新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程宋小川
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。
新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
新生儿溶血病检测标准操作规程
新生儿溶血病检测标准操作规程1.检验原理：本试验为将排阻层析和抗人球蛋白试验（Coombs试验）相结合，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应的不完全抗体在抗人球蛋白的作用下发生凝集反应，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应的不完全抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
2.主要组成部分：本品系在聚丙烯塑料透明卡片上的六支微柱型管中填充葡聚糖凝胶和抗人球蛋白（多抗），制成抗人球蛋白检测卡，凝胶微管分为反应腔和凝胶分离柱两部分。
3.样本要求：3.1红细胞样本：采集被检对象静脉血，用EDTA抗凝，配制成红细胞悬液（直接抗人球蛋白试验配制成红细胞生理盐水悬液，间接抗人球蛋白试验配制成红细胞低离子溶液悬液（只适用于交叉配血和不规则抗体筛检）），红细胞最终浓度0.5%-0.8%。
3.2血清样本：采集被检对象静脉血，放入含有兔脑粉或者其他促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或者37℃放置2小时后离心，200rpm10分钟，取上清该上清不得有絮状物或沉淀。
血清标本必须充分去蛋白，否则标本中析出的或红细胞悬液中残余的纤维蛋白可阻碍红细胞沉降，使非凝集细胞离心后在胶表面形成一条红线，呈假阳性反应。
4.检验方法4.1.准备工作1）微柱凝胶检测卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18－25℃），再用专用离心机离心5分钟。
2）标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象脐带血或静脉血，制备成红细胞标本和血浆标本。
3）红细胞悬液的制备：将被检者红细胞标本至少洗涤4次，取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液或生理盐水，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
4）血浆标本的处理：将被检者血浆标本进行离心，采用3000r/min 离心3min 或3500r/min 离心2min（不得有絮状物或沉淀）。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程PPT文档共52页
45、自己的饭量自己知道。——苏联
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己——德国43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验 标准检测流程
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， 大的可 以破网 而出， 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
新生儿溶血病检测操作SOP
新生儿溶血病检测操作SOP一、产前诊断1、夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh（D）血型定型检测卡）1、1 将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；1、2 撕开微胶卡得封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control 微柱管反应腔中加入1% 待检RBC生理盐水悬液各50μl ；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入1、0% A1、B、O 型试剂红细胞与待检红细胞生理盐水悬液50μ l ，再分别加入待检血浆（血清）50μl ；1、3 将检测卡室温反应≥ 10 min, 取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min 离心；1、4 取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。
ABO RhD2、孕妇抗体效价得测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）2、1孕妇IgG（抗A/抗B）效价2、1、1 取待检血清与2-Me（二巯基乙醇）应用液各0、2ml，充分混匀，37℃水浴 2 小时（以充分破坏血清中得IgM 类抗体）。
2、1、2取 4 支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中与血清与1、6 毫升低离子介质（原液为1:1 稀释，此时稀释倍数为原液得64 倍）。
2、1、3 第2－4 管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升得液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400 微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。
2、1、 4 取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在 4 管中个依次加入倍比稀释好得灭活血清50微升与1％得标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质（LIM）悬液50 微升。
2、1、5 将加好样得检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
2、1、6将孵育好得检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min ，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30 分钟内进行）2、1、7 取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG（抗A/抗B）效价≤ 64。
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程一、目的为规范新生儿溶血性疾病（HDN）产前血型血清学检测的技术操作，准确评估胎儿发生HDN 的危险程度，从而辅助临床正确的诊断和治疗。
二、适用范围输血科进行新生儿HDN产前血型血清学检测。
三、原理通过鉴定孕妇及其胎儿父亲的血型，推测胎儿可能的血型，进一步检测孕妇体内是否有针对胎儿红细胞血型抗原的抗体及其效价来评估胎儿发生HDN的危险程度。
四、步骤和方法1、检测孕妇ABO、RhD血型，红细胞不规则抗体及其丈夫ABO、RhD血型。
根据夫妇ABO 血型组合来推测母婴ABO血型是否相合：如果母婴血型配合则不需检测孕妇ABO血型IgG 抗体效价；如果母婴血型不配合（可能不配合）则需检测孕妇可能致敏胎儿红细胞的ABO 血型IgG抗体效价。
2、由于抗-A或者抗-B主要为IgM类，ABO血型不合极少发生胎儿HDN，故除有死胎史或者新生儿黄疸史的孕妇外，不需检测IgG抗-B及抗-A的效价。
3、如果孕妇为RhD阴性，丈夫RhD为阳性，孕妇不规则抗体阴性，建议孕妇以后每个月复检不规则抗体直至分娩。
4、如果孕妇不规则抗体为阳性，则需鉴定其特异性、Ig类型、37℃反应情况及其效价和丈夫红细胞是否表达对应的抗原，来评估抗体引起的HDN危险程度。
5、结果判定：效价>143有临床意义。
五、质量控制1、用于试验的试剂都在有效期内使用。
2、严格试验操作，设置阴、阳对照，结果符合预期才可判定试验结果。
六、注意事项1、HDN产前血型血清学检测结果只能为评估胎儿发生HDN的风险提供依据，并不能确定HDN 。
母婴ABO血型不合且孕妇IgG类ABO血型抗体效价在妊娠期持续升高或者检出了IgG类红细胞不规则抗体都是HDN的风险因素。
2、传统认为ABO血型系统IgG抗体效价高于64具有临床意义。
随着检测水平得的提高，其作为临床参考意义不大。
3、抗体效价与HDN的发生有一定的相关性，但是抗体效价的高低与HDN的严重程度并不完全一致，可能与IgG抗体亚类不同有关。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程宋小川
新疆医科大学第一附属医院输血科 宋小川
2011年10月在北京由中国医师协会 输血科医师分会举办了全国首届输 血系统新生儿溶血病标准化操作研 讨会。我国开展HDN研究30年以来， 临床已召开过数次HDN专题研讨会， 而输血科实验室工作30年来却从来 没有召开过研讨会。
需要使用抗体筛选细胞和其配偶红细 胞进行ABO以外抗体和针对其配偶特 有的、低频率抗原所产生的免疫性抗 体的筛选。如有抗体要进行抗体特异 性鉴定和效价测定。
HDN产前免疫血液学试验检测标准
五、检测方法（查看Word文件） 六、试验报告 ⒈ 试验报告至少包括以下内容： （1）实验室名称和联系方式； （2）被检者姓名和唯一性编号； （3）送检医院； （4）样本接受/采集日期和报告日期；
⒋ 不同实验室对产后HDN三项试验的 分析标准不统一。
（三）医疗纠纷的潜在隐患
⒈ 全国已有许多案例。
⒉ 为产前免疫性抗体效价高者开药，如果 分娩后,新生儿为O型，或Rh阴性，怎么 办？
⒊ 新生儿生理性黄疸与HDN不易区别时， 如果两个实验室三项试验结果不一致， 怎么办？
⒋ 各实验室HDN结果无可比性，存在潜在 的医疗纠纷隐患。
型者。
HDN产前免疫血液学试验检测标准
二、标本采集时间 ⒈ 有不良妊娠史、输血史及HDN史的
孕前妇女和Rh阴性孕前妇女的标本采 集时间为怀孕前； ⒉ 孕妇血型为0型、配偶血型为非O型 者，标本采集时间为怀孕后；
HDN产前免疫血液学试验检测标准
（1）第一次检测，一般可在妊娠第1216周进行，以此作为抗体基础水平。如 果检测到ABO以外抗体，或高效价的IgG 抗A（B）抗体，建议每月复查一次。
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
新生儿溶血病检测卡标准操作程序(SOP)
新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
(二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。
（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。
（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。
该上清不得有絮状物或沉淀。
（六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。
即放散液。
2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。
参见酸性放散试剂盒使用说明书。
二、实验步骤1、取新生儿的红细胞0.8%－1％悬液50ul分别加入卡1中的1－6孔中。
2、使用专用离心机离心5分钟，900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟。
3、取出，判读结果。
4、第二卡1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号；将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号；将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。
6、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读结果。
结果判定阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。
表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
新生儿溶血病检测作规程
新生儿溶血病检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称：新生儿溶血病检测（包括直接抗人球蛋白试验、游离试验和放散试验三项）2.检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌：美国强生奥索2.代号：BioVue-po1yCassettes3.包装规格：400卡/箱试剂卡（707300）；100卡/箱试剂卡（707350）4.试剂成分:抗人球蛋白（1gG,C3b∕C3d）检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.0IM的EDTA.成分描述第1〜6柱：抗人球蛋白、抗抗一IgG（兔）-IgG.-C3d；多特异性抗一C3b（鼠单克隆）（克隆F7G3）抗一C3d（鼠单克隆）（克隆C4C7）FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期：储存条件：2〜25。
C环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVUe专用离心机；BiOVUe专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2—8。
C保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白（IgG,C3b∕C3d）检测卡为即用型产品。
试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。
试剂卡经过运输颠簸后，需倒置一下，然后重新离心以备用。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程PPT演示课件
分析标准不统一。
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（三）医疗纠纷的潜在隐患
⒈ 全国已有许多案例。
⒉ 为产前免疫性抗体效价高者开药，如果 分娩后,新生儿为O型，或Rh阴性，怎么 办？
⒊ 新生儿生理性黄疸与HDN不易区别时， 如果两个实验室三项试验结果不一致， 怎么办？
⒋ 各实验室HDN结果无可比性，存在潜在 的医疗纠纷隐患。
三、标本要求
⒈ 第一次检查：采集夫妇双方EDTA抗 凝血各3-5毫升。
⒉ 复查检查：采集夫妇双方EDTA抗凝 血3-5毫升。
⒊ 如果无配偶的血液标本，则无法检 测孕妇是否有针对其配偶特有的、低 频率抗原所产生的免疫性抗体。
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HDN产前免疫血液学试验检测标准
四、检查项目
⒈ 夫妇ABO、Rh(D)血型鉴定。
型者。
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HDN产前免疫血液学试验检测标准
二、标本采集时间 ⒈ 有不良妊娠史、输血史及HDN史的
孕前妇女和Rh阴性孕前妇女的标本采 集时间为怀孕前； ⒉ 孕妇血型为0型、配偶血型为非O型 者，标本采集时间为怀孕后；
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HDN产前免疫血液学试验检测标准
（1）第一次检测，一般可在妊娠第1216周进行，以此作为抗体基础水平。如 果检测到ABO以外抗体，或高效价的IgG 抗A（B）抗体，建议每月复查一次。
新生儿溶血病（HDN）免疫 血液学试验标准检测流程
新疆医科大学第一附属医院输血科 宋小川
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2011年10月在北京由中国医师协会 输血科医师分会举办了全国首届输 血系统新生儿溶血病标准化操作研 讨会。我国开展HDN研究30年以来， 临床已召开过数次HDN专题研讨会， 而输血科实验室工作30年来却从来 没有召开过研讨会。
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。
当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。
离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3～4ml,24小时内送检。
将不抗凝血离心分离出血清备用。
6、试剂：5.1 0.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.4 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1)XTL-4.7细胞洗涤离心机；2)DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；3)DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。
7.5.2如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1)取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。
2)在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50μl。
3)将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。
新生儿溶血病血型血清学检验操作规程
新生儿溶血病血型血清学检验操作规程 SXYJ-GZ-02191目的辅助临床诊断母婴血型不合导致的新生儿溶血病。
2适用范围母婴血型不合新生儿黄疸者或产妇产前检出免疫性血型抗体且伴有母婴血型不合者。
3职责检测者负责依据此程序进行HDN产前血型血清学检验操作。
4材料与设备抗-A、抗-B血清、反定型试剂红细胞、血型物质或二硫苏糖醇（DTT）；实验室常规应用的耗材备品准备充分、仪器设备运行状态正常。
5操作方法5.1检查父亲、母亲及新生儿标本血型5.1.1ABO血型鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0202）；5.1.2RhD抗原鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0205）。
5.2新生儿标本的三项试验5.2.1直接抗人球蛋白试验：（方法参见SXYJ-GZ-0210）。
ABO新生儿溶血病时，直接Coomb’T的结果只起参考作用；ABO以外的新生儿溶血病标本的直抗结果，对临床诊断起决定作用。
5.2.2游离IgG抗体测定：（方法参见SXYJ-GZ-0211）。
测定新生儿血清中是否存在游离的IgG抗体。
用A型、B型红细胞检测可发现，A型新生儿血清中可有少量抗A和较多抗B；B型新生儿血清中可有少量抗B和较多的抗A，抗体筛选红细胞用来筛选ABO以外的IgG抗体，结果阳性时需要用谱细胞鉴定其特异性。
5.2.3放散试验：（方法参见SXYJ-GZ-0209）。
采用热放散方法，放散液中抗体鉴定用间接Coomb’T法（方法参见SXYJ-GZ-0211）。
患儿红细胞上放散出抗A、抗B或放散出ABO以外抗体，都是阳性指征。
5.3母亲标本的检查方法参见SXYJ-GZ-02186结果判定6.1根据凝集强度(方法参见SXYJ-GZ-0202:5.2.1.6)对结果进行判读6.2ABO HDN6.3其它血型系统HDN7报告发放根据检测结果形成报告，报告发放至检验申请送检人。
8注意事项8.1如果新生儿标本检测游离抗体阳性，直抗应该阳性，放散试验也应该是阳性，故在直抗阳性、游离抗体阳性时，放散试验可省去不做。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程
HDN产前免疫血液学试验检测标准
⒊ 第二次检测时可以使用第一次的 冻存标本做平行对照，有助于排除 实验技术和试剂红细胞的干扰。
精品PPT
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ 三、标本要求
❖ ⒈ 第一次检查：采集夫妇双方EDTA抗 凝血各3-5毫升。
❖ ⒉ 复查检查：采集夫妇双方EDTA抗凝 血3-5毫升。
全国首届HDN实验室工作者研讨会内容 ❖⒈ 大会交流 ❖ 专家讲座：HDN临床和实验室研究的
国内外进展 ❖⒉ 研讨：
（1）研讨内容： ① 样本采集 ② 实验项目及操作 ③ 结果判定或解释
精品PPT
（2）研讨要达到目的：“三化” ❖ ① 实验方法的规范化 ❖ ② 临床导向科学化 ❖ ③ 不同实验室的结果互相可比化
❖ ⒊ 如果无配偶的血液标本，则无法检 测孕妇是否有针对其配偶特有的、低 频率抗原所产生的免疫性抗体。
精品PPT
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ 四、检查项目
❖⒈ 夫妇ABO、Rh(D)血型鉴定。
❖⒉ 孕妇/孕前妇女血液中IgG抗A（B）抗 体效价检测：
❖ 孕妇/孕前妇女是O型，若配偶是A型或B 型，检测孕妇/孕前妇女相应的IgG抗A （B）抗体效价；若配偶是AB型，分别检 测孕妇/孕前妇女IgG抗A（B）抗体效价。
不合应在出生后尽早为好。
精品PPT
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖⒉ 采样部位：静脉血、脐血标本均可。
❖ 注：因为母婴ABO血型不合的新生儿脐 带血大约有20﹪血清学常规三项试验 为阳性，但临床上并无新生儿溶血症 状，血清胆红素也未见升高【摘自王 羽主编，全国临床检验操作规程（第3 版）268页】。若条件允许，产后血液 学试验推荐使用静脉血。
新生儿溶血病HDN的免疫血液学实验
不是要求提升灵敏度,
新生儿溶血病HDN的免疫血液学实验
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8. 关于 HDN 文章花团锦绣, 实际并不代表国内HDN 临床检测水平:
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新生儿血小板降低症
母婴血小板抗原(HPA)不合,发病机制和HDN相同,产 前/后静脉Ig疗效好
新生儿溶血病HDN的免疫血液学实验
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⑤中和血清100ul, 加夫红细胞悬液50ul: 作聚凝胺 假如有凝集, 妻中和血清倍比稀释, 加夫红细胞悬液, 作聚凝胺或AHG试验,测IgG ABO 抗体效价
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(四) 注意: 1.夫未来检验, 或夫为AB型, 怎么办? 2. 可用试管法, 也可用 HDN 卡 试验
2.三项试验(直抗,游离,放散)均可用 卡 操做,
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(三)三项试验: 试管法结果分析
1、HDN：直抗+
88.5%
游离+
84.2%
放散+
64.7%
三项全阳性 35.3%
2、直抗假阴性/假阳性（华通氏胶污染）
3、儿如为A型
(1)游离
OC（+）：
BC（+）：
AC(+)
因为错失良机, 现在: 不但 垂体已萎缩, 已丧失治疗席汉 氏综合征机会, 必须终生天天吃药; 而且, 子宫萎缩,终生不 育
新生儿溶血病HDN的免疫血液学实验
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二、HDN 定义
“新生儿溶血”与“新生儿溶血病” 新生儿溶血: 综合征，地贫，G6PD↓，遗传性球形
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。
当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。
离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3〜4ml,24小时内送检。
将不抗凝血离心分离出血清备用。
6、试剂：5.10.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.45%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1）XTL-4.7细胞洗涤离心机；2）DiaMed-IDIncubator37SI温育器；3）DiaMed-IDCentrifuge12SII7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。
7.5.2如母子ABO不合（母。
子A、B,母A子B、AB,母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1）取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。
2）在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50口1。
3）将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。
4）结果观察：5）阳性：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程宋小川共52页文档
26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的பைடு நூலகம்良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准 检测流程宋小川
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46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
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47、采菊东篱下，悠然见南山。
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48、啸傲东轩下，聊复得此生。
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49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
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50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
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新生儿检测程序(新)
产后新生儿溶血病检测的操作程序1、样品准备：（一）红细胞悬液：①采集新生儿抗凝血（充分）3-5ml。
②离心3000rpm，3min，取血浆备用。
③取红细胞适量，用生理盐水洗涤三次，去上清液。
④取洗涤后的压积红细胞适量5ul，用DianaSol 1溶液配制500ul 1％红细胞悬液。
（二）红细胞放散液制备：①采集新生儿抗凝血（充分）3-5ml。
②离心3000rpm，3min。
③取红细胞适量（0.5-1ml），用生理盐水充分洗涤三次，去掉上清液。
④取洗涤后的压积红细胞适量，按1：1等量生理盐水混匀。
⑤置56℃水浴，不断摇动10min。
⑥保温离心3000转/2分钟。
⑦速取樱红色上清液（即放散液）备用。
2、ABO/Rh血型鉴定＋直接Coombs实验：①取新生儿血型卡一张。
②分别加入婴儿1%红细胞悬液8孔各50ul。
③将卡放入孵育器孵育15min（37℃）。
④将血型卡放入离心机离心。
⑤判读结果。
3、游离实验和放散实验：①取戴安娜配血卡（Coombs）一张。
②按A、B、O，A、B、O 标记6孔各加入1％的红细胞50ul。
③前3孔各加入新生儿血浆50ul，后3孔各加入放散液各50ul。
④将卡放入孵育器孵育15min（37℃）。
⑤将卡放入离心机离心。
⑥判读结果。
4、ABO血型以外的新生儿溶血病：①当直接Coombs实验阳性强度大于或等于“＋＋”时，考虑。
②用乙醚放散法制备放散液。
③分别对母亲血清和新生儿放散液作抗体鉴定。
5、判断规则：类型直接Coombs实验游离实验放散实验新生儿溶血病1 －－＋是2 当任意两项为＋时是3 ＋＋＋是4 除以上情况外否注：RH血型系统或其他系统放散液制备：试剂：等体积的氯仿和三氯乙烯混合物。
操作步骤：1、生理盐水洗红细胞6次。
2、配1：1盐水红细胞混合液+入1体积氯仿和三氯乙烯混合物。
3、塞住试管口，用力摇动试管10秒，倒置1分钟混合均匀。
4、高速离心3000转/2分钟。
5、取上层的放散液（切忌混入中下层液体）。
新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序
SOP_10-4 新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员。
四、操作步骤：新生儿溶血病包括:①母婴血型不合新生儿溶血病;②红细胞葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷;③球型红细胞增多症。
因为母婴血型不合所致新生儿溶血病为首先发现,所以新生儿溶血病特指为母婴血型不合所致的新生儿溶血,另外两种疾病是以疾病原因命名。
造成新生儿溶血病的抗体有：ABO系统（IgG抗A、IgG抗B、IgG抗AB）；Rh系统（抗D、抗E、抗Ce、抗cE、抗c）；Kidd系统（抗Jka、抗Jkb）；MNSs系统（抗-M、抗N、抗S、抗-s）；Kell系统（抗K、抗-k）；Daff系统（抗Fya、抗Fyb）；Diego系统（抗-Dia、抗-Dib）。
ABO系统新生儿溶血病多见于ABO血型不合的母子。
O型母亲多见(90%以上),多由IgG-AB所致。
A型、B型母亲少见(不足10%),多由IgG抗A或抗B所致。
Rh系统则多见于母子ABO血型相合者(母有输血史除外),以抗D为多见,为抗E,抗cE等。
其它系统为母子其它血型系统不相合。
1.原理：母体内存在与胎儿红细胞不相合的抗体。
抗体的产生是胎儿的红细胞抗原(由父亲而来的恰好是母体红细胞上所缺少)进入母体,刺激母体产生了免疫性抗体。
胎儿红细胞被来自母亲的IgG抗体所包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到免疫必破坏。
另外，母亲有输血史,产生的免疫性抗体恰巧与胎儿红细胞抗原是相应的，也会发生新生儿溶血病。
2.检查方法2.1 ABO新生儿溶血病的检查* 母血清中天然抗体A （B ）用型物质或2-ME 中和后进行试验。
夫妇或母子间ABO 血型关系：妇 夫血型 子血型血型 血清抗体 配合 不配合 配合 不配合O 抗A 、B O A 、B 、AB O A 、BA 抗B A 、O B 、AB A 、O B 、ABB 抗A B 、O A 、AB B 、O A 、ABAB A 、B 、O 、AB A 、B 、AB（1）ABO 定型：新生儿血清中的同种抗体来源于母亲,所以新生儿的ABO 检查完全依靠细胞定型(正定型),如果ABO 定型为O 型,则可排除ABO-HDN 的可能。
新生儿溶血病检测操作
新生儿溶血病检测操作SOP一、产前诊断1.夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh(D)血型定型检测卡）将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；撕开微胶卡的封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1% 待检 RBC 生理盐水悬液各50μl；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入% A1、B、O型试剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50μl，再分别加入待检血浆（血清）50μl；将检测卡室温反应≥10 min,取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min离心；取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。
2.孕妇抗体效价的测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）孕妇IgG(抗A/抗B)效价取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37℃水浴2小时（以充分破坏血清中的IgM类抗体）。
取4支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中和血清和毫升低离子介质（原液为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的64倍）。
第2－4管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。
取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入倍比稀释好的灭活血清50微升和1％的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质(LIM)悬液50微升。
将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30分钟内进行）取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG(抗A/抗B)效价≤64。
孕妇IgG(抗D)效价测定确定孕妇为RhD阴性，丈夫为RhD阳性。
取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37℃水浴2小时（孕妇血清与O型RhD阳性红细胞反应盐水法为阳性需要灭活，阴性不需要灭活）。