凝集反应
凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集反应)(1)
凝集反应实验原理和方法（直接凝集反应和间接凝集反应）(1)凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集现象。
一、直接凝集反应颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）直接与相应特异性抗体结合，在适量电解质存在条件下，出现肉眼可见的凝集现象，称直接凝集反应。
参加凝集反应的抗原称为凝集原，而抗体则称为凝集素。
直接凝集反应有玻片法和试管法两类。
（一）玻片凝集反应在玻片上进行的直接凝集反应,主要用于抗原的定性分析,数分钟之内便可观察结果,快速、简便。
常用于细菌的分型鉴定,也用于ABO血型的测定。
【实验材料】（ 1）抗原：受检菌液或受检者的血细胞盐水悬液。
（ 2）抗体：用于细菌鉴定的1：20稀释诊断血清。
血型检测的A及B诊断血清。
（ 3）生理盐水、玻片、吸管、接种环。
【实验方法】（ 1）于洁净玻片的一端加诊断血清1滴，另一端加生理盐水1滴作阴性对照。
（ 2）用接种环取待检菌液或血细胞悬液分别涂于诊断血清和生理盐水，混匀。
（ 3）轻摇玻片，静置数分钟，观察结果。
【结果分析】玻片上抗原凝集成肉眼可见的小团块状或絮状凝集物，其周围液体澄清，为阳性反应。
阴性反应和生理盐水对照均不发生凝集，为均匀混浊的乳状液。
【注意事项】细菌鉴定时，特别是肠道菌种的沙门菌属或志贺菌属，原则上先用多价诊断血清检测，如为阳性，再用单价诊断血清进行分群或定型。
血型测定时，室温需保持在 20oC左右，若低于10oC，易出现冷凝集现象而造成假阳性的错误诊断。
（二）试管凝集反应是用定量的颗粒性抗原悬液与一系列倍比稀释的待检血清在试管中进行的凝集反应，根据试验结果判定待检血清中有无相应抗体及其效价，对血清中抗体进行半定量分析。
此法目前仍常用于某些病原微生物感染的免疫学诊断，例如，诊断伤寒和副伤寒的肥达氏（ Widal test）反应，诊断斑疹伤寒的外—裴氏反应（weil-felix test）。
第一节凝集反应
第一节凝集反应目的和原理颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下发生友应，出现肉眼可见的凝集小块，称为直接凝集反应。
在操作方法上有玻片法和试管法两种。
本试验以细菌与其相应抗体反应为例，掌握玻片法和试管法凝集试验的原理，熟悉其方法和临床意义。
一、玻片凝集试验器材和试剂1·标本任一常见细菌的平板或斜面培养物。
2·试剂与细菌对应的诊断血清(可用生理盐水作适当稀释以免发生前带现象)、生理盐水等。
3·器材载玻片、接种环等。
步骤和方法1·于洁净载玻片的一端加生理盐水一滴，另一端加诊断血清一滴。
2·用接种环挑取细菌，分别涂于生理盐水和待检血清中，充分混匀。
3．室温下静置数分钟观察结果。
结果和评价生理盐水对照不发生凝集，为均匀混浊的乳状液。
在诊断血清中，细菌与相应抗体反应会出现肉眼可见的凝集块，为阳性结果。
如与对照相同则为阴性。
本方法为定性试验，敏感性较低。
但操作简便，反应迅速，目前仍然是细菌分型鉴定和ABO血型鉴定的常规实验。
二、试管凝集试验器材与试剂1．标本待检血清。
2·试剂伤寒沙门菌H诊断菌液(7×108／m1)、抗伤寒沙门菌H抗血清(用生理盐水做l：10稀释)、生理盐水。
3·器材恒温水浴箱、试管架、试管、吸管等。
步骤和方法-操作程序和加入成分——见表11．取洁净试管8支，排列于试管架上，依次编号并做好标记。
2·向各试管中均加人生理盐水0．5ml。
3·吸取1:10稀释的抗伤寒沙门菌H抗血清0．5ml，加入第一管中，充分混合,吸出0．5ml 放人第二管，混合后取出0·5ml于第三管中……，如此直至第七管，混匀后吸出0．5ml 弃去。
第八管不加血清，为生理盐水对照。
至此第1~~'7管的血清稀释度为：1：20、1 ：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280。
这种稀释方法称为连续倍比(2倍)稀释法，是免疫学试验中常用的一种稀释方法。
临床免疫检验：凝集反应
概述
早在1896年，Widal就利用伤寒 病人的血清与伤寒杆菌发生特异 性凝集的现象，有效地诊断伤寒 病。至1903年，Landsteiner在 特异性血凝现象的基础上发现了 人类ABO血型， 并于1930年获
得了诺贝尔医学奖
凝集反应定义
细菌、红细胞等颗粒性抗原，或 者可溶性抗原(或抗体)与载体颗 粒结合成致敏颗粒后，与相应抗 体(或抗原)发生特异性反应，在 适当电解质存在的情况下，形成
试验
所用载体既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒 而是菌体细胞壁含有葡萄球菌A蛋白即SPA的金黄色葡萄球菌
SPA具有与人和动物血清中IgG的Fc段结合的特性 因此当金黄色葡萄球菌与IgG连接时，就成为了抗体致敏的载体颗粒
如果与相应抗原相遇，就出现了特异凝集现象 协同凝集试验适用于细菌的直接检测
小
结
01 凝 集 反 应 的 定 义
02
凝集反应的方法类型
03 凝 集 反 应 的 结 果 判 断 方 法
思考题
试分析免疫凝集类实验的发展趋势。
谢谢观看！
肉眼可见的凝集现象
主要技术类型
直接凝集反应 凝集反应
间接凝集反应
玻片法 试管法 正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 胶乳凝集试验 协同凝集抑制试验
直接凝集反应
玻片法
+
直接凝集反应
试管法
间接凝集反应
正向间接凝集试验 用抗原致敏载体--检测抗体
直接凝集反应
反向间接凝集试验 用抗体致敏载体----检测抗原
4-1 凝集反应
凝集反应(agglutination)
是一种经典的血清学反应，它是指颗粒性抗原例 如红细胞、细菌等与相应的抗体在适量的电解质存在 的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集物。 参加反应的颗粒性抗原称为凝集原(agglutinogen)， 抗体称为凝集素(agglutinin)。
根据凝集反应中抗原的性质，反应的方式又分为直 接凝集反应(direct agglutination)和间接凝集反应 (indirect agglutination)。 直接凝集反应有玻片法和试管法之分，而间接凝集 反应则分为间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验和协 同凝集反应。 由于抗原、抗体结合具有高度的特异性，所以常利 用凝集反应协助传染病的诊断、流行病学调查以及微生 物分类、遗传研究等诸多方面。
特
点：
1.特异性，抗原1.特异性，抗原-抗体的结合是特异性结合 特异性 2.可逆性， 2.可逆性，抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合 可逆性 3.阶段性，抗原抗体反应可分为两个阶段： 3.阶段性，抗原抗体反应可分为两个阶段：1）特异 阶段性 性结合阶段； 性结合阶段；2）可见的反应阶段 4.比例性， 4.比例性，抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象 比例性 与两者的分子比例密切相关
凝集反应
• 定义: 定义:
+
颗粒性抗原 相应抗体
可见的凝集团块
• 分类: 分类:
直接凝集反应: 直接凝集反应: 间接凝集反应 玻nation
• 细菌、螺旋体或红细胞等颗粒性抗原，在适当电解 质存在的条件下，可直接与相应的特异性抗体结合， 出现凝集的现象，称为直接凝集反应（direct agglutination）。 • 有玻片法和试管法之分.
实验原理
第四章 凝集反应
第四章凝集反应内容一、玻片凝集反应二、试管凝集反应三、血型鉴定当颗粒性抗原与其相应抗体混合时，在电解质存在的环境下，相应的抗原抗体结合产生大小不等的凝集块，这种现象称为凝集。
凝集反应有直接与间接凝集两种。
直接凝集反应是颗粒性抗原与相应抗体直接结合出现的凝集现象;间接凝集反应是指将可溶性抗原吸附于一类与免疫无关的载体微球上，形成人工的免疫微球（或致敏载体），再与相应抗体结合出现的凝集现象。
在操作方法上，凝集反应又可分为玻片凝集与试管凝集。
一、玻片凝集反应将已知的抗体与未知的颗粒性抗原物质（如细菌、钩端螺旋体或细胞等）混悬于载玻片上，摇匀后经数分钟出现可见的凝集颗粒为阳性反应。
该法为定性试验，常用于细菌的种类及分型鉴定、血型鉴定等。
【材料】1、抗体：1∶10稀释伤寒杆菌抗血清。
2、抗原：伤寒杆菌菌液、大肠杆菌菌液。
3、生理盐水。
4、蜡笔、载玻片，毛细血管，吸头或吸球等。
【方法】1、取洁净载玻片一张，用蜡笔分为三格，并在边上标明1、2、3。
2、用毛细吸管于第1、3格内各加1滴伤寒杆菌菌液，第2格加1滴大肠杆菌菌液。
3、用毛细吸管于第1、2格内各加1滴1∶10倍稀释的伤寒杆菌抗血清，第3格加生理盐水1滴作为对照。
4、轻摇动玻片，数分钟后观察结果。
如果不够清晰，可将玻片放于低倍镜下观察。
【结果观察与判定】若上述混合悬液由均匀状变为澄清透明，并出现大小不等的乳白色凝集块者即为阳性，若混合物仍呈均匀混浊状则为阴性。
二、试管凝集反应该法常用已知的颗粒性抗原来检测未知抗体及其相对含量，属定量（半定量）试验。
方法是用生理盐水将待测血清在试管中作倍比稀释，然后于各管中加入等量的已知抗原悬液，37℃恒温箱过夜或56℃水浴2h后，观察有无凝集，并根据凝结情况判定血清抗体的效价。
临床上主要用于诊断伤寒与副伤寒（如肥达反应）、斑疹伤寒及恙虫病（如外斐反应）等。
【材料】1、血清：抗伤寒杆菌H血清或病人血清。
2、抗原：伤寒杆菌H菌液。
凝集反应
第四节 冷凝集试验
• 冷凝集试验是用于检测血清中冷凝集素的方法。 • 冷凝集素（cold agglutinin）是冷反应型抗红 细胞抗体，具有较强的凝集红细胞的作用，属于 IgM型抗体，可存在于正常人血清中，但是正常人 血清抗红细胞抗原的lgM冷凝集素效价比较低。
• 冷凝集试验可协助诊断肺炎支原体感染引起的肺炎， 可用于辅助诊断冷凝集素综合征、传染性单核细胞 增多症、疟疾、肝硬化、淋巴瘤及多发性骨髓瘤等。
为半定量试验
抗原（抗体）致敏载体，检测 检测病原微生物和自 操作简单、快速，敏感
间接凝集试验 标本中相应抗体（抗原）
身免疫病相关抗体
度和特异性高
间接凝集抑制 抗原致敏载体检测是否存在与 绒毛膜促性腺激素
试验
致敏抗原相同的抗原
(HCG)的检测
灵敏度高于上面间接凝 集试验
抗体致敏金黄葡萄球菌颗粒作 适用于细菌的直接检 操作简单、快速，便于
一、载体
载体的种类
RBC 聚苯乙烯胶乳 离子交换树脂 活性炭 明胶颗粒
载体的条件： 1.不溶于水，理化性质稳定且无化学和免疫学活性。 2.大小均匀，密度与介质相近。 3.能直接吸附和通过偶联剂牢固结合抗原抗体。
二、方法类型
根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的方 式不同，间接凝集反应可分为4类:
• 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在适 当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。 • 颗粒性抗原还包括可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒 (O型人红细胞、绵羊红细胞、聚苯乙烯胶乳、炭粒等) 结合成的致敏颗粒。
二、特点
1.抗原分子大，介质中成均匀的颗粒悬液。 2.抗原抗体复合物以抗原为主。 3.试验时稀释抗体。 4.效价报告抗体的稀释度。
凝集反应
凝集程度：
凝集物 全部凝集 上清液 澄清 凝集程度 ++++
大部份凝集
有明显凝集 很少凝集 不凝集
基本透明
半透明 基本混浊 混浊
+++
++ + -
效价（滴度）判定： 首先观察对照管为阴性，说明结果可信，
再观察各实验管以判断效价。
效价判断:以产生明显凝集现象（2+）的
最高血清稀释度为该血清的抗体效价。
1：160
2.5ml N.S
1：320
1：640
稀释血清 1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
N.S
每管加0.5ml
O抗原 H抗原 每管加0.5ml 甲-H抗原 乙-H抗原 丙-H抗原 稀释倍数 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280
37℃过夜，观察
概念：
颗粒性抗原 + 相应抗体
↓(适量电解质)
凝集现象 可溶性抗原（或抗体) + 载体颗粒 ↓ 致敏颗粒+相应抗体（或抗原）
↓(适量电解质)
凝集现象
特点：
1.抗原为颗粒性抗原或可溶性抗原致敏颗粒； 2.反应时间较短，需几到十几分钟； 3.反应产物为凝集块； 4.凝集反应抗原分子大，反应面积小，为使抗 体分子不致过多，试验时需稀释抗体 。
肥达氏反应
用已知的伤寒沙门菌O、H抗原，甲、乙、 丙型副伤寒沙门菌的H抗原与患者血清做 半定量试管凝集试验； 以出现“++”凝集的最高血清稀释度作为抗 体的效价，测定相应抗体的含量，用以辅
助诊断肠热症。
凝集反应相关知识
凝集反应相关知识一、凝集反应的特点细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集(agglutination)现象。
早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。
至1900年Landsteriner在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型，并于193 0 年获得了诺贝尔奖金。
凝集试验灵敏度高，方法简便，迄今已成为通用的免疫学试验，广泛应用于临床检验。
凝集反应的发生分两阶段：①抗原抗体的特异结合;②出现可见的颗粒凝集。
通常，细菌和红细胞等颗粒抗原在悬液中带弱负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子层，构成一个双层离子云。
在松散层内界和外界之间的电位差形成Z电位。
溶液中的离子强度愈大，Z电位也就愈大。
Z电位使颗粒相互排斥。
当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒聚集在一起。
但当抗体分子太少，不足以克服相当厚度的离子云层时，则不能使颗粒聚集。
因此在凝集反应中，IgM类抗体的作用比IgG类抗体要大数百倍，所以IgG类抗体常出现不完全反应，即不可见的抗原抗体反应。
这种抗体有时又称不完全抗体。
不完全的含义是：可与抗原牢固结合，但因其分子量较小，不能起到由桥联作用而形成的可见凝集现象。
在试验过程中，为促使凝集现象的出现，可采取以下措施：增加蛋白质或电解质，降低溶液中离子强度以缩短颗粒间的距离;增加试液的粘滞度，如加入右旋糖酐或葡聚糖等;用胰酶或神经氨酸酶处理，改变细胞的表面化学结构;以离心方法克服颗粒间的排斥等。
凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阳性或阴性;也可以进行半定量检测，即将标本作一系列对倍稀释后进行反应，以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度。
由于凝集反应方法简便，敏感度高，因而在临床检验中被广泛应用。
在免疫学技术中，凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应两大类。
5章凝集反应 Microsoft PowerPoint 演示文稿
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体， 只加抗原)。
1
2
3
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6
7
1:2 1:4 1:8 1;16 1:32 1:64 1:64 1:128
临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。 试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗 原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh＋O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的
凝集反应名词解释
凝集反应名词解释凝集反应是一种集聚反应，是一种微生物学上重要的反应，主要是描述一种由特定蛋白质结合在一起形成类聚体的物理现象，或者用于控制多个分子之间的相互作用。
该反应可以激活或增强特定的生物反应，如催化、促肥、保护等，广泛存在于生命系统中，为多种生物活动提供稳定的支持。
当有适当的分子存在于液体中，这种分子将通过结合和细胞膜受体的作用形成簇，且会表现特定的物理和化学行为，这种结合称为凝集反应。
凝集反应可以用于控制多个分子之间的相互作用，以构建分子簇，例如一些活性核酸分子在液体中称为聚合物，它们的聚合可以增强其生物活性和受体结合性。
此外，凝集反应还可以控制具有有害作用的分子的聚集，从而作用于抑制特定的病原体的生长。
此外，凝集反应还可以通过调节液体的通量来维持细胞的酸碱平衡，并促进细胞内外的活性物质的交换，从而使细胞能够适应某种环境条件，从而保证细胞的生存机制。
另外，凝集反应还能够增强生物反应物的发挥功效，例如促肥、催化、保护等，广泛用于细胞水解、脱氢反应、抗病毒感染反应等。
凝集反应在生物学上具有十分重要的意义，凝集反应能够维持细胞内环境的稳定性，有效地促进受体的配体结合及识别，并可以调控特定的生物反应，如催化、促肥、保护等，使生物活动有效而稳定。
凝集反应的发生也能够控制病原体的聚集，从而阻止细菌病发生，以保护细胞。
因此，凝集反应是一种十分重要的生命现象，为生物系统的正常运作提供了稳定的支持。
从化学的角度来看，凝集反应是一种基于氢键的原子、分子或集聚都能发生的结合反应，可以用来制备均质的类聚体，代替反应溶液中的分子组装。
凝集反应伴随着质子的转移或共价键的构建，它们构建或破坏分子之间的双氧水网络，从而控制分子簇的大小、组成和活性，进而能够影响分子间的相互作用。
总之，凝集反应是一种重要的反应，它在生物学和化学上都有着广泛的应用，其中一个重要的用途是控制细胞内外环境的稳定，通过氢键的发生维持质子的转移，能够发挥催化、保护、促肥等特性，在细胞水解，脱氢，病原体的抗感染反应等过程中都起着至关重要的作用，为细胞活动提供了有效和稳定的支持。
凝集反应(ABO血型的鉴定)
实验一凝集反应（ABO血型的鉴定）[实验目的]1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。
2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。
[实验原理]在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。
据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
[实验器材]1．器材：光学学显微镜，消毒缸2．材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋3．试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B[内容与方法](一)玻片法凝集实验1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。
滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。
用干棉球止血。
2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。
如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。
若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集5.记录凝集情况，判定受检者的血型。
（二）试管法凝集实验1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。
滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。
用干棉球止血。
2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
实验：凝集反应
实验一凝集反应凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）发生特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
凝集反应分为两类：直接凝集反应和间接凝集反应。
直接凝集反应是颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见凝集现象。
间接凝集反应是小分子可溶性抗原吸附到颗粒载体（红细胞、药用炭和乳胶等）表面，再与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象。
凝集反应常用的实验方法：玻片法和试管法。
（一）试管凝集试验－血清抗体效价测定实验目的：了解试管凝集反应方法；掌握凝集效价的判定及其意义。
实验原理：试管凝集试验为半定量试验方法，常用已知红细胞（微生物中常用细菌）作为抗原液与一系列稀释的受检血清混合，保温后观察每管内抗原凝集程度，通常以产生明显凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体的效价，亦称为滴度。
在试验中，由于电解质浓度和pH不适当等原因，可引起抗原的非特异性凝集，出现假阳性反应，因此必须设不加抗体的稀释液作对照组。
临床上常用的直接试管凝集试验为肥达试验（Widal test）和外斐试验（Weil-Felix test）。
在输血时也常用于受体和供体两者的红细胞和血清的交互配血试验。
实验材料：试管、吸管、试管架、记号笔；生理盐水、鸡红细胞、待检血清、温箱等。
37℃恒温培养箱等。
实验方法：①取洁净试管七支，依次编号；②用玻璃吸管在每管内都加NS0.5ml；③将第1试管内加入1:10待检血清0.5ml，液体吸注混匀3次以上，从中取出0.5ml加入第2个试管内，然后再吸注混匀3次取出0.5ml加入第3个试管内，依此类推，直到第6个试管取出0.5ml弃掉，不加入第7个试管，将第7个试管设为阴性对照管；④每管内都加鸡红细胞0.5ml；⑤混匀后放入37°C恒温箱内1.5h，观察结果表1-1 试管凝集实验方法试管号 1 2 3 4 5 6 7 （对照）生理盐水（ml）0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5待检血清（ml）0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 （弃0.5） -红细胞（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5血清稀释度1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 -37℃30 分钟结果判定++++ ++++ +++ ++ + - -实验结果：先观察生理盐水对照管（第7管），应不发生凝集，液体混浊，管底沉淀呈圆形，边缘整齐。
10简述凝集反应的原理及凝集反应的类型
凝集反应是一种免疫学实验技术，广泛应用于临床诊断和研究领域。
它是通过抗原与抗体的特异结合来发生凝聚现象，从而实现对特定抗原的检测和定量。
凝集反应的原理是基于抗原与抗体相互结合后形成免疫复合物，使得溶液中的物质发生可见的沉淀或凝聚现象。
这种凝聚现象可以通过肉眼观察或者光学仪器来进行定性或定量分析。
凝集反应主要包括直接凝集反应、间接凝集反应和双重凝集反应等类型：1. 直接凝集反应直接凝集反应是指抗原与抗体直接结合形成凝集物质的反应。
在这种反应中，抗原与抗体的结合是直接发生的，不需要其他介质的参与。
该反应通常用于检测红细胞凝集抗体、细菌抗原等。
2. 间接凝集反应间接凝集反应是指抗原与抗体先间接结合，再与介体结合形成凝集物质的反应。
在这种反应中，介体起到传递抗原-抗体复合物的作用，使得凝集反应能够进行下去。
间接凝集反应通常用于检测病毒抗体、梅毒螺旋体抗体等。
3. 双重凝集反应双重凝集反应是指两种抗体与抗原之间分别发生凝集反应，最后抗原-抗体复合物之间再发生凝集现象的反应。
这种反应在研究免疫球蛋白结构和功能、检测致病微生物等方面具有重要意义。
凝集反应的类型多种多样，各自在临床诊断和免疫学研究中发挥着重要作用。
通过对不同类型凝集反应的原理和特点的深入研究，可以更好地理解免疫学的基本原理，提高临床诊断的准确性和敏感性。
凝集反应也为药物研发和免疫治疗提供了重要依据和支持。
希望未来能有更多的科研人员投入到凝集反应领域的研究中，推动该领域的发展，为人类健康做出更大的贡献。
凝集反应是一种免疫学实验技术，广泛应用于临床诊断和研究领域。
它是通过抗原与抗体的特异结合来发生凝聚现象，从而实现对特定抗原的检测和定量。
凝集反应的原理是基于抗原与抗体相互结合后形成免疫复合物，使得溶液中的物质发生可见的沉淀或凝聚现象。
这种凝聚现象可以通过肉眼观察或者光学仪器来进行定性或定量分析。
凝集反应主要包括直接凝集反应、间接凝集反应和双重凝集反应等类型。
凝集反应
《凝集反应》课件
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
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在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
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第十五章凝集反应
Chapter 15 Agglutination Test
第一部分教学内容和要求
一、目的要求
·掌握：凝集反应的原理、类型及临床应用；熟悉：凝集反应的技术要点、实验影响因素、方法评价、间接凝集常用的载体；了解：凝集反应各阶段的特征。
二、教学内容
1。
凝集反应的特点与类型。
2。
直接凝集反应：玻片凝集试验，试管凝集试验。
3。
间接凝集反应：间接凝集反应的类型，间接血凝试验，胶乳凝集试验，间接凝集试验的临床应用。
4．自身红细胞凝集试验。
5．抗球蛋白试验。
第二部分测试题
一、选择题
（一）单项选择题（A型题）
1．直接抗球蛋白实验用于检测
A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体
2．玻片凝集实验
A．只能检测抗原，不能检测抗体B．既能检测抗原，又能检测抗体
C．只能检测抗体，不能检测抗原D．为半定量实验
E．不能用于ABO血型鉴定
3。
下列哪一项不属于玻片凝集试验
A。
菌种鉴定 B。
血清学分型 C。
人类ABO血型鉴定
D．定量检测前筛选试验 E。
血清抗体效价测定
4.试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝集现象
A．“+”B．“+或++”C．“++”D．“+++”E．“++++”
5．间接抗球蛋白实验用于检测
A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体
6．协同凝集试验所用的载体是
A．新鲜红细胞B．洗涤红细胞C．醛化红细胞D．聚苯乙烯颗粒E．金黄色葡萄球菌7．自身红细胞凝集试验红细胞是
A．标准新鲜红细胞B．标准洗涤红细胞C．标准醛化红细胞
D．受检者未致敏红细胞E．受检者致敏红细胞
（二）多项选择题（X型题）
1．实验中,促进凝集现象的措施有
A．低温离心 B．增加电解质或蛋白质 C．加入右旋糖酐或葡聚糖
D．用胰酶处理 E．加入抗原
2。
利用试管凝集试验可辅助临床诊断的疾病
A.痢疾
B.伤寒和副伤寒
C.恙虫病
D.布鲁菌病
E.霍乱弧菌
3. 间接凝集试验常用的载体
A.人O型红细胞
B.聚苯乙烯胶乳
C.皂土
D.明胶颗粒
E.活性炭
4．符合正向间接凝集试验的是
A．抗原致敏载体 B．用于检测标本中的抗体 C．出现凝集为阴性
D．敏感性很高 E．特异性不强
5．符合反向间接凝集试验的是
A．抗体致敏载体 B．用于检测标本中的抗原 C．出现凝集为阴性
D．敏感性很高 E．特异性强
6．符合正向间接凝集抑制试验的是
A．检测标本中的抗原B．抗原致敏载体C．抗体为诊断试剂
D．出现凝集为阳性E．不出现凝集为阳性
7．符合反向间接凝集抑制试验的是
A．抗体致敏载体B．抗原为诊断试剂C．检测标本中的抗体
D．出现凝集为阳性E．不出现凝集为阳性
8．关于SPA正确的是
A．为金黄色葡萄球菌的细胞壁成分B．能与IgG的Fc段结合
C．能与IgG的F（ab’）2段结合D．不能与IgG3结合E．与IgG结合后不影响其活性
9．符合间接血凝试验的是
A．以红细胞为载体B．不能检测抗原C．可检测抗体
D．可判断阳性反应的强弱E。
应用广泛
10．符合乳胶凝集试验的是
A．是一种间接凝集试验B．敏感性较血凝试验高C．可进行定性检测
D．可进行半定量检测 E.可进行定量检测
11．符合红细胞自身凝集试验的是
A．红细胞为致敏载体B．可检测抗原C．可检测抗体
D．诊断试剂为抗O型红细胞的单克隆抗体E．检测应为全血标本
12．符合直接Cooms试验的是
A．检测血清中游离的不完全抗体B．可用作定量分析C．可定性检测
D．可用于新生儿溶血检测E．可用于自身免疫性溶血性贫血的检测
13．符合间接Cooms试验的是
A．检测红细胞膜上的不完全抗体B．出现凝集为阳性C．抗体致敏红细胞
D．用于检测母体Rh抗体 E.可检测因红细胞不相容性输血而产生的溶血
14．抗球蛋白试验可用于
A．配血试验B．抗D抗体检测C．诊断新生儿溶血性贫血疾病
D．检测伤寒O抗体E．检测立克次体抗原
15．符合协同凝集试验的是
A．致敏颗粒是金黄色葡萄球菌B．连接物为SPA C．用于检测抗体
D．是一种反向间接凝集试验E．抗体为IgM类
二、填空题
1．凝集反应的类型分为___________和___________两种类型。
2．间接凝集反应的类型包括___________、___________、___________和___________四种类型。
3．参与凝集反应中的抗原称为___________，抗体称为___________，常用的直接凝集试验有___________和___________两种方法。
4．在间接凝集反应中，正向凝集反应是用___________致敏载体以检测标本中相应的___________；而反向间接凝集反应是用___________致敏载体以检测标本中相应的___________。
5．间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中的___________；可用于输血前的___________试验。
三、名词解释
1．效价(滴度，titer)
2．凝集反应(agglutination test)
3．直接凝集反应(direct agglutination test)
4．凝集原(agglutinogen)
5．凝集素(agglutinin)
6．试管凝集试验（tube agglutination）
7．间接凝集反应（indirect agglutination test）
四、问答题
1．简述间接血凝试验的基本原理。
2．简述抗人球蛋白试验的原理（又称Coombs试验）、类型及其在临床上的应用。
第三部分参考答案与题解
一、选择题
（一）单项选择题(A型题)
1 .C 2. B3．E 4．C 5. B 6. E7. D
（二）多项选择题(X型题 )
1.BCD
2.BCD
3.ABCDE
4.AB
5.ABE
6.ABCE
7.ABCE
8.ABDE
9.ACDE 10.ACD 11.BCDE 12.CDE 13.BDE 14.ABC 15.ABD
二、填空题
1．直接凝集反应、间接凝集反应。
2．（正向）间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应
3．凝集原、凝集素、玻片法、试管法。
4．抗原、抗体、抗体、抗原。
5．不完全抗体、交叉配血。
三、名词解释
1．滴度(效价)：血清标本进行一系列倍比稀释后进行反应，以出现明显凝集反应的血清最高稀释度、即滴度(效价)。
2．凝集反应：凝集反应是指细菌或红细胞等颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下结合形成凝集的现象。
现也指颗粒化抗原或抗体与相应抗体或抗原的反应。
3．直接凝集反应：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4．凝集原：.指凝集反应中的抗原。
5．凝集素：指凝集反应中的抗体。
6．试管凝集试验：是在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合，在一定条件下，会出现肉眼可见的凝集现象。
7．间接凝集反应：将可溶性抗原(或抗体)先吸附于适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体(或抗原)作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性疑集现象称间接凝集反应或被动凝集反应(passive agglutination test)。
四、问答题
1．间接血凝试验是将可溶性抗原（或抗体）吸附于人的O型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称被动血凝试验。
2．Coombs试验又称抗人球蛋白试验，其原理是不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。
Coombs试验有二种类型：（1）直接Coombs试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。
（2）间接Coombs试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。
（张学宁）。