乳酸测定方法
乳酸 检测标准
乳酸检测标准
1.范围
2.本标准规定了乳酸的检测方法，适用于各种样品中乳酸含量的测定。
3.原理
4.本方法采用高效液相色谱法，通过色谱柱分离乳酸与其他组分，使用紫外
检测器检测乳酸的峰面积，从而计算乳酸的含量。
5.试剂
3.1 乳酸标准品：纯度应大于99%。
3.2 甲醇：色谱纯。
3.3 超纯水：电阻率大于18MΩ·cm。
6.仪器
4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2 色谱柱：C18反相色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。
4.3 恒温水浴锅：温度波动±0.5℃。
7.样品制备
5.1 称取适量样品，加入超纯水制成溶液。
5.2 将溶液过膜，供高效液相色谱分析。
8.分析条件
6.1 流动相：甲醇+水=70+30（体积比）。
6.2 流速：1mL/min。
6.3 检测波长：210nm。
6.4 柱温：30℃。
6.5 进样量：10μL。
9.操作步骤
7.1 打开高效液相色谱仪，预热30分钟。
7.2 将乳酸标准品和样品分别注入色谱柱中。
7.3 记录色谱图，得到乳酸的峰面积。
7.4 根据峰面积计算乳酸含量。
10.结果表示
11.根据峰面积计算乳酸含量，可以使用以下公式进行计算：
12.乳酸含量（%）= （峰面积/标准品峰面积）×标准品浓度×100%
13.其中，标准品浓度为乳酸标准品的浓度，单位为mg/mL。
乳酸测定
安捷伦6890气相色谱仪，FID检测器，色谱柱为HP-FＦＡP19０９1F-４13型(30m*0.32mｍ＊0.25μm）毛细管柱。
色谱定量结果：乙酸（记为A乙ｇ／L)下同、丙酸(A丙g／L）、丁酸(A丁ｇ/L）、异丁酸（A异丁g/L)、戊酸(A戊g/L)、己酸（Ａ己g/Ｌ)、庚酸(A庚g/L）、辛酸（Ａ辛g/Ｌ）。
样品
测定值(ｍg/L）
平均值
SＤ
ＲSD(％）
1
2
3
４
5
6
7
乳酸
271.15
271.5３
272.33
27２.１9
２71．69
271.53
271.64
2７１.72
0.41
0.15
1.5.4回收率
取20ml样品各３份，其中1份作本底量,另外2份各添加已知量的标准液，经上述样品预处理后,测出乳酸在样品中的含量，并根据检测量计算出乳酸的回收率和精密度，结果表明样品的回收率及准确度满足分析要求，结果见表2。
3．3乳酸含量的求取
根据陈周平对浓香型白酒的测定,白酒中的有机酸含量有下列趋势:乙酸>己酸>乳酸>丁酸>甲酸>戊酸>棕榈酸>亚油酸>油酸>辛酸>异丁酸>丙酸>异戊酸>庚酸,而乙酸、己酸、乳酸、丁酸的含量加上辛酸、异丁酸、戊酸、庚酸、丙酸的含量占其总酸含量的９5％以上,其他的酸特别是高级脂肪酸的含量只有在发酵期较长的优质酒中才有一定的含量，在一般发酵期和一般质量的酒中，含量甚微,因此,未测出的有机酸基本都可以忽略不计。所以乳酸的含量求得为:
1．3试剂及标准溶液的配制
1.3.1内标溶液的配制
(改)乳酸的对羟基联苯比色法测定
乳酸的对羟基联苯比色法测定1试剂乳酸溶液：称取乳酸钙（C6H10CaO6.5H2O，分子量308.29；乳酸为CH3CH(HO)COOH，分子量为90.08，即乳酸钙中含两份乳酸）0.1730g（即308.29/((90.08-1)×2)=1.730，乳酸含量为0.1g）。
用去离子水定容至100ml溶解，即这1000 ug/ml。
从中取出10ml，定容到100ml容量瓶中。
即含量为100ug/ml。
20%硫酸铜溶液：称取20克硫酸酮（CuSO4.5H2O）用100ml去离子水溶解。
对-羟基联苯试剂：称取1.5g，用浓度为5%（W/V）氢氧化钠溶液20ml溶解，去离子水定溶到100ml，棕色试剂瓶中冷藏保存备用。
不能加热溶解。
5%的氢氧化钠：称取5g氢氧化钠溶于100ml的蒸馏水中。
2步骤①青贮饲料浸提液1ml用去离子水进行稀释，稀释浓度根据青贮料的乳酸含量决定。
用20g，加入100ml去离子水，5℃下静置24h。
再取1ml浸提液稀释至100ml，即测出结果约为50ug左右，取1ml从②-⑧中直测。
（测出乳酸的结果一般为2%左右）。
②加入一滴20%硫酸铜溶液，摇匀。
③将试管置于冰水中，缓慢加入6ml浓硫酸，并混匀。
④放入沸水浴中煮沸5min。
⑤试管从沸水浴中取出后，用水冷却到室温，并加入0.2ml的对-羟基联苯试剂，小心摇匀试管内容物。
⑥将试管放入30℃恒温水浴中反应30min显色，振荡摇匀。
⑦为去除多余对-羟基联苯试剂，将试管在沸水浴中再煮沸3min。
⑧取出，冷却后，分光光度计波长560nm（乳酸的吸收波长为243nm）处比色测定OD值。
3 标准曲线的制作①取12支大试管，分为2组（原数据为6组），分别向每组试管中加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml浓度为100ug/ml的标准乳酸溶液。
系列中各乳酸含量为：0、20、40、60、80、100ug。
②向各试管中添加去离子水，即：1、0.8、0.6、0.4、0.2、0，定容至1ml。
乳酸测定
乳酸的测定:
另取4支洁净、干燥的试管，编号，各加入浓硫酸2ml ，将试管置于冰浴中冷却。
用小滴管取各样品滤液2滴逐滴加到已冷却的上述浓硫酸溶液中，边加边摇动冰浴中的试管，避免局部过热。
将各管混匀后，放入沸水浴5min ，加入对羟基联苯试剂2滴混匀，冷却后，比较和记录各管溶液的颜色深浅。
编号 试剂 样品 空白
1
2
3
4
肌肉靡（g ） 0.5
20%三氯乙酸（ml ）
3 3
1/15M 磷酸缓冲液（ml ） 3 0.5%淀粉溶液（ml ）
1
充分摇匀，加液体石蜡封口隔绝空气，37℃水浴1h ，后吸出石蜡。
20%三氯乙酸（ml ） 3
3
饱和硫酸铜溶液（ml ） 1 氢氧化钙粉末（g ）
0.4
充分搅拌，放置10min,并不时搅动内容物，分别过滤，弃去沉淀。
五、实验结果：
肌糖原酵解作用实验结果
空白组（左，基本透明无色）样品组（右，紫罗兰色）
根据实验图判断，样品管中发生了肌糖元酵解，生成的乳酸转变为乙醛后与对羟基联苯反生明显的显色反应，呈现紫罗兰色，空白管因酶失活未发生反应，无颜色变化。
六、实验注意事项
1、实验中用淀粉代替了肌糖元，因为淀粉与肌糖元结构类似，均为葡萄糖分子的高聚糖，淀粉因支链少分解较糖原稍慢，应保证37度水浴时间充足。
2、滴加液体甘油石蜡不宜过多，避免后期过滤困难。
3、测定乳酸的试管必须保证干燥、洁净。
4、最后除糖及蛋白质步骤一定要彻底，保证滤液无杂质干扰，以免影响显色结果。
乳酸含量的测定
乳酸的测定—中和滴定法应用范围：本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。
方法原理：供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。
试剂：1. 水（新沸放置至室温）2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）4. 酚酞指示液5. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液6. 乙醇7.基准邻苯二甲酸氢钾8.基准无水碳酸钠试样制备：1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。
每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。
根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。
C(NaOH)=m/0.2042*(V1-V2)M——邻苯二甲酸氢钾的质量；V1——氢氧化钠的消耗量；V2——空白贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（1 mol/L）配制：取硫酸30m L，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。
有机酸的分析与检验——对羟基联苯比色法测定乳酸含量
有机酸的分析与检验——对羟基联苯比色法测定乳酸含量有机酸是一类含有羧基（COOH）的有机化合物，具有特殊的化学性质和广泛的应用。
有机酸的分析与检验对于实验室研究和工业生产都具有重要意义。
其中，对羟基联苯比色法可以用于测定乳酸含量。
乳酸（lactic acid）是一种常见的有机酸，是由乳酸菌在发酵过程中产生的。
乳酸广泛应用于食品工业、药品工业和医药领域。
因此，测定乳酸含量是非常重要的。
对羟基联苯比色法基于乳酸与对羟基联苯反应生成有色产物的原理进行测定。
该方法操作简便，灵敏度高，具有较高的准确性和精密度。
具体操作步骤如下：步骤一：制备标准曲线1.准备一系列乳酸浓度逐渐递增的标准溶液。
可以使用已知浓度的乳酸溶液进行稀释，或通过乳酸的溶液配制。
2.将标准溶液分别转移到不同的容量瓶中，加入定量的对羟基联苯试剂。
3.在常温环境下，利用分光光度计测量乳酸和对羟基联苯试剂反应产生的有色产物的吸光度。
4.利用所得吸光度数据绘制乳酸浓度与吸光度之间的标准曲线。
步骤二：样品处理1.取适量待测样品，用水稀释至一定体积。
2.将稀释后的样品分别转移到不同的容量瓶中。
3.各个容量瓶中加入定量的对羟基联苯试剂。
4.在常温环境下，利用分光光度计测量样品和对羟基联苯试剂反应产生的有色产物的吸光度。
步骤三：计算样品中乳酸含量1.根据标准曲线，利用所得吸光度数据计算出样品中乳酸的浓度。
2.根据样品的稀释倍数和最初样品的体积，计算出样品中乳酸的实际含量。
需要注意的是，实验过程中应该严格控制温度和时间，避免有色产物与空气中的氧气反应产生误差。
此外，对乳酸本身的特性和分子结构也需要了解，以正确操作和解读实验结果。
通过对羟基联苯比色法测定乳酸含量，可以实现对有机酸乳酸的定量分析。
这种方法具有操作简便、准确度高的特点，适用于实验室研究和工业生产过程中乳酸含量的测定。
乳酸的测定——EDTA滴定乳酸钙法
乳酸的测定——EDTA滴定乳酸钙法1 实验原理1.1 乙二胺四乙酸（简称EDTA，常用H4Y表示）难溶于水，通常使用其二钠盐配制标准溶液。
标定EDTA溶液常用的基准物有Zn、ZnO、CaCO3、Bi、Cu、MgSO4·7H2O、Hg、Ni、Pb等。
通常选用其中与被测组分相同的物质作基准物，这样滴定条件较一致。
EDTA溶液若用于测定石灰石或白云石中CaO、MgO的含量，则宜用CaCO3为基准物。
首先可加HCl溶液与之作用，其反应如下：CaCO3+2HCl═CaCl2+H2O+CO2↑然后把溶液转移到容量瓶中并稀释，制成钙标准溶液。
吸取一定量钙标准溶液，调节酸度至pH≥12，用钙指示剂作指示剂以EDTA滴定至溶液从酒红色变为纯蓝色，即为终点，其变色原理如下：钙指示剂（常以H2Ind表示）在溶液中按下式电离：H3Ind═2H++HInd2-在pH≥12溶液中，HInd2-与Ca2+离子形成比较稳定的络离子，反应如下：HInd2-+Ca2+═CaInd-+H+纯蓝色酒红色所以在钙标准溶液中加入钙指示剂，溶液呈酒红色，当用EDTA溶液滴定时，由于EDTA与Ca2+离子形成比CaInd-络离子更稳定的络离子CaY2-，因此在滴定终点附近，CaInd-络离子不断转化为较稳定的CaY2-络离子，而钙指示剂则被游离了出来，其反应可表示如下：CaInd-+H2Y2-═CaY2-+ HInd2-+H2O酒红色无色纯蓝色由于CaY2-离子无色，所以到达终点时溶液由酒红色变成纯蓝色。
用此法测定钙，若Mg2+离子共存（在调节溶液酸度为pH≥12时，Mg2+离子将形成Mg(OH)2沉淀），此共存的少量Mg2+离子不仅不干扰钙的测定，而且会使终点比Ca2+离子单独存在时更敏锐。
当Ca2+、Mg2+离子共存时，终点由酒红色变到纯蓝色，当Ca2+离子单独存在时则由酒红色变紫蓝色，所以测定单独存在的Ca2+离子时，常常加入少量Mg2+离子溶液。
乳酸检验方法
乳酸检验方法
乳酸的检验方法较多，包括EDTA定钙法、羟基联苯法、乳酸脱氢酶法、高效液相色谱法和酶电极分析法等。
1、EDTA定钙法。
通过发酵液中的乳酸与CaCO3反应生成乳酸钙，再用EDTA标准溶液滴定乳酸钙中的钙，最终计算乳酸含量。
但该方法测得值高于实际乳酸含量，误差较大。
2、羟基联苯法。
通过发酵饲料中加入硫酸铜和浓硫酸，使乳酸与羟基联苯反应生成加色产物，再通过测定光吸收值来计算乳酸含量。
该方法准确度稍高。
3、乳酸脱氢酶法。
利用乳酸脱氢酶催化乳酸与辅酶NADH反应，通过测定NADH的生成量来确定乳酸含量。
该方法准确性较高，速度较快，但成本较高，适用于特定时期快速检测乳酸含量的场合。
4、高效液相色谱法。
通过简单处理发酵液样品，使用反相色谱柱并以磷酸为流动相，在特定波长下进行检测，可以准确分离并测定乳酸、苹果酸和富马酸。
5、酶电极分析法。
利用固定化乳酸氧化酶催化乳酸的氧化反应产生电流变化，通过测量电流来计算乳酸含量。
该方法具有高专一性、长期稳定性和快速灵敏的特点，适用于快速测定乳酸含量的情况。
此外，还有电位滴定法、离子交换树脂法、气相色谱法、光度法和磁共振法等乳酸含量测定方法。
乳酸测定方法
乳酸的测定：对羟基联苯比色法（参照高庆，2005）1.材料、试剂与仪器无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
1.1主要溶液：①钨酸溶液：0.303mol/L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至100ml；③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯1.5g溶于100ml 的0.125mol/L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于4℃冰箱，可使用一个月；④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂106.5mg，溶于50ml 蒸馏水中，加0.5mol/L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至100ml，混匀后保存于4℃冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200µg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。
在冰箱中可保存数天。
1.2主要仪器：UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法2.1 青贮浸提液样品预处理取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液2.00ml于洁净离心管中，加入2.00ml钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。
2.2 标准曲线的制作①用200Lg/mL乳酸应用标准液同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。
乳酸测定方法
乳酸的测定：对羟基联苯比色法（参照高庆，2005）1.材料、试剂与仪器无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
主要溶液：①钨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O)20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至 100ml；③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于100ml 的L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于 4℃冰箱，可使用一个月；④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂，溶于50ml 蒸馏水中，加 L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至 100ml，混匀后保存于 4℃冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200µg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。
在冰箱中可保存数天。
主要仪器：UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法青贮浸提液样品预处理取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。
标准曲线的制作①用200Lg/mL乳酸应用标准液同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。
②各管中分别加入氢氧化钙粉末100mg,混匀,8000r/min离心5min,取上清液,加入预先加有20mg氢氧化钙粉末的小试管中,混匀,加 20%硫酸铜溶液,称重,迅速混匀,沸水浴3min,水浴冷却,补足重量,3000r/min离心5min,各吸上清液加入比色管中。
乳酸测定的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握乳酸测定的原理和方法。
2. 了解乳酸在生物体内的重要作用。
3. 掌握实验操作的规范性和安全性。
二、实验原理乳酸（Lactic Acid）是一种有机酸，在生物体内主要作为能量代谢的中间产物。
乳酸的测定方法有多种，本实验采用酶法测定乳酸浓度。
酶法测定乳酸的原理是：乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）催化乳酸和NAD+发生氧化还原反应，生成丙酮酸和NADH。
NADH在特定波长下有特征性吸收，通过测定吸光度变化，可以计算出乳酸的浓度。
三、实验材料与仪器材料：1. 乳酸标准溶液（已知浓度）2. 纯乳酸3. NAD+4. 丙酮酸5. 酶试剂6. 水浴锅7. 移液器8. 比色计仪器：1. 移液器2. 比色计3. 水浴锅4. 实验室天平四、实验步骤1. 标准曲线绘制：a. 取一系列已知浓度的乳酸标准溶液，分别加入酶试剂，混匀。
b. 将混合液放入水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
c. 取反应后的溶液，用比色计测定吸光度。
d. 以乳酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：a. 取一定量的待测样品，加入酶试剂，混匀。
b. 将混合液放入水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
c. 取反应后的溶液，用比色计测定吸光度。
d. 根据标准曲线，计算样品中乳酸的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：通过绘制标准曲线，可以得到乳酸浓度与吸光度之间的关系。
在本实验中，标准曲线呈线性关系，相关系数R²>0.99，说明该方法具有良好的线性。
2. 样品测定：对不同样品进行乳酸测定，得到以下结果：| 样品编号 | 乳酸浓度（mg/L） || -------- | ----------------- || 1 | 100.0 || 2 | 200.0 || 3 | 300.0 || 4 | 400.0 || 5 | 500.0 |根据实验结果，样品中乳酸浓度与加入的乳酸量呈线性关系，说明该方法可用于乳酸的测定。
测定乳酸水平的方法有几种
测定乳酸水平的方法有几种
测定乳酸水平的方法有多种，以下是其中几种常用的方法：
1. 血液乳酸测定：通过采集血液样本，使用乳酸仪或生化分析仪来测量乳酸浓度。
2. 呼气乳酸测定：通过呼气气体样本，使用乳酸仪或呼气色谱仪来测量呼出气中的乳酸浓度。
3. 尿液乳酸测定：通过采集尿液样本，使用尿液分析仪或乳酸试纸测量尿液中的乳酸浓度。
4. 肌肉组织乳酸测定：通过采集肌肉组织样本，使用生化分析仪或乳酸试剂盒来测量组织中的乳酸浓度。
需要注意的是，不同的测定方法具有不同的准确度和适用性，选择合适的方法取决于具体的实验目的和需要。
实验十三血乳酸的测定与应
实验十三血乳酸的测定与应血乳酸测定是一种生物化学实验，用于检测血液中的乳酸浓度。
乳酸是身体在缺氧情况下产生的一种化合物，通常与运动强度、肌肉疲劳、身体能量代谢等方面有关。
通过测定血乳酸浓度，可以了解身体在高强度运动或某些疾病状态下的代谢状态。
下面是这个实验的详细步骤：实验目的1.了解乳酸的产生和作用机制；2.掌握血乳酸测定的基本原理和方法；3.通过实验数据的分析，了解运动强度与血乳酸浓度的关系，以及如何通过测定血乳酸指导运动训练。
实验原理乳酸是一种有机酸，在身体中以乳酸盐的形式存在。
血液中的乳酸浓度可以通过抽取静脉血液进行测定。
在实验室条件下，血液中的乳酸浓度可以通过使用比色法或电化学方法进行测定。
其中，比色法是通过与标准品比较颜色深浅来计算乳酸浓度；电化学法是通过测量电流信号来计算乳酸浓度。
实验步骤1.准备试剂和仪器：准备好乳酸测定试剂盒和乳酸分析仪。
按照说明书要求配制试剂，并按照仪器说明书操作。
2.采集血液样本：在安静状态下和运动后（如进行高强度运动后），分别抽取静脉血液约5毫升。
使用肝素或枸橼酸钠抗凝剂，将血液样本保存好以备后续测定。
3.样品处理：将采集到的血液样本注入乳酸分析仪的样品杯中。
根据仪器说明书的要求进行操作。
4.数据记录：记录静息状态和运动后的血乳酸浓度。
注意记录运动前后的心率、血压等生理指标。
5.数据分析和解释：根据所记录的血乳酸浓度，分析乳酸的产生和代谢情况。
比较安静状态和运动后的血乳酸浓度变化，探讨运动强度与血乳酸浓度的关系。
注意事项1.采集血液样本时要确保采血部位正确，避免出现溶血、凝血等现象。
2.采集血液样本后要及时进行处理，避免放置时间过长导致血乳酸浓度发生变化。
3.在进行血乳酸测定时，要注意试剂和仪器的使用方法，避免误差的产生。
4.在分析实验数据时，要注意数据的准确性和可靠性。
如果数据异常或不符合预期结果，应该重新进行分析和评估。
5.在解释实验结果时，应该结合运动前后的生理指标进行综合分析。
乳酸含量的测定方法
乳酸含量的测定方法嘿，朋友们！今天咱来聊聊乳酸含量的测定方法。
你可别小瞧了这乳酸，它在咱们身体里那可是相当重要的角色呢！咱就说，这乳酸就像是个调皮的小精灵，在我们运动或者身体有各种活动的时候，它就会出现。
那怎么知道它到底有多少呢？这就需要一些特别的办法啦！比如说，有一种方法就像是给乳酸小精灵拍个特写照片一样。
通过一些化学试剂和它反应，然后根据反应的结果来判断乳酸的含量。
这就好比你要找个隐藏在人群中的小伙伴，你得有个特别的标志或者信号才能找到他，对吧？还有一种方法呢，就像是给乳酸小精灵量身高。
利用一些仪器和技术，精确地测量出它的数值。
这可需要点技术和耐心哦，就像你要小心翼翼地量自己最心爱的宝贝一样，不能有一点马虎。
那你可能会问啦，为啥要测定乳酸含量呀？这用处可大啦！就好像你知道天气情况能决定你穿什么衣服一样，知道乳酸含量能让我们更好地了解身体的状态。
比如运动后测一测，就能知道自己是不是运动过度啦，是不是该休息一下啦。
想象一下，如果没有这些测定方法，我们就像在黑暗中摸索，不知道身体里的乳酸小精灵在搞什么鬼。
但有了这些方法，我们就像是有了一盏明灯，能清楚地看到乳酸的动向。
而且哦，这些方法操作起来也不难。
只要你认真学一学，就像学骑自行车一样，一开始可能有点摇晃，但慢慢就熟练啦。
你可以在实验室里像个小科学家一样，专注地进行测定。
测定乳酸含量的过程也很有趣呢！就像是一场小小的冒险，每一步都充满了新奇和挑战。
你会期待着结果，就像等待一份神秘的礼物一样。
总之呢，乳酸含量的测定方法是我们了解身体的一个重要途径。
它能帮助我们更好地照顾自己，让我们的身体更健康。
所以啊，大家可别小瞧了这些方法哦！它们就像是我们身体的小卫士，时刻守护着我们呢！现在，你是不是对乳酸含量的测定方法更感兴趣啦？赶紧去试试吧！。
乳酸测定
总有机酸检测试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂仪器:磁力搅拌器离心机方法：（1）取发酵后鲜样品5g 置于150ml烧杯中加入溶于95ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。
（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。
（3）取上清液10ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。
（终点到溶液呈现粉红）计算乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/(5×10/100)N(NaOH):NaOH标准溶液的浓度；V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积；0.09008：乳酸的毫克当量。
0.1mol氢氧化钠的配制与标定1、配制：称取10g氢氧化钠，溶于100ml水中配置成饱和溶液，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。
用塑料管虹吸5.6ml的上清液，注入1000ml 无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。
2、标定称取0.4g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。
3、计算氢氧化钠标准溶液的浓度按下式计算c（NaOH）=m/（V1-V2）×0.2042式中c（NaOH）——氢氧化钠标准溶液之物质的量的浓度，mol/l；V1——滴定用邻苯二甲酸氢钾之用量，ml；V0——空白试验氢氧化钠溶液之用量，ml；m——邻苯二甲氢钾之质量，g；• 0.2042——与1.00ml氢氧化钠标准液[c（NaOH）=1.000mol/l]相当的以克表示的邻苯二甲氢钾之用量。
0.1％酚酞指示剂的配制：称取1.000克酚酞，溶解与100ml95％的试剂酒精中，混匀即得。
乳酸测定方法
乳酸测定方法本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March乳酸的测定：对羟基联苯比色法（参照高庆，2005）1.材料、试剂与仪器无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
主要溶液：①钨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至 100ml；③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于100ml 的L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于 4℃冰箱，可使用一个月；④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂，溶于50ml 蒸馏水中，加 L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至 100ml，混匀后保存于 4℃冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200µg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。
在冰箱中可保存数天。
主要仪器：UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法青贮浸提液样品预处理取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。
标准曲线的制作①用200Lg/mL乳酸应用标准液同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。
乳酸测定方法的初步研究
乳酸测定方法初步研究摘要乳酸是重要的生化产品，广泛应用于食品、医药、环保等各领域，目前L-乳酸的主要生产方法为微生物发酵法。
近年来由于其可用于合成可降解塑料——聚乳酸的性质而受到众多的关注，具有广阔的市场前景。
本研究利用薄层色谱、EDTA和对羟基联苯法建立了乳酸的定性定量检测方法，并对实验条件范围进行了研究，结果如下：1、得到了分离提纯精制L-乳酸的具体参数：实验分别在55℃、60℃、65℃、70℃四个温度下直接用50%的稀硫酸酸解浓缩的乳酸钙溶液，用0.1%甲基紫溶液作为指示剂对粗L-乳酸进行了精制。
在此范围内均可得到纯度大于90%的乳酸，精制后的乳酸颜色清澈，对精制的乳酸进行第二次分子蒸馏得到了结晶乳酸。
采用分子蒸馏技术精制L-乳酸，在操作压力为0.1Pa，蒸馏温度为70℃效果最好，同时实验发现适宜的蒸馏温度应低于75℃。
2、确定了乳酸的薄层定性分析条件，实验结果表明，定性分析方法效果良好；方法简单，精确度高，显色稳定，重复性好，可应用于乳酸含量的测定。
3、确定了利用EDTA法测定乳酸的可行性。
在消除其他离子干扰的前提下，钙离子可迅速与乙二胺四乙酸二钠反应，以钙—经酸为指示剂，用EDTA标准溶液滴定，溶液成纯蓝色为滴定终点，用滴定消耗的EDTA 体积和摩尔浓度可求得乳酸钙的含量。
4、在一定浓度范围内，乳酸含量与 565 nm 处波长吸光度呈线性关系，因此，可以通过测定 565 nm 处的吸光度来测定乳酸的含量。
通过实验证明此方法可行并且快速有效。
5、用DNS法测定残糖含量中。
以葡萄糖的浓度Y（mg/ml）对540nm分光光度值，进行线性回归，其回归方程为Y=1.4163X+0.0255，相关系数为0.9988。
为以后测定发酵液中残糖含量奠定了基础。
关键字：L-乳酸，精制，测定，分离，含量目录前言............................................................................................................................. - 2 - 第一章文献综述 ......................................................................................................... - 2 -1.1 乳酸的性质 .................................................................................................... - 2 -1.1.1 乳酸的分子结构................................................................................... - 2 -1.1.2 乳酸的理化性质................................................................................... - 3 - 第二章乳酸测定方法研究 ........................................................................................... - 3 -2.1引言 ............................................................................................................... - 3 -2.2 发酵液中L-乳酸的分离精制......................................................................... - 4 -2.2.1 仪器与方法................................................................................................. - 4 -2.2.1.1仪器及试剂....................................................................................... - 4 -2.2.1.2 实验方法.......................................................................................... - 4 -2.2.1.3结果与讨论....................................................................................... - 5 -2.3 同型、异型乳酸发酵的确定（薄层色谱）....................................................... - 6 -2.3.1 仪器与方法................................................................................................. - 6 -2.3.1.1仪器及试剂....................................................................................... - 6 -2.3.1.2实验方法 .......................................................................................... - 6 -2.3.1.3结果与讨论....................................................................................... - 7 -2.4 乳酸含量测定................................................................................................. - 8 -2.4.1 EDTA滴定法确定乳酸含量仪器与方法 ......................................................... - 8 -2.4.1.1仪器及试剂....................................................................................... - 8 -2.4.1.2实验方法 .......................................................................................... - 9 -2.4.1.3结果与讨论....................................................................................... - 9 -2.4.2 分光光度法标准曲线确定乳酸含量仪器与方法 ............................................ - 9 -2.4.2.1仪器及试剂....................................................................................... - 9 -2.4.2.2实验方法 ........................................................................................ - 10 -2.4.2.3结果与讨论..................................................................................... - 10 -2.5 残糖含量的确定（DNS法）......................................................................... - 12 -2.5.1 仪器与方法............................................................................................... - 12 -2.5.1.1仪器及试剂..................................................................................... - 12 -2.5.1.2实验方法 ........................................................................................ - 12 -2.5.1.3结果与讨论..................................................................................... - 12 - 第三章结论 .............................................................................................................. - 13 -3.1 结论............................................................................................................. - 13 - 参考文献.................................................................................................................... - 13 - 致谢......................................................................................................................... - 14 -前言乳酸是重要的生化产品，广泛应用于食品、医药、环保等各领域，目前L-乳酸的主要生产方法为微生物发酵法。
血乳酸的测定
— 1滴
3.0ml
— 1滴
3.0ml
前0.5ml 1滴
3.0ml
后0.5ml 1滴
3.0ml
沸水浴5分钟后取出，静置2分钟，流水冷 却。
[步骤]
4. 每管滴加对羟基联苯 2 滴，混匀， 37℃水浴保温 15 分钟（每5分钟振摇一次）。 5.沸水浴90秒，室温静置1分钟，流水冷却。 6.分别倒入比色皿，空白管调零，560nm波长比色。
0.48 0.48 0.02 0.02 1.5 1.5 混匀，离心（3500×5min），备用。
பைடு நூலகம்
[步骤]
3.测定血乳酸浓度
样品或试剂
乳酸空白液 乳酸标准液（10µg/ mL）
取四支试管编号后按下表操作：
1空白管
0.5ml —
2标准管
— 0.5ml
3运动前
— —
4运动后
— —
无蛋白血滤液 4%硫酸铜
乳酸+浓硫酸
铜离子、加热
乙醛 紫色化合物
乙醛+对羟基联苯
[步骤] 1. 取血。
取指尖血20µ L，吹入含0.48毫升1％NaF溶液的离心 试 管中 ， 立即摇 匀 。剧 烈运动 1-2 分钟 （如高 抬腿 跑），然后再取指尖血20µ L，操作方法同第一步。
2.无蛋白血滤液的制备 取干净试管2支，做好标记，按下表操作。 试剂（mL） 1%氟化钠 采血 10%三氯乙酸 运动前 运动后
血乳酸的测定
[目的]掌握血乳酸的测定原理、方法及意义。 [原理]乳酸（HL）是体内糖无氧酵解的终产物。运
动时乳酸主要在骨骼肌中生成，然后透过细胞膜进 入血液，并随血液循环到达身体的其他组织被代谢 消除。在安静时，血乳酸浓度约为1-2mmol/L，运动 时血乳酸浓度上升，上升程度与运动强度直接相关， 在一定强度范围内，随运动强度增大，乳酸生成增 多。
乳酸的测定--EDTA滴定乳酸钙法
乳酸的测定--EDTA滴定乳酸钙法乳酸的测定——EDTA 滴定乳酸钙法1实验原理1.1 乙二胺四乙酸（简称EDTA ，常用H 4Y 表示）难溶于水，通常使用其二钠盐配制标准溶液。
标定EDTA 溶液常用的基准物有Zn 、ZnO 、CaCO 3、Bi 、Cu 、MgSO4·7H 2O 、Hg 、Ni 、Pb 等。
通常选用其中与被测组分相同的物质作基准物，这样滴定条件较一致。
EDTA 溶液若用于测定石灰石或白云石中CaO 、MgO 的含量，则宜用CaCO 3为基准物。
首先可加HCl 溶液与之作用，其反应如下：CaCO 3+2HCl═CaCl 2+H2O+CO2↑然后把溶液转移到容量瓶中并稀释，制成钙标准溶液。
吸取一定量钙标准溶液，调节酸度至pH ≥12，用钙指示剂作指示剂以EDTA 滴定至溶液从酒红色变为纯蓝色，即为终点，其变色原理如下：钙指示剂（常以H 2Ind 表示）在溶液中按下式电离：H 3Ind ═2H ++HInd 2-在pH ≥12溶液中，HInd 2-与Ca 2+离子形成比较稳定的络离子，反应如下：HInd +Ca2+═CaInd +H+ 2--纯蓝色酒红色所以在钙标准溶液中加入钙指示剂，溶液呈酒红色，当用EDTA 溶液滴定时，由于EDTA 与Ca 2+离子形成比CaInd 络离子更稳定的络离子CaY ，因此在滴定终点附-2-近，CaInd 络离子不断转化为较稳定的CaY 络离子，而钙指示剂则被游离了出来，其反应可表示如下：CaInd +H2Y ═CaY + HInd+H2O -2-2-2--2-酒红色无色纯蓝色由于CaY 离子无色，所以到达终点时溶液由酒红色变成纯蓝色。
用此法测定钙，若Mg 2+离子共存（在调节溶液酸度为pH ≥12时，Mg 2+离子将形成Mg(OH)2沉淀），此共存的少量Mg 2+离子不仅不干扰钙的测定，而且会使终点比Ca 2+离子单独存在时更敏锐。
当Ca 2+、Mg 2+离子共存时，终点由酒红色变到纯蓝色，当Ca 2+离子单独存在时则由酒红色变紫蓝色，所以测定单独存在的Ca 2+离子时，常常加入少量Mg 2+离子溶液。
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乳酸的测定：
对羟基联苯比色法（参照高庆，2005）
1.材料、试剂与仪器
无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
主要溶液：
①钨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；
②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至100ml；
③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于100ml 的L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于4℃冰箱，可使用一个月；
④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂，溶于50ml 蒸馏水中，加L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至100ml，混匀后保存于4℃冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL 加蒸馏水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200μg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。
在冰箱中可保存数天。
主要仪器：
UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法
青贮浸提液样品预处理
取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。
标准曲线的制作
①用200Lg/mL乳酸应用标准液
同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。
②各管中分别加入氢氧化钙粉末100mg,混匀,8000r/min离心5min,取上清液,加入预先加有20mg氢氧化钙粉末的小试管中,混匀,加20%硫酸铜溶液,称重,迅速混匀,沸水浴3min,水浴冷却,补足重量,3000r/min离心5min,各吸上清液加入比色管中。
③在各管加入25μL的4%硫酸铜溶液,混匀后置冰水浴内冷却。
④将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中,每管各加,边加边摇,混匀后置沸水浴中准确加热5min,取出后迅速置冰水浴中冷却3min左右。
⑤在各管中加%对羟基联苯溶液,充分振摇后,放置,其间每10min 混摇一次。
⑥各管置于沸水浴中准确加热90s,立即放入冰水浴中冷却。
在波长565nm处用lcm比色皿,1管作为参比,分别测定吸光度(A)。
所得数据以乳酸含量为横坐标,以565nm处的光吸收为纵坐标,作标准曲线。
青贮样品浸提液中乳酸含量的测定
取青贮样品浸提液滤液按标准曲线的测定
方法,以蒸馏水为空白测定其在560nm处的光吸收,所得数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量,即为青贮样品浸提液中的乳酸含量。
样品中乳酸含量=计算值×稀释倍数
需要试剂：
无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
需要器材：
分光光度计、离心机、离心管、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。