梅毒螺旋体的检测方法及评价

梅毒螺旋体的检测方法及评价

梅毒螺旋体(treponemapallidum,TP)是引起性传播性疾病梅毒的主

要病原体。1905年由Schandim等首次发现,通过人类粘膜或有破损的皮肤直接接触病人感染性病灶而传播。不但引起人类全身性疾病危害人们的健康,同时还传播给下一代。多年来通过大量的研究工作,建立了许多检测TP的方法。近年来,随着分子生物学和免疫学技术的发展,进一步促进了对TP的研究工作,使得快速、敏感、特异的梅毒诊断方法不断更新完善,有利于广泛开展流行病学调查、预防控制及更准确地指导临床治疗。

TP检测的各种方法

检测TP和抗-TP抗体的方法有梅毒螺旋体检查和血清学检查法。梅毒螺旋体检查主要包括暗视野显微镜检查、直接免疫荧光实验（ＤＦＡ）及梅毒螺旋体镀银染色检查,其中ＤＦＡ的特异性较高。梅毒螺旋体检查适用于一、二期梅毒有病损者的患者，受取材及特殊显微镜限制，耗时长,难以为临床所接受。

血清学试验是目前国内外诊断梅毒的主要方法,其种类较多,包括非

螺旋体抗原试验(非特异性试验)和螺旋体抗原试验(特异性试验)。

非特异性试验是以类脂质为抗原的试验方法,世界卫生组织确认诊断梅毒的标准试验有

1性病研究实验室(VDRL)试验;

2不加热血清反应素(USR)实验;

3快速血浆反应素(RPR)试验;

4自动反应素(ART)试验;

5 RST反应素筛选试验和TRUSAT(甲苯胺红不加热血清试验)。这些试验因具有相同的标准化抗原,敏感性相似,对1、2期梅毒有诊断价值,也可做疗效随访用。又因其操作简易,费用低廉,常用作梅毒的筛选检查。但它们的敏感性和特异性比特异试验差,并且生物学假阳性高,结果受多种条件的影响。除对其他螺旋体感染时出现阳性外,假阳性还出现在急、慢性感染,妊娠,高丙种球蛋白血症,结缔组织病,溶血性贫血和其他自身免疫性疾病,也可出现在老年人和一些健康人,但多数情况下查不出原因。在国外上述几种非特异性试验中,除VDRL试验常用外,RPR试验和ART应用较少。

在我国多用RPR和TRUST。就TRUST、RPR两种方法而言,对非特异性反应素抗体导致的阳性标本TRUST法的检出率和重复性都强于RPR 法,这可能与TRUST试剂中表面包裹抗原的甲苯胺红颗粒比RPR试剂中的活性炭颗粒小更易耐受振荡导致TRUST试剂稳定性强有关。

特异性试验是以梅毒密螺旋体本身或非致病的密螺旋体为抗原,以检查病人血清中抗密螺旋体的特异性抗体。目前应用的方法有:

1密螺旋体荧光抗体吸收(FTA-ABS)试验; FTA-ABS试验被认为是当前敏感性和特异性最高的试验方法, 且在1期梅毒头几天就可以测出特异性抗体F3G，常用来最后确诊梅毒,在研究中以它为标准。但提取物为活菌，存在潜在危险性，故其应用受到很大限制。FAT-ABS试验是定性试验,治疗对它的影响也很小,一般用于确诊而不用于筛选。

2梅毒密螺旋体血凝(TPHA)试验; TPHA试验容易操作和定量,特异性

高,但试剂昂贵和不易标准化,偶然发生生物学假阳性。

通过对国内文献回顾发现，近年来TPHA已成为对除FTA-ABS以外的其他实验的“金标准”。

3蛋白印迹试验; 免疫印迹法检测梅毒特异性抗体敏感度等于或高于其它三种同类方法,特异性与ELISA和TPPA两种方法相同,但显著高于FTA-ABS法(92.2%)。免疫印迹法敏感度高,特异性好,操作简单,不需特殊仪器设备,阴阳性结果界线分明,易于判断,适应于临床广泛开展。

蛋白印迹试验结合了免疫学和分子生物学的特点,敏感性高,特异性强。

4 酶联免疫吸附(ELISA)试验; ELISA法采用抗原包被,用过氧化物酶标记并进行酶反应,是一种较新的梅毒诊断血清学方法。用抗梅毒特异性抗体ELISA试剂盒检测梅毒抗体,第一代试剂原理为间接法,采用梅毒抗原包被在酶标板上, 以辣根过氧化酶标记物的抗人-IgG为第二抗体,测定梅毒感染的特异性抗体,据报道ELISA法对梅毒感染的整体敏感性达98%以上,特异性达99%,可与TPHA,FTA-ABS试验媲美。但梅毒患者血清存在IgG、IgM 二种抗体，应同时检测，以提高敏感度。国外有报道：ELISA IgG敏感性一期梅毒为82%，其余各阶段均为100%，假阳性1.5%； ELISA IgM阳性率一期梅毒为 94%，二期梅毒为85%，早期潜伏梅毒为82%。因此认为分别作ELISA IgM 和ELISA IgG是确诊梅毒的一种有效而简单的方法。国内有人同时检测特异性IgG和IgM抗体，其阳性率分别为一期梅毒93.8%，二期梅

毒100%（IgG/IgM抗体试剂由意大利Sorindiagnostics s.r.i公司提供）。

第二代抗TP-ELISA试剂使用双抗体夹心法，主要是用基因重组表达抗原,包括梅毒螺旋体4种膜抗原,然后进行混合使用。用ELISA方法检测,实验结果与TPHA的总符合率为99 3%,且此方法操作简便,一次可完成多份标本的检测,试验结果由仪器分析,客观而准确。

现在的梅毒抗体诊断试剂将各区优势抗原连接成一个多表位的嵌合

抗原,这样表达的多表位抗原即可满足诊断试剂的需要,大大提高了

检测试剂的灵敏度。随着抗原表位的增多,检测的灵敏度也随之提高。以Ｔｐ15 17 42 47的四合一重组抗原为基础的诊断试剂是用于抗ＴｐＥＬＩＳＡ最理想的多表位抗原。

但有的TP-ELISA试剂,该试剂盒质量差，有文献报道兰州生物制品研究所的梅毒螺旋体特异性抗体酶标目测试剂盒与TPHA对比试验,二者符合率45.5%,35例梅毒血清中仅6例呈TP-ELISA阳性,其阳性检出率为17.1%。此6例TP-ELISA阳性者的TPHA结果,滴度均在1∶160以上,而TPHA1∶80阳性者无一例TP-ELISA阳性。敏感性极差。

有研究表明:用免疫印迹法、荧光梅毒螺旋体抗体吸附实验

(FTA-ABS)、酶联免疫吸附实验(ELISA)和梅毒螺旋体被动明胶颗粒凝集实验(TPPA) 四种方法结果相比较。结果44例未经治疗的梅四种方法检测治疗前后梅毒患者结果一致性分别为100%和92.8%,四种方法检测梅毒的敏感度分别为100%,98.3%,98.3%,100%,经卡方检验,四种方法检测敏感度差异无显著性意义(P>0.05)。