实验设计书

丹参酮IIA促进MSCs向心梗部位的募集作用
冠脉移植
静脉移植
丹参酮IIA
心外膜移植
研究方法
介入法栓塞冠状动脉左前降支的第二对角支远 端建立猪心肌梗死模型，建模成功后将猪随机 分为9组，每组5头。4周后进行自体MSCs移 植，三个移植组分别经耳缘静脉、冠状动脉、 心外膜注射用BrdU标记的MSCs悬液 5ml(1×107)，每组各设细胞移植+丹参酮 IIA及对照组，用同样方法注射骨髓MSCs+丹 参酮IIA及DMEM培养液5ml。移植4周后行心 脏超声及心脏磁共振检查，评价治疗心肌梗死 的效果，组织学检查梗死区心肌形态改变及移 植细胞在心肌内的分布情况。
细胞移植组6组：
D、静脉移植组 G、静脉移植+丹参酮IIA组 E、冠脉移植组 H、冠脉移植组+丹参酮IIA组 F、心外膜移植组 I、心外膜移植组+丹参酮IIA组
动物实验
实 验
4、MSCs的移植 4.1 静脉移植组
步 4.2 冠脉移植组
骤 4.3 心外膜移植组
4.4 对照组
4.5 静脉、心外膜、冠脉移植+丹参酮IIA组
动物实验
实 验
同一品种的健康猪
对 性别：雌雄各半
象
年龄：3月龄
数量：45只
体重：20--25kg
动物实验
仪
主要试剂
器
主要设备
与 1.丹参酮IIA 2.盐酸利多卡因注射液
药 3.肝素钠注射液 4.Ficoll淋巴细胞分离液
品 5.胎牛血清(FCS) 6.DMEM培养液 7.台盼蓝 8.0.25％胰酶+0．02％EDTA 9.硫酸阿托品注射液 10.盐酸氯胺酮注射液
❖ 目前已有多项基础和临床 研究发现MSCs移植既能 促进血管新生，又能促进 心肌细胞的再生，从而明 显改善心肌梗死后的心功 能，缩小梗死面积。
理论依据
MSCs
移
心内膜移植
冠脉移植
植
主
要
MSCs移植
有
以
下
静脉移植
途
心外膜移植
径
理论依据
MSCs
研究发现：间质 细胞因子-1(SDF1)及其特异性受体 CXCR4组成的 SDF-1-CXCR4轴 在干细胞的募集
与对照组相比 减少，但减少 程度较静脉移 植组明显，与 冠脉组相比差 异较小
与对照组相比 升高，但改善 程度较静脉移 植组明显，与 冠脉组相比差 异较小
预期实验结果
心功能评估指标 LVEDD（mm）
LVESD（mm）
EF%
细胞移植组
G、静脉移植+ 丹参酮IIA组
H、冠脉移植组 +丹参酮IIA组
I、心外膜移植 组+丹参酮IIA组
1.台式低温高速离心机 2.CA950．2超净工作台 3.Eclips TS 100倒置相差显微镜 4.BB5060型C02恒温培养箱 5.数字减影血管造影机 6.PD．1200型心电监护仪(带除颤设备) 7.胸外科手术器械 8.心导管 9.5500型心脏超声诊断仪
11.安定(地西泮)注射液 12.泛影葡胺 13.明胶海绵
5、心脏超声检查
6、心脏磁共振检查
7、组织学检查
7.1 HE染色
7.2免疫组织化学鉴定
动物实验
统
计
_
学 所有数据均以X±s表示，组间比较采用
处 t检验，所有统计计算由SPSS 13．0 理 软件完成，P<0．05认为差异有统计
学意义。
预期实验结果
1.心脏超声检查
心功能评估 指标
LVEDD（mm） LVESD（mm） EF%
对照组
A、静脉对 较实验前明 较实验前明 较实验前明
照组
显增大
显增大
显减少
B、冠脉对 较实验前明 较实验前明 较实验前明
照组
显增大
显增大
显减少
C、心外膜 较实验前明 较实验前明 较实验前明
对照组
显增大
显增大
显减少
预期实验结果
心功能评估指 LVEDD（mm） LVESD（mm） EF% 标
细胞移植组
与对照组相比明 与对照组相比明 与对照组相比明
显减少，程度较 显减少，程度较 显升高，程度较
D、E、F组明显， D、E、F组明显， D、E、F组明显，
与H、I组相比差 与H、I组相比差 与H、I组相比差
异较小
异较小
异较小
与对照组相比明 显减少，程度较 D、E、F组明显, 与G、I组相比差 异较小
Baidu Nhomakorabea
研究现状
静脉溶栓 抗凝
抗心肌缺 血 调脂
心脏血运 的重建
骨髓间充 质干细胞 移植
Mesenchymalstem cells（MSCs）
❖什么是骨髓间充 质干细胞 (MSCs)？
❖ 属于成体干细胞的一种， 是中胚层发育的早期细胞， 是骨髓中除了造血干细胞 之外的另一类干细胞，其 具有干细胞的共性，即自 我更新及多向分化能力。
过程中起到了关 键作用
理论依据
❖ 用转基因等方法提高心脏的SDF-1表达能够促进 干细胞向受损心脏的募集，激活细胞生存信号通路， 增加心肌梗死部位的血管新生，最终促进心梗后心 功能的恢复。因此，上调SDF-1／CXCR4通路不 失为一个增加干细胞在受损组织内植入、促进心功 能恢复的好方法。
❖研究发现，丹参酮IIA(TanIIA)具有通过调 控SDFl／CXCR4轴以促进MSCs向心梗部 位的募集的作用。
10. 1.5T磁共振成像仪 11.冰箱
14.青霉素
15.BrdU标记液
16.BrdU抗体
一抗为小鼠抗猪单抗(1：50稀释)
二抗为两步法羊抗小鼠IgG+FITC
动物实验
实 l、猪骨髓MSCs的分离和培养
验 1.1 分离 步 1.2 培养 骤 2、猪心肌梗死模型的建立
3、动物分组
对照组3组：
A、静脉对照组 B、冠脉对照组 C、心外膜对照组：
D、静脉移植 组 E、冠脉移植 组
F、心外膜移 植组
与对照组相比 与对照组相比 与对照组相比
轻度减少
轻度减少
轻度升高
与对照组相比 减少，但减少 程度较静脉移 植组明显
与对照组相比 减少，但减少 程度较静脉移 植组明显
与对照组相比 升高，但改善 程度较静脉移 植组明显
与对照组相比 减少，但减少 程度较静脉移 植组明显，与 冠脉组相比差 异较小
丹参酮ⅡA对骨髓间充质干细胞移 植治疗心肌梗死的影响
Company
LOGO
Contents
1 研究现状
实验 设计书
2 理论依据 3 研究内容 4 研究方法
5 动物实验
❖心肌梗死：在冠状动脉病变的基础上，发生冠状动
脉血供急剧减少或中断，使相应的心肌出现严重而持久 地急性缺血性坏死。一旦发生将造成心肌细胞不可逆损 伤、坏死，然而成熟的心肌细胞不能再生，且梗死区的 心肌最终被纤维组织所取代，心功能受到严重影响。