实验二 萌发麦苗淀粉酶活性的测定
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定实验二：萌发麦苗淀粉酶活性的测定一、实验目的本实验旨在测定萌发麦苗中淀粉酶的活性，了解其在萌发过程中的变化规律，为进一步研究萌发麦苗的生理生化特性提供参考。
二、实验原理淀粉酶是一种能够水解淀粉为葡萄糖的酶，其在萌发麦苗中发挥着重要的作用。
本实验采用碘化钾法测定淀粉酶的活性，通过测定反应液在一定时间内生成碘化钾的量，计算出淀粉酶的活性。
三、实验步骤1.准备实验材料：选取健康萌发的小麦种子，用蒸馏水冲洗干净，放入无菌培养皿中，加入适量蒸馏水，于25℃恒温培养箱中培养。
每天观察种子的萌发情况，适时补充水分。
2.制备样品：从培养箱中取出一定量的萌发麦苗，用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干表面水分。
称取一定量的样品，加入适量的蒸馏水，放入研钵中研磨成匀浆。
将匀浆转入离心管中，于4℃下离心10分钟（转速为10000 r/min），收集上清液备用。
3.测定淀粉酶活性：取两个试管，分别加入1.0 mL 0.5%的可溶性淀粉溶液和1.0 mL 0.02 M的磷酸缓冲液（pH 6.9），摇匀。
再分别加入1.0 mL上清液和1.0 mL 0.5 M的氢氧化钠溶液，混匀。
将试管置于40℃恒温水浴中保温10分钟。
取出试管，加入1.0 mL 0.5 M的硫酸溶液终止反应。
最后加入2.0 mL碘化钾溶液，摇匀后静置1分钟，用紫外分光光度计在660 nm波长下测定吸光度。
4.计算淀粉酶活性：根据实验结果，计算淀粉酶的活性。
公式如下：淀粉酶活性（U/gprot）= (ΔA660 × V × t) / (W × 1000 × 0.01 × ΔT)其中，ΔA660为吸光度变化值，V为反应体系总体积（mL），t为反应时间（min），W为样品质量（g），ΔT为温度差（℃）。
四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录实验过程中各步骤的数据，包括种子萌发情况、样品制备过程中的质量变化、淀粉酶活性测定中的吸光度变化等。
淀粉酶活性的测定实验报告
淀粉酶活性的测定实验报告淀粉酶活性的测定实验报告引言淀粉酶是一种重要的酶类，能够催化淀粉的降解为葡萄糖。
淀粉酶活性的测定对于了解酶的特性以及其在生物化学过程中的作用具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶的活性，探究其受到不同因素的影响，为进一步研究酶的功能提供基础数据。
材料与方法1. 实验材料：淀粉酶溶液、淀粉溶液、缓冲液、I2-KI试剂、洗涤液。
2. 实验仪器：比色皿、移液管、离心机、恒温水浴。
实验步骤：1. 预热水浴至37°C。
2. 准备不同浓度的淀粉溶液（0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%），并分别加入比色皿中。
3. 向每个比色皿中加入相同体积的淀粉酶溶液，混匀后立即放入预热的水浴中。
4. 在反应开始后的不同时间点（如0、5、10、15、20分钟），取出一个比色皿，立即加入I2-KI试剂，形成蓝色淀粉-碘复合物。
5. 使用比色计测定各比色皿中的吸光度，并记录下实验数据。
6. 重复实验步骤2-5，以获得可靠的结果。
结果与讨论通过实验测定得到各个时间点下不同淀粉浓度的吸光度值，进而计算出淀粉酶的活性。
实验结果显示，随着淀粉浓度的增加，淀粉酶的活性也随之增加。
这是因为淀粉浓度的增加会提供更多的底物供淀粉酶催化反应，从而增加反应速率。
然而，当淀粉浓度超过一定范围时，淀粉酶的活性开始饱和，即使再增加淀粉浓度，反应速率也不再显著增加。
此外，实验结果还显示，随着反应时间的增加，淀粉酶的活性逐渐增加，但增加速率逐渐减缓。
这是因为淀粉酶需要一定的时间来结合底物，并催化反应发生。
随着反应进行，底物逐渐减少，淀粉酶与底物的结合也变得更加困难，从而导致反应速率的下降。
此外，实验还可以探究其他因素对淀粉酶活性的影响，如温度、pH值等。
通过调节这些因素，可以进一步了解淀粉酶的特性以及其在生物体内的作用机制。
结论通过本实验的测定，我们得出了淀粉酶活性与淀粉浓度和反应时间的关系。
实验结果表明，淀粉酶活性随着淀粉浓度的增加而增加，并随着反应时间的增加而逐渐饱和。
实验二 淀粉酶活性的测定
实验二淀粉酶活性的测定预习报告生物094 左宇 0902040409一、研究背景：酶作为生物体内催化剂，测定其活力是非常有必要的。
不同种类的酶的活力测定方法不同，我们将通过在细节设计上差异较大的酶活力测定方法的设计细节的分析和具体酶活测定操作，体会分析比较其设计细节的差异，从而获取相关设计理念并完成没活力测定实验操作的训练。
二、研究目标：按照淀粉酶水解淀粉的作用方式，可以分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数，来对这两种酶进行有效的测定。
三、研究策略：两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。
根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。
本实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶的活力。
在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再减去α-淀粉酶的活力，就可求出β-淀粉酶的活力。
四、研究方案及可行性分析：两种酶作用淀粉的方式不同。
α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。
淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
五、具体实验设计1、所需的主要材料、试剂、仪器（1）实验材料：小麦种子（2）实验仪器：离心机、离心管、研钵、电炉、容量瓶（50mL×1,100mL×1）、恒温水浴、分光光度计。
实验二 萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定
实验二萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定一．研究背景及目的1.即便是同一种酶，在体外测定酶活性时在不同的测定方法和不同的材料、时期中，实验测定的具体细节设计却大不相同，体外酶活性的测定实验在生化实验中更是经典的实验案例。
本次实验是淀粉酶活性的测定，通过实验进一步体会实验的细节设计。
2.利用酶促反应测定萌发的小麦种子种淀粉酶的活力以及水溶性蛋白质的含量。
二．原理1.淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总成，可以分成α-淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种。
实验中测定萌发的小麦种子的酶活力，因为材料中两种酶都含有，所以要采取一定方法分别测定两种酶活性。
利用两种酶不同的特性，α-淀粉酶不耐酸，pH3.6以下钝化，而β-淀粉酶则不耐高温，高温下易钝化，将β-淀粉酶钝化测得α-淀粉酶活性，再测总酶活性，相减即得到β-淀粉酶活性。
（C6H10O5）n + 0.5nH2O 淀粉酶，40℃0.5nC12H22O11C12H22O11 + 3,5-二硝基水杨酸3-氨基-5-硝基水杨酸淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
2.利用Folin-酚法测定萌发小麦种子中水溶性蛋白的含量。
在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。
在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。
[1]三．仪器与试剂1.仪器：离心机（飞鸽牌系列离心机，TDL-40B），722-型分光光度仪（上海分析仪器总厂），DK-SR四型电热恒温水浴锅（上海精密实验设备有限公司），双列八孔电热恒温水浴锅（天津市中环实验电炉有限公司），冰浴微量可调手动移液器（大龙牌），研钵，容量瓶天平（上海精密科学仪器邮箱公司，双杰牌JP-100架盘药物天平）2．试剂萌发的小麦种子，3，5—二硝基水杨酸溶液，1%淀粉溶液，柠檬酸缓冲液0.4MNaOH溶液，麦芽糖标准液,A液，B液，试剂甲，试剂乙四．操作步骤1.制备酶液：2g萌发小麦种子研磨，用蒸馏水浸提，稀释成50ml，一部分3500转/分离心20min，取上清液备用，另一部分过滤，取滤液备用。
实验二-萌发麦苗淀粉酶活性的测定
实验二-萌发麦苗淀粉酶活性的测定实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定生物112 周泓兆 1102040226一、研究背景及目的酶作为生物体内最重要的催化剂，其活性尤其受到关注。
在这次实验中，我们将对一些经典经典酶活力测定实验进行分析，对比其思路与设计差异，了解测定酶活力的基本方向和实验技巧。
完成小麦萌发过程中淀粉酶活力的测定并分析测定结果是否合理。
二、原理淀粉在淀粉酶的催化作用下生成麦芽糖。
本实验便是通过测定淀粉酶在一定时间内分解淀粉所产生的麦芽糖总量来测定酶的活性。
根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）。
本实验涉及α-淀粉酶与β-淀粉酶，我们可通过钝化β-淀粉酶的方法单独测定α-淀粉酶的活性。
本实验所使用的3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。
还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。
因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。
麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。
三、仪器与试剂1.仪器：TDL-40B 离心机（上海安亭科学仪器厂），722 光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），DK-S24 型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），JP-100 架盘药物天平（常熟市双杰测试仪器厂），HCTP12A1 架盘药物天平（北京医用天平厂）2.试剂：麦芽糖标准液，pH5.6 的柠檬酸缓冲液，3,5-二硝基水杨酸溶液，0.4M NaOH，Folin-酚试剂甲，Folin-酚试剂乙，标准牛血清白蛋白溶液（1mg/ml ）3.材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）四、实验方法/操作步骤1、酶液的制备：称取两克萌发的小麦种子（芽长一厘米左右），置研钵中加少量石英砂，以蒸馏水作为匀浆液，研磨成匀浆，转移到50ml容量瓶中至40ml左右，室温浸提15-20分钟，浸提充分后定容至刻度，混匀后3500r/min离心20min，取上清液备用（初始酶液）。
萌发麦种淀粉酶活力的测定
萌发麦种淀粉酶活⼒的测定实验⼆萌发麦种淀粉酶活⼒的测定⼀、实验背景及⽬的⽲⾕类作物作为最重要的粮⾷作物，对其种⼦技术的研究对于提⾼我国种业发展⽔平、保障国家粮⾷安全有重要意义。
【1】休眠的种⼦中只有β-淀粉酶，萌发时胚释放出来的⾚霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达，引起α-淀粉酶⽣物合成，分泌到胚乳中。
【2】两种酶共同催化淀粉⽔解为糖，为细胞分裂以及细胞⽣长提供原料。
【3】【4】本实验通过测定萌发麦种淀粉酶活⼒，更好的了解酶在⽣物代谢中的作⽤。
⼆、实验原理淀粉是植物最重要的贮藏多糖，也是⼈和动物的重要⾷物和发酵⼯业的基本原料。
淀粉经淀粉酶作⽤后⽣成葡萄糖、麦芽糖等⼩分⼦⽽被机体利⽤。
淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种，在⽲本科植物萌发过程中，这两种酶的活性最⾼。
【5】α-淀粉酶可随机地作⽤于淀粉中的α-1,4-糖苷键，⽣成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此⼜称为液化酶。
β-淀粉酶可从淀粉的⾮还原性末端进⾏⽔解，每次⽔解下⼀分⼦麦芽糖，⼜被称为糖化酶。
【6】【7】研究发现他们各有其⼀定的特性：α-淀粉酶不耐酸，在 pH3.6 以下则发⽣钝化；β-淀粉酶不耐热，在⾼温下易钝化。
利⽤不同特性，钝化其⼀，即可测定另⼀种酶的活性。
测定α -淀粉酶活性时，可将提取液加热到70°C 维持 15 分钟来钝化β-淀粉酶；【8】【9】⽽测定β-淀粉酶时，可⽤ pH3.6 的醋酸缓冲液处理提取液，以钝化α-淀粉酶。
实验应该严格把控钝化条件。
淀粉酶活⼒的⼤⼩与产⽣的麦芽糖量成正⽐，可⽤ 3,5-⼆硝基⽔杨酸法进⾏测定。
还原糖和碱性⼆硝基⽔杨酸试剂共热，产⽣⼀种棕红⾊的氨基化合物。
⽤实验体系中单位时间内⽣成的麦芽糖毫克数表⽰淀粉酶活⼒的⼤⼩。
在实验中要严格控制温度及时间，保证酶的最适条件及初速度状态，以减⼩实验误差。
【10】【11】本次实验分为两部分，⼀是通过纯化β-淀粉酶活⼒完成α-淀粉酶的活⼒测定，⼆是不进⾏任何钝化处理测定总酶活⼒。
小麦萌发前后淀粉酶活性的
小麦萌发前后淀粉酶活性的小麦萌发前后淀粉酶活性比较一、实验目的及要求：1、学习分光光度法测定淀粉酶活力的原理与方法2、了解小麦萌发前后的淀粉酶活力变化。
二、实验原理淀粉酶是水解淀粉(1→4)糖苷键的一类酶的总称。
实验证明，在某些植物如小麦和大麦的休眠种子中只含有β-淀粉酶，α-淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。
其活性随萌发时间的延长而增高。
本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。
麦芽糖是还原糖，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，后者在540nm处有最大光吸收，可进行定量测定。
三、主要仪器设备及实验耗材：小麦种子可见分光光度计离心机恒温水浴研钵等麦芽糖标准液0.2%淀粉溶液3,5-二硝基水杨酸溶液1%NaCl0.02 mol/L磷酸缓冲液石英砂四、实验步骤：1、麦芽糖标准曲线制作取7支干净的具塞刻度试管，编号，按下表加入试剂：制作麦芽糖标准曲线配方表试剂(ml)管号1 2 3 4 5 6 7麦芽糖标准液(1 mg/ml) 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水 2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 3,5-二硝基水杨酸 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0摇匀，置于沸水浴中煮沸5 min。
取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20 ml。
以1号管作为空白调零，在540 nm波长下比色测定。
以麦芽糖含量(mg)为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、萌发小麦种子充分浸泡小麦种子24 h，25℃恒温箱或室温下发芽(2~3天)。
3、提取小麦萌发前后的淀粉酶液1) 幼苗酶的提取：取萌发幼苗10株，入研钵加石英砂0.2 g，1%NaCl 3 ml，研磨成匀浆，0~4℃下放置20 min。
离心(2,000 r/min, 10 min)取上清，量筒测定上清酶液总体积。
2) 种子酶的提取：取干燥种子10粒作对照，操作方法同上。
萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究
萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究
淀粉酶是一类重要的酶，它们在各种植物的发芽过程中发挥着重要的作用。
在小麦种
子萌发过程中，淀粉酶起着决定性的作用。
本文旨在研究萌发小麦种子中淀粉酶的酶学性质。
首先，我们选择小麦种子在实验中进行分离，以初步确定淀粉酶来源。
实验结果表明，小麦种子中含有淀粉酶，它们主要来自小麦种子里的胚乳和淀粉质泡沫，而小麦种子表皮
则有较低含量的淀粉酶。
其次，我们利用粒度分级、沉淀分离技术对淀粉酶分离、纯化并收集淀粉酶样品，淀
粉酶完成从原始材料分离纯化后，样品中淀粉酶的浓度和纯度都比原始材料的含量的高。
继而，我们观察了温度、pH值、聚集剂和胰蛋白酶对淀粉酶活性的影响，结果表明，淀粉酶的最佳活性状态为30℃时的pH8.0条件下，加入聚集剂NaCl和胰蛋白酶；同时，
淀粉酶对温度和pH值的变化具有一定的耐受性，在30℃-45℃pH7.0-8.5范围内淀粉酶仍
可保持较高的活性。
最后，我们测定了萌发小麦种子中淀粉酶的最大活性，结果显示，30℃时的pH8.0条
件下，淀粉酶的最大活性为250 U/ml。
此外，经过NaCl聚集处理和加入胰蛋白酶处理后，淀粉酶的活性都有所提高，分别达到280 U/ml和290 U/ml。
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定生物112 周泓兆 1102040226一、研究背景及目的酶作为生物体内最重要的催化剂，其活性尤其受到关注。
在这次实验中，我们将对一些经典经典酶活力测定实验进行分析，对比其思路与设计差异，了解测定酶活力的基本方向和实验技巧。
完成小麦萌发过程中淀粉酶活力的测定并分析测定结果是否合理。
二、原理淀粉在淀粉酶的催化作用下生成麦芽糖。
本实验便是通过测定淀粉酶在一定时间内分解淀粉所产生的麦芽糖总量来测定酶的活性。
根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）。
本实验涉及α-淀粉酶与β-淀粉酶，我们可通过钝化β-淀粉酶的方法单独测定α-淀粉酶的活性。
本实验所使用的3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。
还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。
因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。
麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。
三、仪器与试剂1.仪器：TDL-40B 离心机（上海安亭科学仪器厂），722 光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），DK-S24 型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），JP-100 架盘药物天平（常熟市双杰测试仪器厂），HCTP12A1 架盘药物天平（北京医用天平厂）2.试剂：麦芽糖标准液，pH5.6 的柠檬酸缓冲液，3,5-二硝基水杨酸溶液，0.4M NaOH，Folin-酚试剂甲，Folin-酚试剂乙，标准牛血清白蛋白溶液（1mg/ml ）3.材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）四、实验方法/操作步骤1、酶液的制备：称取两克萌发的小麦种子（芽长一厘米左右），置研钵中加少量石英砂，以蒸馏水作为匀浆液，研磨成匀浆，转移到50ml容量瓶中至40ml左右，室温浸提15-20分钟，浸提充分后定容至刻度，混匀后3500r/min离心20min，取上清液备用（初始酶液）。
实验二：淀粉酶活性测定实验报告
淀粉酶活性的测定一、实验目的酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。
淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。
α-淀粉酶是一种典型的内切型淀粉酶,主要作用于淀粉水解的液化阶段,因此又叫液化酶。
作为一种最重要的工业酶制剂，α-淀粉酶广泛存在于动物,植物和微生物中。
其中，微生物α-淀粉酶以其经济易得成为工业生产主要来源。
目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种。
本实验采用杨氏改良法测定α-淀粉酶；掌握测定α-淀粉酶活性大小与温度关系的方法，通过分析得出酶的最适温度范围。
二、实验原理酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和pH值称为某种酶作用时的最适温度和pH值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低，其变化趋势呈钟形曲线变化。
不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色，淀粉含量越高，颜色越深。
用分管光度计检测显色效应大小，通过分管光度值计算酶活力注意：实验中为了消除非酶促反应引起的淀粉水解带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。
并且在酶的作用过程中，三支测定管及空白管不要混淆。
三、材料、试剂与仪器实验材料：α-淀粉酶仪器：分光光度计、电热恒温水浴锅、小台秤、研钵、玻璃仪器若干试剂：①0.4M NaOH/0.4M CH3COOH及0.1M HCl：②0.005%工作碘液：0.5克I2和5.0克KI水中研磨，定容至1000mL；③1%糊化淀粉溶液：称取1.0克淀粉，加入25mL0.4M NaOH，60℃5min，冷却后加25mL0.4M CH3COOH，定容至100mL；④稀释α-淀粉酶溶液：待测样品四、实验步骤①10mL1%淀粉溶液加入试管中，室温25/45/65℃保温10min②于每管中各加酶稀释液1mL，在室温25/45/65℃恒温水浴中（水浴温度的变化不应超过±0.5℃）准确加热10min，冷却。
实验2 淀粉酶活力的测定
实验2 淀粉酶活力的测定【摘要】本次试验目的在于通过实际的操作与观察，掌握酶活力测定的方法以及巩固分光光度计的使用。
根据淀粉酶催化淀粉水解产生的葡萄糖、麦芽糖等还原糖能够与3,5-二硝基水杨酸作用，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，通过分光光度计测定棕红色溶液的吸光度值，并与标准葡萄糖-吸光度值曲线进行对比，即可知道实验中生成的还原糖的量，从而测定酶活。
比对试验结果，发现本组的实验数据与别组的存在一定差别，本次实验所得结果欠佳。
【材料与设备】如表1所示表1 淀粉酶活力测定实验材料设备一览表【实验步骤】1. 葡萄糖标准曲线的测定（1）取7支试管，按如下表2所示，加入试剂表2 葡萄糖标准曲线加样表(2)将各管摇匀，置于沸水浴(3)取出试管，冷却近室温，加入8ml蒸馏水（4）以1号管为对照，测定各管在540nm 下的吸光度，并记录 2.酶活力的测定（1）四组样品（稀释200倍的酶原液、洗脱峰1、洗脱峰2、洗脱峰3）分别按照如下表3操作进行，即每个样品测两管，对照组缓冲液只需测定一管 表3 酶活力测定加样一览表（2）将各管摇匀后，于540nm 下测定吸光度值，并记录 【实验结果】 1. 原始数据记录(1)葡萄糖标准曲线的测定：原始数据记录如表4所示表4 测定葡萄糖标准液吸光度原始数据记录表 （2）酶活力测定：原始数据记录如表5所示 表5 酶活力测定原始数据记录表2.数据处理（1）葡萄糖标准曲线的绘制所以，葡萄糖标准曲线方程为y=0.0968x+0.0291 （1）（2）酶活力的测定以洗脱峰2的一组数据为计算示例：平均吸光度A1=(0.811+0.809)/2=0.8065纯吸光度A2=0.8065-0.278=0.5285 带入式子（1）即0.5285=0.0968x+0.0291 解得x=5.16umol所以实验中0.1mol洗脱峰生成还原糖的物质的量为n=5.16umol本实验中规定每min生成1umol的还原糖为1U所以0.1ml洗脱峰2的酶活为5.16/10=0.516U1ml洗脱峰2的酶活力为0.516*10=5.161U/ml其余计算结果汇于下列表6中表6 酶活力测定实验结果记录表【讨论】1.经过本次实验，基本掌握了酶活力测定的一种方法，也更加熟练的对分管光度计进行了操作。
萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定 实验报告
萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定一、研究背景及目的酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂。
大多数由蛋白质组成（少数为RNA）。
能在机体中十分温和的条件下，高效率地催化各种生物化学反应，促进生物体的新陈代谢。
生命活动中的消化、吸收、呼吸、运动和生殖都是酶促反应过程。
酶是细胞赖以生存的基础。
细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。
因此，对酶的研究是十分重要的。
通过对酶活性的测定，可以更好地了解生物体的代谢过程。
其中，淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，可以分成α-淀粉酶，β-淀粉酶等。
α-淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α-1，4-链。
β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1，4-葡聚糖链。
根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化产生的麦芽糖毫克数。
3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。
还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。
因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。
麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。
本次实验的目的在于通过实验过程，理解淀粉酶测定的原理，熟悉实验操作，掌握实验方法。
蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质，对生物来说十分重要。
目前有四种蛋白质含量测定方法：凯氏定氮、Folin-酚法、染料结合法、紫外法，最常用的是后三种。
本次实验选择通过Folin-酚法测定蛋白质含量。
这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。
过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难，近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
二、实验原理该实验的总体思路为精确控制酶促反应的条件，保持其处于最适条件，测定酶促反应的初速度来表示酶的活力。
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告引言：淀粉酶是一种在植物中广泛存在的酶类，它在植物生长过程中起着重要的作用。
本实验旨在比较小麦种子在萌发前后淀粉酶活力的变化，以探究小麦种子发芽过程中淀粉酶的作用机制。
实验方法：1. 实验材料准备：- 小麦种子：选择一批健康的小麦种子，确保它们具有相似的大小和外观。
- 碘液：用于检测淀粉的存在，可以通过在碘液中加入淀粉溶液来制备。
- 淀粉酶提取液：用于提取小麦种子中的淀粉酶，可以通过粉碎小麦种子并在适当的缓冲液中悬浮来制备。
2. 实验步骤：a. 将一部分小麦种子放入适当的培养皿中，加入一定量的水，使其浸泡12小时，促进种子的萌发。
b. 取出部分浸泡过的小麦种子，用纸巾轻轻擦干表面的水分。
c. 将擦干的小麦种子放入另一个培养皿中，加入适量的淀粉酶提取液，使种子充分浸泡。
d. 分别在萌发前和萌发后的小麦种子上滴加碘液，观察颜色变化。
实验结果：观察到小麦种子在萌发前后的淀粉酶活力差异明显。
在萌发前，小麦种子表面滴加碘液后呈现出深蓝色，表示淀粉的存在。
而在萌发后，小麦种子表面滴加碘液后呈现出较浅的蓝色，表明淀粉减少。
讨论：小麦种子在萌发过程中，淀粉酶活力的变化与淀粉的分解有关。
在萌发前，小麦种子处于休眠状态，淀粉是主要的能量储备物质。
而在萌发后，淀粉被淀粉酶分解为葡萄糖，供给发芽过程中的能量需求。
淀粉酶是一种水解酶，它能够将淀粉分解为较小的分子，如葡萄糖。
这种酶活性的变化可能与种子内部激素水平的变化有关。
在种子萌发过程中，激素的合成和分解会发生变化，从而调节淀粉酶的活性。
此外，温度、pH值等环境因素也可能影响淀粉酶的活性。
在实验中，我们没有对这些因素进行控制，因此实验结果可能受到这些因素的干扰。
结论：通过本实验，我们观察到小麦种子在萌发前后淀粉酶活力的变化。
在萌发前，小麦种子的淀粉酶活性较低，而在萌发后，淀粉酶活性显著增加。
这表明淀粉酶在小麦种子发芽过程中起着重要的作用，帮助种子分解淀粉并提供能量。
小麦萌发前后淀粉酶活性的比较实验报告
小麦萌发前后淀粉酶活性的比较实验报告
淀粉酶是植物生长发育中必不可少的物质，由于其关系到植物生长发育，其在抗性和产量等方面起着关键性作用。
本实验旨在比较小麦萌发前后淀粉酶活性的变化，对淀粉酶活性变化有更深入的了解。
本实验研究物质为未萌发前和萌发后的小麦种子，实验地点位于某市某镇的土壤培养室，实验时间为2019年12月1日至2019年12月4日，实验研究成果如下：
1. 采用三通柱法测定实验中小麦淀粉酶活性，结果在实验准备前，小麦淀粉酶活性为25.24 U/min；而在3 d萌发后，小麦淀粉酶活性显著增加，结果为156.97 U/min，默克尔比值为6.22，其差异有统计学意义，P＜0.01。
综上所述，萌发是小麦活性酶启动的重要转折点，同时也是调控植物生长发育及抗逆性的重要时期，萌发前期、萌发后期小麦淀粉酶活性有明显的提高，在此实验中，从三通柱法的实验结果来看，小麦萌发后淀粉酶活性显著增加，活性以156.97 U/min为主，其差异极具统计学意义。
因此可以说在小麦植物生长发育过程中，淀粉酶活性变化与萌发有着重要关系，是影响植物生长发育和产量的重要因素。
萌发小麦种子中淀粉酶的提取
萌发小麦种子中淀粉酶的提取、酶活性的测定及PH、温度、激活剂、抑制剂对酶活性的影响(东北农业大学生命科学学院, 哈尔滨:150030)摘要：从萌发的小麦种子中通过离心方法提取淀粉酶，采用分光光度计法绘制麦芽糖标准曲线，并在此基础上测定萌发小麦种子中淀粉酶的活性。
温度、PH值、激活剂、抑制剂是影响酶活性的几个重要因素。
本实验结果表明，在PH=5.6，T=40℃的条件下，小麦种子中淀粉酶总活性为2325.71mg/g·5min ，而α-淀粉酶的活性为246.33mg/g·5min；40℃左右时，酶的活性最高，室温下活性较高，0℃时淀粉酶活性明显下降，100℃时淀粉酶几乎已失活；PH为5.6时，酶的活性最大，PH=3.6时和PH=8.0时淀粉酶活性降至最低；Cl-使酶的活性增强，Cu2+使酶活性减弱。
关键词：淀粉酶酶活性温度PH 激活剂抑制剂前言：生物体内的新陈代谢是一切生命活动的基础。
新陈代谢是由许多复杂而有规律的化学反应组成，酶是生物体系中的催化剂，生物体内的各种化学反应包括物质转化和能量转化，都是在特定的酶催化下反应的，由于自然界中生物长期进化和组织功能分化的结果，酶在机体中受到严格的调控，使错综复杂的代谢过程有序进行。
可以说，没有酶的参与，生命活动即告终止，所以酶学的深入研究在探讨生命现象的本质上使至关重要的[1]。
大多数酶的本质是蛋白质。
酶的特性决定了其研究内容的特殊性。
随着生物化学、分子生物学、基因工程、化学工程等相关学科的发展，酶学研究早已进入一个崭新的阶段。
现代酶学的研究主要包括酶学理论、酶工程和酶应用3部分[2]。
它们是现代生物技术的重要组成部分，应用范围包括医药，食品，化学工业，诊断分析和生物传感器，涉及的品种不少，如淀粉酶，其市场需求生产规模和产值均很乐观，并已产生巨大经济效益[3]。
生物体内的各种代谢变化都是由酶驱动的,酶有两种功能:其一，催化各种生化反应,是生物催化剂；其二，调节和控制代谢的速度、方向和途径，是新陈代谢的调节元件。
萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定实验报告
萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定1、研究背景及目的酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂。
大多数由蛋白质组成（少数为RNA）。
能在机体中十分温和的条件下，高效率地催化各种生物化学反应，促进生物体的新陈代谢。
生命活动中的消化、吸收、呼吸、运动和生殖都是酶促反应过程。
酶是细胞赖以生存的基础。
细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。
因此，对酶的研究是十分重要的。
通过对酶活性的测定，可以更好地了解生物体的代谢过程。
其中，淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，可以分成α-淀粉酶，β-淀粉酶等。
α-淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α-1，4-链。
β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1，4-葡聚糖链。
根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化产生的麦芽糖毫克数。
3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。
还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。
因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。
麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。
本次实验的目的在于通过实验过程，理解淀粉酶测定的原理，熟悉实验操作，掌握实验方法。
蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质，对生物来说十分重要。
目前有四种蛋白质含量测定方法：凯氏定氮、Folin-酚法、染料结合法、紫外法，最常用的是后三种。
本次实验选择通过Folin-酚法测定蛋白质含量。
这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。
过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难，近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
2、实验原理该实验的总体思路为精确控制酶促反应的条件，保持其处于最适条件，测定酶促反应的初速度来表示酶的活力。
实验二萌发麦苗水溶性蛋白含量测定预习报告 (3)汇总
实验二萌发麦苗中淀粉酶活力的测定及水溶性蛋白的Folin-酚法测定杨明轩 1102040128 （同组成员：黄文君）一、研究背景及目的1.1 研究背景生命活动依赖于一系列有序的生理生化反应，而这些生化反应的高效有序进行离不开生物体内具有催化作用的生物大分子——酶。
在20世纪上半叶，酶的发现成为生物化学领域的三大发现之一。
对酶进行深入研究不仅有利于揭示细胞新陈代谢的奥秘，而且有许多实际应用价值。
酶学理论和酶制品广泛应用于疾病诊断、作物育种、药物设计、食品加工、工业发酵、纺织印染等领域。
因而，对酶的研究一直是分子生物学的重要内容，而其中对于酶活力的测定便是对酶研究中非常重要的一项。
在农业生产领域，小麦种子含有大量的淀粉，其淀粉的许多特性优于玉米淀粉。
而小麦中又含有许多酶，这些酶在小麦发芽时酶活力都有很大改变，与种子的萌发情况息息相关。
在小麦萌发过程中，小麦种子中含有的α-型和β-型两种淀粉酶起到了非常重要的作用。
α-淀粉酶能够水解种子中的α-1,4，-葡萄糖苷键，是种子萌发过程中形成的，它可使淀粉糊的粘度迅速下降，起“液化”的作用。
β-淀粉酶是一种外切酶，作用于淀粉时，能够从淀粉分子非还原性末端切开α-1,4-糖苷键，水解时沿着淀粉链每次水解掉两个葡萄糖单位，生成麦芽糖。
基于两种酶现有的作用位点和机制，我们认为它们处于协同作用的相互关系，本实验以期设计实验测定α和β两型淀粉酶以及总酶的酶活性，验证它们之间是否存在协同作用，同时判断用该方法得出β—淀粉酶活性是否合理，以为今后测定酶活的方法选择提供理论依据。
基于此背景，本实验计划探究测定小麦萌发幼苗淀粉酶酶活的方法。
同时，本实验还设计了通过Folin-酚法对萌发麦苗种子水溶性总蛋白进行测定。
小麦中提取出来的蛋白、小麦蛋白和胶原蛋白为面粉中的蛋白质的主要成分。
小麦籽粒蛋白质含量及其组成,对食品加工品质和营养品质具有决定性作用。
1.2 研究目的本实验通过采用小麦萌发幼苗为原料，设计实验测定淀粉酶的酶活力。
淀粉酶活性测定实验报告-样本
专业：姓名：学号：实验报告多效唑处理对小麦种子α-淀粉酶活力的影响一、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发生钝化。
本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，麦芽糖的浓度利用比色法测得。
二、材料、试剂与仪器材料：萌发3d的小麦种子。
试剂：1%淀粉溶液、蒸馏水、3，5-二硝基水杨酸溶液、麦芽糖标准液、1M NaOH。
仪器：分光光度计、水浴锅、离心机、天平；容量瓶、移液管、刻度试管、研钵等。
三、实验方法1．麦芽糖标准曲线的制作取7支干净的具塞刻度试管，按下表加入试剂摇匀，置沸水浴中煮沸5 min，取出后流水冷却，加蒸馏水定容至10 mL。
用分光光度计测定吸光值A540。
以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值A540为纵坐标，绘制标准曲线。
表 1 麦芽糖标准曲线制备方法试剂试管编号1 2 3 4 5 6 71mg/mL麦芽糖标准液（mL）0 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 1.0 蒸馏水（mL） 1.0 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1 0 3, 5-二硝基水杨酸（mL） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 麦芽糖浓度（mg/mL）0 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 1.02. 酶液制备称取1 g萌发3天的小麦种子，置于研钵中，加少量的石英砂和2 mL 蒸馏水，研磨至匀浆。
将匀浆倒入离心管中，用6mL 蒸馏水分3次将残渣洗入离心管。
提取液在室温下放置提取20 min，每隔3分钟搅动1次，使其充分提取。
然后再3000 r/min下离心10 min，将上清液倒入100 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至100 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
3. 酶活力的测定变化取2支干净的具塞刻度试管，按表2加入试剂并进行相应处理，用分光光度计测定吸光值A540。
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告本实验旨在通过比较小麦种子萌发前后淀粉酶活力的差异，探究淀粉酶在小麦萌发过程中的作用。
实验材料：1. 小麦种子2. 碘液3. 淀粉溶液4. 蒸馏水5. 烧杯6. 试管7. 光学显微镜8. 平板电脑实验步骤：1. 将小麦种子浸泡在蒸馏水中，保持2小时，以激活种子。
2. 将浸泡后的小麦种子平均分配到两个试管中，每个试管内种子数量相同。
3. 一个试管中的小麦种子加入淀粉溶液，另一个试管中的小麦种子加入同等体积的蒸馏水作为空白对照组。
4. 使用注射器将试管中的液体充分混合，并保持试管内液体的温度在恒温箱中约25。
5. 在小麦种子萌发的第1天、第3天、第5天和第7天，分别取出一小部分试管液滴于玻片上，并加入碘液进行反应，观察观察淀粉酶活动情况。
6. 将玻片放置在光学显微镜下，调节放大倍数并使用平板电脑拍摄淀粉颗粒溶解的图像。
实验结果：根据实验步骤，我们观察到小麦种子萌发前后淀粉酶活力的差异。
在萌发前的第1天，两组显微镜下的淀粉颗粒大小和浓度几乎相同，未发现明显的淀粉颗粒溶解。
而在萌发后的第3天，加入淀粉溶液的试管中淀粉颗粒已经有所溶解，观察到淀粉溶液呈现较浅的蓝色。
在第5天和第7天，淀粉溶液的颜色更浅，而温水对照组基本无溶解颗粒的迹象。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 小麦种子萌发后，淀粉酶活力显著增强。
从试管内淀粉溶液颜色的变化来看，淀粉酶能够促进淀粉分子的水解，使其逐渐转化为葡萄糖等可溶性糖类。
2. 萌发后的小麦种子在消化淀粉的同时，也将葡萄糖等营养物质释放出来，供给其生长、发芽所需。
3. 与淀粉分子相比，溶解的葡萄糖等可溶性糖类更易被小麦种子吸收和利用，因此能够更好地支持其萌发、生长的需要。
4. 通过对实验中淀粉颗粒溶解情况的观察，我们可以间接评估种子的萌发活力以及淀粉酶的活性。
实验改进和展望：1. 增加实验重复性：本实验中每个时间点只使用了一组样本进行观察，实验结果的可靠性还需要进一步验证。
实验二 淀粉酶活性的测定
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生物化学实验
3、α-淀粉酶活性的测定：
（1）取两支试管一支对照，一支测定→各加淀粉酶原液 1ml→70℃ 准 确 加 热 15min→ 冷 却 → 向 对 照 管 加 4ml0.4MNaOH，终止酶活性；
（2）向各管中均加入柠檬酸缓冲液1ml ； （3）测定管和对照管于40℃水浴15min→均加入2ml 40℃预
Please be quiet, 上课了！！
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生物化学实验
实验二
淀粉酶活性的测定
2020/3/4
生物化学实验
学时：3
一、实验目的：
1、学习并掌握植物体内淀粉酶活性测定 的原理和方法。
2、掌握α，β-两种淀粉酶的理化特性。
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生物化学实验
二、实验原理:
淀粉是植物生长期间以淀粉粒形式存在于
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生物化学实验
（3）取对照管和测定管中溶液各2ml，分别加入 到刻度试管中→各加2ml 3,5-二硝基水杨酸→沸水 浴5min→冷却→稀释至20ml刻度→混匀→以制作 麦芽糖标准曲线的1号试管为参比溶液，调“零”， 测定540nm处吸光度→记录结果。
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生物化学实验
五、实验结果与计算：
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生物化学实验
4、淀粉酶总活力的测定
（1）取两支试管一支对照，一支测定→各加 酶液1ml，向对照管加4ml 0.4MNaOH，以钝化 酶的活性；
（2）向各管中均加入柠檬酸缓冲液1ml ； （3）测定管和对照管于40℃水浴15min→均加入2ml
40℃预热的淀粉→立即40℃水浴保温5min→取出 后迅速向测定管加入4ml 0.4M NaOH；
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实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定生物112 周泓兆 1102040226一、研究背景及目的酶作为生物体内最重要的催化剂，其活性尤其受到关注。
在这次实验中，我们将对一些经典经典酶活力测定实验进行分析，对比其思路与设计差异，了解测定酶活力的基本方向和实验技巧。
完成小麦萌发过程中淀粉酶活力的测定并分析测定结果是否合理。
二、原理淀粉在淀粉酶的催化作用下生成麦芽糖。
本实验便是通过测定淀粉酶在一定时间内分解淀粉所产生的麦芽糖总量来测定酶的活性。
根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）。
本实验涉及α-淀粉酶与β-淀粉酶，我们可通过钝化β-淀粉酶的方法单独测定α-淀粉酶的活性。
本实验所使用的3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。
还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。
因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。
麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。
三、仪器与试剂1.仪器：TDL-40B 离心机（上海安亭科学仪器厂），722 光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），DK-S24 型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），JP-100 架盘药物天平（常熟市双杰测试仪器厂），HCTP12A1 架盘药物天平（北京医用天平厂）2.试剂：麦芽糖标准液，pH5.6 的柠檬酸缓冲液，3,5-二硝基水杨酸溶液，0.4M NaOH，Folin-酚试剂甲，Folin-酚试剂乙，标准牛血清白蛋白溶液（1mg/ml ）3.材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）四、实验方法/操作步骤1、酶液的制备：称取两克萌发的小麦种子（芽长一厘米左右），置研钵中加少量石英砂，以蒸馏水作为匀浆液，研磨成匀浆，转移到50ml容量瓶中至40ml左右，室温浸提15-20分钟，浸提充分后定容至刻度，混匀后3500r/min离心20min，取上清液备用（初始酶液）。
2、取15支试管，分别编号α-测定管1、α-测定管2、α-对照管1、α-对照管2、α+β-测定管1、α+β-测定管2、α+β-对照管1、α+β-对照管2与1、2、3、4、5、6、7。
3、在α-测定管1、α-测定管2、α-对照管1、α-对照管2中各加入酶液1ml在70℃恒温水浴中准确加热15min，取出后立即在冰浴中冷却至室温或更低。
取出后分别在四支试管中各加入1mlpH5.6柠檬酸缓冲液，置于40℃恒温水浴中准确保温15min。
之后向两支对照管中各加入4ml 0.4M NaOH，再向各管分别加入40℃下预热的淀粉溶液2ml，摇匀，立即于40℃水浴中准确保温5min，然后向两支测定管分别迅速加入4ml 0.4M NaOH，摇匀备用。
4、取制备的酶液5ml，放入100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混合均匀后，在α+β-测定管1、α+β-测定管2、α+β-对照管1、α+β-对照管2中各加入1ml稀释后的酶液与1mlpH5.6柠檬酸缓冲液置于40℃恒温水浴中准确保温15min。
之后向两支对照管中各加入4ml 0.4M NaOH，再向各管分别加入40℃下预热的淀粉溶液2ml，摇匀，立即于40℃水浴中准确保温5min，然后向两支测定管分别迅速加入4ml 0.4M NaOH，摇匀备用。
5、取编号1、2、3、4、5、6、7的七支试管，分别加入麦芽糖标准液（1mg/ml）0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.0ml，然后将各管用蒸馏水准确补充至1.0ml，摇匀。
6、在α-测定管1、α-测定管2、α-对照管1、α-对照管2、α+β-测定管1、α+β-测定管2、α+β-对照管1、α+β-对照管2与1、2、3、4、5、6、7管内各加入1ml 3,5二硝基水杨酸试剂混匀，同时在沸水浴中准确保温5min，取出冷却，用蒸馏水稀释到15ml，混匀。
7、依次取各试管溶液在520nm波长下进行比色，记录消光值。
以1、2、3、4、5、6、7管消光值作为纵坐标，麦芽糖含量作为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线进行结果计算。
8、Folin-酚测萌发麦苗水溶性蛋白含量：称取0.5g萌发的小麦种子（芽长一厘米左右），置研钵中加少量石英砂，以蒸馏水作为匀浆液，研磨成匀浆，转移到50ml容量瓶中至40ml 左右，室温浸提15-20分钟，浸提充分后定容至刻度，混匀后3500r/min离心20min，取上清液备用。
9、取9支具塞试管，分别标上待测液1、待测液2、待测液3与F1-F6。
分别在F1-F6中加入标准BSA 溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，然后将各管用蒸馏水补充到 1.0ml。
再各取1ml上清液（步骤8）于标有待测液1、待测液2、待测液3的试管中。
在这九支试管中各加试剂甲5ml，混匀后室温下放置10min，再加试剂乙0.5ml，立即混匀，30min后测定各管的OD650。
五、数据整理六、结果计算与讨论分析根据数据绘制标准曲线如下：管号α-测定管1 α-测定管2α-对照管1α-对照管2α+β-测定管1α+β-测定管2α+β-对照管1α+β-对照管2麦芽糖浓度（mg/ml）0.445 0.241 0.507 0.274结果计算：α-淀粉酶活性（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）=[(A-A')*样品稀释总体积]/[样品重（g）*5] =[(0.445-0.241)*800]/[2*5]=16.32（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）（α-+β-）淀粉酶总活性（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）=[(B-B')*样品稀释总体积]/[样品重（g）*5]=[(0.507-0.274)*8000]/[2*5]=186.4（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）A—α-淀粉酶测定管中的麦芽糖中的浓度A'—α-淀粉酶对照管中的麦芽糖浓度B—α-及β-淀粉酶总活性测定管中的麦芽糖浓度B'—α-及β-淀粉酶总活性对照管中的麦芽糖浓度根据标准曲线查得：稀释后溶液的蛋白质浓度（μg/ml）=240.9μg/ml结果计算：稀释倍数为2g/0.5g=4，可得酶液的蛋白质浓度（μg/ml）=240.9μg/ml*4=963.5μg/ml（α-+β-）淀粉酶总比活=（α-+β-）淀粉酶总活性（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）/[酶液的蛋白质浓度（μg/ml）*酶液总体积（ml）]=186.4（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）/[963.5μg/ml*25ml)=7.738U/mg我们可以看出,平行数据之间的误差在允许的范围之内,说明3,5-二硝基水杨酸法测定生成麦芽糖的浓度是可行的。
而α-淀粉酶活性与（α-+β-）淀粉酶总活性差距极大很可能是因为酶的协助作用，或是一部分有协助分解淀粉作用的酶在70℃时与β-淀粉酶一同失活。
七、结论与展望通过以上的实验方法，我们对淀粉酶的活性进行了测定。
并且我们发现α-+β-）淀粉酶总活性远高于α-淀粉酶活性，小麦淀粉酶的总比活为7.738U/mg。
八、思考题及质疑1．完成这次小小的蛋白含量测定实验从设计到实施完成的自我经验总结。
答：这次蛋白实验的主要难点在于蛋白溶液的稀释倍数。
在设计时我考虑使用浓度梯度的方法来使得稀释后酶液浓度落在工作曲线内，其实实际操作时通过不断稀释即可。
而且设计实验时我强调“可溶性蛋白”，于是考虑了溶解度的问题，并且设计了12000r/min的离心过程，后来发现这样使得蛋白含量与酶活性之间丧失了可比性（因为离心程度不同了）。
因此我的经验总结是：联系本次实验设计相关实验，尽可能减少变量的数目2．从酶活测定的相关实验结果判断本次实验设计的酶活测定样品稀释倍数是否合理？为什么？答：根据我们组和其它小组的经验，本次α-淀粉酶活性测定结果均靠近甚至稍微超过工作曲线，因此我们觉得应当再稀释一倍后进行测定。
3．众多测定淀粉酶活力的实验设计中一般均是采取钝化β-淀粉酶的活力而测α-淀粉酶和测总酶活力的策略，为何不采取钝化α-淀粉酶活力去测β-淀粉酶活力呢？这种设计思路说明什麽？答：钝化β-淀粉酶可以采取高温的方法，而钝化α-淀粉酶则需要采用酸性环境。
若在实验中采取钝化α-淀粉酶的方式，则在将pH调回的的过程中α-淀粉酶会有很大一部分复性。
而高温处理后立即冰浴，则可以大大减少β-淀粉酶的复性。
其次，在实验中，酶对pH更加敏感，若酸过量则会导致β-淀粉酶也被钝化，相对而言，温度更加易于控制。
这种设计思路说明我们在实验设计时要考虑其在操作时的合理性，使实验操作尽可能简便。
4．α-淀粉酶活性测定时70℃水浴为何要严格保温15分钟？保温后为什么要立即于冰浴中骤冷？而经如此处理，为什么在随后的40℃温浴和酶促反应中就能保证β-淀粉酶不会再参与催化反应。
答，保温时间过短β-淀粉酶失活不完全，时间过长导致α-淀粉酶也有一部分被钝化，所以要严格保温15分钟。
立即于冰浴中骤冷是为了减小β-淀粉酶在降温过程中的复性。
经过巨大的温度变化，不耐高温的β-淀粉酶会彻底失活，所以在随后的40℃温浴和酶促反应中就能保证β-淀粉酶不会再参与催化反应。
5．酶的最适反应温度（一般都是生理温度）和最适保存温度（一般0℃以下）为什么不一样？而这两个状态都是需要维护酶的空间结构。
答：最适反应温度时，酶的结构最适合诱导底物与之结合形成酶-底物复合物，因此体现出酶的活性最强。
而在最适保存温度时，酶的稳定性最好，催化能力很低，从而很好地保存了酶的活性。
6.为什么3，5-二硝基水杨酸与还原糖的反应要先沸水浴然后再稀释测定？答：原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物。
因此在沸水浴时，溶液浓度越大反应越完全。
而在比色法测定时，浓度过大无法测定，因此需要稀释以后进行测定，使数据尽可能符合朗伯-比尔定律。
7. 在设计酶活测定的实验时，要求酶促反应初速度对底物浓度的小量变化不敏感，具体要求为：在底物浓度有10%的变化幅度范围内，而所测初速度的变化幅度小于1%。
则[S]/K m 应该大于多少才能保证这一点？（设定为米氏酶）答：根据米氏方程：v=(V max[S])/(K m+[S])，根据题意：0.9[S]≤[S']≤1.1[S]，则0.99v≤v'≤1.01v,计算可得：[S]/K m＞8.18。
8. 转氨酶在细胞内的作用及生理意义？细胞内有众多的转氨酶，但相关研究及医学临床应用中却几乎都是只检测谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活力，而极少测定其它转氨酶活力，你推测可能的原因会是什么？为什么？答：转氨酶在细胞内催化酮酸与氨基酸或氨基酸之间的转氨基反应，可以生成非必须氨基酸或产生酮酸分解产能或作为糖和脂肪酸的原料。