植物组织培养 (2)

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6 植物组织培养实验二PPT课件

You Know, The More Powerful You Will Be
谢谢你的到来
学习并没有结束，希望大家继续努力
Learning Is Not Over. I Hope You Will Continue To Work Hard
演讲人：XXXXXX 时间：XX年XX月XX日
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2、无菌操作要注意：每次操作前，将双手用酒精棉球擦拭消毒；镊子、解剖剪刀等金属工具用火焰烧过灭菌，冷却后方可使用；尽量减少无菌三角瓶或培养皿在空气中的暴露时间；所有无菌操作尽量快速完成，并要求在酒精灯附近进行。
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3、请先在自然条件下练习外植体解剖，分割成0.5cm2左右的小块（段），经操作熟练，检查无误后，再进行无菌解剖分割及接种，以减少植物材料染菌或失水死亡的机率。
欢迎同学们进入奇幻的植物组织培养实验世界
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植物组织培养实验Ⅱ——— 外植体取材﹑表面消毒与接种
实验目的实验原理、基本知识实验用品、材料实验要求实验内容、方法实验报告——作业下一次实验预告
2
一、实验目的
1、掌握无菌操作技术，加深对无菌操作的了
解；
2、掌握常规的植物细胞组织培养技术，达到能独立操作的能力
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7、打开三角瓶——铝箔纸的拿法
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8、瓶口在火焰上烧过
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9、铝箔纸的放法
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10、镊出黄瓜苗
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11、镊出黄瓜苗
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12、放入培养皿中
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13 、
黄瓜
幼苗形态
生长点
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——
14、剪取茎段
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15、剪好的外植体
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16、黄瓜切块的接种

植物组织离体培养2

植物组织离体培养-组织培养实验室的建立(2)摘要：组织培养实验室实际上就是从组培材料进到合格商品苗出的生产线，实验室的各个分区单元就是生产车间，各个分区单元就是按组培体系建立的要求顺序排列的。

实验室是一个无菌系统，是一个光、温、湿、气可控系统，这都是建立组培体系的必要保证系统。

无论实验室的性质和规模如何，实验室设臵的基本原则是：科学、节能、减排、低耗、高效、经济和实用。

组织培养实验室布局的总体要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察、适合于生产技术路线。

关键词：基本实验室、辅助实验室、温室、组培室通用仪器设备、组培室药品试剂、学校组培室、家庭组培室、企业组培室、常用设备仪器组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。

规模化生产的组织培养实验室应建在交通方便的地方，便于培养物料和产品的运送。

实验室的建设均需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费和实验性质。

设计组织培养实验室时，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。

实验室的大小取决于工作的目的和规模。

以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。

在设计时，应按组织培养程序来没计，避免环节倒排，引起日后工作混乱。

植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。

要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。

组织培养实验室实际上就是从组培材料进到合格商品苗出的生产线，实验室的各个分区单元就是生产车间，各个分区单元就是按组培体系建立的要求顺序排列的。

实验室是一个无菌系统，是一个光、温、湿、气可控系统，这都是建立组培体系的必要保证系统。

无论实验室的性质和规模如何，实验室设臵的基本原则是：科学、节能、减排、低耗、高效、经济和实用。

第二章(2)植物组织培养操作技术

第二章(2)植物组织培养操作技术1 灭菌用物理或化学方法，杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体，即所有生命的物质全部杀死。

2 灭菌方法2.1培养基灭菌一般高压湿热灭菌，某些激素、维生素采用过滤灭菌。

2.2玻璃器皿灭菌干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h；湿热灭菌：121℃, 20～40min。

接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。

2.3接种工具灭菌用前干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h；用前湿热灭菌：121℃, 20～30min。

接种前用酒精棉球擦试，浸入95%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。

2.4实验服、口罩、滤纸灭菌湿热灭菌：121℃,20～30min。

实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。

2.5接种室灭菌紫外灯照射(接种室、超净台、接种箱)：波长260nm，距离小于1.2m，20～30min。

臭氧灭菌机：1～2h；熏蒸灭菌：5～8ml/m3甲醛+5g/ m3高锰酸钾；冰醋酸；1～3%高锰酸钾或3%来苏儿。

接种台喷雾消毒：75%酒精。

2.6接种材料灭菌灭菌步骤：①流水冲洗或洗衣粉漂洗②用化学灭菌剂浸润灭菌，最好加吐温-80等表面活性剂(灭菌液的0.5%)，一般70%酒精30S，0.1～1%升汞5～8 min。

③无菌水冲洗3～5次。

2.7物体表面灭菌2.7.1灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌2.7.2范围：桌面、墙面、双手、材料表面2.7.3消毒剂：70%酒精；1～2%来苏水；0.25～1%新洁尔灭；洗衣粉；吐温-802.8培养室灭菌新建培养室用前一定要彻底熏蒸1次。

隔2～5天用洗衣粉水或来苏水拖地1次，用高锰酸钾擦架1次。

3无菌操作3.1作好接种前准备3.1.1接种室的灭菌3.1.2超净工作台的灭菌3.1.2.1 开风机前将紫外灯打开30min以上3.1.2.2 之后开风机15min3.1.2.3 用95%酒精洗工作台面3.1.3接种器皿、用具的灭菌用具先用95%酒精浸泡，后于酒精灯外焰灼烧。

植物组织培养综合实验2

实验目的意义
通过满天星等的茎尖培养获得完整的幼苗，学会茎尖组培快繁的基本原理和操作技术。
实验原理
植物组织培养的原理: 植物细胞的全能性.
茎尖离体快繁技术
植物的茎尖和腋芽在适宜的培养基上，在合适的激素条件下，其生长点分化形成大量芽并能形成良好的苗。苗经诱导可长出根而形成完整的植株，这就是茎尖组培快繁。此技术已广泛用来繁育那些不能形成种子进行繁殖或难以繁育的花卉杂交品种或其它具有重要经济价值的植物，由于病毒一般不侵入生长点细胞，因此，这种方法也广泛用来脱病毒获取脱毒苗。
室实验
选材：材料类型、大小，年龄与发育状况等修剪：去除较老和脏的叶片，尽量减小体积，减少污染清洗：自来水冲洗，2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗
无菌间室培养
灭菌：75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水
冲洗3-5次。
无菌修剪：用无菌镊子和剪刀进一步去除多余的叶片，
依据需要切割成相应大小的茎段（带2-3个叶片）。
接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个
材料/瓶
培养：25 ℃，光照培养
观察记录：污染，生长状况，分枝
实验结果与分析
培养过程请进行下列观察和记录:
1、污染情况：内生菌污染？外源菌污染？ 2、茎尖诱导情况，分枝状况，诱导率。 3、幼苗生长状况：弱小？健壮？玻璃化？
褐化？
理论基础
利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养。在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称离体无性繁殖，由于这种方式得到的植株群体来自一个单株（或一个单芽），它们的遗传组成相同，这些株群可称单株无性系或单芽无性系。优越性：

植物组织培养

Vc具有很强的还原能力，常用于防止组织褐变。
（3）肌醇又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。使用浓度：一般为lOOmg／L。作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。
（4）氨基酸 (almino acide）作用：蛋白质的组成部分，也是一种有机氮化合物。是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等半胱氨酸及多种氨基酸的混合物（水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。
（11）再分化经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可又转变为各种不同细胞类型的能力。（12）分化培养经过脱分化阶段的外植体（形成愈伤组织），转移到另一培养基上分化出芽（或小球茎）或胚时，则称为分化培养，所用的培养基为分化培养基。
（13）增殖培养已分化芽、小球茎或无性幼胚再继续进行增殖，即
1. 培养条件可人为控制，周年生产
植物组织培养中的植物材料完全是在人为提供的培养基及小气候环境下生长的，摆脱了大自然中四季、昼夜气温频繁变化及灾害性气候等外界不利因素的影响，且条件均一、对植物生长极为有利。因此植物组织培养不受气候和季节的限制，可周年进行生产。
2. 生长周期短，繁殖速度快
植物组织培养可根据不同植物、不同器官、不同组织的不同要求而提供不同的培养条件，满足其快速生长的要求，缩短培养周期。一般20~30d就完成一个繁殖周期.每一繁殖周期可增殖几倍到几十倍,甚至上百倍,植物材料以几何级数增加。
3. 管理方便，可实现工厂化生产
植物组织培养是在人为的提供一定温度、光照、湿度、营养和植物生长调节剂等条件下进行的，不受自然界中病、虫、杂草等有害生物危害，生产微型化、精细化、高度集约化，重复性强，便于标准化管理和自动化控制，真正实现了种苗的工厂化生产。与田间栽培、盆栽等相比，省去了中耕除草、浇水施肥、病虫防治等一系列繁杂劳动，可大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。

植物组织培养步骤2

植物组织培养一．实验原理根据植物细胞具有全能性，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。

再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。

二．实验药品及仪器试剂：氯化钙(CaCL2.2H2O) 硫酸亚铁 (FeSO4 .7H2 O) 硝酸钾(KNO3)硫酸铜(CuSO4 .5H2 O) 硫酸镁(MgSO4.7H2O) 氯化( CoCL2 .6H2 O)硫酸铵(NH4NO3 ) 甘氨酸磷酸二氢钾(KH2PO4) 盐酸硫胺素硫酸锰(MnSO4.4H2O) 盐酸吡哆素硫酸锌(ZnSO4.7H2O) 烟酸硼酸(H3BO3) 肌醇碘化钾(KI) 蔗糖钼酸钠(Na2MoO4.2H2O) 琼脂乙二胺四乙酸二钠盐Na2-EDTA.2H2O仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，烧杯，量筒，培养皿，棉线，超净工作台，分析天平，长镊子，容量瓶，移液管。

三．实验步骤1.培养基的配方：化合物数量化合物数量氯化钙(CaCL2.2H2O) 440 硫酸亚铁 27.80(FeSO4 .7H2 O)硝酸钾(KNO3) 1900 硫酸铜 0.025(CuSO4 .5H2 O)硫酸镁(MgSO4.7H2O) 370 氯化钴 0.025( CoCL2 .6H2 O)硫酸铵(NH4NO3 ) 1650 甘氨酸 2磷酸二氢钾(KH2PO4) 170 盐酸硫胺素 0.1硫酸锰(MnSO4.4H2O) 22.3 盐酸吡哆素 0.5硫酸锌(ZnSO4.7H2O) 8.6 烟酸 0.5硼酸(H3BO3) 6.2 肌醇 100碘化钾(KI) 0.83 蔗糖 30000钼酸钠(Na2MoO4.2H2O) 0.25 琼脂 10000乙二胺四乙酸二钠盐 37.25 氢离子浓度 1.585微摩/升(Na2-EDTA.2H2O) (PH5.8)按上述配方制作培养基2.培养基灭菌将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 培养瓶中，每瓶约15 mL 。

实验二植物组织培养2-愈伤组织的诱导

中国海洋大学实验报告2015 年 4 月23 日姓名###云年级BBB专业UUUUUU学号HHHHHHHHHHHH课程细胞工程学实验题目植物愈伤组织诱导实验一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理；2、掌握植物组织接种培养的整个无菌操作的过程；3、熟悉超净工作台的使用。

二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。

植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。

而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。

植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。

超净工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备。

三、实验仪器试剂1、仪器：镊子、解剖刀、烧杯、酒精灯、试剂瓶、含有培养基的培养瓶、培养皿、金属盘、记号笔2、用品：胡萝卜、75%酒精、10%次氯酸钠、无菌水四、实验步骤：（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。

（2）将植物体用准备好的自来水冲洗后,用酒精棉擦拭取材部位表面, 于70%酒精中浸沾数秒钟。

（3）将材料放入已灭菌的100ml试剂瓶中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。

（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。

（5）弃次氯酸钠浸泡液，用准备的无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。

（6）将已灭菌的植物材料置于平板内，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm 厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。

（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。

植物组织培养试卷及答案4套

《植物组织培养》试题(一)一、填空题(每空1分,共20分，)1、一般培养室控制的温度是________，培养基常选用的pH值是________。

2、在组织培养中，培养基常用____________法灭菌，不耐热物质用_________法灭菌。

3、非洲菊的叶片_______,故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用________法繁殖。

4、1962年，Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了____培养基，其特点是__________浓度较高，且为较稳定的_______________。

5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织，大致要经历 ______、____和＿＿＿期。

6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时________，比值低时_______________。

7、脱毒苗培养的常用两种方法是_______和__________。

8、菊花在生产实践中常用 _______法繁殖，在组织培养可用______作为外植体进行培养。

9、草莓属于_____科植物，用微尖培养草莓主要使其＿＿＿＿，从而提高产量和质量。

二、判断题（每题2分,共10分，）（）1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。

（）2、菊花属于球根花卉，而兰花属于宿根花卉。

（）3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织，这个过程称为脱分化。

（）4、MS0培养基是没有激素的培养基。

（）5、受精卵和体细胞都具有全能性。

三、名词解释（每题2分，共10分）1、细胞全能性2、灭菌3、玻璃化现象4、指示植物5、驯化四、选择题（每题1分,共10分）（）1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶A 纤维素酶B 半纤维素酶C果胶酶D淀粉酶（）2、下列哪种不是组织培养常用的维生素A：维生素B2 、B：维生素B1 、C：维生素B6、 D：维生素C（）3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。

A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径C 胚状体发育途径D 花粉均等分裂途径（）4、下列哪种激素不属于生长素类①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA（）5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式A“胚性”生长B早熟萌发C先胚根后胚芽D先形成愈伤组织再分化（）6、适于花粉培养的最佳时期是＿＿A双核期B单核期C多核期D无核期（）7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A 硫酸镁B 硫酸亚铁C硫酸锌 D 硫酸铜（）8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂（）9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基A①②③④B①④③②C①③②④D①④②③（）10、和组织培养相似的代名词是A 克隆B有性生殖C孤雌生殖 D 单性生殖五、简答题（共50分）1、6-BA在组织培养中有何作用？(6分)2、述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)3、什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)4、尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？(6分)5、移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质？(6分)6、接种室有哪些技术要求？(6分)7、用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些？(7分)8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒？(7分)《植物组织培养》试题 (二)一、填空题(每空1分,共20分)1、在分离原生质体酶溶液内，需加入一定_____稳定剂，其作用是_______________。

植物组织培养第2章培养基及其配制

植物组织培养第2章培养基及其配制培养基及其配制目的要求：1、了解几种常用培养基的特点；2、掌握培养基的主要成分及其作用；3、掌握培养基的配制方法。

培养基(culture medium) :---是植物组织培养的重要基质。

(土壤+自养条件) ---不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。

因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。

一、培养基的种类最早的培养基: 是Sacks(1680)和Knop(1681),根据植物从土中主要是吸收无机盐营养，设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液.常用的培养基及特点如下：(1) MS培养基1962年，Murashige和Skoog,培养烟草细胞。

特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸盐含量较其他培养基为高；应用广泛―基本培养基。

(2) B5培养基1968年，Gamborg等，培养大豆根细胞。

特点：含有较低的铵，对有些植物的生长有抑制作用；适宜于双子叶植物特别是木本植物。

(3) White培养基1943年，White,培养番茄根尖。

特点：无机盐数量较低，适于生根培养。

(4)N6培养基1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培养。

特点：成分较简单，KNO3和(NH4)2SO4含量高。

在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。

(5) KM―8P培养基1974年，原生质体培养。

特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。

二、培养基的成分水、无机盐、有机物、天然复合物、植物激素、培养体的支持材料、抗生素、活性炭等。

(一)水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。

它是生命活动过程中不可缺少的物质。

配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。

植物组织培养第二章

（三）Байду номын сангаас细胞胚胎发生的基因表达机理（略）
二、植物体细胞胚胎发生途径
（一）体细胞胚胎发生的方式由外植体诱导体细胞胚胎发生的途径有两种：直接途径和间接途径。直接途径：从外植体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎。这种“胚性细胞”是在胚胎发生之前就已决定了的。间接途径：外植体先脱分化形成愈伤组织，在从愈伤组织的某些细胞，即重新决定为胚性细胞的细胞分化出体细胞胚胎，多数体细胞胚胎的形成是通过间接途径产生的。
植物愈伤组织的培养
愈伤组织培养是指将母体植株上的各个部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。一般情况下，植物组织均能诱发形成愈伤组织，由外植体形成愈伤组织，标志着植物离体培养的开始。
差异：（1）受精卵的全能性最高（2）受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。潜在全能性的原因：基因表达的选择性
科学研究表明，处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。人工条件下实现的这一过程，就是植物组织培养。
三、植物体细胞胚胎发生的极性和生理隔离
体细胞胚胎具有两个明显特点： 1、双极性 2、与母体组织或外植体的维管束系统无直接联系，处于较为孤立的状态，即存在生理隔离。
（一）体细胞胚胎发生的极性
单个胚性细胞与合子胚一样，具有明显的极性，第一次分裂多为不均等分裂，顶细胞继续分裂形成多细胞原胚，基细胞进行少数几次分裂形成胚柄。（二）体细胞胚胎发生的生理隔离
第二章
植物组织培养的基本原理
植物细胞全能性理论是植物组织培养的核心理论。离体细胞具有生命的特征属性，在全能性的基础上，提供合适的营养和环境条件，离体细胞经历脱分化和再分化过程

组培习题(二)

1、试管苗发生玻璃化现象的原因不是( D ) A、温度高 B、瓶内湿度大 C、激素浓度过大 D、光照过强 2、炼苗的环境开始时和（ A ）相似，后期类似于田间栽培条件。 A、培养室条件 B、无菌界室条件 C、缓冲间条件 D、准备室条件 3、植物组织培养实验室需要定期用（ A ）进行熏蒸。 A、高锰酸钾和甲醛 B、酒精和洗液 C、高锰酸钾和酒精 D、高锰酸钾和洗液 4、（ D ）是植物离体培养常用的主要糖类。 A、葡萄糖 B、果糖 C、麦芽糖 D、蔗糖 5、为了减少污染，一般选择培养材料的大小，在（ A ）之间。 A、0.1-0.5cm B、0.5-1.0cm C、1.0-1.5cm D、1.5-2.0cm

1、原生质体培养时常用的三个指标是存活率、密度和产量。 2、压片染色法是检测划分发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。 3、一般认为，诱导愈伤组织成败的关键不在于植物材料的来源，主要在于培养条件。 4、细胞培养时，从完整的植物器官中分离单细胞的方法有：机械法、酶解分离和化学分离。 5、驯化现象和衰退现象产生于试管苗的多次（或多代）过程中。 6、诱导单倍体植株二倍化的传统方法是用适宜浓度的秋水仙素溶液对植物材料进行相应的处理。 7、植物组织培养按培养对象分为器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养_等。 8、6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进 _____根_____的生长，这时______生长素____占主导地位；比值高促进_芽__的生长，这时细胞分裂素占主导地位。

1、再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。 2、器官培养：植物的根、茎、叶、花器（包括花药、子房）和幼小果实的无菌培养。 3、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。 4、看护培养法：是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 5、微体嫁接：指将0.1-0.2mm 的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌实生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的的植株。

植物组织培养教程李浚明(2)

植物生长调节剂：主要以细胞分裂素和生长素的配合使用,调节外植体的生长和分化.另外ABA、GA、CCC 等也具有不同的作用.
培养基的物理特性：以固体培养较为普遍,也有采用液体培养,如兰花原球茎的增殖.
三、培养条件：
光照：1000-3000lx,阶段Ⅲ可增强.14-16h/天. 温度：与植物的原产地相应.一般为25±2℃.有时可
成苗数量大、速度快、结构完整.但由于对其发生及发育过程了解不够,应用上还没有前两种广泛.
Direct somatic embryogenesis in Brassica napus
菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察
针叶松体细胞胚及体胚萌发生长
五、原球茎发生型
是兰科植物特有的一种快繁方式.指茎尖或腋芽外植体经培养产生原球茎的繁殖类型.原球茎可以增殖形成原球茎丛.
二、丛生芽发生型
是大多数植物快繁的主要方式.指外植体携带的顶芽或腋芽在适宜培养环境〔含有外源细胞分裂素〕中不断发生腋芽而呈丛生状芽,将单个芽转入生根培养基中,诱导生根成苗的繁殖方法.
不经过愈伤阶段,后代变异小,应用普遍,也可用于无病毒苗的生产.
三、不定芽发生型
指外植体在适宜培养基和培养条件下,形成不定芽, 后经生根培养,获得完整植株的繁殖方法.分为通过愈伤组织产生不定芽,和直接产生不定芽两种方式.
叶表皮组织不发达的试管苗也不易移栽存活. 移栽要求打开瓶口驯化2-3天；或在瓶内添加一些生长延缓剂如PP333、CCC等培育壮苗.
第四节植物快繁的商业化应用
植物快繁的重要用途是进行植物的商业化生产.世界上快繁商业化开始于上个世纪美国的兰花工业.我国的香蕉快繁苗占全国组培苗的2/3.其次有甘蔗、兰花、马铃薯、甘薯等.

植物组培实验二

植物组培实验报告实验二、培养基的配制及灭菌一、实验目的1、熟悉植物组织培养的一般工作流程。

2、了解培养基的成分、类型及特点。

3、能正确进行培养基的配制及灭菌操作。

二、实验原理植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作，对场地有一定的要求，需配备必要的仪器设备和器皿、器械，还必须熟练掌握每个环节的操作技术。

植物组织培养的一般程序包括拟定培养方案、初代培养、继代扩繁、生根壮苗培养及驯化移栽，其基本操作技术包括培养基的配制及灭菌、外植体的选择与消毒、无菌接种与培养、试管苗生根与驯化移栽等。

三、实验内容1、培养基的成分以MS培养为例，其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。

１．水作用：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。

它是生命活动过程中。

配制：培养基母液时要用蒸馏水：配培养基时可用自来水。

但在少量研究上尽量用蒸馏水。

２．无机元素大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等。

其作用是：(1)N功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。

供应形式：含有ＮＯ3－N又含ＮＨ4－N。

ＮＨ4－N对植物生长较为有利。

在制备培养基时以这两种形式供应。

供应的物质有ＫＮＯ3、、ＮＨ4ＮＯ3等。

有时，也添加氨基酸。

(2)P功能：是磷脂的主要成分，而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。

磷也是核酸、ＡＴＰ、辅酶等的组成成分。

组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对Ｎ的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。

供应形式：常用的物质有ＫＨ2ＰＯ4或ＮaＨ2ＰＯ4等。

(3)K功能：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。

Ｋ增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。

但浓度不易过大，一般为１～３mg/l 为好。

供应形式：制备培养基时，常以ＫＣl、ＫＮＯ3 等盐类提供。

二植物组织培养培养基母液的配制

2、如药品所带结晶水不同，应进行换算。
3、称量必需准确，一般用1-4/万的分析天平称量，特别如微量元素及激素等，但有些药品不影响基本反应过程的如蔗糖、琼脂等可用1/100粗天平称取。 4、所用的水必须纯净，一般用全玻璃蒸馏器二次蒸馏的重蒸水或者达到一定标准的无离子水。
5、制备好的浓缩液应保存于冰箱中，储备液配置量要依据使用频度而定，一般所制备的储备液最好于1-2个月内使用完，不宜过长时间保存。
药品
50 %酒精、95 %酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品蒸馏水
三、实验步骤
按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。如 MS培养基各种母液的配制步骤如下：大量元素母液：包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液l00 ml或50 ml。
植物在自然状态下生长时具有完整的营养体是属于自养型的很多营养物质可以自制对外界营养条件的要求比较简单而在离体条件下生长的植物器官组织和整体植物不同属于异养型要求的营养条件十分复杂因此在人工合成培养基的组成和制备上必须全制
简介
植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单，而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型，要求的营养条件十分复杂，因此在人工合成培养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。

名词解释

组织培养复习资料名词解释：（1）组织培养：是指通过无菌操作分离植物体的一部分接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。

（2）外植体：从活体植物体上分离下来的用于离体培养的材料（原生质体、悬浮细胞、组织、器官）。

（3）愈伤组织:原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中由外植体诱导形成的具有分生能力的一团不规则、无序生长的薄壁细胞，多在植物体切面上产生。

（4）细胞培养：是对由愈伤组织等进行液体振荡培养所得到的能保持较好分散性的离体单细胞或花粉单细胞或很小的细胞团的培养。

（5）原生质体培养：是用酶及物理方法除去细胞壁的原生质体的培养（6）分化：细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在个体发育中形成各类组织和器官完成整个生活周期。

（7）再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。

(8)初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体在离体培养条件下诱导愈伤组织、侧芽或不定芽、胚状体过程。

（9）继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织、芽）。

（10）生根培养：将芽苗转接到生根培养基上培养成为完整植株的过程.（12）植物生长调节剂：是指一些具有植物激素活性的人工合成的物质。

（13）灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的微生物全部杀死。

（14）消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用.（15）器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。

（16）茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。

（17）微茎尖培养: 带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超过0.5mm。

（19）花器官的培养：花器官培养指整个花器及其组成部分如花托、花瓣、花丝、花柄、子房、花药等的无菌培养。

（20）无病毒苗木：是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。

第三章(2)植物组织培养基本技术

2种激素5种浓度的试验组合Ⅱ
NAA（mg/L)
6－BA（mg/L)
低
中
高
低
低低
低中
低高
中
中低
中中
中高
高
高低
高中
高高
三、逐步增减法
筛选最佳有机营养添加量和最佳激素配比时常用此法。
增加增加减少
减少
无机盐
LMH
无L 机M 盐H
有机物生长素细胞分裂素
L M H L MH L MH
81个试验处理
正交试验
最佳组培方案筛选
参观咨询
文献检索
◆植物的学名、品种名、商品名 ◆此种植物组培的相关报道 ◆重点收集分析的技术信息
收集、分析的技术信息
◆外植体取样时间与外植体类型 ◆诱导、继代、生根培养基配方 ◆培养条件（温度、湿度、pH值等） ◆移栽驯化条件及基质配比
预备试验
针对某些关键因素简单拟定试验方案，粗略判断某因素是否有影响及影响程度、剂量的大致范围。
◆最佳培养基配方长期使用后，应视培养物的表现适当调整或校正。
今天我们都学习什么了？
复习思考题：
• 母液配制目的是什么？ • 图示母液和培养基配制
流程。
？？？
• 如何筛选出最佳培养方案？应注意哪些问题？
观察。。。
正交
L4(23)正交表
试
验
正交
L8(27)正交表
试
验
正交
L9(34)正交表
试
验
正交
L16(45)正交表
试
验
正
正交表的代号
交
试验因子数（列号数）
试

植物组织培养期末考试习题参考答案

仅供参考植物组织培养复习题一、名词解释1植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。

2初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体从植物体上分离下来的第一次培养的过程。

3继代培养：初代培养后，将组织转移到新的培养基上进行培养的都称为继代培养。

4体细胞胚：植物组织培养过程中能够产生与正常合子胚相似的结构，由体细胞发育而成，也称为胚状体。

5胚的培养：在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行离体培养的方法。

6外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。

7驯化现象：植物组织经长期继代培养，要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象称为“驯化”现象。

8玻璃化苗：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状，这种现象通常称为玻璃化，这种出现玻璃化现象的试管苗成为玻璃化苗。

9愈伤组织：在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团无定形的疏松排列的薄壁细胞，类似分生组织。

10脱分化：已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。

11再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。

12人工种子：人工种子是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。

13褐化现象：褐化是指在接种后，外植体表面开始褐化，释放出褐色物质，有时甚至会使整个培养基褐化的现象。

14器官培养：以植物器官作为外植体进行离体培养，包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。

15原生质体培养：用酶及物理方法除去细胞壁，对所得到的原生质体进行培养的方法。

16基本培养基：人工配制的仅能满足外植体最基本生长需要的培养基，如MS、MT、White培养基。

17完全培养基：在基本培养基的基础上添加各种各样的附加物（激素、有机物质等），具备可使其最大限度地生长和繁殖的条件，含有满足各种营养要求的培养基二、填空、选择、判断、简答、问答1植物组织培养的定义、特点、发展简史（1）定义：把无菌操作分离植物体的一部分，接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。

植物组织培养绪论第一章第二章大纲

一、植物组织培养的广义含义(tissue culture)在无菌条件下，将离体植物的器官、组织、细胞或原生质体在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件使其长成完整植株的过程或生产具有经济价值的其他产品的技术。

也称离体培养（Invitro culture）。

二、此定义内涵：1、无菌条件（asepsis)：外植体、培养基、培养容器、接种工具、操作环境、培养环境等。

2、外植体（explant）：健康植株的特定部位或组织，如根、茎、叶、花、果实、胚珠、花药和花粉等，选择用于组织培养的起始材料，称之为外植体。

包括营养器官、生殖器官、组织、细胞等。

3、培养基（culture medium)：是植物组织培养的重要基质，它提供植物生长所需的营养物质。

人工配制，成分确定。

4、组培的理论基础：植物细胞的全能性（totipotent）。

5、激素：调控培养物的状态和发育方向，实现不同的实验目的。

6、封闭培养：通过封口材料实现气体交换。

7、培养条件（ culture condiction）:人为控制。

*植物组织培养的狭义含义指对植物体所有组织如分生组织、胚乳组织、薄壁组织、花药组织、愈伤组织的培养。

本课程所涉及的组织培养若无特殊说明均指广义含义。

三、植物组织培养的四要素（1）无菌（2）培养材料：①器官：根、茎、叶、花、果实②组织：花药组织、胚乳、皮层等③细胞：体细胞（2n）、生殖细胞（n）④原生质体（3）培养基（4）培养条件：温度、光照、湿度等四、与组培有关的术语及理论1、植物细胞全能性（totipotent)：植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。

原理：植物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，植物体的每一个活细胞都应该具有全能性。

潜在全能性的原因：基因表达的选择性。

科学研究表明，处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。