(整理)肺炎克雷伯氏菌PCR快速检测试剂盒
克雷伯菌实验报告结果
一、实验目的1. 了解克雷伯菌对常见抗生素的敏感性。
2. 分析克雷伯菌的耐药性特征，为临床合理用药提供依据。
二、实验材料1. 克雷伯菌临床分离株2. 常用抗生素：头孢菌素类、喹诺酮类、氨基糖苷类、碳青霉烯类等3. 药敏试验纸片4. 微量稀释法药敏试验试剂盒5. 酶联免疫检测仪三、实验方法1. 药敏试验纸片扩散法：将克雷伯菌接种于琼脂平板，将抗生素纸片贴于平板表面，培养24小时后测量抑菌圈直径，判断克雷伯菌对各种抗生素的敏感性。
2. 微量稀释法药敏试验：采用微量稀释法测定克雷伯菌对亚胺培南、头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦、呋喃妥因、氨苄西林等抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。
3. 酶联免疫检测：检测克雷伯菌对亚胺培南、头孢吡肟、头孢他啶等抗生素的耐药性。
四、实验结果1. 药敏试验纸片扩散法结果：（1）克雷伯菌对头孢菌素类抗生素的敏感性较好，其中头孢噻肟的抑菌圈直径最大，表明其对头孢噻肟的敏感性较高。
（2）克雷伯菌对喹诺酮类抗生素的敏感性较好，其中左氧氟沙星的抑菌圈直径最大。
（3）克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性较好，其中阿米卡星的抑菌圈直径最大。
（4）克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的敏感性较好，其中亚胺培南的抑菌圈直径最大。
2. 微量稀释法药敏试验结果：（1）克雷伯菌对亚胺培南、头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦的MIC值均小于1mg/L，表明其对这些抗生素的敏感性较高。
（2）克雷伯菌对呋喃妥因、氨苄西林的MIC值在4mg/L以上，表明其对这两种抗生素的敏感性较差。
3. 酶联免疫检测结果：（1）克雷伯菌对亚胺培南、头孢吡肟、头孢他啶的耐药率分别为10%、5%、3%。
（2）克雷伯菌对头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均为0。
五、结论1. 克雷伯菌对头孢菌素类、喹诺酮类、氨基糖苷类、碳青霉烯类抗生素的敏感性较好。
2. 克雷伯菌对呋喃妥因、氨苄西林的敏感性较差。
3. 克雷伯菌对亚胺培南、头孢吡肟、头孢他啶的耐药率较低，但对头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为0。
肺炎支原体6小时快检试剂盒(快速培养法)药品说明书
肺炎支原体6小时快检试剂盒（快速培养法）
药品名称：
通用名称：肺炎支原体6小时快检试剂盒（快速培养法）
英文名称：暂无
成份：
产品性能：1.酸碱度：本品的PH值应在7.3-8.5之间。
2、特异性：用标准肺炎支原体株检验，结果应为阳性。
3】灵敏度：本品灵敏度检查采用变色单位试验法，变色单位应≥10-8。
4、稳定性：将试剂在37±1℃下放置1周，英符合特异性要求。
产品组成：改试剂盒为液体单一试剂，其主要组成为：牛心浸液、马血清、酵母浸液、抑菌剂、生长因子等。
适应症：
该产品用于体外定性检测肺炎支原体，用于临床肺炎支原体感染的六小时快速筛查和临床辅助诊断。
用法用量：
暂无
不良反应：
暂无。
禁忌：
暂无。
注意事项：
暂无。
贮藏：
暂无
有效期：
暂无
标准文号：
鄂食药监械(准)字2013第2401238号。
用于鉴定肺炎克雷伯菌毒力和碳青霉烯酶耐药性的试剂盒[发明专利]
![用于鉴定肺炎克雷伯菌毒力和碳青霉烯酶耐药性的试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b3c40d22f08583d049649b6648d7c1c709a10b76.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011479560.1(22)申请日 2020.12.15(71)申请人 深圳市第三人民医院地址 518112 广东省深圳市龙岗区布澜路29号(72)发明人 杨扬 刘映霞 杨明辉 许智祥 韦金丽 彭运 (74)专利代理机构 北京轻创知识产权代理有限公司 11212代理人 张力波(51)Int.Cl.C12Q 1/689(2018.01)C12Q 1/6851(2018.01)C12Q 1/10(2006.01)C12R 1/22(2006.01)(54)发明名称用于鉴定肺炎克雷伯菌毒力和碳青霉烯酶耐药性的试剂盒(57)摘要本发明涉及一种用于鉴定肺炎克雷伯菌毒力和碳青霉烯酶耐药性的多重荧光定量PCR试剂盒,包括用于扩增icuA、rmpA1、rmpA2和KPC的引物对以及对应的荧光探针组，三组引物对、三个荧光探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。
该试剂盒可以快速高效鉴定肺炎克雷伯菌是否为高毒力株以及碳青霉烯酶耐药菌株。
权利要求书1页 说明书6页序列表2页 附图2页CN 112430677 A 2021.03.02C N 112430677A1.一种用于鉴定肺炎克雷伯菌毒力和碳青霉烯酶耐药性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为多重荧光定量PCR试剂盒，包括用于扩增icuA、rmpA1、rmpA2和KPC的引物对以及与icuA、rmpA1、rmpA2和KPC对应的荧光探针组，所述用于扩增icuA的引物对为icuA -F和icuA -R，所述用于扩增rmpA1和rmpA2的引物对均为rmpA1/2-F和rmpA1/2-R，所述用于扩增KPC的引物对为KPC -F和KPC -R，所述荧光探针组包括与icuA对应的荧光探针icuA -P、分别与rmpA1和rmpA2对应的荧光探针rmpA1/2-P以及与KPC对应的荧光探针KPC -P，所述icuA -F、icuA -R、rmpA1/2-F、rmpA1/2-R、KPC -F、KPC -R、icuA -P、rmpA1/2-P、和KPC -P的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。
六项呼吸道病原菌核酸检测试剂盒(多重荧光PCR法)注册技术审评报告
一、技术审评报告1、技术审评报告概述本技术审评报告是针对六项呼吸道病原菌核酸检测试剂盒（多重荧光PCR法）的审评报告，该试剂盒由XX公司研发，主要用于检测呼吸道病原菌的核酸，包括病毒性肺炎（SARS-CoV-2）、流感病毒（A型、B型、C型）、细菌性肺炎（结核分枝杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎支原体、病原性链球菌）。
本技术审评报告主要介绍了该试剂盒的主要特点、检测原理、检测方法、检测结果、检测效果及其优势等内容。
2、技术审评报告内容（1）六项呼吸道病原菌核酸检测试剂盒（多重荧光PCR法）的主要特点该试剂盒采用多重荧光PCR技术，可以快速、准确、灵敏地检测呼吸道病原菌的核酸，具有检测结果准确、检测时间短、检测灵敏度高、操作简便等优点。
该试剂盒可以检测的病原菌包括病毒性肺炎（SARS-CoV-2）、流感病毒（A型、B型、C型）、细菌性肺炎（结核分枝杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎支原体、病原性链球菌），可以满足不同病原菌的检测要求。
（2）检测原理该试剂盒采用多重荧光PCR技术，通过检测样本中的特异性核酸序列，从而实现病原菌的快速检测。
该试剂盒中的特异性核酸序列是病毒性肺炎（SARS-CoV-2）、流感病毒（A型、B型、C型）、细菌性肺炎（结核分枝杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎支原体、病原性链球菌）的特异性核酸序列，可以有效检测样本中的病原菌核酸。
（3）检测方法1）将样本放入试剂盒中的检测管，加入检测液，振荡混匀。
2）将检测管放入PCR仪中，进行PCR反应。
3）将PCR仪中的检测管放入荧光定量仪中，进行荧光定量检测。
4）根据荧光定量仪的检测结果，判断样本中是否含有病原菌核酸。
（4）检测结果根据荧光定量仪的检测结果，可以判断样本中是否含有病原菌核酸，具体结果如下：1）病毒性肺炎（SARS-CoV-2）：如果荧光定量仪的检测结果为阳性，则表明样本中含有病毒性肺炎（SARS-CoV-2）的核酸；2）流感病毒（A型、B型、C型）：如果荧光定量仪的检测结果为阳性，则表明样本中含有流感病毒（A型、B型、C型）的核酸；3）细菌性肺炎（结核分枝杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎支原体、病原性链球菌）：如果荧光定量仪的检测结果为阳性，则表明样本中含有细菌性肺炎（结核分枝杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎支原体、病原性链球菌）的核酸。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
【产品名称】
通用名称：肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒
英文名称：PCR diagnostic kit for Klebsiella pneumoniae
【检验原理】
目前，国内食品卫生微生物检验的方法主要采用国家标准（GB/T）和行业标准（SN/T），该类标准是由传统的分离培养、镜检观察、生化鉴定等实验组成，一般的检测周期在6～8 天，要求检测步骤较多而且精度低，存在着检验周期偏长、工作量大等缺点。
临床上对致病菌检测也需要快速得到检测结果，以免延误病情。
针对目前微生物检测的现状，天津生物芯片结合目前微生物研究领域的先进技术，投入大量人力、物力，成功开发了基于PCR技术的肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒。
肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒使用肺炎克雷伯氏菌的特异引物，可与样本中的肺炎克雷伯氏菌基因组的相应靶位点特异性结合，利用PCR反应达到对肺炎克雷伯氏菌快速检测的目的。
试剂盒具有特异性强的特点，可以将肺炎克雷伯氏菌从其它细菌中特异地区分出来。
【预期用途】
用于食品、水样、临床样品以及环境样品中的肺炎克雷伯氏菌的检测。
肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌,无需增菌.通过滤膜法成功地从人工污染肺炎克雷伯氏菌的乳粉中提取了肺炎克雷伯氏菌的DNA.以肺炎克雷伯氏菌的间区序列(ITS)为靶基因,经过PCR扩增得到158 bp的产物,经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物.该方法灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为10CFU/mL,可在6 h内完成对乳品中肺炎克雷伯氏菌的检测,比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12-24 h.
【主要组成部分】
肺炎克雷伯氏菌核酸扩增（PCR）检测试
剂盒
组份规格
数量贮存温度核酸提取液
1ml/支2支
-20℃肺炎克雷伯氏菌PCR反应液500μl /支
1支
Taq酶
12μl /支1支
肺炎克雷伯氏菌阳性对照品100μl /支
1支
阴性对照品100μl /支1支
【储藏条件及有效期】
-20℃保存，避免反复冻融，有效期一年。
【样品处理】
（1）取培养后的菌液约1.5ml，12000rpm离心2min，弃上清。
（2）加入200μl无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，弃上清。
（3）加入80μl裂解液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100 ℃水浴15分钟，冰上放置10分钟后12000rpm离心3min。
（4）取上清液用于PCR检测。
【使用方法】
1.试剂配制（试剂准备区）
从试剂盒中取出PCR反应液在室温融化，将PCR反应液充分震荡混匀，所有试剂在使用前2000rpm离心10s。
设所需要的管数n（n=样本数+1管阳性对照品+1管阴性对照品），每个测试反应体系试剂配置如下表。
计算所需要的n管反应的各试剂的使用量，加入至适当体积的无菌离心管中，充分混合均匀，分装至无菌PCR反应管中，每管20μl。
PCR反应液Taq酶
每个反应体系试剂用量19.7μl0.3μl
2.PCR扩增（扩增和产物分析区）
将样本、阴性对照品和阳性对照品使用前恢复至室温，2000rpm离心10s。
向每个PCR反应管中分别加入样本、阴性对照品和阳性对照品各5μl，震荡混匀，于2000rpm离心10s。
将PCR管放入PCR仪中，使用以下程序进行扩增反应，整个扩增反应约需2小时。
3.结果判断（扩增和产物分析区）
从PCR管中取出2μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
在紫外灯下，阴性对照品没有任何条带；肺炎克雷伯氏菌阳性对照品具有大小为269bp的条带。
当被检样品经电泳检测出现269bp大小的条带时则属于肺炎克雷伯氏菌阳性；当未出现条带或所出现的条带大小与阳性对照品的条带大小不一致时均视为阴性结果。
【注意事项】
1.本试剂盒不做临床诊断。
2.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培
训，实验过程中严格分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实
验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。
3.样本准备和试剂准备阶段应使用生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，
使用自卸管移液器。
4.对每次实验进行质量控制。
5.试剂使用前要完全解冻，并混合均匀，但应避免反复冻融。
6.样本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢
弃。
7.实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器。
8.所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微
生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。