肺炎克雷伯与痰液标本检查PPT精品课程课件讲义
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对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入45℃
左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。对于 幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳嗽而取 之。
15
标本的采集
（2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直接 吸取标本，或用气管刷采取标本。 （3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。
16
痰液标本常见的分离菌
属菌属或种的细菌，可直接报告。
如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报告“痰
液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄状”；
21
痰液标本检验操作流程
如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显荚膜时， 可报告“痰液涂片查见革兰阳性双球菌，形似肺炎
球菌”。
如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告“痰液
涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片中均为鳞状上
悬雍垂后侧反复涂抹数次小心取出，避免接触口腔部其他组织。 2．咽拭子
将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌根，暴露整个
口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后弃去，再取1支湿润的拭 子轻压扁桃体，擦取挤压出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。
13
14
标本的采集
3. 痰液标本
（1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后， 用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。
皮细胞，则应视为不合格标本。
22
痰液标本检验操作流程
3、分离培养：
1）痰液标本的前处理
• A. 均质化法：加入等量的PH 7.6 的1%
胰酶溶液，放置35℃、90 min使痰液均质
化；
23
痰液标本检验操作流程
• B. 洗涤法：取无菌平皿4个，加入无菌生理盐水 20ml ，将痰液标本放入第1个平皿中，用接种环用 力震摇，将脓痰分散为小块悬浮于盐水内，将小块 脓痰取出依次放入第2、3、4个平皿中重复以上操 作。最后在第4个平皿收集脓痰小块，接种于平皿。
检验程序
痰液标本 肉眼观察 涂片染色观察 血平板 普通培养 35℃、18~24h
培养前处理 巧克力平板 普通培养 35℃、18~24h 中国蓝平板 普通培养 35℃、18~24h
初步报告
菌落形态和涂片染色 生化反应、血清学鉴定
报告
19
痰液标本检验操作流程
1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选取脓血
正常菌群 革兰阳性细菌 α和γ链球菌、微球菌、 表皮葡萄球菌、四联球 菌、白喉以外的棒状杆 菌、乳杆菌 化脓性链球菌、金黄色葡 萄球菌、白喉棒状杆菌、 结核分枝杆菌、白色念 珠菌 化脓性链球菌 、金黄色葡 萄球菌、肺炎链球菌、 白喉棒状杆菌、结核分 枝杆菌、厌氧菌、放线 菌、奴卡菌 革兰阴性细菌 除脑膜炎和淋病奈瑟 菌外的其他奈瑟菌、 其他嗜血杆菌 脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、百日咳鲍 特菌、肺炎克雷伯菌、 大肠埃希菌、铜绿假 单胞菌 脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、肺炎克雷 伯菌、大肠埃希菌、 铜绿假单胞菌、产气 肠杆菌、嗜肺军团菌 17
同时接种未经洗涤的痰液标本，作为对照。
24
痰液标本检验操作流程
• 2）取经过前处理的痰液标本分别接种血平板、
巧克力平板和中国蓝平板。巧克力平板置5%— 10% CO2 环境培养，其他平板于普通环境35℃孵 育18—24h 。根据菌落形态，细菌染色观察，进 一步进行鉴定。
25
特殊菌的培养
• 1.结核分枝杆菌培养：无菌吸管加前处理标本2-3滴于罗-琴 培养基35℃孵育至8周，每周观察一次； • 2.嗜肺军团菌培养：取气管分泌物接种于活性炭酵母琼脂 (CYE)或费-高(F-G)平板，35℃、2.5%CO2培养，每天用肉眼 观察，直至第14天； • 3.百日咳鲍特菌的培养：将标本直接接种在鲍-金培养基上， 置有盖的玻璃缸（缸内加少量的水，并在水中加少许硫酸铜， 防止细菌及霉菌生长）中，35℃ 孵育3—5天。
的卵黄双抗平板上，35℃、5%-10% CO2环境孵育18—24h。
性的痰液用于细菌学检验。异常恶臭的脓性痰， 常见于肺脓疡患者，而且可能与厌氧菌有关。痰 液中有颗粒状、菌块和干酪样物质可能与放线菌 病和曲霉菌感染有关。
20
痰液标本检验操作流程
2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂片，干 燥固定后，进行革兰染色镜检。
如发现形态典型、有特殊结构，初步可以确定所
上呼吸道 常见致 病菌 下呼吸道 常见致 病菌
检验程序
鼻咽拭子 直接涂片染色检 查 革兰染色 异染颗粒 常规培养 血平板 巧克力平板 中国蓝平板
白喉棒状杆菌培养
血清斜面培养基 鸡蛋培养基 菌落形态、涂片染色 初步报告
百日咳杆菌培养 鲍-金培养基
初步报告
亚碲酸钾血平板纯培养
菌落形态、涂片染色
18 生化反应、血清学鉴定
11
器材和试剂
• 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革兰染 色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。 • 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻 片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非发酵 菌生化编码表等。
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标本的采集
1. 鼻咽拭子 采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向上仰张大口，
用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子绕过悬雍垂，在鼻咽腔、
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肺炎克雷伯与痰液标本检查
主讲：XX XX
凡大医治病，必当安神
定志，无欲无求，先发大慈恻 隐之心，誓愿普救含灵之苦。
- - 孙思邈
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开始上课！
肺炎克雷伯菌革兰染色
肺炎克雷伯菌荚膜染色
肺炎克雷伯菌的菌落特征（血琼脂平板）
肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC）
肺炎克雷伯菌粘丝试验
肺炎克雷伯菌KIA（A A＋＋ ）、MIU（－－＋）
目的要求
• • 掌握呼吸道标本的细菌学检验和报告方法 掌握肺炎克雷伯菌的培养特征、主要微生物 特性及鉴定方法。 • 了解呼吸道标本的采集方法。
10
器材和试剂
• 1、标本：痰液标本 • 2、菌种：肺炎克雷伯菌 • 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克 氏双糖斜面培养基、半固体培养基、微 量生化管等。
26
特殊菌的培养
• 4. 白喉棒状杆菌培养：将标本接种于血清斜面或鸡蛋培
养基Leabharlann Baidu35℃ 孵育8-10h观察；
• 5.流感嗜血杆菌培养：将标本接种于血平板和巧克力平 板，并在平板中央接种一直线金黄色葡萄球菌（或四角 点种），35℃、5%-10% CO2环境孵育18-24h。 • 6.脑膜炎奈瑟菌培养：将鼻烟拭子接种于已保温在 350C
左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。对于 幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳嗽而取 之。
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标本的采集
（2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直接 吸取标本，或用气管刷采取标本。 （3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。
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痰液标本常见的分离菌
属菌属或种的细菌，可直接报告。
如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报告“痰
液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄状”；
21
痰液标本检验操作流程
如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显荚膜时， 可报告“痰液涂片查见革兰阳性双球菌，形似肺炎
球菌”。
如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告“痰液
涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片中均为鳞状上
悬雍垂后侧反复涂抹数次小心取出，避免接触口腔部其他组织。 2．咽拭子
将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌根，暴露整个
口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后弃去，再取1支湿润的拭 子轻压扁桃体，擦取挤压出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。
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标本的采集
3. 痰液标本
（1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后， 用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。
皮细胞，则应视为不合格标本。
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痰液标本检验操作流程
3、分离培养：
1）痰液标本的前处理
• A. 均质化法：加入等量的PH 7.6 的1%
胰酶溶液，放置35℃、90 min使痰液均质
化；
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痰液标本检验操作流程
• B. 洗涤法：取无菌平皿4个，加入无菌生理盐水 20ml ，将痰液标本放入第1个平皿中，用接种环用 力震摇，将脓痰分散为小块悬浮于盐水内，将小块 脓痰取出依次放入第2、3、4个平皿中重复以上操 作。最后在第4个平皿收集脓痰小块，接种于平皿。
检验程序
痰液标本 肉眼观察 涂片染色观察 血平板 普通培养 35℃、18~24h
培养前处理 巧克力平板 普通培养 35℃、18~24h 中国蓝平板 普通培养 35℃、18~24h
初步报告
菌落形态和涂片染色 生化反应、血清学鉴定
报告
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痰液标本检验操作流程
1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选取脓血
正常菌群 革兰阳性细菌 α和γ链球菌、微球菌、 表皮葡萄球菌、四联球 菌、白喉以外的棒状杆 菌、乳杆菌 化脓性链球菌、金黄色葡 萄球菌、白喉棒状杆菌、 结核分枝杆菌、白色念 珠菌 化脓性链球菌 、金黄色葡 萄球菌、肺炎链球菌、 白喉棒状杆菌、结核分 枝杆菌、厌氧菌、放线 菌、奴卡菌 革兰阴性细菌 除脑膜炎和淋病奈瑟 菌外的其他奈瑟菌、 其他嗜血杆菌 脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、百日咳鲍 特菌、肺炎克雷伯菌、 大肠埃希菌、铜绿假 单胞菌 脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、肺炎克雷 伯菌、大肠埃希菌、 铜绿假单胞菌、产气 肠杆菌、嗜肺军团菌 17
同时接种未经洗涤的痰液标本，作为对照。
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痰液标本检验操作流程
• 2）取经过前处理的痰液标本分别接种血平板、
巧克力平板和中国蓝平板。巧克力平板置5%— 10% CO2 环境培养，其他平板于普通环境35℃孵 育18—24h 。根据菌落形态，细菌染色观察，进 一步进行鉴定。
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特殊菌的培养
• 1.结核分枝杆菌培养：无菌吸管加前处理标本2-3滴于罗-琴 培养基35℃孵育至8周，每周观察一次； • 2.嗜肺军团菌培养：取气管分泌物接种于活性炭酵母琼脂 (CYE)或费-高(F-G)平板，35℃、2.5%CO2培养，每天用肉眼 观察，直至第14天； • 3.百日咳鲍特菌的培养：将标本直接接种在鲍-金培养基上， 置有盖的玻璃缸（缸内加少量的水，并在水中加少许硫酸铜， 防止细菌及霉菌生长）中，35℃ 孵育3—5天。
的卵黄双抗平板上，35℃、5%-10% CO2环境孵育18—24h。
性的痰液用于细菌学检验。异常恶臭的脓性痰， 常见于肺脓疡患者，而且可能与厌氧菌有关。痰 液中有颗粒状、菌块和干酪样物质可能与放线菌 病和曲霉菌感染有关。
20
痰液标本检验操作流程
2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂片，干 燥固定后，进行革兰染色镜检。
如发现形态典型、有特殊结构，初步可以确定所
上呼吸道 常见致 病菌 下呼吸道 常见致 病菌
检验程序
鼻咽拭子 直接涂片染色检 查 革兰染色 异染颗粒 常规培养 血平板 巧克力平板 中国蓝平板
白喉棒状杆菌培养
血清斜面培养基 鸡蛋培养基 菌落形态、涂片染色 初步报告
百日咳杆菌培养 鲍-金培养基
初步报告
亚碲酸钾血平板纯培养
菌落形态、涂片染色
18 生化反应、血清学鉴定
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器材和试剂
• 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革兰染 色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。 • 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻 片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非发酵 菌生化编码表等。
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标本的采集
1. 鼻咽拭子 采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向上仰张大口，
用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子绕过悬雍垂，在鼻咽腔、
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肺炎克雷伯与痰液标本检查
主讲：XX XX
凡大医治病，必当安神
定志，无欲无求，先发大慈恻 隐之心，誓愿普救含灵之苦。
- - 孙思邈
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开始上课！
肺炎克雷伯菌革兰染色
肺炎克雷伯菌荚膜染色
肺炎克雷伯菌的菌落特征（血琼脂平板）
肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC）
肺炎克雷伯菌粘丝试验
肺炎克雷伯菌KIA（A A＋＋ ）、MIU（－－＋）
目的要求
• • 掌握呼吸道标本的细菌学检验和报告方法 掌握肺炎克雷伯菌的培养特征、主要微生物 特性及鉴定方法。 • 了解呼吸道标本的采集方法。
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器材和试剂
• 1、标本：痰液标本 • 2、菌种：肺炎克雷伯菌 • 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克 氏双糖斜面培养基、半固体培养基、微 量生化管等。
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特殊菌的培养
• 4. 白喉棒状杆菌培养：将标本接种于血清斜面或鸡蛋培
养基Leabharlann Baidu35℃ 孵育8-10h观察；
• 5.流感嗜血杆菌培养：将标本接种于血平板和巧克力平 板，并在平板中央接种一直线金黄色葡萄球菌（或四角 点种），35℃、5%-10% CO2环境孵育18-24h。 • 6.脑膜炎奈瑟菌培养：将鼻烟拭子接种于已保温在 350C