HUV-EC-C人脐静脉血管内皮细胞
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离培养仪器试剂和操作步骤
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分离培养仪器试剂和操作步骤溶液以及器材：1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml2、配三抗：青霉素：100ku/L链霉素：100ku/L庆大霉素：100ku/L3、培养液（M199＋ECGS[3ug/ml]＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml4、大瓶生理盐水5、广口瓶（脐带数＋1）6、止血钳（脐带数×2＋2）7、大针头数个（用于吸取生理盐水，胶原酶）8、手术剪刀数把使用前器械高温蒸气灭菌。
实验步骤：1、去妇产科取当天新鲜脐带（广口瓶；生理盐水），试验前放入4度冰箱。
2、辨别脐带静脉（粗大的那根），顺着静脉瓣插入大针头，注入生理盐水，充分冲洗脐静脉，至流出液体中无可见血液。
3、夹住脐带下端，从上端灌注0.1%的胶原酶，钳住脐静脉上端，37度孵育15分钟（已经足够）；如果消化液中出现絮状物，说明消化时间过长。
4、收集消化液，并用含小牛血清的RPMI-1640 冲洗脐静脉，冲洗液并入消化液中。
1000－1500转离心10分钟。
5、将细胞悬浮于培养液中（一根脐带一般可以一个培养瓶，如果细胞少就六孔板一个孔），细胞不能太稀疏，否则生长缓慢。
6、正常情况下三天长满传代，正常的内皮细胞长满后如同卵石状，见下图。
【注意事项】大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。
本文到此结束，谢谢大家!。
一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法
一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法作者：李琴山冯赞杰刘洋徐海燕钱民章【关键词】 ,内皮细胞；脐静脉；细胞培养【Abstract】 AIM: To establish a stable method to isolate and culture human umbilical vein endothelial cells (hUVEC) in vitro. METHODS: Endothelial cells of vein from newborn umbilical cord were successfully isolated using a combination of collagenase and trypsin (1∶1). Cells were not digested with trypsin until the cells reached confluence over 80%. The composition of culture medium was simplified by not adding vascular endothelial cell growth factor and heparin. The cultured cells were verified as hUVEC by morphology and immunofluorescence staining. RESULTS: The endothelial cells initially spread on the bottom of the dishes in 4 h, then coalesced and grew to form confluent monolayers of polygonal cells within 7-10 d. The cultured cells had a cobblestone appearance with a strict monolayer growth and contact inhibition. The purity of endothelial cells was more than 95% identified by immunocytochemistry staining for Ⅷ:Ag and KDR. CONCLUSION: Method of injection with mixed Enzyme solution is an optimized protocol which is reliable and of high achievement ratio. Cellsharvested with this protocol can be used as models on research of vascular endothelial cells in vitro.【Keywords】 endothelial cell; umbilical vein; cell culture【摘要】目的：建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离和培养的方法. 方法：采用胰蛋白酶/胶原酶（1∶1）混合酶液消化法培养人脐静脉内皮细胞，简化完全培养液组分（不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子），当原代培养细胞80％以上汇合后用胰蛋白酶消化传代；用形态学、免疫细胞化学法进行鉴定. 结果：种植在培养瓶中的内皮细胞4h贴壁生长，48~96 h生长最快，7~10 d汇合. 内皮细胞呈单层铺路石样外观，Ⅷ因子相关抗原（Ⅷ：Ag）和内皮细胞生长因子受体2（KDR）鉴定内皮细胞纯度达95％以上. 结论：用混合酶液灌注脐静脉消化内皮细胞是获取内皮细胞的一种好方法，可靠性大，成功率高，可以构建体外研究血管内皮细胞的模型.【关键词】内皮细胞；脐静脉；细胞培养0引言血管内皮细胞(vascular endothelial cell, VEC)在心血管疾病的发生中占有重要的地位［1］. 采用培养的VEC进行相关机制研究是一种普遍应用的实验方法. 由于人体组织取材限制，很难获取大量原代培养的人VEC.我们以健康胎儿脐静脉血管为材料，建立起一种改良的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, hUVEC）培养方法.1材料和方法1.1材料新生儿脐带由遵义医学院附属医院提供；胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、EDTA（Sigma公司）；M199、胎牛血清（Gibco公司）；台盼蓝(Amresco公司进口分装)；鼠抗人Ⅷ因子抗体、鼠抗人内皮细胞生长因子受体2（KDR）抗体（美国Dako公司）；超净台（苏州苏净集团安泰空气公司）、倒置相差显微镜（日本Nikon公司）, CO2孵箱（美国Thermo Formo公司）、酶标仪（德国Huma Reader公司）. 完全培养液为800 mL/L M199培养液、200 mL/L胎牛血清、2 mmol/L L谷氨酰胺、1×105 U/L青霉素、100 mg/L链霉素，使用前调节pH至7.0~7.4.1.2方法1.2.1hUVEC的分离和培养在无菌条件下，取健康产妇分娩后6 h内［2］的脐带，长约30 cm,剪去脐带两端钳夹处. 于脐静脉一端插入一针头，用生理盐水反复冲洗至无血迹后，将脐静脉另一端用止血钳夹紧，用空针封闭. 灌入1 g/L胶原酶和2.5 g/L胰蛋白酶（1∶1）（V/V） 15 mL，置37℃水浴箱中孵育8 min，将消化液收集入离心管，用PBS冲洗脐静脉2次，将冲洗液一同收集入离心管，1000 r/min 离心10 min，去上清液，加入完全培养液重悬细胞，取0.1 mL细胞悬液用4 g/L台盼蓝染色后作活细胞计数. 将1.5×107/L细胞接种到24孔板中，每孔加入完全培养液1 mL，置37℃，950 mL/L O2，50 mL/L CO2培养箱内静置培养，次日换培养液，以后每3 d换液1次，7~10 d 融合.1.2.2细胞计数采用台盼蓝排斥法. 取0.1 mL混匀的内皮细胞悬液与4 g/L台盼蓝0.9 mL混匀后，取1滴在显微镜下计数100个细胞. 当细胞悬液中细胞存活率大于95%时可用于进行原代细胞培养.1.2.3hUVEC的鉴定［3-5］用Ⅷ因子抗体（抗von Willebrand 因子抗体）以及KDR抗体免疫细胞化学法鉴定内皮细胞. 将酸化处理的普通盖玻片消毒后放入6孔培养板，将原代或传代的内皮细胞悬液接种于盖玻片上，当细胞生长至近融合状态时用PBS缓冲液冲洗细胞爬片，-20℃丙酮固定10 min；PBS缓冲液洗3次，5 min/次；用30 mL/L H2O2,室温孵育5 min，灭活内源性过氧化物酶；分别滴加适量鼠抗人Ⅷ因子一抗工作液（1∶100）； KDR（1∶200）一抗工作液，37℃作用60 min；PBS缓冲液洗3次，每次5 min；再分别滴加羊抗鼠的IgGFITC 和IgGTR的二抗工作液，37℃作用30 min后，PBS洗涤3次. 立即在荧光显微镜下观察、摄片. GAMFITC绿色荧光显示膜上KDR；GARTR红色荧光显示胞内的Ⅷ因子. 对于Ⅷ因子相关抗原还采用免疫细胞化学SABC法进行检测，显微镜下观察.1.2.4hUVEC的消化传代①取生长融合的细胞吸去培养液，PBS洗2次；②翻转培养瓶，加入1.25 g/L胰蛋白酶, 0.2 g/L EDTA 的细胞消化液；③倒置显微镜下观察细胞消化情况，待细胞与细胞分开、胞体变圆变亮时翻转培养瓶，吸去消化液；④加入完全培养液，小心吹散细胞，计数，接种到新的培养瓶或培养板, 置37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养.1.2.5细胞生长曲线的测定取待测生长状态良好细胞，增长至接近汇合时向培养瓶内加入1 mL 1.25 g/L胰蛋白酶液消化，待细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液，加入完全培养液，轻轻吹打制成细胞悬液、计数. 向24孔板的每孔中接种等量细胞，置37℃，50 mL/L CO2培养箱中培养. 将细胞分成8组，每组3孔，培养8 d. 从接种次日起每24 h分别取3个孔计数，取平均值，以时间为横轴，细胞数为纵轴，绘制生长曲线.2结果2.1hUVEC的培养与鉴定在倒置显微镜下连续观察，培养的原代内皮细胞在接种4 h之后开始贴壁生长，细胞呈球形、小多角形，单个或小团块存在. 接种第2～3日，细胞即进入对数生长期，细胞生长迅速；第5～8日时铺满培养瓶瓶底，呈现典型的铺路石样形态特征(图1). Ⅷ因子mAb免疫细胞化学结果显示95%以上为阳性血管内皮细胞，细胞胞质为棕黄色，胞核为蓝色(图2). KDR(图3)和Ⅷ因子(图4)免疫荧光双标显示95%以上为阳性血管内皮细胞.图1培养6 d的原代脐静脉内皮细胞（略）图2脐静脉内皮细胞Ⅷ因子免疫组化检测（略）图3脐静脉内皮细胞内皮细胞生长因子受体2免疫荧光检测（略）2.2hUVEC生长曲线测定通过细胞计数,接种后第1日，细胞较接种时无明显变化，此时细胞仍处于滞留期，第2日则明显增加，第3~5日增长迅速,达到其生长高峰，此时细胞处于对数生长期，第6~8日细胞生长稳定,处于生长平台期(图5).图4脐静脉内皮细胞Ⅷ因子免疫荧光检测（略）图5原代人脐静脉内皮细胞生长曲线（略）3讨论我们以人脐静脉作为培养血管内皮细胞的来源，是因为它具有取材及操作方便，获得细胞数多，在某些方面尚具有与动脉生物学特征相似的优点.获取内皮细胞的方法有机械刮取［6］、组织块移植和酶消化法3种. 前两种易混杂其它血管壁细胞，近几年来已逐渐被酶消化法取代. 从分离细胞数量、保持细胞活性和结构完整性来看，胶原酶是理想的血管内皮细胞分离酶，自成功分离hUVEC以来，已得到广泛应用，但其价格昂贵. 用胰蛋白酶代替胶原酶分离血管内皮细胞已有文献报道. 我们比较了全胶原酶和胰蛋白酶加胶原酶混合两种酶液的消化能力，结果表明，采用胰蛋白酶加胶原酶混合消化的方法，hUVEC 收获量基本接近全胶原酶血管内皮细胞的收获量. 在混合酶液中，胶原酶仅占1/2，这种方法既经济，效果又好. 而且用胰蛋白酶处理可以降低非内皮细胞的贴壁能力，内皮细胞的贴壁能力比平滑肌细胞和成纤维细胞早，所以在接种后6 h可以去除未贴牢的细胞，这些非内皮细胞的污染如不去除，将抑制内皮细胞的增殖.hUVEC较动物内皮细胞的培养困难，只有在培养液中加入刺激细胞生长的物质，方能长期传代培养. 董玉兰等［7］和Relou等［8］报道，培养液中加入人血清、血管内皮细胞生长因子、肝素及培养瓶（皿）用明胶覆盖是hUVEC长期培养的重要条件. 但这些促进内皮细胞贴壁及生长的物质的加入可能成为影响实验结果的混杂因素，限制内皮细胞的实验应用范围. 有人［9-11］研究发现，血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子等有助于培养的胚胎干细胞分化为内皮细胞. 胚胎干细胞有望成为新的种子细胞来源. 我们在改进内皮细胞分离和传代方式的基础上选择M199培养基，补充200 mL/L胎牛血清和2 mmol/L L谷氨酰胺，在维持内皮细胞正常生长和形态结构的前提下尽可能减少完全培养液的组分，能将hUVEC传5～6代. 总之，我们改进的hUVEC培养方法可获取足够数量高纯度可传代的内皮细胞，对内皮细胞生物学特性和心脑血管相关疾病的研究有重要意义.【参考文献】［1］ Li XD, Lu kH, Guo SZ, et al. Culture of vascular endothelial cell ［J］. Chin J Aesthetic Med, 2001,10(3):18-20.［2］王建民，刘荫秋，赖西南. 正常脐静脉离体后不同时间内皮某些物质含量的变化［J］. 第三军医大学学报，1995，17（1）：86.［3］ Jonathan B. Rosenberg, Judith S, et al. Genetic induction of a releasable pool of factor Ⅷ in human endothelial cells ［J］. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2000, 20 (12)：2689-2695.［4］李孟彬，王为忠，张宏伟，等. 猪血管内皮细胞的培养与表型鉴定［J］. 第四军医大学学报，2004，25（24）：45.［5］ Mario P, Afazal J, Daniel P, et al. Expression of VEGFR2 and AC133 by circulating human CD34+ cells identifies a population of functional endothelial precursors ［J］. Blood, 2000,95（3）：952-958.［6］ Quattrone S, Chiappini L, Scapagnini G, et al. Relaxin potentiates the expression of inducible nitric oxide synthase by endothelial cells from human umbilical vein in in vitro culture ［J］. Mol Hum Reprod, 2004,10(5): 325-330.［7］董玉兰，陈铁镇，王铁吉,等. 人脐静脉内皮细胞的继代培养［J］. 中国医科大学学报，1989，18（2）：81-85.［8］ Relou IAM, Damen CA, Van der Schaft. Effect of culture conditions on endothelial cell growth and responsiveness ［J］. Tissue Cell, 1998,30(5):525-530.［9］ Evans GR, Brandt K, Klatz S, et al. Bioactive poly(Llactic acid) conduits seeded with Schwann cells for peripheral nerve regeneration［J］. Biomaterials, 2002,23(1):841.［10］ Liang PF, Zhang PH, Yang XH, et al. Experimental study on inductionof endothelial apoptosis by burn serum and subeschar tissue fluid ［J］.中华烧伤杂志,2004,20(5):275-277.［11］ Savore C, Zhang C, Muir C, et al. Perlecanknockdown in metastatic prostate cancer cells reduces heparinbinding growth factor responses in vitro and tumor growth in vivo ［J］. Clin Exp Metastasis,2005,22(5):377-390.。
人脐静脉血管内皮细胞的高效分离与培养
人脐静脉血管内皮细胞的高效分离与培养张臣;李彤;侯跃龙;严晓晔;高英堂【摘要】目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、鉴定的高效方法.方法:胰酶消化法从脐静脉获得HUVEC,观察其形态并传代培养,检测其摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,传3代流式榆测内皮细胞特异性表达.结果:消化分离的细胞呈小圆形且聚集成团;2h细胞开始贴壁,呈条索状;7d细胞增多呈漩涡样生长;此后细胞继续增多接近融合,呈铺路石样改变.流式检测细胞高表达血管内皮细胞特异性标志CD144、vWF、CD31,部分表达CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达.镜下发现贴壁细胞原代、第5代摄取Dil-AcLDL,胞浆呈现红色荧光,提示为有活性的内皮细胞.结论:利用胰酶消化法能从人脐静脉获得大量内皮细胞,体外培养后能成功增殖传代.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2010(038)007【总页数】3页(P605-607)【关键词】内皮细胞;脐静脉;细胞培养技术;细胞分离;连续传代【作者】张臣;李彤;侯跃龙;严晓晔;高英堂【作者单位】300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室【正文语种】中文人的内皮细胞是血管壁的主要组成部分，在维持组织稳态、纤溶与凝血、血液组织交换、血管舒缩调节、血管新生、血细胞激活和迁移等生理和病理过程中发挥着重要作用，另外在免疫反应起始过程中也起着决定性的作用[1]。
因此体外获得血管内皮细胞可为阐明许多疾病血管并发症的病理过程提供重要研究模型[2]。
新生儿脐带由于取材经济、来源充足,而成为血管内皮细胞体外获得的主要材料。
人脐静脉血管内皮细胞HUVEC
第三：铺板加样方法错误。
• 6孔、12孔、24孔、48孔与96孔的细胞接种铺板过程中，你的 加样方式是哪种？你觉得加样方式对后期的接种均匀度影响大 吗？例如你是否有过垂直加入96孔板的经历？是不是有的孔就 比较均匀，而有的孔就聚集在了一起？六孔板怎么摇晃也不均 匀？其实也许你离铺好板就差一种适合你的方法。
• 2、不是所有细胞消化后都会变成圆形
• 有些细胞(比如U87，U251)消化好了也不会变成圆形， 只是呈半沙状。
• 3、有些细胞即使变圆，也有脱落的细胞，但还是没消化好 • 比如7860，要等到大部分细胞脱落培养皿底部才可以停
止消化，否则很难吹打下来，这种情况一般发生于难以消化 的细胞。
• 4、对于一些特殊的细胞需要消化过一点 • 有些细胞吹成单个细胞反而对细胞的状态会好一点，一
6孔板、12孔板或24孔板
• 为防止表面张力导致的中间液面太低细胞聚集的现象。通常 每孔首先滴加少量培基，轻轻晃动浸润整个孔底以保证板子 的孔底都是湿润的，这样加液后细胞悬液会平铺在整个孔底， 可以避免加在中间位置和加在周边晃匀后周边细胞局部太多 的现象，细胞分散会较均匀。注意加完细胞悬液后要放工作 台静置一下（5-10分钟）。镜下观察细胞均匀度，如不均匀 可采用以下8字法、十字法及震荡法等方法进行细胞均匀度 处理
• HUVEC细胞培养难度较高，建议使用内皮细胞专用培养基， 选用优质胎牛血清。细胞推荐传代比例为1:2-1:3，胰酶消化室 温1-2分钟，传代周期通常为3-4天。需要注意的是，如 HUVEC出现聚团生长，可能由于培养板亲水性差或者血清中 促贴壁因子不足，可考虑用人纤维粘连蛋白包被培养板，能有 效预防细胞聚团。
第二：细胞吹打次数不够，细胞悬
液密度不均匀。
huvec的分离及培养
（一）脐静脉内皮细胞原代培养1.1 取材与接种（1）取产后6 h内的健康新生儿脐带10-15ml,立即放入灭菌的PBS缓冲液中, 4 ℃保存（2）在超净工作台内,剪除破损或有夹痕及血肿的部分,脐带一端插入去掉针尖的16号注射针头,止血钳固定,使用预冷的PBS缓冲液冲洗至无血迹（3)将脐带另一端扎紧,从针头一端向静脉内灌注0.1% I型胶原酶,使静脉完全充盈,并夹闭两端（4）将盛有脐带和PBS液的烧杯放入37 ℃水浴中孵育15 min。
孵育完毕后放出脐静脉内液体,用PBS液反复冲洗脐静脉,一并收集到50ml离心管（5）1000r/min,离心10min,弃上清液,向沉淀中加入含20%胎牛血清的L-DMEM培养液(10ng/LVEGF、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素、200mmol/L L-谷胺酰胺) 用吸管轻轻的吹打制成均匀的细胞悬液,接种于25cm的培养瓶,放入37℃,5%CO2培养箱,24h换相同培养液1次,以后每2～3d换液1次。
1.2 内皮细胞传代培养（1）原代培养的内皮细胞80%以上融合时,弃去培养液后,用PBS液冲洗2～3遍,（2）然后加入0.25%胰蛋白酶常温下消化1min,轻轻摇动,当见细胞出现皱缩,细胞间隙增宽,并有少许细胞脱落时立即停止消化，加入含血清的培养液灭活胰蛋白酶,用吸管轻轻的吹打使仍贴壁的细胞脱落下来,（3）收细胞- 酶溶液, 1000r/min,离心10min,弃上清液,用吸管轻轻的吹打制成均匀的细胞悬液,计数、并按( 0.5 ～1 ) ×105密度接种于25 ml的培养瓶中继续培养。
1.3 鉴定(1)人脐静脉内皮细胞形态鉴定用倒置显微镜每天镜下观察细胞形态。
(2)内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原检测①在6孔塑料培养板孔内放置无菌的盖玻片,待内皮细胞生长至单层,用镊子轻轻取出盖玻片,用PBS洗3遍,晾干②用中性缓冲福尔马林固定30min,蒸馏水冲洗③加3%H2O2 ,作用10min,蒸馏水冲洗④加pH 6.0枸橼酸缓冲液,高压灭菌3min,冷却后,PBS洗3 遍⑤加入兔抗人第Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体, 4 ℃过夜,同时以磷酸缓冲盐替代一抗做阴性对照,具体步骤参照，即用型SABC免疫组化染色试剂盒使用说明书。
实验室常用实验方法-人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养
实验室常用实验方法-人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养___培养的步骤如下：1.将15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存，注意储存时间不要超过规定时间。
2.使用钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的PBS溶液冲洗3-5次，将污血冲洗干净为止。
3.使用手术钳夹紧脐带下端，加入15ml的胶原酶（1mg/ml）室温下消化15-20分钟，并不时上下摇动脐带。
4.消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50ml无菌离心管中，用无菌的PBS溶液冲洗脐带2-3次。
5.将收集液离心（2000转/分）3分钟，倒去上清，加入10mlM199培养基（加入10U/ml的bFGF），用弯管吹散细胞，将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中，37℃培养。
6.在每个培养瓶中加入3-4ml无菌的1%的明胶溶液，摇匀使得明胶溶液完全铺满瓶底，放入37℃孵育，最少2小时，用前将明胶溶液倒了即可，明胶包被有利于细胞贴壁。
7.培养24小时后，倒掉培养基，并用无菌的PBS溶液清洗2-3次，洗掉红细胞和死细胞，加入10ml新鲜的M199培养基。
8.每2天换一次培养基（每次换掉2/3的培养基）。
9.一般培养5-7天，细胞可长满至80-90%单层，这时可以传代。
10.倒掉培养基，用无菌的PBS溶液清洗2-3次，加入2-3ml消化液（0.25%胰酶+0.1%EDTA）消化细胞，在显微镜下观察，一旦细胞变圆，即加入2-3倍的有血清的DMEM培养基终止反应。
11.使用弯管将细胞吹打下来，并将所消化的细胞转移到一个50ml无菌离心管中，2000转/分，离心3分钟。
12.倒掉上清，加入10ml新鲜培基，一般一瓶细胞可传代3-4瓶。
以后照此传代培养。
13.一般传代2-3代（培养了20天左右）用于做各种实验效果最好。
中医药对体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究进展_图文(精)
中医药对体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究进展张燕燕浙江中医药大学杭州310053关键词人脐静脉内皮细胞体外培养中医药综述血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC不仅是血流和血管壁之间的机械屏障,而且是高度活化的、功能异常活跃的内分泌、旁分泌及代谢器官。
在对血管内皮细胞的研究中发现,体外血管内皮细胞的成功培养是研究内皮细胞功能及其在各种疾病的发生发展中所起作用的基础。
原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC在疾病与血管功能研究中,得到越来越多地应用。
与此同时,中医药对体外培养的人脐静脉内皮细胞的保护研究也有一定的进展。
多种理化因素可导致内皮细胞功能障碍,成为血管性疾病产生的关键环节,参与的因素很多,如糖尿病、高血脂和高血压等多种疾病,氧化应激以及炎症反应等。
本文就中医药对不同因素致HUVEC损伤的保护作用综述如下。
1中医药对H20:诱导HUVEC损伤的保护1.1阿魏酸乙酯王汝涛等…用H:02诱导血管内皮细胞损伤,结果阿魏酸乙酯及阿魏酸不同剂量对H:O:损伤的人血管内皮细胞具有保护作用,可抑制H:O:损伤的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶和丙二醛。
1.2麦冬药理成分范俊等呤】观察麦冬不同提取部位对H:O:致血管内皮细胞损伤的保护程度。
分别用正丁醇、水和氯仿提取麦冬,共同作用于培养的人脐静脉血管内皮细胞,结果麦冬3个提取部位均能减少HUVEC凋亡,其中正丁醇提取部位作用更强些。
同时范俊等p 1又利用H:O:建立血管内皮细胞损伤模型,麦冬正丁醇提取部位作用HUVEC24小时后,可拮抗H:O:所致血管内皮细胞NO水平的升高和前列环素水平的降低,从而保护H:O:所致血管内皮细胞的损伤。
蒋风荣等H1研究麦冬皂苷D对HUVEC凋亡相关分子的影响。
结果显示麦冬皂苷D可以稳定线粒体膜电位,减少钙离子内流,增加细胞的活力,对HUVEC有一定的保护作用。
1.3山葡萄多酚高维明等K1用H:O:诱导血管内皮细胞损伤,结果山葡萄多酚不同剂量抗过氧化氢 519引起的血管内皮细胞增殖抑制、LDH渗漏、PGl2释放减少和ET一1释放增加,提示山葡萄多酚具有保护血管内皮细胞作用。
HUVEC细胞培养心得
HUVEC 培养交流讨论：各位仁兄，我查了一下，关于HUVEC 的贴子有几千篇，不知有那位知道的多的能给总结一下？我想应该有以下几1、讲清HUVEC 与ECV304区别2、HUVEC 原代与细胞株的关系、区别问题3、能否总结一下国内有哪些单位可以买到HUVEC ？是原代还是细胞株？4、培养中到底添加ECGS 还是ECGF ？5、有些推荐细胞的应该讲清自己的是原代还是细胞株，能养多少代。
希望能抛砖引玉。
票数+收藏2回帖16浏览2686我也要发帖举报∙浙江医院招聘浙江省老年医学研究所（临床医学） ∙请教关于HUVEC 细胞的培养 ∙求购HUVEC ∙【互助小组】正在养或已经养过HUVEC 的请进。
docter_zhao∙0 2004-08-03 15:14 消息 引用 分享 huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖 举报 ∙zjqlucky∙15 ∙ 5∙7 2004-08-03 17:27 消息 引用 分享docter_zhao wrote: huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖这个好像也未必吧，我养的原代的huvec 只用20％胎牛血清的RPMI1640也长的很好呀，只是传ecgs 能传这么多代吧票数+收藏1举报 ∙2004-09-08 00:20 消息 引用 分享我们曾试过用m199或DMEM 加20％胎牛血清原代培养，感觉效果不佳，后来加了ECGS 及肝素，发现细胞长得能有改变票数+收藏1举报引用 分享huvec 是脐静脉内皮细胞,不是那么难养,细胞可以从脐带自己提取,卖现成的细胞株也不贵,用内皮细胞的配套培email-sinian19988@∙∙细胞系查询培养基培养用常用试剂各品牌评定cairuiyanzi入门站友 ∙积分 ∙得票 ∙3粉丝加关注 2012-08-16 10:02 消息 引用 分享哪位大虾知道HUVEC 加肝素的目的？谢谢了！ 我现在养着HUVEC ，第二代是用新配的GIBCO 的M19培养两天发现细胞状态不好，似大面积凋亡，并伴有部分脱落。
人脐静脉血管内皮细胞培养、冻存、复苏与鉴定
人脐静脉血管内皮细胞培养、冻存、复苏与鉴定汤庆;何小洪;向邦德;徐辉雄【期刊名称】《广州医学院学报》【年(卷),期】2006(034)002【摘要】目的:探讨人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法.方法:采用改良的胶原酶灌注消化法对HUVEC体外分离、培养,按慢冻速融原则对第3代细胞进行液氮冻存、复苏.采用免疫组化Ⅷ因子相关抗原染色和活体细胞荧光DiI-Ac-LDL鉴定.结果:分离的原代HUVEC总数平均为1×106个细胞,最多达3×106个细胞;两种鉴定结果HUVEC均为95%以上阳性;冻存后分3批复苏细胞活性均超过90%.结论:成功建立了人脐静脉血管内皮细胞体外培养、冻存、复苏与鉴定方法,获得了足够数目和纯度的血管内皮细胞,保持了细胞的同源同代性.【总页数】4页(P60-63)【作者】汤庆;何小洪;向邦德;徐辉雄【作者单位】广州医学院第一附属医院超声科,广东,广州,510120;中山大学附属第一医院卫生部辅助循环重点实验室,广东,广州,510080;广西医科大学附属肿瘤医院,广西,南宁,530000;中山大学附属第一医院超声科,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1【相关文献】1.一种悬浮培养细胞简便冻存和复苏方法 [J], 童晨壕;丰佳雯;陈丽洁;何立锋;郑蒙雨;王犇;陈功星2.体外培养人肺腺癌细胞液氮冻存及复苏培养 [J], 张春燕;刘晏杰3.人脐带华通氏胶间充质干细胞的分离、培养、鉴定及冻存、复苏 [J], 杨晓清;张沐;杨兵;张华;张玉泉4.人脐静脉血管内皮细胞培养、冻存、复苏与鉴定 [J], 延芳;孙侃5.无血清培养基对深低温冻存复苏后的间充质干细胞免疫功能的研究 [J], 韩颢;白虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响
苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响目的通过观察苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响，探讨苦碟子注射液治疗不稳定性心绞痛的可能机制。
方法选择不同浓度的苦碟子进行处理HUVEC细胞，并在24h、48h后应用MTT法对各组细胞生长情况进行检测。
同时对40例不稳定性心绞痛患者进行常规治疗，其中20例在此基础上给予苦碟子注射液进行治疗。
最后，我们分析了全部实验数据以评估苦碟子治疗的效果。
结果苦碟子能够促进HUVEC细胞增殖，并且随着药物浓度的增加进而促进作用加强，这与浓度为0μl/ml（对照组）比较差异显著，P＜0.05有统计学意义。
40例患者，经过2周的治疗，同时给予KDZ和常规治疗的组内，临床症状有效率为87.5%，心电图恢复有效率为62.5%，高于对照组，有统计学意义。
结论苦碟子能够促进HUVEC细胞增殖，且能有效治疗不稳定性心绞痛。
标签：苦碟子；人脐静脉血管内皮细胞株；细胞增殖；不稳定性心绞痛【Abstract】Objective：To investigate the probable mechanism of KDZ treatment of unstable angina via observing the effect of the KDZ on proliferation of human umbilical vein endothelial cell line.Methods：We used different concentrations of Kudiezi to treat HUVEC cells for 24h or 48h，and then detected the cell proliferation in each group with MTT assays.Besides，we treated 40 cases of patients with unstable angina with conventional therapy，20 of which were given KDZ treatment additionally.In the end，we analyzed all the data to evaluate the effect of KDZ treatment.Results：KDZ can promote HUVEC cell proliferation，and with the increase of drug concentration the promoting effect enhanced.All the KDZ groups were significantly different from the concentration of 0μl / ml（the control group），P <0.05 considered statistically significant.40 patients，after two weeks of treatment，in the group which was given KDZ as well as conventional therapy，the effective rate of clinical symptoms was 87.5%，the effective rate of ECG was 62.5%，significantly higher than the control group（the effective rate of clinical symptoms was 87.5%，the effective rate of ECG was 62.5%）.Conclusion：KDZ can promote HUVEC proliferation therefore effectively alleviate unstable angina.【keyword】：Kudiezi；HUVEC；Cell proliferation；Unstable angina pectoris不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris，UAP），是临床上常见的冠心病类型，是一种介于慢性稳定性心绞痛（SAP）和急性心肌梗塞（AMI）之间的综合征[1]，易发展为AMI或猝死，预后不良。
人脐静脉内皮细胞特异基因
人脐静脉内皮细胞特异基因摘要：1.人脐静脉内皮细胞简介2.人脐静脉内皮细胞的功能与应用3.人脐静脉内皮细胞特异基因的研究进展4.人脐静脉内皮细胞特异基因的应用前景正文：【人脐静脉内皮细胞简介】人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，简称HUVECs）是一种来源于脐带组织的干细胞。
脐带是哺乳动物连接胎儿和胎盘的管状结构，其中包含脐动脉、脐静脉、卵黄囊血管等。
脐静脉内皮细胞是脐静脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。
【人脐静脉内皮细胞的功能与应用】脐静脉内皮细胞具有分化为血管内皮细胞的潜能，因此在血管内皮研究领域被广泛应用。
脐静脉内皮细胞具有以下特点：1.取材容易，来源充足：脐静脉内皮细胞的取材较为容易，来源也比较充足，有包括产品、服务在内的厂家提供。
2.具有干细胞特性：脐静脉内皮细胞是一种干细胞，理论上可以进行无限次传代。
3.实验应用广泛：在血管内皮实验中，通常选用脐静脉内皮细胞作为细胞模型。
【人脐静脉内皮细胞特异基因的研究进展】人脐静脉内皮细胞特异基因是指在脐静脉内皮细胞中特异性表达的基因。
研究这些特异基因有助于深入了解脐静脉内皮细胞的生物学特性、功能及在疾病发生发展中的作用。
近年来，随着基因测序技术的发展，许多研究都聚焦于人脐静脉内皮细胞特异基因的鉴定和功能研究。
【人脐静脉内皮细胞特异基因的应用前景】人脐静脉内皮细胞特异基因的研究进展为相关领域的研究提供了新的思路和方向，有望在以下方面取得应用：1.疾病诊断：某些脐静脉内皮细胞特异基因的表达异常可能与某些疾病的发生发展密切相关，因此研究这些基因可能有助于疾病的早期诊断和预后评估。
2.干细胞治疗：脐静脉内皮细胞具有分化为血管内皮细胞的潜能，未来可能通过引入脐静脉内皮细胞特异基因，调控干细胞分化，以实现更有效的干细胞治疗。
3.药物研发：针对脐静脉内皮细胞特异基因的药物研发，可能有助于治疗与这些基因相关的疾病，如心血管疾病等。
人脐静脉内皮细胞分离培养方法的建立及优化
人脐静脉内皮细胞分离培养方法的建立及优化马振华;张连杰;马艳琴【摘要】为优化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代及传代的培养方法,建立一种简便且能够获得数量较多及活力良好的HUVEC培养体系.分离脐静脉并插管,用0.1％的Ⅱ型胶原酶灌注消化分离内皮细胞.M199完全培养基悬浮并接种于细胞培养瓶,37℃,5％CO2培养.待细胞铺满80％时,0.25％胰酶-EDTA消化传代培养.倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,姬姆萨染色法鉴定内皮细胞的形态,vWF因子相关抗原免疫荧光法鉴定内皮细胞.比较不同胶原酶消化时间、不同接种密度、不同胰酶消化时间、不同培养基组分对细胞得率、形态和纯度的影响.结果表明,原代培养时,Ⅱ型胶原酶最佳消化时间为15 min,最佳接神密度为1×106 mL-1;传代培养时,胰酶最佳消化时间为2min.倒置显微镜下观察和姬姆萨染色结果显示,贴壁内皮细胞呈长梭形,且呈单层铺路石状排列.免疫荧光检测结果表明,细胞胞浆呈绿色荧光,为vWF因子阳性细胞,DAPI衬染细胞核呈蓝色,显示内皮细胞纯度接近100％.本实验成功建立了HUVEC原代分离培养的优化体系,纯度高、活力好,为后续研究做好了准备.【期刊名称】《山西农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(035)003【总页数】5页(P285-289)【关键词】人脐静脉血管内皮细胞;胶原酶消化法;姬姆萨染色;免疫荧光技术【作者】马振华;张连杰;马艳琴【作者单位】山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801;山西农业大学山西省环境兽医学重点实验室,山西太谷030801;山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】Q813.1血管内皮细胞(endothelial cells,EC)是一种多功能细胞，其在多种疾病中所起的重要作用已越来越受到重视，已成为当今医学、生物学领域的重要研究对象[1]。
人脐静脉 (human umbilical vein，HUV)是培养血管内皮细胞的常用来源之一，与动物血管内皮细胞相比，人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vascular endothelial cells,HUVEC)使实验条件更符合人体情况，结果更有意义[2]。
复方丹参注射液对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC生长的影响
复方丹参注射液对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC生长的影响摘要】目的：观察复方丹参注射液对人脐静脉血管内皮细胞株（HUVEC）生长的影响。
方法：取HUVEC进行传代培养，将其置于96孔培养板中，设置正常组、丹参组、空白组，每组分别设置8个复孔。
向正常组和丹参组中分别加入无菌生理盐水、复方丹参注射液（1.25mg/ml），空白组不加任何药液，造模成功后进行培养。
采用四唑盐比色（MTT）法分别检测各组的OD值，并对比三组之间的丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量。
结果：丹参组OD值显著低于正常组和空白组，组间差异均有显著性（P＜0.05），而正常组与空白组OD值比较差异均无显著性（P＞0.05）；丹参组MDA、NO的含量也均显著低于正常组和空白组（P＜0.05），而正常组与空白组MDA、NO的含量比较差异均无显著性（P＞0.05）。
结论：复方丹参注射液有助于改善HUVEC的生长和增殖状态，还可下调HUVEC中MDA和NO分泌与合成水平，有助于减轻氧化应激损伤。
【关键词】复方丹参注射液；人脐静脉血管内皮细胞株；丙二醛；一氧化氮；氧化应激【中图分类号】R285.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）29-0045-03Effects of Compound Salvia Injection on the Growth of Human Umbilical Vein Endothelial Cell Line HUVECJiang Hong1,2,He Cheng3, Jia Aimin2, Wang Liheng2, Lei Jiahong1,2,3, Yang Minghui1,2,3.The Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College:1.Institute of Rheumatism Immunity, 2.Medical Research Center,3.Department of Clinical Laboratory, Nanchong Sichuan, 637000, China【Abstract】Objective To observe the effect of Compound Salvia Injection on the growth of human umbilical vein endothelial cell line (HUVEC). Methods HUVEC was cultured in the 96 hole culture plate, the normal group, Salvia group and blank group were set, and each group was set with 8 holes. After successful modeling, the normal group and Salvia group were cultured with sterile physiological saline, compound Salvia injection (1.25mg/ml) respectively, the blank group did not add any liquid. Using four tetrazolium (MTT) colorimetric method respectively to detect the OD value, and compared between the three groups of malondialdehyde (MDA), nitric oxide (NO) content. Result The OD values of Salvia group was significantly lower than that of normal group and blank group, there were significant differences between the groups (P<0.05), but the difference between normal group and the blank group was not significant (P>0.05); the content of MDA and NO in Salvia group were significantlylower than that of normal group and blank group (P<0.05), and there were no significant difference between normal group and blank control group MDA (P>0.05). Conclusion Compound Salvia injection can help to improve the growth and proliferation of HUVEC, and also can down regulate the secretion and synthesis ofMDA and NO in HUVEC, which is helpful to reduce oxidative stress damage.【Key words】Compound Salvia injection; Human umbilical vein endothelial cell line; Malondialdehyde;Nitric oxide;Oxidative stress复方丹参注射液具有活血化瘀的功效，常用于各种心血管疾病治疗中，并且对内皮细胞功能损伤有一定的控制作用，但是复方丹参注射液对心血管疾病患者内皮细胞的保护作用机制尚未阐述清楚，仍需要给予进一步的探讨观察[1-2]。
人脐静脉内皮细胞培养
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养
准备的药品：pbs,199培养液，I型胶原酶（SIGMA）。
主要的器械：手术剪，镊子，止血钳，丝线，鞘管（PTCA用的动脉鞘的扩张管，6F或7F）。
首先，以PBS漂洗脐带1-2次，用剪刀将脐带剪成数段15CM左右长短（本人认为这个长度较为合适）。
之后，以止血钳提起一段脐带的一端，将鞘管插入脐静脉中，并经该鞘向静脉内注入PBS1 0-8ml左右（最后注入空气吹净残留液体），后以丝线将另一端结扎（一定要扎紧），并从鞘管注入适量胶原酶，一般1ml（0.1%）足以,并以止血钳将该端钳闭。
后将如此处理的脐带放入小烧杯中，在温箱中孵育10-15分钟（视酶的活力而定）。
最后将消化后的脐带轻轻揉捏2-3次，将结扎线及止血钳除去，后经鞘管向内注入199培养液（8-10ml就可以了，一次即可），将冲刷下来的酶液收集到离心管中，1000rpm离心5-6分钟，后倾去培养液，加入事先配制好的内衣细胞培养液（199，20%FBS,双抗,内皮细胞生长因子），吹打数次制成细胞悬液，接种入培养瓶。
一般一段脐带所得细胞放入一个2 5CM培养瓶（最好是一次性的塑料瓶）。
注意：
1、如果培养瓶内有较多残血，先不要紧张，因为这样并不影响内皮的生长，第二天予换液一次即可。
2、一定要确保有足够数量的内膜消化下来，否则细胞生长缓慢影响质量（如离心后，管底的白膜-消化下来的内膜较少，必要时可两段脐带合为一瓶）。
平阳霉素诱导人脐静脉血管内皮细胞HUVEC凋亡的作用机制
平阳霉素诱导人脐静脉血管内皮细胞HUVEC凋亡的作用机制佟笑;夏思文;康宗辉;胡献惠;薛向阳;黄益灯【摘要】目的检测不同浓度平阳霉素(pingyangmycin,PYM)作用24h对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC细胞的生长抑制及凋亡的影响,探讨平阳霉素诱导HUVEC 细胞凋亡最佳浓度及有关作用机制.方法用不同浓度的平阳霉素作用HUVEC细胞24h,以细胞增殖-毒性8检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较0.1、10、100、1000μg/ml平阳霉素作用24h后对HUVEC细胞的抑制作用,用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒(Annexin-V FITC/PI apoptosis kit)检测不同浓度PYM对HUVEC细胞凋亡作用的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测不同浓度平阳霉素作用HUVEC细胞后内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达.结果 CCK-8结果显示随平阳霉素浓度的升高,对HUVEC细胞的抑制作用越明显(P＜0.05);然平阳霉素药物浓度100μg/ml和1000μg/ml组相比,差异无显著性统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测显示0.1、1、10、100μg/ml平阳霉素作用24h 后细胞凋亡率分别为5.37％±1.63％、12.70％±1.57％、24.70％±6.99％、23.60％±0.80％,坏死率分别为4.87％±2.09％、7.32％±3.88％、39.10％±6.18％、66.30％±0.40％,随药物浓度增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导,和对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blot法结果显示,平阳霉素各浓度作用24h后促进内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达.结论平阳霉素在体外能明显抑制HUVEC细胞生长并促进其凋亡,当平阳霉素浓度达到100μg/ml时,细胞以坏死为主;平阳霉素可能通过内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途径诱导HUVEC细胞凋亡.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2016(045)005【总页数】5页(P86-90)【关键词】血管瘤;平阳霉素;糖调节蛋白78;C/EBP同源蛋白;内质网应激【作者】佟笑;夏思文;康宗辉;胡献惠;薛向阳;黄益灯【作者单位】325000 温州医科大学第一临床学院;325000 温州,中国人民解放军第118医院耳鼻咽喉头颈外科;325000 温州,中国人民解放军第118医院耳鼻咽喉头颈外科;325000 温州,中国人民解放军第118医院耳鼻咽喉头颈外科;325000 温州医科大学分子病毒与免疫研究所;325000 温州医科大学第一临床学院【正文语种】中文【中图分类】R762;R979.14平阳霉素是由我国研究者自主研制并投入临床应用的抗肿瘤药物，其化学名称为N -[3-(4-氨基丁酸)氨基]丙氨基博来霉素A5，是博来霉素类抗肿瘤药物的新品种。
人脐静脉血管内皮细胞
HUVEC 人脐静脉血管内皮细胞General Information:
Culture Method:
具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，
时和我们联系武汉普诺赛生命科技有限公司
全国免费服务电话：400-650-3656 邮箱：techsupport@ sales@
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象
发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需
细胞因子等，确保细胞培养条件一致。
若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。
因运输问题贴壁细胞会有少量
从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。
此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞
汇合度90%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传
代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部
沟通交流
告知细胞的。
护骨素对人类脐静脉内皮细胞粘附功能的影响及其机制探讨的开题报告
护骨素对人类脐静脉内皮细胞粘附功能的影响及其机制探
讨的开题报告
标题：护骨素对人类脐静脉内皮细胞粘附功能的影响及其机制探讨
研究背景：
脐静脉内皮细胞（HUVEC）广泛存在于人体各个器官和组织的微血管中，其粘附功能对于维持正常的血管结构和功能至关重要。
护骨素是一种多肽激素，已经被证明具有维护骨骼健康、降低血压和促进血管内皮细胞增殖等功能。
然而，护骨素对于HUVEC粘附功能的影响尚未被深入研究。
研究目的：
本研究旨在探究护骨素对于HUVEC粘附功能的影响，并阐明其作用机制。
研究方法：
1. 采用MTT法检测不同浓度护骨素处理HUVEC细胞后的细胞增殖情况；
2. 利用Transwell培养皿测定不同浓度护骨素处理HUVEC细胞的迁移率和侵袭能力；
3. 采用ELISA法检测不同浓度护骨素处理HUVEC细胞后的分泌肌动蛋白（MYPT1）和肌链轻链磷酸化（MLC）水平；
4. 通过Western blot检测不同浓度护骨素处理HUVEC细胞后的RhoA、Rac1和Cdc42等小GTPase蛋白表达情况。
研究意义：
通过本研究的探讨，我们可以更加深入地了解护骨素对于HUVEC粘附功能的影响及其作用机制，为进一步解析护骨素在血管系统中的生理和病理功能提供理论和实验基础。
同时，本研究也有望为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。
用培养人脐静脉内皮细胞法观察体外循环对内皮细胞的损伤作用
用培养人脐静脉内皮细胞法观察体外循环对内皮细胞的损伤作用张红超;蓝鸿钧;孙宗全;罗军;于鲁峰;陈元恒;杨玉红【期刊名称】《中国胸心血管外科临床杂志》【年(卷),期】2002(9)4【摘要】目的采用体外培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,观察体外循环 (CPB)后人体炎性血浆对内皮细胞(EC)的影响。
方法选取风湿性心瓣膜病行人工瓣膜置换术患者 2 0例 ,取不同时间点的 CPB血浆。
将已培养好的HU VEC随机分为4组 ,对照组 :加入正常培养基 ; 组 :加入 CPB 4 5分钟的血浆 ; 组 :加入 CPB 90分钟的血浆 ; 组 :加入 CPB90分钟血浆 +抑肽酶。
观察未贴壁悬浮 EC、组织型纤活酶激活物 (t- PA)功能、EC分泌血小板颗粒膜蛋白 - 14 0 (GMP- 14 0 )、6 -酮 -前列腺素F1α(6 - K- PGF1α)和乙酰胆碱刺激 EC合成 NO的变化。
结果悬浮细胞数和t- PA, 组和组显著高于对照组 , 组与组比较显著降低 (P<0 .0 1)。
各组间 GMP- 14 0差别均无显著性意义。
6 - K- PGF1α, 组、组和组均显著高于对照组 , 组与组比较显著降低 (P<0 .0 5 )。
NO 组比对照组显著升高 , 组比对照组显著降低 ; 组与组比较显著升高 (P<0 .0 5 )。
结论 CPB可激活或损伤 EC,抑肽酶可减轻此作用,用培养的HU VEC研究CPB损伤EC的机制是一种可行的方法。
【总页数】3页(P279-281)【关键词】培养;人脐静脉;内皮细胞;体外循环;风湿性心瓣膜疾病;内皮细胞损伤【作者】张红超;蓝鸿钧;孙宗全;罗军;于鲁峰;陈元恒;杨玉红【作者单位】空军总医院心脏外科;同济医科大学附属协和医院心血管外科【正文语种】中文【中图分类】R654.1【相关文献】1.血小板活化因子对培养人脐静脉血管内皮细胞损伤作用的探讨 [J], 李文;金鸣;李金荣;路彤;陈铁军2.17-β雌二醇对培养人脐静脉内皮细胞缺氧损伤的保护作用 [J], 向常清;黄岚;晋军;李洪3.普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 [J], 田庆印;刘同涛;李伯勤;潘其兴;朱清4.心钠肽对培养人脐静脉内皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用的实验研究 [J], 陈章强;姚常5.氨氯地平对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 [J], 梁英;刘同涛;田庆印因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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HUV-EC-C人脐静脉血管内皮细胞
Cat Number：KG419For Research Use Only
一、组成:
二、客户自备试剂:
1、PBS (凯基货号：KGB5001)
2、Complete growth medium (凯基货号：KGM 21127N-500)
3、0.25% （W/V） Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号：KGY0012)
三、细胞简介:
四、常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。
次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞
活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养条件一致，如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
由于运输的情况，所以极个别细胞会出现不稳定，客户收到细胞后务必第一时间和我们联系，告知细胞具体情况，以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通，不胜感谢！。