反相高效液相色谱法同时测定重楼药材中4种皂苷的含量(精)

反相高效液相色谱法同时测定重楼药材中4种皂苷

的含量

[ 08-05-19 15:55:00 ] 作者：吴珊吴卫郑有

良编辑：studa20

【摘要】目的建立RP HPLC法测定重楼中4种甾体皂苷的含量。方法采用色谱柱：Zorbax eclipse XDB C8,（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 水（40∶60），流速1.0 ml·min-1；检测波长：203 nm；柱温：40℃。结果4种甾体皂苷范围在0.401～4.028 μg线性良好，R=0.999 6～0.999 9，回收率99.1%～103.1% 。不同来源的重楼药材中4种甾体皂苷的含

量差异较大。结论该方法准确、简捷，为重楼药材的质量控制提供了一定方法和依据。

【关键词】重楼；甾体皂苷；反相高效液相色谱法

Abstract：ObjectiveA comprehensive analytical method based on high performance liquid chromatography-ultraviolet detection has been established for the simultaneous determination of four steroidal saponins in Paris polyphylla.MethodsThe column was Symmetry C8,mobile phase was acetonitrile-water (40∶60),UV detection was performed at 203nm.ResultsThe calibration curves showed good linearity over the range of 0.401～4.028 g, R=0.9996～0.9999,the recoveries were 99.1%～103.1% for the four steroidal saponins. The results showed that the contents of the four steroidal saponins in Paris polyphylla were different with different sources . ConclusionThe method is simple with good reproducibility and selectivity and high sensitivity ,which provides a method for quality control of Paris polyphylla.

Key words：Paris polyphylla; Steroidal saponins; RP HPLC

重楼Paris polyphylla来源于百合科（Liliaceae）重楼属植物的干燥根茎，又名蚤休、七叶一支花等。本属云南重楼Paris polyphylla

var.yunnanensis和七叶一枝花P.polyphylla var.chinensis 两个变种被1995年和2000年版《中国药典》收载，其它多数种类为民间常用草药［1］。重楼是多年生草本，根状茎常肉质，呈团块状圆柱形，具有清热解毒、消肿散淤之功效［2］，是著名中成药云南白药、季德胜蛇药片、宫血宁等的主要组成成分。现代药理研究表明具有止血、抗肿瘤、免疫调节、心血管作用等广泛的药理活性［3］，极具研发价值，受到广泛关注。现已从该属植物中分离鉴定出五十余种化合物，其中主要有效成分为甾体皂苷，约占总化合物数目的80%，

并含有氨基酸、甾酮、蜕皮激素、黄酮苷等化合物［4,5］。活性成分重楼皂苷Ⅱ，重楼皂苷gri，重楼皂苷Ⅰ，重楼皂苷Ⅴ等，含量较高，易于检测［6］。本研究试图通过对这四种成分的含量测定，建立一种简便快速准确的高效液相色谱测定方法，为加强重楼药材质量控制提供一定方法和依据。

1 仪器与试药

Agilent 1100 高效液相色谱系统（美国Agilent 公司）：四元泵，二极

管阵列检测器，自动进样器，Agilent色谱工作站。重楼皂苷对照品（纯度均

高于99%）购自中科院昆明植物研究所，分别为重楼皂苷Ⅱ，重楼皂苷gri，重楼皂苷Ⅰ，重楼皂苷Ⅴ（以下顺序同，简称4种皂苷）。重楼药材来自药店采购及各地从药农处购买鲜品干燥或直接购买生药，经四川农业大学吴卫教授鉴定为重楼药材。甲醇为分析纯，乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Zorbax eclipseXDBC8（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（40∶60），流速1.0 ml·min-1；检测波长：203 nm；柱温：40℃。

2.2 对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的4种重楼皂苷对照品各10 mg，置50 ml容量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀使浓度分别

为0.2 g/L，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备准确称取重楼样品粉（60目）约1 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 ml，超声处理（功率250W，频率25KHZ）20 min，

过滤，残渣用甲醇分次洗涤。重复超声3次，合并每次滤液与洗涤液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，过0.45 μm滤膜并定容至10 ml。

2.4 系统适应性实验按上述方法分别对对照品溶液和供试品溶液分别进样10 μl分析，确定各成分峰位置。对照品及供试品溶液色谱图分别见图1～2。由图1可知，4种重楼皂苷的保留时间分别为17.45，20.39，21.54，25.36 min。4种重楼皂苷成分与其相邻峰均达基线分离。样品中杂质对重楼皂苷的测定基本无干扰。

图1 对照品HPLC图（略）

图2 样品5HPLC图（略）

2.5 线性关系精密吸取对照品溶液2，5，10，15，20 μl进行测定，以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。回归方程及线性范围如下。

表1 4种甾体皂苷线性方程及范围（略）

2.6 精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样5

次，测得4种重楼皂苷成分峰面积积分值RSD分别为0.27%，0.46%，0.22%，0.60%。