饲料中盐酸克伦特罗的测定-HPLC法
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
80 年代初，美国一家公司意外地发现，将一 定量的 CLB 药物添加在饲料中，可明显促进动物 生长，并增加瘦肉率。随后，这一新发现在一些国 家被应用于养殖业。CLB 进入体内后具有分布快和 消除慢的特点，能够改变营养的代谢途径，促进动 物肌肉，特别是骨骼肌蛋白质的合成，抑制脂肪的 合成和积累，从而使生长速度加快，瘦肉相对增加。 一般来说，饲料中添加适量 CLB 后，可使饲料转
关键词 高效液相色谱 饲料 盐酸克伦特罗 测定
中图分类号 ：S 816.17 文献标志码 ：B 文章编号 ：1002 - 2813（2011）06 - 0042 - 05
盐酸克伦特罗（CLB）残留在动物组织中，人 食用后会对肝和肾等内脏器官产生毒害，出现心悸、 头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快和肌肉振颤等 症状，严重者甚至死亡。临床表现为急性中毒有心 悸，面颈和四肢肌肉颤动，有手抖甚至不能站立， 头晕，乏力，原有心律失常的患者更容易发生反应， 心动过速，心室性早搏，心电图示 S-T 段压低与 T 波倒置 ；原有交感神经功能亢进的患者，如 ：有高 血压、冠心病和甲状腺功能亢进者上述症状更易发 生 ；与糖皮质激素合用可引起低血钾，从而导致心 律失常 ；反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作 用减弱及持续时间缩短。虽然 CLB 残留的毒作用 为轻度，但美国食品与药品管理局（FDA）研究表 明 ：应用拟交感神经药者或对前药过敏者，对 CLB 的反应要比正常健康个体更为严重。
饲料检测
饲料中盐酸克伦特罗的测定－ HPLC 法
贾涛 北京市饲料监察所
摘 要 盐酸克伦特罗（CLB）作为一种主要的 β- 兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中，用以提高肌肉 和脂肪的比例并加快生长速度。在畜禽产品中过量残留会对消费者造成危害，因此被禁止在畜禽养殖中使用。 CLB 在家畜与人体内吸收好，而且与其他 β- 兴奋剂相比，它的利用率高，以至食用了含有盐酸克伦特罗 的猪肉出现中毒现象。由于 CLB 通过饲料对动物的饲喂会残留在动物的肌肉与内脏组织中，对饲料中 CLB 进行监测也就显得尤为重要。经试验，应用高效液相色谱（HPLC）法检测饲料中盐酸克伦特罗，标准曲线 r 值≥ 0.999 95 ；变异系数（CV 值）≤ 0.82 % ；检测回收率 88.06 %~100.33 % ；回收率标准偏差≤ 1.25 %。
1 材料与方法
1.1 CLB 简介 CLB 是一种平喘药的商品名，又称氨哮素和克
喘素，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，或 2-[( 叔丁 氨基 ) 甲基 ]-4- 氨基 -3,5- 二氯苯甲醇盐酸盐。中 文名称有瘦肉精、克伦特罗、CLB、盐酸双氯醇胺、
收稿日期 ：2010 - 12 - 27Fra Baidu bibliotek
克喘素、氨哮素、氨必妥、氨双氯喘通和氨双氯醇胺。 理化特性为白色或类白色的结晶粉末，无臭，味苦， 熔点 174~175.5 ℃，易溶于水、甲醇和乙醇，微溶 于丙酮和氯仿，不溶于乙醚。
42 饲料研究 FEED RESEARCH NO.6,2011
饲料检测
化率、生长速率和酮体瘦肉率提高超过 10 ％，所 以也称它为瘦肉精。基于食用动物内脏而导致的中 毒事件不断发生，欧盟很快作出了反应 ：严禁在饲 料中添加 CLB 类药物。FDA 也将肉品中的 CLB 残 留作为必检项目。FDA 和世界卫生组织（WHO）还 制定了畜产品中 CLB 的最高残留限量 ：动物肌肉中 最高限量为 0.2 μg/kg，肝中最高限量为 0.6 μg/kg， 肾中最高限量为 0.6 μg/kg，动物脂肪中最高限量为 0.2 μg/kg，奶制品中最高限量为 0.05 μg/kg。至此， 瘦肉精在动物生产与饲料加工中全面被禁止使用。 近年来，动物性产品中 CLB 残留对人类健康造成 的危害和对生态食物链所造成的破坏已经引起高度 的重视。 1.2 对饲料中 CLB 进行监测的意义
饲料样品中的 CLB 经酸性甲醇溶液提取，离 心后溶液碱化，经乙酸乙酯萃取和固相萃取柱净化， 最后用反相色谱柱分离测定，紫外检测器 210 nm 波长处检测，同等条件下绘制工作曲线，CLB 含量 与吸光度值在一定质量浓度范围内成正比，试样与 工作曲线比较定量。 1.4 试剂和材料
甲 醇 ：色 谱 纯， 过 0.45 μm 有 机 相 滤 膜 ；乙 腈 ：色谱纯，过 0.45 μm 有机相滤膜 ；盐酸 ：优级 纯 ；提取液 ：0.5 % 偏磷酸溶液（14.29 g 偏磷酸溶 解于超纯水中，并稀释至 1 L）：甲醇＝ 80 ：20 ；
由于 CLB 是一种低毒、高效和用量少的促生 长剂，作为一种饲料添加剂被使用，具有促进代谢， 提高饲料利用率，增加被饲喂动物瘦肉率，增加经 济效益的效果。但是 CLB 既不是兽药也不是饲料 添加剂，其蓄积毒性不但能使动物发生中毒或死 亡，而且 CLB 还能残留在动物的内脏及肌肉组织中， 从而进一步引起对人的危害。由于 CLB 的蓄积毒 性，对人和被饲喂动物都会造成心动过速的现象 ； 原有交感神经功能亢进的患者，如有高血压和冠心 病患者上述症状更易发生，甚至会危及生命。因此， CLB 在我国已经禁止用作饲料添加剂使用。但有些 不法养殖企业（户）为了经济利益还是会违规使用， 所以对饲料中 CLB 进行监测可以减少其在动物性 食品的残留产生，间接保障了人类的身体健康与生 命安全。 1.3 检测原理
0.02 mol/L 盐酸溶液 ：准确移取盐酸优级纯 1.67 mL 定容至 1 000 mL 容量瓶中 ；2 mol/L 氢氧化钠溶液 ： 称取 20 g 氢氧化钠，溶于 250 mL 超纯水中 ；乙酸 乙酯 ：优级纯 ；HLB 固相萃取（SPE）小柱 ：HLB 填充量 200 mg，容量 6 mL。 1.4.1 SPE 淋洗液
CLB 是一种 β- 兴奋剂，添加于饲料中能提高 几种家畜（包括猪）的瘦肉率。由于其在黑市可买 到，CLB 在欧洲、美国和亚洲非法用于家畜饲料中 及饮用水中。在某些国家，非法用过 CLB 的牛组 织中的残留引起人的中毒。最近报道人食用了含有 CLB 的猪肉导致中毒。
CLB 能激动 β2- 受体，对心脏有兴奋作用， 对支气管平滑肌有较强而持久的扩张作用，口服后 较易经胃肠道吸收。该药物可选择性地作用于肾上 腺素受体，是一种强效激动剂，可引起交感神经兴 奋，在药物剂量下，具有松弛气管平滑肌作用，用 于治疗支气管炎和肺气肿等引起的哮喘。
关键词 高效液相色谱 饲料 盐酸克伦特罗 测定
中图分类号 ：S 816.17 文献标志码 ：B 文章编号 ：1002 - 2813（2011）06 - 0042 - 05
盐酸克伦特罗（CLB）残留在动物组织中，人 食用后会对肝和肾等内脏器官产生毒害，出现心悸、 头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快和肌肉振颤等 症状，严重者甚至死亡。临床表现为急性中毒有心 悸，面颈和四肢肌肉颤动，有手抖甚至不能站立， 头晕，乏力，原有心律失常的患者更容易发生反应， 心动过速，心室性早搏，心电图示 S-T 段压低与 T 波倒置 ；原有交感神经功能亢进的患者，如 ：有高 血压、冠心病和甲状腺功能亢进者上述症状更易发 生 ；与糖皮质激素合用可引起低血钾，从而导致心 律失常 ；反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作 用减弱及持续时间缩短。虽然 CLB 残留的毒作用 为轻度，但美国食品与药品管理局（FDA）研究表 明 ：应用拟交感神经药者或对前药过敏者，对 CLB 的反应要比正常健康个体更为严重。
饲料检测
饲料中盐酸克伦特罗的测定－ HPLC 法
贾涛 北京市饲料监察所
摘 要 盐酸克伦特罗（CLB）作为一种主要的 β- 兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中，用以提高肌肉 和脂肪的比例并加快生长速度。在畜禽产品中过量残留会对消费者造成危害，因此被禁止在畜禽养殖中使用。 CLB 在家畜与人体内吸收好，而且与其他 β- 兴奋剂相比，它的利用率高，以至食用了含有盐酸克伦特罗 的猪肉出现中毒现象。由于 CLB 通过饲料对动物的饲喂会残留在动物的肌肉与内脏组织中，对饲料中 CLB 进行监测也就显得尤为重要。经试验，应用高效液相色谱（HPLC）法检测饲料中盐酸克伦特罗，标准曲线 r 值≥ 0.999 95 ；变异系数（CV 值）≤ 0.82 % ；检测回收率 88.06 %~100.33 % ；回收率标准偏差≤ 1.25 %。
1 材料与方法
1.1 CLB 简介 CLB 是一种平喘药的商品名，又称氨哮素和克
喘素，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，或 2-[( 叔丁 氨基 ) 甲基 ]-4- 氨基 -3,5- 二氯苯甲醇盐酸盐。中 文名称有瘦肉精、克伦特罗、CLB、盐酸双氯醇胺、
收稿日期 ：2010 - 12 - 27Fra Baidu bibliotek
克喘素、氨哮素、氨必妥、氨双氯喘通和氨双氯醇胺。 理化特性为白色或类白色的结晶粉末，无臭，味苦， 熔点 174~175.5 ℃，易溶于水、甲醇和乙醇，微溶 于丙酮和氯仿，不溶于乙醚。
42 饲料研究 FEED RESEARCH NO.6,2011
饲料检测
化率、生长速率和酮体瘦肉率提高超过 10 ％，所 以也称它为瘦肉精。基于食用动物内脏而导致的中 毒事件不断发生，欧盟很快作出了反应 ：严禁在饲 料中添加 CLB 类药物。FDA 也将肉品中的 CLB 残 留作为必检项目。FDA 和世界卫生组织（WHO）还 制定了畜产品中 CLB 的最高残留限量 ：动物肌肉中 最高限量为 0.2 μg/kg，肝中最高限量为 0.6 μg/kg， 肾中最高限量为 0.6 μg/kg，动物脂肪中最高限量为 0.2 μg/kg，奶制品中最高限量为 0.05 μg/kg。至此， 瘦肉精在动物生产与饲料加工中全面被禁止使用。 近年来，动物性产品中 CLB 残留对人类健康造成 的危害和对生态食物链所造成的破坏已经引起高度 的重视。 1.2 对饲料中 CLB 进行监测的意义
饲料样品中的 CLB 经酸性甲醇溶液提取，离 心后溶液碱化，经乙酸乙酯萃取和固相萃取柱净化， 最后用反相色谱柱分离测定，紫外检测器 210 nm 波长处检测，同等条件下绘制工作曲线，CLB 含量 与吸光度值在一定质量浓度范围内成正比，试样与 工作曲线比较定量。 1.4 试剂和材料
甲 醇 ：色 谱 纯， 过 0.45 μm 有 机 相 滤 膜 ；乙 腈 ：色谱纯，过 0.45 μm 有机相滤膜 ；盐酸 ：优级 纯 ；提取液 ：0.5 % 偏磷酸溶液（14.29 g 偏磷酸溶 解于超纯水中，并稀释至 1 L）：甲醇＝ 80 ：20 ；
由于 CLB 是一种低毒、高效和用量少的促生 长剂，作为一种饲料添加剂被使用，具有促进代谢， 提高饲料利用率，增加被饲喂动物瘦肉率，增加经 济效益的效果。但是 CLB 既不是兽药也不是饲料 添加剂，其蓄积毒性不但能使动物发生中毒或死 亡，而且 CLB 还能残留在动物的内脏及肌肉组织中， 从而进一步引起对人的危害。由于 CLB 的蓄积毒 性，对人和被饲喂动物都会造成心动过速的现象 ； 原有交感神经功能亢进的患者，如有高血压和冠心 病患者上述症状更易发生，甚至会危及生命。因此， CLB 在我国已经禁止用作饲料添加剂使用。但有些 不法养殖企业（户）为了经济利益还是会违规使用， 所以对饲料中 CLB 进行监测可以减少其在动物性 食品的残留产生，间接保障了人类的身体健康与生 命安全。 1.3 检测原理
0.02 mol/L 盐酸溶液 ：准确移取盐酸优级纯 1.67 mL 定容至 1 000 mL 容量瓶中 ；2 mol/L 氢氧化钠溶液 ： 称取 20 g 氢氧化钠，溶于 250 mL 超纯水中 ；乙酸 乙酯 ：优级纯 ；HLB 固相萃取（SPE）小柱 ：HLB 填充量 200 mg，容量 6 mL。 1.4.1 SPE 淋洗液
CLB 是一种 β- 兴奋剂，添加于饲料中能提高 几种家畜（包括猪）的瘦肉率。由于其在黑市可买 到，CLB 在欧洲、美国和亚洲非法用于家畜饲料中 及饮用水中。在某些国家，非法用过 CLB 的牛组 织中的残留引起人的中毒。最近报道人食用了含有 CLB 的猪肉导致中毒。
CLB 能激动 β2- 受体，对心脏有兴奋作用， 对支气管平滑肌有较强而持久的扩张作用，口服后 较易经胃肠道吸收。该药物可选择性地作用于肾上 腺素受体，是一种强效激动剂，可引起交感神经兴 奋，在药物剂量下，具有松弛气管平滑肌作用，用 于治疗支气管炎和肺气肿等引起的哮喘。