UltraECL底物化学发光检测试剂盒说明书
关于蛋白定量，ECL试剂盒的一些实验建议
关于蛋⽩定量，ECL试剂盒的⼀些实验建议蛋⽩定量⼁ECL试剂盒化学发光技术经过多年的发展，已经有多种发光体系，但实验室最常⽤的仍然是基于鲁⽶诺（Luminol）或者其衍⽣物（异鲁⽶诺等）的技术体系。
Western荧光检测试剂ECL免疫印迹化学发光溶液是⼀种旨在通过⾮放射性（辣根过氧化酶）发光系统，检测固定在固相膜上（如NC、PVDF等）的30⾄50⽪克以上蛋⽩，经X光⽚（放射⾃显影⽚）感光记录其免疫印迹的实验辅助试剂。
⼀、实验建议：为获得最佳的实验结果，需要优化所有实验要素，包括样品数量，抗体浓度，膜和封闭剂的使⽤。
⼆、特点：Abbkine开发的SuperLumia HRP底物ECL试剂盒，基于经典的过氧化物酶底物体系⾰新优化⽽来，⽤于增强化学发光(ECL)，可直接替代其它昂贵ECL产品⽽⽆需重新优化实验条件，是卓越品质与亲和价格的完美结合。
三、使⽤注意事项：1.按照1：1的⽐例混合两种底物组分，制备底物⼯作溶液。
2.建议每1 cm2⼤⼩的膜对应0.1-0.2ml SuperLumia ECL⾼敏⼯作液3.使⽤SuperLumia ECL Substrate⾼敏⼯作液孵育1-5mins4.排出多余的试剂。
⽤透明塑料包装覆盖印迹。
5.使⽤X光胶⽚曝光SuperLumia ECL底物系列是⼀类即⽤型的化学发光试剂，⽤于基于HRP的免疫印迹检测。
SuperLumia ECL Plus HRP底物试剂，组分和配⽅经过特殊优化，特别适合⽤于飞克级别的抗原检测。
货号产品名称K22020SuperLumia HRP底物ECL⾼敏试剂盒- 30mlK22030SuperLumia HRP底物ECL Plus超敏试剂盒- 30mlAbbkine专注于蛋⽩学和细胞学领域，致⼒于创新和研发各类抗体、蛋⽩质、分析试剂与试剂盒，以期成为⽣命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。
我们为您提供蛋⽩和免疫研究⽤户最喜爱的产品，从免疫学基础产品，如蛋⽩提取定量，到免疫学实验的内参标签抗体、⼀抗及⼆抗等；细胞研究⽤户最喜爱的产品，从⽤于检测细胞状态的染料及试剂盒，细胞器提取试剂盒，细胞亚结构染⾊⽰踪及细胞代谢检测产品，到⽤于细胞培养的细胞因⼦及蛋⽩类检测试剂盒，只为助⼒您的研究事业！。
ecl发光液使用方法
ecl发光液使用方法ecl发光液是一种能够发出强烈光亮的化学试剂，广泛应用于生物化学和生命科学领域。
它的发光原理是通过化学反应释放能量，激发荧光物质发出光线。
下面将详细介绍ecl发光液的使用方法，以帮助读者更好地使用该试剂。
使用ecl发光液前需要准备实验室所需的器材和试剂。
常见的器材包括离心机、显微镜和电子天平等，而试剂包括ecl发光液和底物等。
确保实验环境干净整洁，以避免外部因素对实验结果的干扰。
在开始实验之前，需要根据实验的要求选择合适的ecl发光液。
市面上有多种型号和规格的ecl发光液，根据实验的需要选择合适的型号。
同时，根据实验的要求，确定所需的底物，底物的选择也会影响到实验结果。
接下来，按照实验方案准备样品。
样品的准备包括提取目标物质并制备成适当的浓度。
在提取样品时，要注意避免污染和损伤目标物质。
制备样品时，要根据实验要求调整样品的浓度，以保证实验的准确性和可重复性。
准备好样品后，开始进行实验。
首先，将样品和ecl发光液混合均匀。
混合时要轻轻摇晃试管或容器，以确保样品和ecl发光液充分接触。
然后，根据实验方案，在合适的温度下反应一段时间，使底物被ecl发光液激发发光。
在实验过程中，要控制实验条件，如温度、时间和pH值等。
不同的实验条件可能会对实验结果产生影响，因此要根据实验要求进行调整。
同时，要记录实验过程中的关键数据和观察结果，以备后续分析和解读。
实验完成后，可以通过观察样品的发光情况来评估实验结果。
正常情况下，样品在加入ecl发光液后会发出明亮的光线。
根据发光的强度和持续时间，可以初步评估样品中目标物质的含量或活性。
对实验结果进行分析和解读。
根据实验方案和相关知识，对实验结果进行定性和定量分析。
同时，要注意排除实验中可能存在的误差和偏差，确保结果的准确性和可靠性。
ecl发光液是一种重要的实验试剂，在生物化学和生命科学领域具有广泛的应用。
通过合理选择试剂和底物，并严格控制实验条件，可以获得准确可靠的实验结果。
超敏ECL化学发光液
超敏ECL化学发光液超敏ECL发光液Super ECL Reagent Cat.No..M2301 Size: 50 ml描述：海基超敏ECL发光液⽤于Western、Northern和Southern blot分⼦杂交的化学发光检测，⽐传统化学显⾊法灵敏度⾼，可达pg⽔平。
原理是采⽤新型发光底物（Luminol），其与辣根过氧化物酶反应时产⽣很强的发光信号，在暗室中对X-光⽚感光，以此检测微量蛋⽩⽽获得理想的实验结果。
海基增强型ECL发光液具有灵敏度⾼，持续时间长等特点。
组分应⽤在Western 印迹分析，核酸杂交以及EMSA 实验中，HRP 标记的⼆抗或探针与靶分⼦结合再与底物反应产⽣可见光。
储存：2-8°C，Super ECL A要求避光保存。
操作⽅法（以Western Blot为例)1．按每平⽅厘⽶膜⾯积⽤0.1-0.2 ml配置发光液：根据发光液的需要量，取等体积A液和B液，混匀后避光保存备⽤；该发光液必须现配现⽤。
2. 取出膜，平放在⼲净的保鲜膜上，膜的正⾯（蛋⽩质⾯）朝上，在膜的中央加适量的配置好的发光液（6×8 cm的膜加2 ml 发光液），溶液向四周迅速扩散，覆盖所有膜⾯。
室温保温5分钟左右，在此过程中请仔细观察信号的出现。
注意：如果信号强，在暗室中能很快看到阳性信号出现。
3. 待信号出现且稳定后，⽤镊⼦夹起膜，除去多余的发光液，平放在⼲净的保鲜膜上，膜的正⾯（蛋⽩质⾯）朝上，在转移膜的上⾯再覆盖⼀层保鲜膜，除去保鲜膜与转移膜之间的空⽓泡，请务必保证保鲜膜是⼲净的，不被其他杂物或液体污染。
4. 在暗室中，将膜的正⾯对着X-光⽚，放⼊暗盒。
第⼀次曝光时间在1分钟左右(有经验的操作者可以根据信号的强弱⾃⾏决定)，⽴即按要求对X-光⽚进⾏显影和定影，确定最佳曝光时间。
曝光时间从数秒到数⼩时不等；特别弱的过夜曝光也可。
注意1.PVDF膜较硝酸纤维膜能更好的结合蛋⽩，因此呈现较强的信号。
TOP-ECL 印迹化学发光溶液 说明书
星汉DBI 生物技术研究中心网址： 免费电话400-711-6961TOP TOP——ECL 印迹化学发光溶液主要用途星汉生物通用型ECL 免疫印迹化学发光溶液是一种旨在通过非放射性（辣根过氧化酶）发光系统，检测固定在固相膜上（如NC 、PVDF 等）的30或50飞克以上蛋白，经X 光片（放射自显影片）感光记录其免疫印迹的实验辅助试剂。
该技术由DBI 公司精心研制、成功实验证明的。
其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测。
产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，发光清晰，重复性好。
产品内容保存星汉生物发光液A （Reagent A ）和星汉生物发光液B （Reagent B ）在4℃冰箱里；星汉生物发光液A （Reagent A ），避免光照，有效保证12月。
用户自备固相膜：用于蛋白转移的载体2毫升锥形离心管：用于发光工作液配制的容器平式摇荡仪：用于孵育和混匀反应X 光片：用于发光显影实验步骤1．实验开始前，将4℃冰箱里的试剂盒中的发光液A （Reagent A ）和发光液B （Reagent B ）置入室温下，移出1毫升星汉生物发光液A （Reagent A ）到2毫升锥形离心管，加入1毫升星汉生物发光液B （Reagent B ），混匀后，标记为发光工作液，用锡箔纸包裹，避免光照。
然后进行下列操作。
准备好含有待测蛋白的固相膜（5X 8cm 2）3．置于平式摇荡仪上，在室温下孵育1-2分钟，避免光照。
4．用镊子夹起固相膜，一角放在吸水纸上，吸干发光液。
5．用保鲜膜塑料纸包住，避免气泡。
6．置于X 光片夹压片（膜片蛋白吸附面面向X 光片），曝光3分钟至15分钟不等。
(对于内参和GAPDH 和细胞内表达比较高的蛋白质，曝光时间控制在3分钟之内，但对于表达量较低的蛋白质，曝光时间延长到10——30分钟左右)注意事项1．本产品为50毫升总量，可用于1000cm 2膜片2．建议2毫升用于1张5X 8cm 2膜片3．操作时，须戴手套4．星汉生物发光工作液配制后切莫暴露在光线下，否则影响效果5．如果蛋白浓度低到30飞克，建议曝光16小时6．膜片封闭和洗涤处理十分重要7．孵育时，避免光照8．曝光时间需根据情况调整9．本公司提供系列免疫印迹发光试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定显影清晰使用承诺星汉生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
EasyBlot ECL化学发光显色试剂盒
产品编号：SK6668-50 / SK6668-100 包装规格：50 ml / 100 ml
产品简介
ECL 超敏化学发光试剂盒用于检测辣根过氧化物酶（HRP）标记的蛋白检测。在过氧化氢的存在下，辣根过氧化物酶催 化发光液中的底物氧化并发光，此光可经 X 光-胶片感光记录下来。
产品特点
1. 操作方便，使用前将溶液 A 和溶液 B 混合即可。 2. 灵敏度高。 3. 稳定性好。
运输和保存条件
本试剂盒 4°C 运输，溶液 A 和溶液 B 都应避光存储于 4°C，有效期为 6 个月。
试剂盒组成成份
成份 溶液 A： 溶液 B：
SK6668-50 50 ml 150 μl
SK6668-100 100 ml 300 μl
操作步骤
1. 进行 Western Blotting 实验，常规电泳、转膜、孵育一抗，HRP 标记二抗，洗膜，以下操作可在室温下进行。 2. 新鲜配制发光工作液，将溶液 A 和溶液 B 按 1000:3 比例混合，例如 1 ml 溶液 A 与 3 ul 溶液 B 混合即成工作液。每 1 cm2
膜只需要 0.05 ml 发光工作液。 3. 将漂洗过的膜用吸水纸除去膜上多余的洗涤液，但不要使膜完全干燥，并将其转移至清洁的塑料小盒子中，蛋白面朝上，
定曝光时间，以便得到较好的曝光图片。 6. 曝光后将定影的胶片取出，在自来水中轻轻漂洗，晾干后扫描图片，以便保存。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ注意事项：
1. 试剂盒应避光保存。 2. 发光工作液要现配现用，且在强光下信号容易淬灭，因此配制后应避光保存。 3. 曝光时避免多余的发光液浸湿胶片，影响曝光效果。
发光底物试剂盒说明书
pSTAT 3
㖻ߗ㯺⮬ バქ㯺⮬
β-cat enin
pSTAT3
2.5 2
1.5 1
0.5
0 12345 㷱㼒ᵦৰ
1.4 1.2
1 0.8 0.6 0.4 0.2
0 12345
㷱㼒ᵦৰ
图7.免疫蛋白印记法检测（A）5种不同NIH 3T3细胞裂解物中 β-catenin和（B）5种不同Hela细胞裂解物中Tyr705磷酸化STAT3 （pSTAT3）的表达水平。每个实例都对同一次免疫印迹中目标蛋 白以肌动蛋白水平进行标化和相对定量。值得注意的是，虽然 β-catenin的水平在印记的视觉检测上非常相似，但通过ECL prime 和ImageQuant LAS 4000 mini分析仍能找到之间明显的差异。
信号稳定性
ECL prime产生的化学发光信号非常稳定，即使对于所检测 的最小量的蛋白质，其信号依然能在加入试剂后三小时内 维持足够强度，这使得重复曝光成为可能，并且能在每次 实验和分析之间轻松地安排时间（图5和表1）。
经过ECL prime处理1小时后，大约还剩下60%的信号，而 ECL plus处理则只剩下15%。
ECL Prime保留并增强了Amersham ECL plus和Amersham ECL Advance™的优势，提供出一套敏感、稳定、在很宽蛋 白动态水平范围内能精确定量并在节省昂贵的抗体试剂成 本的检测系统：
• 信号强度高且灵敏，允许使用高度稀释的一抗和二抗而 不降低灵敏度
• 信号稳定，可重复曝光，非常适合大量实验的开展，客 户可以从容地安排实验和检测之间的时间
样品： 对10 μg的NIH 3T3细胞裂解总蛋白进行2倍梯度稀释 膜： Amersham Hybond-P 封闭： 5%牛血清白蛋白，溶解在PBS-T溶液中 一抗： 兔抗β-catenin(1:3000到1:10000) 二抗： HRP偶联的抗兔IgG(1:30000到1:50000) 检测： Amersham ECL prime/ Amersham ECL plus 成像： ImageQuant LAS 4000 mini(一抗1:3000或1:5000稀释时需5分钟，一抗
罗氏电化学发光ECL2010中文操作手册
3.光标移到POS栏。输入所需样本位置号，按ENTER。将样本放入指定位置。
4.如果以多样本盘形式运行，按第一个样本盘的POS，输入样本盘号（0－9），按ENTER。
5.按屏幕上试验项目键进行试验项目的选择。当某一项目被选择，此项目键变蓝色。
释放/拒绝定标：
A.按CALIBRATIONDATA屏幕上的试验键
B.按RALEASE或REJECT
C.按OK
红色:表明定标失败。
8.保养
8.1日常保养
注意不要清洗搅拌器
清洗样本/试剂针(S/R):
在关机状态下手工移动S/R针到方便擦拭的位置用纱布沾70%酒精擦拭针表面
注意:针的尖端部分不能擦拭
擦拭外表面 小心尖端部分
6.如需要，按SAMPLECUPNORMAL键转变成REDUCED而使样本死腔量减少。REDUCED
只是针对样品杯或试管顶部而言。
注:只有当样本稀释液在机,自动稀释功能才有效.按DILUTION FACTOR选择相应稀释倍数
7.按REGISTER键储存当前样本信息。
光标回到SAMPLEID栏。
顺序号被自动累加。
材料准备:
清洗液:SysClean
清洗液容器: SysClean adapter
将9ml左右清洗液倒入清洗液容器
放在系统试剂位3如左图位置:
进入Util-maintenance-liquid flow cleaning-start
完成清洗后将清洗液容器用蒸馏水冲洗干净,仪器废液桶也用次氯酸钠泡洗干净
♥C.按BC♥CARD♥SCAN。SCANNING出现在状态线上。在分析仪未回到STAND－BY
Western blotting ECL化学发光法检测试剂盒说明书
Western blotting ECL化学发光法检测试剂盒说明书货号：SW2010Western blotting(小鼠IgG)ECL化学发光法显色试剂盒SW2020Western blotting(兔IgG)ECL化学发光法显色试剂盒SW2030Western blotting(山羊IgG)ECL化学发光法显色试剂盒SW2040Western blotting(小鼠/兔IgG)ECL化学发光法显色试剂盒SW2050Western blotting(人IgG)ECL化学发光法显色试剂盒产品内容：1.封闭试剂：30g(可配制600ml)。
2.10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3.HRP标记二抗，0.1ml，效价1：5000-10000。
4.ECL显色液，25ml A+25ml B。
保存：-20℃避光密闭保存，一年有效。
若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于2-8℃以方便使用。
产品简介：SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。
经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
操作步骤：(仅供参考)常规电泳转膜后:1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。
室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。
用TBS-T缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。
West Femto ECL 化学发光底物说明书
West Femto ECL化学发光底物说明书货号：PE0030规格：2*12.5ml/2*25ml保存：保存：室温运输，收到后在4℃避光下储存试剂产品说明：West Femto最高灵敏度底物是用于辣根过氧化物酶(HRP)的增强型化学发光底物，有以下特点：•灵敏—使用适当的一抗和二抗时，可在硝化纤维膜或PVDF膜上检测丰度为飞克级的蛋白条带•定量—所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级。
•明亮信号—通过胶片或成像系统进行曝光，易于捕获图像。
•长信号持续时间—优化条件下，可检测的光信号输出长达8小时。
•稳定试剂—试剂盒组分能够在4°C条件下稳定放置一年，在室温下可稳定放置6个月。
•价格经济—配方经过优化，可适用于浓度极低的抗体检测。
•1ng至0.2μg/mL一抗（以1μg/mL储存液稀释1:5,000至1:100,000倍）•2ng至10ng/mL二抗（以1μg/mL储存液稀释1:100,000至1:500,000倍）当West Femto底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时，可检测到常规ECL底物无法检测的低丰度靶标蛋白。
重要提示:1、为获得最佳效果，必须优化该系统的全部组分，包括样品量、一抗和二抗浓度以及膜和封闭试剂的类型。
2、使用该产品比使用沉淀比色HRP底物检测所需的抗体浓度低。
为优化抗体浓度，请进行一次系统的点印迹分析。
3、没有一种封闭试剂对所有系统而言都是最佳的，所以为每一个免疫印迹检测系统找到最合适的封闭缓冲液非常必需。
封闭试剂有可能与抗体产生交叉反应，导致出现非特异性信号。
封闭缓冲液同时也会影响系统的灵敏性。
当从一种底物转换为另一种底物时，有时会出现信号衰减或背景增加的现象，原因可能是封闭缓冲液不适合新的检测系统。
4、使用亲和素/生物素检测系统时，避免使用牛奶作为封闭试剂，因为牛奶中含有不定量的内源性生物素，会导致高背景信号。
5、保证洗涤缓冲液、封闭缓冲液、抗体溶液和底物工作液的使用体积，以确保在整个实验过程中印迹膜完全被液体覆盖，避免膜变干。
ECL发光液（Enlight）使用手册
ECL发光液（Enlight）使⽤⼿册第1页共2页北京英格恩⽣物科技有限公司⽹址：订购电话：************转8001订购Email:*****************.cn技术⽀持：************转8003技术⽀持Email：*******************.cn EnlightTMWestern特异发光检测试剂盒（WesternBlottingDetectionReagents）使⽤⼿册常温运输，避光储存于4℃⼀产品介绍EnlightTMWestern特异发光检测试剂盒⽤于辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋⽩或核酸检测。
在WesternBlotting实验的发光检测中，由于发光增强剂的使⽤，发光灵敏度已不是问题，更核⼼和关键的是，避免发光试剂造成“⾮特异条带”或“背景条带”、避免“发光淬灭”，需要发光更加稳定可靠，避免⼈为⼲扰。
发光检测试剂的发光特异性和发光稳定性已成为实验成功的关键。
EnlightTMWestern特异发光检测试剂有如下特点：1.EnlightTM采⽤精准的发光底物，有效降低发光试剂造成的⾮特异发光和背景发光。
2.EnlightTM含独特的发光增强剂，灵敏度⾼，微弱的信号也能检测。
3.EnlightTM采⽤特异的发光配⽅，发光快速⽽稳定。
4.EnlightTM不破坏膜上蛋⽩，可在曝光后，经洗涤，对多种蛋⽩进⾏杂交。
⼆组成Cat.No.Description29050BufferA50ml，BufferB50ml29100BufferA100ml，BufferB100ml三使⽤⽅法1.常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。
以下操作在室温进⾏。
注意：EnlightTM推荐的抗体稀释度为:储存液浓度为1mg/ml的⼀抗推荐稀释度储存液浓度为1mg/ml的⼆抗推荐稀释度1:1000-1:5000或0.2-1.0µg/ml1:2000-1:10,000或100-500ng/ml2.新鲜配制发光⼯作液。
优宝 超敏 ECL 化学发光试剂盒 使用说明书
SuperStar超敏ECL化学发光试剂盒使用说明书【包装规格】产品编号产品名称包装EK-5008-100ml Super Star ECL Solution A50ml Super Star ECL Solution B50ml 使用说明书1份【保存条件】4℃避光保存12月【概述】超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。
用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。
由于采用了独特的发光底物系统，SuperStar ECL超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光ECL检测试剂（具有极高灵敏度和高信噪比）；可在日光灯下进行发光操作；发光迅速，荧光可使X光胶片感光达12小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)，极其节省抗体。
【特点】⏹飞克级灵敏度-在硝酸纤维素或PVDF膜上检测低至飞克量的目标蛋白量⏹高信号稳定性-孵育印迹在关键的4小时时间内提供稳定的信号持续时间，在最佳条件下可产生长达24小时的光输出⏹稳定的试剂-在4℃下1年的试剂盒稳定性⏹更经济的抗体用量：0.2至1.0μg/mL一抗（从1mg/mL原液中1：1000至1：5000稀释）10至50ng/mL二级抗体（从1mg/mL原液中1：20,000至1：100,000稀释）【操作方法】1.执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。
注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。
2.Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取A:B=1:1混合（如需要1ml 发光液则取500ul ECL A液和500ul ECL B液混合），放入干净容器中混合。
建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3.用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。
将膜完全浸入发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2膜)中，与发光工作液充分接触。
碧云天 特超敏ECL化学发光试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-1683301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒)产品编号产品名称包装P0018AS BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) 100mlP0018AM BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) 500ml产品简介：碧云天生产的Western萤光检测试剂BeyoECL Star是一种特超敏ECL化学发光试剂盒，发光效果显著优于BeyoECL Plus，可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)发生化学反应，发出萤光，从而可以通过用X光片压片或其它化学发光成像设备检测样品。
碧云天生产的Western萤光检测试剂目前共有三种，分别是P0018S/P0018M BeyoECL Plus、P0018AS/P0018AM BeyoECL Star 和P0018FS/P0018FM BeyoECL Moon。
常规的Western检测，优先推荐使用BeyoECL Star。
对于丰度比较高的目的蛋白的检测，例如内参蛋白等的检测，推荐使用性价比更高的BeyoECL Plus。
对于低丰度较难检测的目的蛋白，优先推荐使用检测灵敏度最高的BeyoECL Moon。
但对于丰度适中的目的蛋白的检测，不太推荐使用BeyoECL Moon，因为使用BeyoECL Moon时由于检测灵敏度特别高，容易产生过曝的现象。
BeyoECL Star灵敏度极高，比DAB显色的灵敏度至少高1000倍，比Amersham公司的ECL或碧云天以前生产的BeyoECL的灵敏度高100-500倍左右，比碧云天生产的BeyoECL Plus的灵敏度高约5-10倍(参考图1)，比原Pierce公司(现Thermo公司)的SuperSignal West Pico Substrate的灵敏度高10倍以上，实际检测效果与原Pierce公司的SuperSignal West Dura和SuperSignal West Femto的检测灵敏度相近。
biolight ECL 超灵敏化学发光检测试剂盒（飞克级）使用说明书
ECL超灵敏化学发光检测试剂盒（飞克级）版本号：V1.1-202206一、产品规格产品组成BLWB021-100ML BLWB021-250MLECL FemtoLight Substrate 100 mL 250 mLECL FemtoLight Oxidant 100 mL 250 mL说明书1份1份二、产品情况ECL超灵敏化学发光检测试剂盒是一款非放射性的化学发光系统，可用于检测结合到膜上的蛋白所偶联的辣根过氧化物酶(HRP) 的活性。
本产品包括增强的鲁米诺底物和稳定的过氧化物体系，能检测低至飞克级的微量蛋白，适用于常规Western Blot的化学发光。
ECL化学发光试剂盒分BLWB016 ECL基础化学发光试剂盒和BLWB021 超敏ECL化学发光试剂盒。
对于丰度较高的目的蛋白检测，例如内参蛋白等，推荐使用BLWB016，该产品可检测低至皮克量的蛋白；而对于低丰度较难检测的目的蛋白，推荐使用BLWB021，该产品可检测到低至飞克量的蛋白，且发光更稳定。
三、储存运输冰袋运输；2-8℃避光保存，保质期12个月；如果长期不用，可以-20℃保存。
三、注意事项（一）100 mL 规格可供1000cm2的转印膜使用；（二）ECL FemtoLight Substrate和ECL FemtoLight Oxidant在吸取过程中必须要更换吸头，相互污染后会导致底物和过氧化物逐渐失效；（三）金属离子的污染会降低本试剂的灵敏度，请注意用干净吸头；（四）NaN3会抑制HRP的活性，因此二抗的保存或回收应避免使用NaN3；（五）ECL FemtoLight Substrat及发光工作液应避免强光照射，强光照射会导致灵敏度降低；（六）ECL发光液灵敏度很高，如果出现背景升高的现象，可能是使用的一抗或二抗浓度过高会造成；（七）如果荧光迅速淬灭，可能原因是目的条带荧光过强，导致HRP迅速消耗ECL；（八）如果没有发光信号，可能是目的蛋白表达很弱，可延长压片时间；（九）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
增强化学发光法(ECL)
增强化学发光法(ECL)Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。
在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。
试验步骤：1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。
2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。
3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。
4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。
5）显影、定影。
6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到最佳结果。
注意：荧光在一段时间后会越来越弱。
记得全程手套操作，一则避免手印污染影响结果，二则保护自己（未交联的丙烯酰胺、甲醛等等虽不立即致命但都会慢慢毒害你的身体）1. 如果WB前没有可参考的资料--比如不知道是否有表达，比如抗体少还要摸条件（稀释度），可以用剪膜剩下的边角料来先做几组点杂交摸条件，省点时间省点试剂；2. 去掉积层胶后，预染的Marker可用以识别胶上下方向和膜的正反面（预染M arker如果照着说明书用量，有可能在电泳时看不到条带，但转膜时有浓缩效应而且背景白就可以看到了。
如果要电泳能看到就要参考电泳的那个用量，或者多加1-2倍的量）；如果目标蛋白小，指示剂也可以指示方向，但是如果蛋白大，指示剂已经跑出去了，就要留意分清胶上下方向，切个小角是常用的方法。
膜和滤纸一起裁最好（不过滤纸上下叠多了膜不好剪，硝纤膜容易裂，用利刀+尺子+垫厚报纸划比较容易）尽量和胶一样大小，胶用纯水冲洗一下后用电泳缓冲液平衡过再量。
我自己通常剪的时候会故意长宽各比胶少1mm，保证膜和胶不会碰到对方背后的滤纸就好。
3. 对于特别小的蛋白，tricine SDS-PAGE电泳有助于提高蛋白大小在1KD-20 KD间的分辨率，不用甘氨酸，丙烯酰胺的浓度也不用太高（可参考2004年中国生物工程杂志上有一篇文章（有效分离1kD小肽的Tricine-SDS-PAGE方法）4. 转膜前胶要在转移缓冲液里平衡一下防止胶变形，也有助于进一步去掉可能有碍转膜的杂质。
ECL说明书
免疫印迹化学发光试剂（ECL Reagent）用途：本试剂是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白，其敏感性达1-10pg。
用X光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。
所含独特的底物足以维持数小时的发光，便于反复曝光操作，免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。
原理：辣根过氧化酶使试剂中的发光物（Luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。
在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE 分离，并转移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫学检测，经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。
当加入免疫印迹化学发光试剂后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光片（放射自显影片）感光记录下来。
操作注意：1. 本试剂每个批号均独立优化，请不要混用或稀释本试剂以免降低敏感性；2. 加入一抗某膜不能再干燥；3. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要；4. 使用前配置化学发光试剂，配置两足够覆盖膜片即可，弃去使用过的混合试剂；5. 使用干净取样头取用每种试剂；6. 第一张片子建议曝光30秒钟，观察结果后判断最佳曝光时间可从30秒至2小时不等；7. 除了放射自显影片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作；8. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体，再次印迹使用，在此情况下，此试剂更为理想；9. 因为它不象生色物质需要从膜片上清除底物。
使用方法：I. 印迹膜制备按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，适当的封闭非常重要。
可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交联物。
仔细地淋洗对于降低背景非常重要，在与HRP交联物温育后，膜片更需仔细洗涤，所有步骤均在室温下完成。
II. 化学发光试剂的配置在使用前等量混合A液和B液，混合后尽快使用。
将膜片置混合液中于室温下振荡温育1分钟，每平方厘米膜片至少使用0.125ml以覆盖全膜片。
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◆UltraECL底物化学发光检测试剂盒◆目录号1924
◆使用手册
◆实验室使用，仅用于体外
UltraECL底物化学发光检测试剂盒目录号：1924
目录编号包装单位
192401 50ml
（A液B液各25ml）
192402 100ml
（A液B液各50ml）
192403 500ml
（A液B液各250ml）
试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成保存50ml 100ml 500ml
溶液A 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml
溶液B 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml 本产品收到后按照上面指示温度存放，至少6个月内有效。
产品介绍：
Western blot底物发光检测试剂可由标记于二抗上的辣根过氧化酶催化，产生化学发光反应，可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。
UltraECL底物化学发光检测试剂盒基于新一代增强型化学发光底物研制而成，并对成份做了优化。
产品背景低，稳定性好，比普通ECL试剂敏感度高数十倍。
它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应，发出荧光，可对X光胶片曝光，也可直接进行luminometer检测或者荧光CCD扫描。
操作步骤：
1.按常规Western blot操作，二抗孵育后，进行最后一次洗涤时，根据膜的大小，按
每10cm2膜混合0.5ml溶液A和0.5ml溶液B，混匀，配制成发光检测工作液。
2.用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。
膜的
蛋白面朝上，置于洁净保鲜膜（某些市售保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜）上。
用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上，使其均匀覆盖，室温孵育1-2分钟。
3.用平头镊夹持蛋白膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。
膜的
蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。
轻轻赶出其间的气泡，固定在X片暗盒内。
4.在暗室中取一张X片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分钟。
立即显影定
影，根据其曝光强度，缩短或延长下一张X片的曝光时间（对微弱信号，曝光时间可延长至数小时）,或者曝光0.5，1，2，4，6分钟一系列后再显影定影挑选一张满意的。
也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。
注意：如果储存使用时间过长，溶液B中过氧化氢可能随时间分解降低曝光敏感度，可取普通纯水按照每10ml纯水加入40µl 30％H202（商品化的H202一般为30％）比例配成新鲜H202溶液替代溶液B使用，可以完全恢复发光工作液最大发光敏感度，效果和新鲜的溶液B完全一样。