2、毒理学第二讲 急性毒性
急性毒性实验内容课件
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染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
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耳缘孔口法：
在耳缘先用针穿孔和用剪刀剪口，再用酒精墨 汁涂抹，使黑色渗入孔口，伤口愈合后不易脱 落，这种标号亦可标号１～９９。
适用于大、小鼠。
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• 初步了解动物致死的原因，为研究毒作用的机
制提供线索，进而为制定中毒急救治疗措施提
供依据。
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由急性毒性试验可得到两类毒性参数
上限参数 是以死亡为终点的毒性，包 括绝对致死量、半数致死量、最小致 死量、最大耐受量等；
下限参数 是以非致死性急性毒作用 为终点的毒性，包括急性阈剂量和无 作用剂量等。
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实验动物的年龄与体重的关系
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
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急性毒性试验的动物体重
四 3 11 16 17 20
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随机区组设计
将动物称重，按体重顺序依次排列编号，分成若 干个区组，每一区组的动物体重相近，每一区组的 动物数即为组数。再从随机数字表上任意抄下随机 数字，依次标在每个动物的编号下，如欲将动物分 为４组，则将每一区组动物编号下的随机数字，按 顺序分别用４、３、２、１除之，根据余数大小将 动物分入各组。
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急性毒性及其评价方法PPT课件
灌胃器具制作
取l2号普通注射针头，首先将针头尖部去 掉，然后用细锉刀把去掉部分锉平、锉光， 再用沙纸磨光滑，有条件时可在针尖处点 焊成球型。加工成有20度弧度的灌胃针， 连接1ml或5ml的注射器，即成为大小鼠的 灌胃器。
2. 经呼吸道接触
在常温、常压下为气态，或在生产过程 中 和生活过程中以蒸气、气溶胶、烟、粉 尘 状态污染生产与生活环境空气，此时就 有 可能经呼吸道吸入。
吸入接触分为两种方式 ：
静式吸入 动式吸入
3. 经皮肤染毒
➢ 研究外源化学物经皮肤吸收应当尽 量选择皮肤解剖、生理与人类较近似的动 物为对象，目前多选用家兔和豚鼠
1 LgLD0
•••
2 LgLD0+i
随机性：每只动物分散到各组去的机会是均 等的，以避免成见或系统误差
实验动物的预处理
适应性饲养一周，选择生理健康的动物 凡经口染毒时，要求试验前要对动物禁食，
以保证胃内无食物，减少食物对化学物毒性 的干扰
大鼠、小鼠——隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物——每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水
2. 通过观察动物中毒作用表现、毒作用 强 度和死亡情况，初步评价毒物对机体的 毒效应特征、靶器官、剂量－反应关系和对 人体产生损害的危险性
3. 为亚慢性及慢性毒性试验研究以及 其他 毒理试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据
4. 为毒作用机理研究提供线索，了解中 毒 效应的特征（包括症状，生理、生化与 组织病理损伤）
(二) 受试物及处理
受试物的接受、分样、保管、称重、配制 以及在此过程中严格的质量保证影响急性 毒性试验
2第二讲+化学品分类和标签规范(GB30000.18-27)-健康危害
危险化学品登记管理
c 类别5的指标是旨在能够识别急性毒性危害相对较低的，但在 某些情况下，对敏感群体可能存在危害的物质。这些物质预期它 的经口或经皮肤LD50的范围为2000—5000mg/㎏体重，吸入途径为 上述的当量剂量。类别5的具体准则为： 1）如果现有可靠的证据表明LD50（或LC50）在类别5的数值范围 内，或者其他动物研究或人体毒性效应表明对人体健康有急性影 响，那么该物质应被分为这一类别。 2）通过数据的推断、评估或测定，如果不能分类到更危险的类 别，并有如下情况时，该物质分到此类别： —得到的可靠信息说明对人类有显著的毒性效应； —通过经口、吸入或经皮肤接触试验直至类别4的剂量水平时 观察到死亡； —在试验至类别4的数值时，除了出现腹泻、被毛蓬松、外观 污秽之外，专家判断确定有明显的临床毒性表现； —专家判定来自其他动物研究的可靠信息表明存在潜在的明显 急性毒性效应的。 国家安全生产监督管理总局化学品登记中心
危险化学品登记管理
3.如果有一种组分在混合物中的浓度为1%或更大而无任何可利 用的信息时，不能够对该混合物作出肯定的急性毒性估计值。在 这种情况下，该混合物应根据仅已知道的组分来分类，并附加说 明该混合物由质量百分数（%）的未知毒性组分组成。 4.如果未知急性毒性的组分的总浓度小于等于10%时，则应采用 “1”中提出的公式。如果未知毒性的组分总浓度大于10%时，则 对“1”中的公式进行校正：
国家安全生产监督管理总局化学品登记中心
危险化学品登记管理
1 急性毒性（GB 30000.18-2013）
经口或经皮肤给予物质的单次剂量或在24h内给予的 多次剂量，或者4h的吸入接触发生的急性有害影响
/trans/danger/publi/ghs/g hs_welcome_e.html 2011 rev4
毒理学基础 第六章 化学物的一般毒性作用
〔四〕慢性实验设计要点
1.实验动物 2.染毒途径与期限
3.剂量分组: 高剂量组：1/5-1/2 LOAEL〔亚慢〕 中剂量组：1/50-1/10LOAEL 低剂量组：1/100 LOAEL或：1/1000-1/10LD50 阴性对照：
4.观察指标 同亚慢，但精，为亚慢显现靶的指标。
〔五〕结果评价
染毒使半数动物出现相同效应〔或死亡〕的剂量[ED50(1)]
的比值，K 即= 蓄ED5积0(n)系数。
ED50(l)
LD50(n
K
=
)
LD50(l
)
1)固定剂量法 2)剂量递增法
〔2〕生物半减期法
用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用 化学物的蓄积极限：
a.半减期的测定 b.计算蓄积极限
第六章 化学物的一般毒性作用
急性毒性 一般毒性亚慢性毒性
慢性毒性
急性毒性试验 亚慢性毒性试验 慢性毒性试验
第一节 急性毒性作用
一、急性毒性的概念
➢ 急性毒性(acute toxicity) ：是指机体〔实验动物或人〕 一次或24小时内屡次接触外源化学物后在短期内所引 起的毒性效应。
➢ 包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应 ➢ 说明： ➢ 1.接触的次数：一次/屡次 ➢ 2.毒效应出现时间： ➢ 3.中毒效应的强度：
〔二〕染毒途径
1.经消化道染毒 2.经呼吸道染毒 3.经皮肤染毒 4.经注射染毒
〔三〕剂量选择及分组
1.剂量范围确实定： 动物死亡率0％－100％ 〔或10％-90%〕的致死剂量范围
2.分组及剂量确实定： 窛氏法：6－8组为宜，各组剂量呈等比级数 霍恩氏法：4组，各组剂量呈等比级数
〔四〕毒作用观察
急性毒性、蓄积毒性、亚慢性毒性、亚急性毒性、慢性毒性资料区分
易混知识
毒性概念区分 蓄积性毒性(资料不要求，但注意区分)
蓄积性毒性：当化学毒物反复多次(未有时间要求)给动物(实验或靶动物)染毒，化学 毒物进入机体的速度（或总量）超过代谢转化和排泄的速度（或总量）时，化学毒物或 其代谢物在机体内逐渐增加并贮留的现象为化学毒物的蓄积作用。 蓄积作用是发生亚慢性、慢性毒作用的物质基础。 试验目的：求出外源化学毒物的蓄积系数K，了解蓄积毒性的强弱，并为慢性毒性试 验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。 评价方式： 1.蓄积系数法（accumulation coefficient）以蓄积系数K为指标，一般认为K值越小，蓄 积毒性越大(参考《蓄积系数分级标准》表) 2.生物半减期法（biological half-life, t1/2）,根据得到的蓄积极限值可以推断产生中毒的 大概时间。
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易混知识
毒性概念区分 亚慢性毒性
亚慢性毒性：是指人或实验动物连续较长时间（相当于生命周期的1/10，如大鼠为3 个月）接触较大剂量(相对于低剂量，无剂量下限，但低于LD50，动物无死亡或极少死 亡)外源化合物所产生的毒性效应。 亚慢性毒性试验期限“较长时间”确切天数至今尚无完全统一认识。一般认为在环境 毒理学与药品、食品毒理学中所要求的连续接触为3～6个月，而在工业毒理学中认为 1～3月即可。 现有学者主张进行实验动物90天喂饲试验为亚慢性毒性试验，即将受试物混合物饲 料或饮水中，动物自然摄取连续90天。这是由于有研究报道认为动物连续接触外来化 合物3个月，其毒性效应往往与再延长接触时间所表现的毒性效应基本相同，故不必 再延长接触期限。
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易混知识
动物分类
动物分类 按实际用途分类：实验动物、经济动物、野生动物、观赏动物。 按遗传学控制分类：近交系动物、突变种纯系动物、纯杂种动物。 微生物学控制方法分类： 1.无菌动物：这种动物无论体表或肠道中均无微生物存在，并且体内 不含任何抗体。 2.悉生动物：是给无菌动物引入已知5～17种正常肠道菌丛培育而成的 动物。 3.无特殊病原体动物：又称屏障系统动物。 4.清洁动物或最低限度疾病动物：该种动物是饲养在设有清洁走廊和 不清洁走廓的设施中，其种群均来自剖腹产。 5.常规动物：指一般在自然环境中饲养的带菌动物。
2、毒理学第二讲 急性毒性
第二章急性毒性作用及其评价方法第一节基本概念1、定义 急性毒性（acute toxicity ）：是指机体（人或试验动物）一次接触或24小时内多次接触药物后在短期（最长到14天）内所发生的毒性效应，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。
最主要观察指标是LD 502、急性毒性试验的目的①测试和求出药物对试验动物的致死量（以LD 50表示），以及其他的急性度U 型参数，了解急性毒性作用强度。
②观察动物中毒表现和死亡情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因。
③探求药物急性毒性的剂量-反应关系与中毒特征。
④为多次重复给药毒性试验（亚慢性、慢性毒性作用）的剂量设计提供参考依据。
第二节LD50的测定一、LD 50的概念1927年由Trevan 提出的一种带有置信限估计的中介值，是反映药物毒效应的上限指标；定义：能引起一群实验动物50％死亡所需的剂量，或者说是某药物于一次性给予一群动物后预期引起50％死亡的经统计学演算得出的一个剂量。
二、LD 50测定的意义1)LD 50是药物的重要特征性参数之一常被用来判断药物对机体的毒性程度，其数值越大，说明该药物越安全。
LD 50并非一个绝对的生物学常数，它与药物的pH、pKa、熔点、凝点、比旋度、溶解度等常数不同，LD 50仅是一个统计学参数，一个为描述药物在某个特殊的群体中以致死反应为指标而设计的统计学术语，是许多反映药物急性毒性的参数之一。
2)有助于计算其它相关毒性参数①急性毒作用带（Acute adverse effect zone,Zac）：是指药物的毒性上限与下限的比值。
Zac=LD 50/Limac其中LD 50代表毒性作用的上限，Limac 为急性阈剂量，代表毒性作用的下限。
②治疗指数(Therapeutic index，TI)：是指半数致死量与半数有效量之比值。
TI=LD 50/ED 503)药物急性毒性分级依据按药物的LD50值进行相对急性毒性分级可粗略地表示其急性毒性的强弱和对人的潜在危害程度，这一分级标准目前尚未完全统一，WHO 推荐了一个五级分级标准。
毒物毒理学基础与急性中毒概述
缺点
耗资、耗时多 (多为回顾性)，无健 康保护 难以确定暴露，有混 杂暴露问题 可检测的危险性增加 必需达到2倍以上 测定指标较粗(发病 率，死亡率)
耗资多 较低浓度和较短时间 的暴露 限于较少量的人群 (一般＜50) 限于暂时、微小、可 逆的效应 一般不适于研究最敏 感的人群
动物暴露与人暴露相 关的不确定性 受控的饲养条件与人 的实际情况不一致 暴露的浓度和时间的 模式显著地不同于人 群的暴露
1. 不引起机体机能形态、生长发育和寿命的改变；
2. 不引起机体功能容量的降低； 3. 不引起机体对额外应激状态代偿能力的损伤。
4. 机体发生的一切生物学变化应在机体代偿能力范围之内，当 机体停止接触该种外源化学物后，机体维持体内稳态的能力 不应有所降低，机体对其他外界不利因素影响的易感性也不 应增高。
苯巴比托钠盐
DDT 木印防已苦毒素 硫酸士的宁
大 鼠
大 鼠 大 鼠 大 鼠
150
100 5 2
烟碱
d-筒剑毒碱 河豚毒素 二恶英 肉毒杆菌毒素
大 鼠
大 鼠 大 鼠 豚 鼠 大 鼠
1
0.5 0.1 0.001 0.000,01
一、绪论
第二节 毒理学简史
一、绪论
第三节 毒理学的研究方法
毒理学主要是借助于动物模型模拟引起人体中毒的各种条件， 观察实验动物的毒性反应，再外推到人。由于动物，特别是 哺乳动物和人体在解剖、生理和生化代谢过程方面有很多相 似之处，这就是利用动物实验的结果可以外推到人的基础。 毒理学实验可采用整体动物、游离的动物脏器、组织、细胞 进行。根据所采用的方法不同，可分为体内试验(in vivo test)和体外试验(in vitro test)。毒理学还利用限定人体 试验和流行病学调查直接研究外源化学物对人体和人群健康 的影响。
化学毒物的一般毒性作用急性毒性ppt课件
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• 1）初设剂量组
– 以了解的LD50值为中间剂量组的剂量，按一定的 比值，再向上或下各推1-2 个剂量组，开始时，组 距要稍大些。
• 举例：某受试物相关文献查阅结果，其大鼠经口LD50
约为40mg/kg， 按此剂量倍数差４来划分上下各两组 （lg4=0.6）
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某化合物预实验剂量表
• 一次灌胃体积
小鼠： 大鼠：
0.2-1ml/只 (0.1-0.5 ml/ 10g) < 5 ml/只 (0.5-1 ml/100g)（也有书本为<3ml/ 只）
家兔：
狗：
< 10 ml/ 2kg
< 50 ml/10kg （100ml/只）
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２）喂饲
• 优点：
– 符合人类接触毒物的实际情况。
• 缺点：
• 优点：
– 剂量准确，尤适用于易挥发、易水解、有异味 的化合物。 – 兔、猫、狗等大动物常用此法。
2
• 根据接触化学毒物的时间长短所产生的毒性效应，
可划分为急性毒性、重复剂量毒性、亚慢性毒性和 慢性毒性。那么相应地，按接触化学毒物时间长短 所进行的哺乳动物试验以观察毒效应、评价化学毒 物综合毒性的试验即为急性毒性试验、重复剂量毒 性试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验。根据以 上试验结果对化学毒物的毒性进行评价称为一般毒 性评价（evaluation for general toxicity）。
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2．选择方法
• 种属的选择： • 动物的种属很多，脊椎动物的大小、生命周期、
•
生育行为都较为适宜， 有些已被训化，有利 于被培育成标准动物。 最主要的急性实验动物是大鼠，几乎占全世界 所报导的研究外来化合物急性毒性试验的一半， 占第二位的是小鼠。
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用小动物试验可求出外源化学物对一种或几种
实验动物的急性LD50或LC50; 用大动物试验可求出近似致死剂量
（approximate lethal dose, ALD）;
根据LD50（LC50）值可进行急性毒性分级，以 初步评价外源化学物对机体急性毒性大小和急
性毒作用的强度。
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常用方法：完全随机和随机区组
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完全随机设计
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。如将 ２０只动物分为４组，从随机数字表的第 １１行开始，顺序取２０个数字，用４除 的余数即为组别。
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急性毒性试验项目
急性半数致死量测定 半数耐受限量测定 7d喂养试验 其他：近似致死量试验、固定剂量法、
急性毒性分级法、阶梯法、金字塔法、 限量试验、急性系统毒性试验等。
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急性毒性试验设计
▪ 实验动物选择 ▪品种 ▪品系 ▪个体 性别 年龄 体重 生理病理状况
对外源化学物毒性反应与人近似； 原则 易于饲养管理，方便实验操作；
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随机区组设计
将动物称重，按体重顺序依次排列编号，分成若 干个区组，每一区组的动物体重相近，每一区组 的动物数即为组数。再从随机数字表上任意抄下 随机数字，依次标在每个动物的编号下，如欲将 动物分为４组，则将每一区组动物编号下的随机 数字，按顺序分别用４、３、２、１除之，根据 余数大小将动物分入各组。
等浓度稀释：
将受试化学物配成一种浓度，不同剂 量组实验动物单位体重所给受试化学 物的体积不同。
急性毒性试验讲解
在化学品安全性评价中的应用
在化学品安全性评价中，急性毒性试验是评估化学品对人体健康和生态环境可能 产生危害的重要步骤。通过急性毒性试验，可以初步了解化学品对生物体的毒性 作用和潜在风险。
急性毒性试验的结果可以为化学品的分类、标签和风险管理提供依据，有助于制 定相应的安全措施和应急预案。
急性毒性试验的局限性
常用动物
大鼠、小鼠、兔子等。
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急性毒性试验操作流程
实验前准备
明确实验目的
在开始急性毒性试验之前，必须明确 实验的目的，是为了评估化学物质、 药物或其他物质的毒性，还是为了其 他目的。
准备实验材料
准备好所需的化学物质、药物或其他 质，以及实验所需的仪器和设备， 如注射器、秤、笼子等。
选择实验动物
细胞模型
利用特定细胞系或干细胞 分化得到的细胞，模拟体 内环境进行毒性测试。
计算模型
基于已知化合物的毒性数 据，建立预测模型，实现 对新化合物的快速毒性预 测。
微流控技术
模拟体内生理环境，实现 细胞与分子的复杂交互， 为药物筛选和毒性测试提 供新途径。
急性毒性与其他毒性试验的整合
整合多种毒性试验
将急性毒性试验与其他类型的毒性试验（如慢性毒性、生殖毒性 等）相结合，全面评估化合物的潜在危害。
目的
了解受试物质的毒性性质，为后续的 亚急性、慢性毒性试验以及毒理学研 究提供依据，同时为化学品的安全评 估和危险度评估提供重要数据。
试验方法
实验设计
根据受试物质的特点和试验目的，选择合适的实验动物（如大鼠、小 鼠、兔子等），确定受试物质的剂量范围，设置对照组。
给药方式
根据实际情况选择合适的给药途径（如经口、皮肤、吸入等），确保 受试物质能够被动物充分吸收。
2023年毒理学之化学毒物的一般毒性作用相关知识解读
✓ 鼠类的灌胃法：用左手固定鼠，右手持灌胃器， 将灌胃针从鼠的口腔插入，压迫鼠的头部，使口 腔与食道成一直线,将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食 道，可感到轻微的阻力,此时可略改变一下灌胃针 方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。 一般灌胃针插入小鼠深度为3～4cm，大鼠或豚鼠 为 4 ～ 6cm 。 常 用 灌 胃 量 小 鼠 为 0.2 ～ 1ml ， 大 鼠 1～4ml，豚鼠1～5ml
②品系纯化 ③级别：清洁级以上的动物【实验动物分为：无菌动物、悉生
动物、无特定病原体动物（SPF动物）、清洁动物和普通动物】 ④性别 ⑤年龄和体重 ⑥生理与健康状况
除
试验动物的种属和品系
• 试验动物的种属和品系
– 最好用两种种属的动物 – 啮齿类（rodent species）
小鼠（昆明种、NIH、ICR) 大鼠(Sprague-Dawley（SD）、Wistar ) 豚鼠或家兔 – 非啮齿类（nonrodent species）：狗或猴 – 急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，优先考 虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急性毒性试验则 优先考虑大鼠
2023年毒理学之化学毒物 的一般毒性作用 2 亚急性毒性作用 3 亚慢性毒性作用 4 慢性毒性作用
外源化学物一般毒性评价 和研究的主要目的
确定受试物毒作用的表现和性质
确定受试物毒作用的剂量－反应（效应）关系
确定毒作用的靶器官
确定损害的可逆性
其它：敏感检测指标和生物学标志、毒作用机制、 毒物动力学、中毒的解救措施…
▪ 易感性生物学标志可用以筛检易感人群，保护高危人群
生物学标志
接触标志
效应标志
暴露 吸收剂量 靶剂量 生物学效应 健康效应
易感性标志
急性毒性研究
不必计算LD50
急性毒性试验
定性
毒性反应类型 出现和消失时间 可能的靶器官和死亡原因
定量
致死量 最大给药量 半数致死量
四、急性毒性实验的常用方法
1、半数致死量法：经典方法，设计4-6个剂量， 每个剂量10只动物，至少有两组动物产生部分 反应（死亡率大于0%，小于100%）
2、最大给药量法：低毒受试物采用
3、上下法：固定剂量
五、急性毒性实验方法的要点
总体原则：
✓ 实验动物 ✓ 给药途径 ✓ 给药剂量 ✓ 观察周期 ✓ 观察指标的选择、计算方法和评价
（一）实验动物的选择和要求
主要原则
✓ 急性毒性反应与人近似 ✓ 易于饲养、操作方便 ✓ 繁殖力较强，数量较大 ✓ 价格较低，易于获得
除特殊需要外，首选哺乳动物
实验动物的物种和品系
给药方法
给药途径影响受试物急性毒性
不同途径的吸收量和吸收速率 ✓ 吸收速率：静脉注射>呼吸道>肌肉注射>
腹腔注射>皮下注射>消化道>皮内注射> 经皮 ✓ 同一受试物不同给药途径LD50的大小通 常符合上述规律
给药容量
常规给药容量（单位：mL）
i.g.
s.c.
i.p.
小鼠 0.2-0.4 0.1-0.2 0.1-0.2
大约相当体重70kg人的致死剂量 mg/kg
稍尝 500-4000 4000-30000 30000-250000 250000-50000 >500000
二、急性毒性作用的有关参数
2、ED，TD：ED50，TD50
三、急性毒性实验的目的
1、测试和求出化合物的急性毒性参数，初步 估算对人类毒害的危险性
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第二章急性毒性作用及其评价方法第一节基本概念1、定义 急性毒性（acute toxicity ）：是指机体（人或试验动物）一次接触或24小时内多次接触药物后在短期（最长到14天）内所发生的毒性效应，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。
最主要观察指标是LD 502、急性毒性试验的目的①测试和求出药物对试验动物的致死量（以LD 50表示），以及其他的急性度U 型参数，了解急性毒性作用强度。
②观察动物中毒表现和死亡情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因。
③探求药物急性毒性的剂量-反应关系与中毒特征。
④为多次重复给药毒性试验（亚慢性、慢性毒性作用）的剂量设计提供参考依据。
第二节LD50的测定一、LD 50的概念1927年由Trevan 提出的一种带有置信限估计的中介值，是反映药物毒效应的上限指标；定义：能引起一群实验动物50％死亡所需的剂量，或者说是某药物于一次性给予一群动物后预期引起50％死亡的经统计学演算得出的一个剂量。
二、LD 50测定的意义1)LD 50是药物的重要特征性参数之一常被用来判断药物对机体的毒性程度，其数值越大，说明该药物越安全。
LD 50并非一个绝对的生物学常数，它与药物的pH、pKa、熔点、凝点、比旋度、溶解度等常数不同，LD 50仅是一个统计学参数，一个为描述药物在某个特殊的群体中以致死反应为指标而设计的统计学术语，是许多反映药物急性毒性的参数之一。
2)有助于计算其它相关毒性参数①急性毒作用带（Acute adverse effect zone,Zac）：是指药物的毒性上限与下限的比值。
Zac=LD 50/Limac其中LD 50代表毒性作用的上限，Limac 为急性阈剂量，代表毒性作用的下限。
②治疗指数(Therapeutic index，TI)：是指半数致死量与半数有效量之比值。
TI=LD 50/ED 503)药物急性毒性分级依据按药物的LD50值进行相对急性毒性分级可粗略地表示其急性毒性的强弱和对人的潜在危害程度，这一分级标准目前尚未完全统一，WHO 推荐了一个五级分级标准。
4)为长期毒性试验、特殊毒性试验和临床药理评价提供剂量设计参考5)为毒效应的靶器官确定和机制分析提供线索书p133表格，了解表2.我国食品毒理急性毒性分级法急性毒性分级大鼠经口LD50（mg/kg）大致相当于70kg人的致死量6级（极毒）＜1稍尝，＜7滴5级（剧毒）1-507滴-1茶匙4级（中等毒）51-5001茶匙-35克3级（低毒）501-500035-350克2级（实际无毒）5001-15000350-1050克1级（无毒）＞15000＞1050克三、非致死毒性反应及其转归（了解，p147）外源化合物可对机体的生理、生化、免疫、神经或其它系统产生损害，使正常生理功能发生严重紊乱，有些实验动物虽可幸免于致死性毒效应，但可能出现上述系统不可逆的损伤，即产生非致死性毒性反应。
非致死性有害反应与致死性反应仅仅是程度上的差异，都是用药过程中不希望出现的。
非致死性反应的转归问题主要涉及到反应是否可逆。
可逆反应是指当药物在体内消除后，反应也亦随之消失，不残留任何效应。
反应的可逆与否主要取决于下列因素：•1．毒性作用涉及的器官与系统•2．药物的内在毒性•3．用药时间的长短•4．在确定的时间范围内，药物在体内的量•5．实验动物的年龄（月龄）和健康状况四、急性毒性试验1、一般程序：（p131-132）通过一定的染毒途径给予数组实验动物，必要时可增加一个溶媒对照组，在特定的时间间隔内观察实验动物的行为表现、中毒症状及死亡情况。
试验过程中对死亡动物进行大体肉眼尸检，存活动物在实验终止时处死并进行尸检，尸检中如发现明显的组织或器官异常，进行病理组织学检查。
2、实验动物：【原则】（p133）①急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。
②动物易于获得。
③品系纯化。
④价格较低和易于饲养等条件。
2.1实验动物的种属和品系最好用两种种属的动物啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：狗或猴根据不同接触途径和试验要求，选择不同的物种。
首选大鼠或小鼠：经济；易于获得且便于饲养和管理；毒理学研究背景资料较多便于比较。
急性毒性试验所用大鼠的品系以SD、Wistar为主，小鼠以昆明种、NIH、ICR为多。
表实验动物的选择研究内容实验动物急性毒性大、小鼠免疫毒性大、小鼠，最常用C57BL/6放射病狗、大、小鼠，不宜用兔吸入性粉尘大鼠药物对皮肤局部作用兔、豚鼠实质性脏器的毒作用小鼠慢性毒性大鼠、狗致畸性大、小鼠，兔致突变性、致癌性大、小鼠2.2实验动物的年龄和体重急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。
例如：大鼠180～220g、小鼠18～22g、家兔2～2.5kg、豚鼠200～250g、狗10～15kg。
同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的20％。
2.3实验动物的性别除特殊要求外，一般为雌雄各半。
如果在预试验时发现药物对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求。
出雌性与雄性动物各自的LD502.4动物数量与随机分组大、小鼠等小动物每组10只狗等大动物每组6只分组原则——随机化原则2.5禁食经口给药时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠——隔夜禁食；给药后禁食4h大动物——每日上午喂食前给药给药后继续禁食2~4h，不禁水。
2.6实验动物的饲养环境恒定的温度：25±3℃相对湿度：30~70%照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格3、染毒方法染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。
✧最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。
✧经口(胃肠道)接触:灌胃:小鼠0.2∼1.0ml/只或0.1∼0.5ml/10g大鼠一次灌胃体积不超过3ml/只家兔不超过10ml/2kg 狗不超过50ml/10kg吞咽胶囊:多用于犬、猴的给药✧经呼吸道接触:静式吸入、动式吸入✧经皮肤接触:目前多选用家兔和豚鼠✧注射途径接触4、剂量设计（p135-136）4.1查阅文献①找出与受试化学毒物结构近似或有共性基团的化学物的毒性资料。
②了解化学毒物的结构式、分子量、熔点、沸点、密度、水溶性和脂溶性等理化特性。
通过与受试化学物化学结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，以其LD 50(LC 50)值作为受试化学物的预期毒性中值。
4.2预试验①设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在该剂量的上下各设计l-2个剂量组作为预试验剂量。
②根据确定的剂量组进行染毒。
③根据预试验的死亡资料确定组距（10%-90%动物死亡剂量范围）。
可根据以下公式计算出剂量分组i=(lgLD 90-lgLD 10)/(n-1)或i=(lgLD 100-lgLD 0)／(n-1)式中i 为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n 为设计的剂量组数。
4.3正式试验求得i 值后，以最低剂量组(LD 0或LD 10)的对数剂量加上一个i 值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。
123456LgLD 0LgLD 0+i LgLD 0+2i LgLD 0+3i LgLD 0+4i •••4.4全新结构的受试物先通过少量动物的摸索找出0%和100%估计死亡值，再求出i 值。
①先用10倍稀释的药物浓度系列，用少量动物找出大致的死亡范围。
②再用2倍稀释的药物浓度每组4只动物寻找。
i=(lgDmax-lgDmin)/(n-1)5、剂型与给药（p136-137）（1）受试物应能溶于或混悬于适当的溶媒中。
若溶媒毒性未知，应设溶媒对照组，其给药容量与最高剂量组相等。
（2）给药方法：等体积或等浓度。
（3）给药体积：具体根据动物种属和给药途径来确定。
（表急性毒性试验常用动物单次给药的常用容量和最大容量p137）6、试验时限与量限（p137-138）（1）时限：致死迅速的受试物--24h致死较慢的化合物--3-7天（一般不超过14天）（2）量限：口服给药5g/kg注射给药2g/kg在此剂量下如无死亡出现，通常不必做更高的剂量7、毒效应观察7.1中毒症状（表格，不重要）7.2体重体重可以反映动物中毒后的整体变化。
体重改变的原因很多:①刺激或损伤消化道试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。
②腹泻，影响食物吸收和利用，体重也会减轻。
③影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。
所以，对存活动物尤其是对低于LD50剂量组的存活动物,应在观察期14天内称量其体重的变化,以便了解受试物引起毒效应的持续时间。
7.3病理检查及其他指标对死亡的动物均应及时进行大体解剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器取材做组织病理学检查。
对存活动物在观察期结束时进行大体病理检查．必要时做组织病理学检查。
根据试验需要可进一步扩大观察项目，如体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。
7.4死亡过程和死亡时间观察实验动物给药后的死亡过程，有助于探讨中毒的机制或动物中毒的死亡原因。
观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。
分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深入研究化学物的毒作用机制提供参考。
的计算方法五、LD501、统计学原理（了解，p139-141）2、计算方法（了解，p141-142）六、经典急性毒性试验的局限性1.消耗的动物量大2.获得的信息有限3.测得的LD50仅仅是一个近似值4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。
第三节其他急性毒性测定方法3R原则：替代（replace）、减少（reduce）、优化（refine）1、替代（是指使用其他方法而不用动物进行的试验或研究，或是使用没有知觉的试验材料代替神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法，包括：）①低级动物代替高级动物、小动物代替大动物。
②用组织学实验代替整体动物实验。
③用分子生物学方法替代动物实验。
④人工合成材料替代动物实验。
⑤计算机模拟替代动物实验。
利用数学及电脑模式来模拟动物各种生理反应。
2、减少减少是指在保证获取一定数量与精确度的数据信息的前提下，减少动物的使用量。
方法:通过使用适合的动物品种、品系和高质量的实验动物，改进实验设计、规范实验动物操作程序等，达到动物使用数量的减少。