真菌营养体观察与酵母菌死活细胞鉴别(实验死)

实验四

真菌营养体观察与酵母菌死活细胞鉴别

一、实验目的

1.掌握对真菌个体形态结构的观察方法；初步认识真菌的形态特征，巩固课堂知识，增强感性认识。

2.掌握对酵母菌的形态结构及出芽生殖方式的观察方法，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；认识酵母菌的基本形态特征。

二、实验原理

1.真菌个体形态结构的观察

霉菌是由复杂的菌丝体组成。它分为基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌的繁殖菌丝及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10微米)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。

2.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

⑴形态观察：

酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。因此用高倍镜观察即可。酵母细胞一般呈卵圆形。其繁殖方式比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖（仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖），有些酵母可形成假菌丝；有性繁殖通过接合形成子囊及子囊孢子。

⑵死活细胞鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。

三、实验步骤

1.霉菌个体形态结构的观察

⑴霉菌直接制片观察法：在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝；再放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地将菌丝分散开。盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。

2.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别：在载玻片中央滴加1滴0.1%美蓝染色液→无菌挑取一环酵母菌与美蓝染色液均匀→盖上盖玻片（制成水封片）→放置3分钟→高倍镜（×40）下观察酵母形态和出芽情况→30分钟后再观察

四、实验结果

1.绘图说明所观察的根霉菌、曲属菌、青霉属的形态特征图。

2.绘图说明所观察的酵母菌的形态特征图。

五、讨论分析

1.你主要根据哪些形态特征来区分毛霉菌和根霉菌在形态特征上的异同？

毛霉菌:营养体为无隔多核菌丝体,在营养菌丝上长出分枝或不分枝的孢囊

梗,顶端膨大形成孢子囊,有囊轴、囊领、无囊托,无匍匐枝、无假根,有性生殖

产生接合孢子,接合孢子外无附属丝。根霉菌：营养体为无隔多核的菌丝体,由

营养菌丝产生匍匐菌丝,以跳跃式蔓延生长,在匍匐丝交接处长出假根,上方长

出孢囊梗,顶端膨大成孢子囊,有囊轴,孢囊孢子,囊托,无囊领。

2.试比较曲霉属菌和青霉属菌无性结构的不同

曲霉属：在营养菌丝的足细胞上长出无隔的分生孢子梗,顶端膨大形成顶囊,在顶囊的表面上长出单层或双层小梗,在小梗顶端分化出串珠状的分生孢子。青霉菌：分生孢子梗从菌丝细胞长出,有隔有分枝,小梗有单轮或双轮生,双轮生中又分为对称和不对称。分生孢子梗的分枝和轮生组成了复杂的扫帚状分枝结构。在扫状枝上,最后一级分枝为产生串生链状分生孢子的小梗,呈瓶梗状,着生小梗的细胞叫梗茎,支持梗基的细胞叫副枝。分生孢子常为球形,椭圆形呈蓝绿色。

3.你主要根据哪些形态特征来区分酵母菌的形态特征？

酵母菌:营养体外形不同于一般霉菌，不形成菌丝，是圆形或卵圆形的单细胞真菌。部分酵母菌的菌营养体属“假菌丝”，是酵母菌出芽繁殖时，先在细胞一端生一小突起，叫生“芽”，当芽长到正常大小时，当不脱离母细胞而与母细胞相连接，在子细胞上又长出新芽，如此反复进行，最后成为具有发达或不发达分枝状的假菌丝。假菌丝与真菌丝不同，其两细胞间有一细腰，而不象真正菌丝横隔处两细胞宽度一致。

六、改进实验建议