醋酸菌培养基

基于固态培养基的醋酸菌扩大培养研究

ａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｉｇｏｎｇ６４３０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍ，ｔｈｅｅｘｐａｎｄｉｎｇｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｃｅｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａＡ１０ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｖｉｎｅｇａｒｆｅｒｍｅｎｔｅｄｇｒａｉｎｓｉｓｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｃｅｔｉｃ
第３９卷第４期２０１４年４月
中国调味
ＣｈｉｎａＣｏｎｄｉｍｅｎｔ
品
基础研究
基于固态培养基的醋酸菌扩大培养研究
郇阿梅，刘军，原海兵，韩志双
（四川理工学院生物工程学院，Ｉ￣Ｊｌｌ自贡６４３０００）
ａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｎｏｃｕｌｕｍｓｉｚｅ，ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｒａｔｉｏｏｆａｃｉｄａｎｄａｌｃｏｈｏｌｂｅｆｏｒｅｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｓｔｉ — ｒｉｎｇｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｎｅｘｐａｎｄｉｎｇｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｃｅｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａａｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．

微生物实验设计-醋酸菌

实验设计：醋酸菌的分离与纯化——生物科学2班秦琬莹辛吉瑀张博文一、实验目的学习醋酸菌的分离纯化、鉴定的原理。

掌握平板表面涂布法、平板划线法的分离技术。

二.实验原理1.菌种的分离纯化从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。

2.接种操作方法涂布平板法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

3. 结晶紫结晶紫是一种碱性染料，也一种极佳的精密酸指示剂，pH 0.5(绿)～2.0(蓝)~弱酸（蓝紫）~中性（紫色）~碱性（赭红色）；所以在醋酸菌分离纯化平板培养基中加入少量的结晶紫溶液，既不会影响醋酸菌的生长，又可根据变色圈的大小很快把产酸高的醋酸菌株分离出来。

二、材料、用品1.样品：食醋2.培养基：（1）分离纯化平板培养基葡萄糖1 g，酵母膏1 g，碳酸钙2 g，琼脂2g，水100mL，121℃灭菌20min，冷却至70℃加入4mL无水乙醇和0.5mL 0.02％结晶紫冰醋酸溶液。

（2）液态发酵培养基葡萄糖l g，酵母膏1.5 g，磷酸二氢钾0.05 g，硫酸镁0.05 g，水100 mL，pH6.5，灭菌后冷却至60 ℃以下加入无水乙醇3.5mL。

3.器材：接种环、冰箱、试管、培养皿、无菌玻璃涂棒、移液管、恒温培养箱、无菌操作台、高压灭菌锅等。

响应面法优化醋酸菌的发酵产酸培养基

发酵培养条件：５２０ｍＬ锥形瓶装液量５０ｍＬ，接
３个对醋酸产量影响显著的因素及其正负效应确定最
基金项目：北工业大学发酵工程省部共建教育部重点实验室２０湖０９年开放基金资助项目（０９ＪＯ）２０ＫＦＪ７收稿日期：０００９２１ —１ —０作者简介：文瑛（９４）女，北武汉人，士研究生，究方向：酸茵的选育、酵与应用研究；讯作者：雄，授。Ｅ孙１８一，湖硕研醋发通陈教～
两种菌属都能产生醋酸，同的是醋酸菌属氧化乙醇不
种量４，０静置培养５ｄ３℃ 。
１３方法．
能力强于葡萄糖，而葡萄糖杆菌属氧化葡萄糖能力强于乙醇，醋酸生产中用的大多是醋酸菌口。醋酸菌利］用细胞膜上的乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶氧化乙醇生成醋酸，乙醇和醋酸分别作为醋酸菌的碳源和代谢产物，浓度过高对醋酸菌细胞有毒害，些醋酸菌种在高醋有酸浓度的环境下还会启动氧化醋酸机制，而降低产反量¨ 。作者采用响应面法优化发酵培养基，定最佳３］确碳源、氮源以及其它营养因子的最适添加量，醋酸产使量得到较大的提高。
亿
与生物互程２１，ｏ２Ｎｏ１１８ｏ１Ｖ．

醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究

第2章醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究2.1引言醋酸菌包括醋酸杆菌属和醋酸单胞菌属[30]，又名醋酸细菌。

醋酸菌的细胞一般为杆状、直或者稍弯，也有少部分像椭圆形，由单个、成对或者成链状排列的，大小一般在0.6～0.8×1.0～3.0 μm。

醋酸菌没有芽胞是革兰氏阴性菌，它有的细胞是周生鞭毛种类，一般在液面上生长会形成较厚的菌膜。

黑色醋酸杆菌等为另一些种类的醋酸菌细胞是端生鞭毛。

醋酸菌的分布广泛，在未灭菌的醋、啤酒、黄酒中果酒，以及在果园的土壤中、葡萄或酸败食物表面中都有生长[31]。

醋酸菌是酿醋过程中不可缺少的。

醋酸菌在发酵过程中，会产生大量的醋酸和其他有机酸，而且还有醇类[32]。

本章节研究醋酸菌的分离鉴定和发酵条件，通过平板分离、革兰氏染色、产醋酸实验，并经生理生化鉴定和查阅伯杰氏手册，做出进一步鉴定。

2.2实验材料与方法2.2.1材料与仪器分离样品：取自湖北某果醋厂发酵的醋醅。

试验主要仪器设备型号及产地如表2.2.1.a。

表2.2.1.a主要仪器设备Tab 2.2.1.a Main instrument equipment主要仪器型号厂家生化培养箱双目生物显微镜分析天平手提式不锈钢蒸汽灭菌锅超净工作台精密数字式酸度计PYX-250S-ABME（BA/E3）BS224SDSX-280BSW-CJ-1FDpHS-3C长沙科技科力仪器德国莱卡北京化丰上海南鹏上海科技试验试剂：葡萄糖、酵母膏、甘油、无水乙醇(95%)、CaCO3、(NH4)2SO4、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、FeCl3、乙酸钙、乳酸钙、浓硫酸均为分析纯；琼脂食用级。

2.2.2培养基[33-37]表2.2.1.ｂ培养基成分表Tab 2.2.1.ｂMedium composition名称葡萄糖酵母膏无水乙醇(v/v)琼脂CaCO3备注⑴基础发酵培养基1%1%3%pH 4. 5⑵分离培养1%1%3%2%2%pH自然⑶斜面保藏培养基1%1%3%2%1%pH自然⑷液体保藏培养基1%1%1%pH自然⑸改进后的斜面液体保藏培养基1%1%3%2%1%pH自然⑹发酵培养基1%1%7%pH 4. 5⑺Horyer-Frateur培养基3%pH自然⑻GYC培养基10%5%2% 2. 5%pH自然⑼高糖培养基30%1%2%2%pH自然⑽生酮培养基3%2%甘油3%⑾产5-酮基葡萄糖酸盐培养基3%1%2%2%pH自然⑿氧化乙酸培养基1% 1% 2% 乙酸钙1% pH7.2⒀氧化乳酸培养基1% 1% 2% 乳酸钙2% pH7.0-7.2⒁乙醇培养基1% 3% 2% pH自然注：培养基⑸在斜面保藏培养基⑵上，30℃培养24 h，加入无菌碳酸钙，灌入并液体培养基到斜面上，至离管口2cm处，密封冷藏；培养基⑺其他成分有(NH4)2SO40.1%，K2HPO40.1%，KH2PO40. 01%，0.025%，FeCl30. 0005%；以上培养基均以121℃灭菌20 min。

常用培养基

1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖)，100g；Y easst extract (酵母膏)，10g ；CaCO3，20g；Agar (琼脂)，15g；Distilled water(蒸馏水) ，1000ml；Adjust(调)，pHto 6.8。

适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种。

2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) ，5g；Beef extract (牛肉膏)，30g；NaCl ，5g；Agar (琼脂)，15g ；Distilled water (蒸馏水)，1000mL；Adjust (调)，pH to 7.0-7.2 。

[Note]：When cultivation of Bacillus 5mg of to MnSO4.H2O may be added ..适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌。

3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4, 0.2g; K2HPO4,0.8g ;MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O，0.1ｇ；Ｎa2MoO4.2H2O，Trace(微量)；Y east axtract(酵母膏)，0.5g ；Mannitol(甘露醇)，20g ；FeCl3，Tract(微量) ；Distilled water (蒸馏水) ，1000ml；Agar (琼脂)，15g ；Adjust (调)，pH to 7.2。

各种培养基的配方

各种培养基的配方（全）培养基编号培养基名称培养基组份SICC0009 醋酸菌培养基(Ⅰ) 豆芽汁20%，葡萄糖1%，碳酸钙2%，乙醇2%，琼脂2%。

乙醇：杀菌后加入。

SICC0010 醋酸菌培养基(Ⅱ) 酵母膏0.5%，葡萄糖1%，碳酸钙2%，乙醇2%，琼脂2%。

乙醇：杀菌后加入。

SICC0011 乳酸菌培养基(Ⅰ) 蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，葡萄糖1%，番茄汁20%，土温-80 0.05%，PH 5.4( 0.4M醋酸钠缓冲液或醋酸调节)，琼脂2 %。

SICC0012 乳酸菌培养基(Ⅱ) 牛肉膏0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，葡萄糖1%，乳糖0.5%，氯化钠0.5%，琼脂2%。

SICC0013 乳酸菌培养基(Ⅲ) 100 Bx麦芽汁中加入酵母膏0.5%,无菌碳酸钙0.6%,琼脂1.5～2.0%。

SICC0014 脱脂牛奶培养基12%脱脂奶粉溶液于0.6㎏/cm2灭菌20分钟后,将灭过菌的脱脂牛奶置于30℃保温箱中培养3天,经检查确实无菌即可使用。

培养基编号培养基名称培养基组份SICC0001 60 Bx麦芽汁琼脂暂时无数据SICC0002 100 Bx麦芽汁琼脂暂时无数据SICC0003 120 Bx麦芽汁琼脂暂时无数据SICC0004 100 Bx米曲汁琼脂暂时无数据SICC0005 120 Bx米曲汁琼脂暂时无数据SICC0006 丁二醇培养基牛肉膏1%，葡萄糖1%，氯化钠0.5%，蛋白胨1%，PH7，琼脂1.5～2.0%。

SICC0007 异Vc钠培养基葡萄糖1%,磷酸氢二钾0.6%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.02%,玉米浆0.3%,氯化钠0.05%,蛋白胨0.5%, PH 6.7－7.0, 琼脂2%。

SICC0008 己酸菌培养基醋酸钠0.5%,磷酸氢二钾0.04%,硫酸镁0.02%,硫酸铵0.05%,酵母膏0.5%,乙醇2%,碳酸钙1%,琼脂2%。

乙醇：杀菌后加入。

146种常见微生物培养基配方(可打印版)

146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。

121℃灭菌20min。

3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液）100mL琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。

121℃灭菌30min。

6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

各种培养基配方

146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。

121℃灭菌20min。

查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rose100mLbengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。

121℃灭菌30min。

6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

醋酸菌

(一)醋酸菌概述:一、概念:醋酸杆菌(ACＥＴOＢACＴER)就是细菌,属于醋酸单胞菌属,细胞从椭圆到杆状,单生、成对或成链。

在老培养物中易呈多种畸形,如球形、丝状、棒状、弯曲等、幼龄菌呈革兰氏阴性,老龄菌不稳定。

二、特点:可产生乳白色得菌膜,代谢产物含有纤维素,味道有酸腥味,与酵母菌共生在一起培养有促进生长得作用,产生得醋酸可清理肠胃,帮助消化、三、分类:醋酸菌,即醋酸杆菌。

它有两种类型得鞭毛:一群就是周生鞭毛细菌,它们可以把醋酸进一步氧化成二氧化碳与水;另一群就是极生鞭毛细菌,它们不能进一步氧化醋酸。

两群都就是革兰氏阴性杆菌。

根据日本朝井勇宣分类,醋酸杆菌依其发育最适温度与特性分为两大类:一类发育适温在30度以上,氧化酒精为醋酸得称为醋酸杆菌(ACETOBACTER);一类发育适温在30度以下,氧化葡萄糖为葡萄糖酸得称为葡萄糖氧化杆菌(ＧLUＣＯNOBACTＥＲ)。

醋酸杆菌属(AＣＥＴOBＡCTＥR)在比较高得温度下(39--40度)可以发育,增殖得适温在３0度以下、主要作用就是氧化葡萄糖为葡萄糖酸,亦能氧化酒精生成少量醋酸,但不能氧化醋酸为二氧化碳与水。

四、醋酸菌得培养:醋酸菌属于好氧微生物培养醋酸菌时,需要用含糖或酵母膏(维生素B)得培养基,在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。

大多数菌株可用六碳糖与甘油作为碳源,对甘露醇与葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用,不分解乳糖、糊精与淀粉。

分布:醋酸菌分布广泛,在果园得土壤中、葡萄或其她浆果或酸败食物表面,以及未灭菌得醋、果酒、啤酒、黄酒中都有生长、五、用途:醋酸菌如果在糖源充足得情况下,可以直接将葡萄糖变成醋酸; 如果在缺少糖源得情况下,先将乙醇变成乙醛,再将乙醛变成醋酸;在氧气充足得情况下,能将酒精氧化成醋酸,从而制成醋。

(二)醋酸菌公司产品介绍:醋酸菌就是一类能够将乙醇氧化生成乙酸得革蓝氏阴性细菌,该菌来源于传统酿醋发酵物中,细胞形态为杆状,单个或呈链。

醋酸菌培育工艺流程

醋酸菌培育工艺流程英文回答：Acetobacter is a type of bacteria that is commonly used in the production of vinegar. The cultivation process of Acetobacter involves several steps to ensure optimal growth and vinegar production.Firstly, the cultivation medium is prepared. This medium typically consists of a carbon source, nitrogen source, minerals, and water. The carbon source can be ethanol or glucose, which provides the bacteria with energy for growth. The nitrogen source, such as ammonium sulfate or yeast extract, is essential for protein synthesis. Minerals, including potassium phosphate and magnesium sulfate, are added to provide essential nutrients for the bacteria. The medium is sterilized to eliminate any potential contaminants that could hinder the growth of Acetobacter.Once the medium is prepared, it is inoculated with Acetobacter culture. The culture is obtained from a previous batch of vinegar or a pure culture obtained from a laboratory. The inoculum is added to the medium and mixed thoroughly to ensure even distribution of the bacteria.The cultivation vessel is then sealed to create an anaerobic environment. Acetobacter is a facultative anaerobe, meaning it can grow in both aerobic and anaerobic conditions. However, in the initial stages of cultivation, an anaerobic environment is preferred to promote the growth of Acetobacter. This is because the bacteria first undergoes an ethanol oxidation phase, where ethanol is converted to acetic acid. This process is more efficient in the absence of oxygen.After the anaerobic phase, the cultivation vessel is opened to introduce oxygen. Acetobacter requires oxygen for the second phase of growth, which involves the conversion of acetic acid into vinegar. Oxygen is supplied either through aeration or agitation of the medium. The vessel is typically equipped with aeration devices or stirrers toensure sufficient oxygen supply.During the cultivation process, temperature and pH are carefully controlled. Acetobacter grows optimally at temperatures between 25-30°C. The pH of the medium is maintained between 4-6, as Acetobacter prefers a slightly acidic environment. pH can be adjusted using acid or base solutions as needed.The cultivation process typically takes several weeks to months, depending on the desired vinegar production. Acetobacter grows and produces acetic acid over time, gradually increasing the acidity of the medium. The vinegar production is monitored by regularly measuring the pH and acidity of the medium. Once the desired acidity is reached, the cultivation process is stopped, and the vinegar is harvested.中文回答：醋酸菌是一种常用于醋的生产中的细菌。

醋酸菌培养基的选择原理

醋酸菌培养基的选择原理
醋酸菌培养基的选择原理是根据醋酸菌的特性和生长需求设计的。

醋酸菌是一种厌氧菌，对氧气敏感，因此选择培养基时需要使用无氧培养基或低氧培养条件。

另外，醋酸菌是一种呈杆状或球杆状的革兰氏阴性菌，具有醋酸发酵能力。

因此，醋酸菌培养基需要含有醋酸作为碳源。

醋酸菌培养基的选择原理还需要考虑以下因素：
1. pH值：醋酸菌适宜生长的pH范围一般为4.0-6.0。

培养基的pH应根据醋酸菌的生长要求进行调整。

2. 氮源：醋酸菌需要氮源来合成蛋白质和其他生物分子。

常见的氮源包括硫酸铵、氯化铵和硝酸铵等。

3. 矿物元素：醋酸菌需要一些微量的矿物元素来维持生长和代谢活动。

常用的矿物元素包括钠、钙、镁、钾、铜、锌等。

4. 辅助因子：醋酸菌生长还需要一些辅助因子，如复合维生素溶液或特定激素等。

总之，醋酸菌培养基的选择原理是根据醋酸菌的生长需求，选择适合其生长和代谢的碳源、氮源、矿物元素和辅助因子，并提供合适的培养条件来满足醋酸菌的生长需要。

优良醋酸菌的分离纯化

产酸量（％）＝（ｖ—ｖ０）×ｃ。“０．０６ｘ１００％
衰１结晶紫溶液的呈色情况裹
Ｔ＿ｂｋｌｍ衄棚ｍＩ雌ｃ山ｒ酣瑚岫乜ｂｋ０ｆ霉即廿蚰ｖ｜ｏｍ帅●Ⅱ廿ＯⅡ０ｆ血ｅｍ嘲Ⅱｌ－ｅｄｍ日怔咖
式中，ｖ——发酵液样品滴定耗用的ＮａＯＨ量（ｍＬ）；
ｖｒ—－以空白培养基为对照滴定耗用的ＮａＯＨ量（ｍＬ）；
３０气、转速为１６０州ｎ恒温摇床培养。于不同的培养
加入无水乙醇３．５ｍＬｏ
时间，取上述发酵液测其产酸量。
１．３方法１．３．１醋酸菌分离纯化流程帅
１．３．６大米糖化液中的产酸试验方法同１．３．３，种子液不变，用取自味莼园酒精度
样品一醋酸菌发酵液中富集培养一稀释分离一纯６．３１４％（ｖ，ｖ）大米糖化液代替其液体发酵培养基。
Ｏ．ｏ卜消耗１ｃＭ广一ＮａＯＨ标准溶液浓度（ｍｏｌ∞；ｍＬ０．１ｍｏｌ，ＬＮａ０Ｈ溶液相当于乙酸的质量（ｇ）；１００盼——转化为百分含量的系数。１．３．３分离纯化
被捌物质的酸碱性Ａｃｉｄｉｔｙ跚ｄ正ｋａｌｉｎ奸
极强酸性Ｇ嘲婶８眦ｌＩＥ【ＩｌｅＩｌｅｄ们ｉｄ灯
强中酸强性酸ｓｈ性龃ｓ时吨ｈｃ∞ｎｅｄｉ日ｄ畸ｃｉｄｉ婶
１６０“ｌＩｌｉｎ恒温摇床培养４８ｈ。以６％的接种量接人盛
１．２．４液体种子及发酵培养基目
有５０ｍＬ液态发酵培养基的２５０ｍＬ三角瓶中（每个
葡萄糖ｌｇ，酵母膏１．５ｇ，磷酸二氢钾０．０５ｇ，硫酸镁０．０５ｇ，水１００ｍＬ，ｐＨ６．５，灭菌后冷却至６０ｔ以下
样做３个平行），接种时需充分振荡，以使菌液均匀，
4.期刊论文周秉辰.ZHOU Bingchen 食醋生产中醋酸菌乙醇脱氢酶的活性与产酸速率关系的研究 -中国酿造
2009,""(11)

醋制的实验报告

一、实验目的1. 掌握醋制的基本原理和方法。

2. 了解醋的成分及作用。

3. 学习醋的制备过程，提高实验操作技能。

二、实验原理醋是一种含有多种有机酸和微量元素的调味品，主要成分是醋酸。

醋制是一种利用醋酸发酵的原理，将原料经过醋酸菌的发酵，使其转化为具有酸味和香味的醋。

醋制实验主要分为以下步骤：原料选择、原料处理、醋酸菌培养、发酵、过滤、陈化等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）原料：大米、高粱、糯米等；（2）醋酸菌：醋酸杆菌；（3）培养基：葡萄糖、酵母粉、琼脂等；（4）其他：水、玻璃棒、烧杯、酒精灯、培养箱等。

2. 实验仪器：（1）显微镜；（2）酒精灯；（3）培养箱；（4）天平；（5）pH计；（6）玻璃棒；（7）烧杯。

四、实验步骤1. 原料选择与处理（1）选择新鲜、无霉变的大米、高粱、糯米等原料；（2）将原料洗净，浸泡一段时间，使原料充分吸水；（3）将浸泡好的原料磨成粉状，过筛，去除杂质。

2. 醋酸菌培养（1）制备培养基：按照培养基配方，称取葡萄糖、酵母粉、琼脂等，加入适量水，溶解后倒入培养皿中；（2）将培养皿放入培养箱，培养24小时，观察菌落生长情况；（3）挑选生长良好、形态正常的菌落，进行纯化培养。

3. 发酵（1）将处理好的原料与醋酸菌按一定比例混合，装入发酵瓶中；（2）将发酵瓶密封，置于恒温培养箱中，进行发酵；（3）定期观察发酵过程，记录pH值、温度等指标；（4）发酵时间一般为15-20天。

4. 过滤与陈化（1）发酵完成后，将醋液过滤，去除杂质；（2）将过滤后的醋液装入容器中，进行陈化，陈化时间一般为1-2个月；（3）陈化期间，定期检查醋液的酸度、色泽等指标。

五、实验结果与分析1. 实验结果（1）醋酸菌在培养基上生长良好，形态正常；（2）发酵过程中，醋液酸度逐渐升高，pH值下降；（3）发酵完成后，醋液色泽呈金黄色，酸度适中；（4）陈化过程中，醋液酸度、色泽等指标稳定。

2. 结果分析（1）醋酸菌发酵过程中，将原料中的糖分转化为醋酸，使醋液具有酸味；（2）发酵过程中，醋酸菌产生的醋酸具有抑菌作用，有利于醋液的保存；（3）陈化过程中，醋液中的有机酸、微量元素等成分逐渐稳定，使醋液口感更加醇厚。

醋酸菌培养基Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT培养醋酸菌用1.醋酸菌斜面培养基：葡萄糖1克，酵母膏1克，碳酸钙1克，琼脂克，水100毫升。

2.斜面培养斜面制作：培养基按配方调配好（碳酸钙先不加入），分装试管，灭菌备用。

碳酸钙按比例分装、灭菌。

摆斜面前将培养基和碳酸钙混合，用手搓均匀，然后摆斜面，备用。

()Glucose(葡萄糖)100gYeasstextract(酵母膏)10gCaCO320gAgar(琼脂)15gDistilledwater(蒸馏水)1000mlAdjust(调)适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种葡萄糖8g，酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水，分装试管。

灭菌20min。

95％酒精(食用级)40mL。

摆斜面，葡萄糖10g酵母粉水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)灭菌20min。

醋酸菌种的制备扩大培养过程：安瓿管，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL 三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。

3.3.1安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，对光观察摇动时有云雾状金属光泽。

每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。

三角瓶三级扩培，三角瓶中培养基的装量为50％，每级按种量在10％左右，在转换振荡器上恒温培养，培养温度均为30℃，时间依次缩短为36、36、24h，3.3.4种子罐培养基同前配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min，冷却后，先加入4％食用酒精，无菌操作接入菌种。

接种量为10％~12％，温度保持在30℃±1℃，通无菌空气，菌体生长时间为24~36h．视菌体生长情况及镜检结果而定每次接种前，先将菌种进行外观观察。

笋醋专用醋酸菌培养基的筛选

（１．ＨｕｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００４，Ｃｈｉｎａ；
２．ＦｏｒｅｓｔｙｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴａｏｊｉａｎｇＣｏｕｎｔｙ，Ｔａｏｊｉａｎｇ４１３４００，Ｃｈｉｎａ）
摘
要：采用平板涂抹法研究了不同培养基种类对醋酸菌生长效果的影响。结果表明：啤酒培养基培养醋酸杆菌
能缩短增殖时间，提高产酸量，常用培养基提高１．０７倍，培养时间缩短４ｈ。醋酸茵利用啤酒培养及在３Ｏ℃下培养２０ｈ，茵数可达９６０×１０ＣＦＵ／ｍＬ。关键词：醋酸茵；培养基；筛选
有对人体蛋白质组成非常重要的必需氨基酸，如赖氨
能，从而减轻疲劳。醋酸菌是食用醋生产过程中主要作用微生物，作用机制是将乙醇氧化为乙酸，即醋酸。醋酸菌为好气性菌，发酵在通气条件下进行，发酵温度一一般为２５～３０℃ ，醋酸菌培养需要氨基酸及维生素类物质，因此发酵液中除乙醇外还需添加酵母汁、曲汁或其它含氮
ｍｅｄｉｕｍａｔ３０℃ ｆｏｒ２０ｈ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｃｅｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｉａｒ；ｍｅｄｉｕｍ；ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ

醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究

第2章醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究2.1引言醋酸菌包括醋酸杆菌属和醋酸单胞菌属[30]，又名醋酸细菌。

醋酸菌的细胞一般为杆状、直或者稍弯，也有少部分像椭圆形，由单个、成对或者成链状排列的，大小一般在0.6～0.8×1.0～3.0 μm。

醋酸菌没有芽胞是革兰氏阴性菌，它有的细胞是周生鞭毛种类，一般在液面上生长会形成较厚的菌膜。

黑色醋酸杆菌等为另一些种类的醋酸菌细胞是端生鞭毛。

醋酸菌的分布广泛，在未灭菌的醋、啤酒、黄酒中果酒，以及在果园的土壤中、葡萄或酸败食物表面中都有生长[31]。

醋酸菌是酿醋过程中不可缺少的。

醋酸菌在发酵过程中，会产生大量的醋酸和其他有机酸，而且还有醇类[32]。

本章节研究醋酸菌的分离鉴定和发酵条件，通过平板分离、革兰氏染色、产醋酸实验，并经生理生化鉴定和查阅伯杰氏手册，做出进一步鉴定。

2.2实验材料与方法2.2.1材料与仪器分离样品：取自湖北某果醋厂发酵的醋醅。

试验主要仪器设备型号及产地如表2.2.1.a。

表2.2.1.a主要仪器设备Tab 2.2.1.a Main instrument equipment主要仪器型号厂家生化培养箱双目生物显微镜分析天平手提式不锈钢蒸汽灭菌锅超净工作台精密数字式酸度计PYX-250S-ABME（BA/E3）BS224SDSX-280BSW-CJ-1FDpHS-3C长沙科技科力仪器德国莱卡北京化丰上海南鹏上海科技试验试剂：葡萄糖、酵母膏、甘油、无水乙醇(95%)、CaCO3、(NH4)2SO4、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、FeCl3、乙酸钙、乳酸钙、浓硫酸均为分析纯；琼脂食用级。

2.2.2培养基[33-37]表2.2.1.ｂ培养基成分表Tab 2.2.1.ｂMedium composition名称葡萄糖酵母膏无水乙醇(v/v)琼脂CaCO3备注⑴基础发酵培养基1%1%3%pH 4. 5⑵分离培养1%1%3%2%2%pH自然⑶斜面保藏培养基1%1%3%2%1%pH自然⑷液体保藏培养基1%1%1%pH自然⑸改进后的斜面液体保藏培养基1%1%3%2%1%pH自然⑹发酵培养基1%1%7%pH 4. 5⑺Horyer-Frateur培养基3%pH自然⑻GYC培养基10%5%2% 2. 5%pH自然⑼高糖培养基30%1%2%2%pH自然⑽生酮培养基3%2%甘油3%⑾产5-酮基葡萄糖酸盐培养基3%1%2%2%pH自然⑿氧化乙酸培养基1% 1% 2% 乙酸钙1% pH7.2⒀氧化乳酸培养基1% 1% 2% 乳酸钙2% pH7.0-7.2⒁乙醇培养基1% 3% 2% pH自然注：培养基⑸在斜面保藏培养基⑵上，30℃培养24 h，加入无菌碳酸钙，灌入并液体培养基到斜面上，至离管口2cm处，密封冷藏；培养基⑺其他成分有(NH4)2SO40.1%，K2HPO40.1%，KH2PO40. 01%，0.025%，FeCl30. 0005%；以上培养基均以121℃灭菌20 min。

醋酸菌单因素实验

醋酸菌单因素实验
首先，需要搭建实验室，准备好所需要的仪器和材料，并按照实验要求准备实验用的试管。

其次，准备好用于测定醋酸菌数量的培养基以及DIH2O以清洗试管。

然后，从样品中取出一定量的样品放入加有培养基的试管中，并将用于比较的对照培养基也放入另一个试管中。

之后，将试管保温37℃，经24小时培养后，按照实验要求比较培养基中的醋酸菌数量，并以分泌葡萄糖醛酸作为指标判断在单因素处理下醋酸菌受不同处理的生长情况。

最后，将取出的培养基进行清洗，清洗完毕后安排放置待用。

醋酸菌培养基

培养醋酸菌用1.醋酸菌斜面培养基：葡萄糖1克,酵母膏1克,碳酸钙1克,琼脂2.5克,水100毫升;2.斜面培养斜面制作：培养基按配方调配好碳酸钙先不加入,分装试管,灭菌备用;碳酸钙按比例分装、灭菌;摆斜面前将培养基和碳酸钙混合,用手搓均匀,然后摆斜面,备用;3.AcetobacterMediumGlucose葡萄糖100gYeasstextract酵母膏10gCaCO320gAgar琼脂15gDistilledwater蒸馏水1000mlAdjust调pHto6.8适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种3.1葡萄糖8g,酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5,分装试管;0.IMPa灭菌20min;95％酒精食用级40mL;摆斜面,3.2葡萄糖10g酵母粉10gpH5.5水1000mL灭菌后加入酒精食用级40mL0.1MPa 灭菌20min;3.3醋酸菌种的制备扩大培养过程：安瓿管,液体试管1．液体试管2,100mL三角瓶,500mL三角瓶,1000mL三角瓶,种子罐;3.3.1安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次,用重器撞击,打开,注入0.5mL无菌水,将菌球溶解,全部注入装有10mL液体的18×180试管1内,30℃培养72h,每2h摇动—次3.3.2菌体生长：培养基变混浊后,颜色变浅,对光观察摇动时有云雾状金属光泽;每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液,30℃培养48h,每2h摇动—次;3.3.3三角瓶三级扩培,三角瓶中培养基的装量为50％,每级按种量在10％左右,在转换振荡器上恒温培养,培养温度均为30℃,时间依次缩短为36、36、24h,3.3.4种子罐培养基同前配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min,冷却后,先加入4％食用酒精,无菌操作接入菌种;接种量为10％~12％,温度保持在30℃±1℃,通无菌空气,菌体生长时间为24~36h．视菌体生长情况及镜检结果而定3.3.5每次接种前,先将菌种进行外观观察;有异样情况者,作涂片、染色、镜检观察,菌体生长不正常或染菌的三角瓶不得使用;外观正常者抽检2—3个样品,在确保菌株纯度、无污染的情况下转入下一级菌种扩培;培养醋酸菌时,需要用含糖或酵母膏维生素B的培养基,在肉汤蛋白胨培养基上生长不良;大多数菌株可用六碳糖和甘油作为碳源,对甘露醇和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用,不分解乳糖、糊精和淀粉;醋酸菌不形成芽孢,一般为形态近于球菌的短杆菌;醋酸菌可在PH4.3以下繁殖,增殖时多在液面成膜;幼龄细胞呈G-,老龄细胞呈可变性,因而染色只用来作为鉴定时的参考因素;醋酸菌增殖时生成挥发性酸臭;感官判断类似于一种丁香成分,和纯醋酸的嗅感不同;防止方法不外呼改善工厂的环境卫生,加强卫生管理什么的;但是它也是很好控制的：1好气性菌,尽可能降低密封容器的溶解氧效果明显2.降低PH值基本无效;3.污染主要在5,6月份发生;4.与容器有关,塑料容器要比玻璃瓶容易感染,可能与塑料容器的透氧性有关;5.醋酸菌不形成芽孢,故耐热性不强,65℃5~10分钟即可杀死;所以综合来看醋酸菌不是很难控制的;。

醋酸菌培养基

基于固态培养基的醋酸菌扩大培养研究

微生物实验设计-醋酸菌

响应面法优化醋酸菌的发酵产酸培养基

醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究

常用培养基

各种培养基的配方

146种常见微生物培养基配方(可打印版)

各种培养基配方

醋酸菌

最新110种培养基配方

醋酸菌培育工艺流程

醋酸菌培养基的选择原理

优良醋酸菌的分离纯化

醋制的实验报告

醋酸菌培养基

笋醋专用醋酸菌培养基的筛选

醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究

醋酸菌单因素实验

醋酸菌培养基