常用乳酸菌培养基

双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

BBL培养基双歧杆菌选择性培养基成份蛋白胨15.0g酵母粉2.0g葡萄糖20.0g可溶性淀粉0.5g氯化钠5.0g5%半胱氨酸10.0mL西红柿浸出液400.0mL吐温80 1.0mL肝提取液80.0mL琼脂20.0g蒸馏水520.0mLpH7.0MRS培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨10.0 g牛肉膏10.0 g酵母膏 5.0 g柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] 2.0 g葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g吐温80 1.0 mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O） 5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） 2.0 g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58 g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25 g琼脂18.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 6.2~6.6当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH 值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。

2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享奉上一篇实验，以供参考！厌氧菌的分离和培养目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。

这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。

以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。

而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。

亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。

乳酸菌生长最佳培养基的筛选

乳酸菌生长最佳培养基的筛选摘要：文中通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基。

实验表明,在添加胡萝卜汁的乳酸菌分离固体培养基上,乳酸菌生长最好,活菌数含量最高,菌落和溶钙圈最大。

同种培养基,半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长,前者出菌快,活菌数多。

关键词：乳酸菌固体培养基半固体培养基菌落乳酸菌是有益于人体健康的益生菌,主要存在于人体肠道,其有助于宿主调整正常菌群,维持肠道微生态环境的平衡。

乳酸菌的代谢产物能降低肠道内的pH值,抑制肠道中腐败菌的生长和减弱腐败菌在肠道的产毒作用,并有帮助消化、防止便秘,防止细胞老化,降低胆固醇,抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用[1-5]。

在食品向天然型、功能型发展的今天,乳酸菌制品正愈来愈受到人们的重视,通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数,菌落和溶钙圈的大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基,用于乳酸菌制品的研究与开发一、材料及方法111菌种及来源保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus),由西北农业大学微生物室提供。

(以下简称乳酸菌)。

112培养基11211固体培养基的筛选RJP培养基(1号):牛肉膏3g;蛋白胨3g;酵母膏3g;乳糖20g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH610。

LAB培养基(2号):牛肉膏10g;酵母膏10g;乳糖20g;琼脂15g;吐温80110ml;CaCO310g;KH2PO42g;蒸馏水950ml;pH616。

214号培养基(3号):牛肉膏3g,胰胨10g;NaCl5g;酵母膏6g;葡萄糖2g;半胱氨酸013g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH714~715乳酸菌分离培养基(4号):牛肉膏1g;蛋白胨1g;酵母膏1g;葡萄糖1g;蕃茄汁20%;吐温800105%;CaCO32g;溴甲酚绿0101%;琼脂115g;蒸馏水100ml;pH615。

发酵实验报告三、乳酸菌的分离和酸奶的制作

发酵工程学实验报告实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作学院生命科学学院专业应用生物教育班级12应生A班姓名李顺昌学号124120218实验课程乳酸菌的分离和酸奶的制作指导教师许波开课学期2014—2015学年下学期实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作小组合作：是小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤一、实验目的1.掌握分离纯化微生物的基本方法2.掌握酸奶制作的基本原理3.学会酸奶的制作方法二、实验设备与材料1、仪器设备：三角瓶、平皿、试管、移液管、玻璃涂布棒、灭菌锅、超净工作台、培养箱、恒温摇床、冰箱等。

2、材料：市售酸奶、奶粉、白糖、棉花、酸奶瓶（自备，1个/人）等。

3、培养基：乳酸菌分离用乳酸菌分离用培养基：牛肉膏：0.5％；酵母膏：0.5％；蛋白胨：1％；葡萄糖：1％；乳糖：0.5％；NaCl：0.5％；琼脂：2.5％；pH6.8。

配制250mL/组，装于2个三角瓶三、实验原理1、酸奶制作的基本原理（1）酸奶：以牛奶为主要原料，接入一定量乳酸菌，经发酵后制成的一种乳制品饮料。

（2）生理生化原理牛奶（乳糖）→接种乳酸菌→β-D-半乳糖苷酶→乳糖（半乳糖和葡萄糖）→乳酸发酵（葡萄糖）→乳酸→破坏钙-酪蛋白-磷酸复合物的稳定性→蛋白质凝结→酸奶2、提供适宜的生长条件、采用一定的微生物分离纯化方法，就能够从酸奶中分离出乳酸菌。

3、酸奶中含有乳酸菌的菌体及代谢产物，因而对人体的肠胃消化道疾病有良好的治疗效果。

四、实验方法步骤（一）乳酸菌的分离纯化——稀释涂布平板法1、倒平板（约6块/100ml）2、制备酸奶稀释液（1）将0.5mL酸奶吸入4.5mL无菌水（自备）中，摇动5min；（2）用无菌吸管吸出0.5mL酸奶悬液，加入盛有4.5mL无菌水的试管中，充分混匀，制备得到10-2稀释液；（3）再从中吸出0.5mL加入盛有4.5mL无菌水的大试管中，混匀后得到10-3稀释液；（4）以此类推，分别制备得到10-4、10-5、10-6酸奶稀释液。

乳酸菌的分离与纯化实验报告

乳酸菌的分离与纯化实验报告一、实验目的：1. 掌握乳酸菌的分离与纯化方法；2. 学习乳酸菌的形态特征及生长特性；3. 熟悉微生物实验室操作规范和安全注意事项。

二、实验原理：乳酸菌属于革兰氏阳性细菌，可以利用革兰染色方法进行初步鉴定。

乳酸菌的形态特征有很大差异，有的呈短杆状、短圆柱状，有的呈梭形或球形。

乳酸菌的培养基选择要根据实验目的而定，一般常用的是MRS培养基。

常规乳酸菌分离方法有两种：血漂白法和渐进稀释法。

血漂白法是用过氧化氢或次氯酸钠等对血液进行漂白处理后加入培养基进行分离，由于血液中含有多种抑菌物质，故需漂白处理后方能使用。

渐进稀释法则是将混菌液逐步稀释后按一定比例接种于选定的培养基上，经过多次传代，可得到单一的菌落。

三、实验步骤：1. 取适量样品加入1ml生理盐水中，充分摇匀。

2. 再从上述稀释液中取出1ml加入9ml生理盐水中，得到10-2悬液。

3. 再抽取1ml悬液加入9ml生理盐水中，得到10-3悬液。

4. 分别取适量的10-2和10-3悬液接种于MRS培养基上，并分别转移多次，培养时间一般为24-48小时，必要时可延长到72小时。

5. 分离菌落后进行鉴定。

四、结果及分析：实验结果显示，经过分离培养，从10-2和10-3悬液中分别分离出了多个菌落，经过重复转移，逐步稀释，最终获得了单一的菌落，可见分离培养方法的有效性和行之有效的可行性。

鉴定乳酸菌的一般方法包括形态学鉴定、生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。

形态学鉴定包括形态、大小、形状和染色等方面；生化特性鉴定则主要包括代谢途径、酸产生量和果糖发酵能力等；分子生物学鉴定则是通过特异性引物扩增菌株中的核酸，进行分子水平鉴定。

五、实验心得：本次实验通过乳酸菌分离、培养和鉴定的过程，使我对乳酸菌的形态特征、生长特性和鉴定方法有了更深入的了解。

同时，要时刻注意实验室的操作规范和安全问题，确保实验顺利进行。

在今后的实验中，我将更加重视实验操作的规范性和安全性。

146种常见培养基的配方

146种常用培养基配方THE COMPOSITION OF MEDIA培养基及成分1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10gCaCO3 20g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2[Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation .适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8gMgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1gNa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5gMannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量)Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15gAdjust (调) pH to 7.2适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基)Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1gGlucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml[Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃ for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃ for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。

乳酸菌菌种的分离筛选原理

乳酸菌菌种的分离筛选原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，广泛应用于食品、饲料、医药等领域。

乳酸菌菌种的分离筛选是乳酸菌应用研究中的重要一环，其目的是从大量的混合菌群中筛选出具有优良特性的菌株。

乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括以下几个方面：1. 选择合适的培养基：乳酸菌菌种对营养要求较高，因此选择适宜的培养基是分离筛选的首要步骤。

常用的培养基有MRS培养基、DC培养基等，它们含有适宜乳酸菌生长的营养成分，能提供所需能量和营养物质。

2. 适宜的培养条件：乳酸菌对培养环境的温度、pH、氧气和二氧化碳等条件有一定要求。

通常情况下，乳酸菌分离筛选需要在适宜的温度（一般为30-40）下进行，pH值保持在4.5-7.0之间，氧气和二氧化碳含量适中。

3. 分离方法：乳酸菌菌种的分离常采用传统的分离培养技术，如层析法、稀释平板法、摇瓶培养法等。

其中，层析法是一种常用的快速分离方法，通过将混合菌群在筛选培养基上涂抹或刺激，使不同菌株在筛选培养基上形成分离的菌落。

4. 鉴定鉴别：乳酸菌菌种的筛选与鉴定是不可分割的一步，只有确定菌株的种属和特性才能真正确认其乳酸菌的菌种类型。

目前，常用的鉴定方法包括形态学观察、生理和生化特性检测、分子生物学方法（如PCR技术、16S rDNA序列分析）等。

在乳酸菌菌种的分离筛选过程中，还需要注意以下几个问题：1. 选择样品：样品的选择对于乳酸菌菌种的分离筛选至关重要。

通常情况下，从乳制品、肠道、土壤等环境中寻找潜在的乳酸菌菌种，可以提高分离到优良菌株的几率。

2. 优化培养条件：对于特殊的乳酸菌菌种，可能需要优化培养条件，如调整温度、添加特定的营养成分等，以促进其生长和繁殖。

3. 评价筛选结果：乳酸菌菌种的分离筛选结果需要综合考虑其特性和应用价值。

如菌株的酸奶生产能力、耐酸碱能力、抗菌能力、抗氧化能力等。

总结起来，乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括选择合适的培养基和培养条件、采用适当的分离方法和鉴定鉴别技术。

乳酸杆菌

分布区域
乳酸杆菌广泛分布于周围的环境中，特别是动物的消化道、阴道。
为革兰氏阳性杆菌，常呈链状排列，无动力，不形成芽胞，微需氧或厌氧，营养要求严格，较难培养。常见于牛乳、乳制品，肉制品、啤酒、葡萄酒、水果及果汁，泡菜及麦芽汁中。也寄生于人和动物的口腔、肠道、阴道中。极少有致病性。
代表菌种
乳酸乳杆菌
广泛分布于自然界，有些菌株是人和动物口腔、肠道及阴道的正常菌群之一，很少致病，除极偶尔引起亚急性细菌性心内膜炎外，对人基本无害。寄生于口腔的乳酸杆菌在龋齿发生中起重要作用。一般认为寄生于肠道和阴道的乳酸杆菌对机体有保护作用某些乳杆菌如嗜酸性乳杆菌、保加利亚乳杆菌，常用于饮料的发酵工业。
已经从动物粪便、阴道分泌物、奶酪、酸菜等分离到40多种乳酸杆菌，它们共同属于乳酸杆菌属。它们能拮抗致病菌，有助于维持机体对抗原的细胞和体液免疫反应。所有乳酸杆菌广泛地应用于腌制泡菜、制作酸奶、青贮饲料等加工工业。
主要价值
乳酸杆菌在维护人和高等动物机体健康方面具有重要的作用。在营养生理方面，乳酸杆菌可提高蛋白质、乳糖和钙等营养物质的消化吸收，可产生多种维生素为机体消化吸收所利用；可抑制肠道内腐败菌、致病菌的繁殖，降低血氨和血中胆固醇的含量，并具有维持肠道内菌群平衡的整肠作用。乳酸杆菌具有免疫调节作用，如能明显促进细胞分裂、促进抗体产生、活化巨噬细胞，诱导产生干扰素等，提高机体的抗病能力。乳酸杆菌对巨噬细胞具有活化作用，使巨噬细胞的细胞毒性增强。而且乳酸杆菌还能诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生IL-12， IL-18和γ-干扰素，从而诱导产生Th1型细胞免疫反应。此外，乳酸菌能抑制羟甲基戊二酸辅酶A还原酶，减少肠道胆固醇的吸收，从而降低体内的胆固醇含量。很多研究也已证明乳酸菌具有降低血清胆固醇和甘油三酯的作用。乳酸杆菌对胃上皮细胞有高度的亲和力，可通过与病原菌竞争黏附位点，产生乳酸、乙酸、乙酸醋酸等有机酸，大量分布在消化道黏膜，对病原菌的黏附起屏障作用等机制拮抗病原菌，并产生有机酸细胞素样蛋白等物质和影响细菌毒物产生的相关代谢，对胃肠道起保护作用。值得指出的是，乳酸杆菌的作用具有株的特异性，即使是传统认为安全的乳酸杆菌菌种也不能保证种内所有菌株均安全，因此对乳酸杆菌进行鉴定和检测非常重要。

双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

BBL培养基双歧杆菌选择性培养基成份蛋白胨酵母粉葡萄糖可溶性淀粉氯化钠5%半胱氨酸西红柿浸出液吐温80肝提取液琼脂蒸馏水MRS培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨 g牛肉膏 g酵母膏 g柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] g葡萄糖(C6H12O6·H2O) g吐温80 mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O） g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） g硫酸镁（MgSO4·7H2O） g硫酸锰（MnSO4·H2O） g琼脂 g蒸馏水 1 000 mLpH ~当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。

2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享奉上一篇实验，以供参考！厌氧菌的分离和培养目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。

这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。

以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。

而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。

亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。

1材料样品双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。

培养基改良MRS培养基，PTYG 培养基。

仪器和器具亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。

2 流程铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数3方法铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。

常用乳杆菌培养基整理

培养基名称
用途
原理
改Hale Waihona Puke 番茄汁培养基用于食品中乳酸菌总数测定
番茄汁可提供碳源、蛋白质等营养物质；牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
MRS肉汤
用于乳酸菌增菌培养
蛋白胨、肉膏、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸氢二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌。
MRS琼脂
用于食品中乳酸菌总数测定
蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸氢二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
APT琼脂
用于乳酸菌分离培养
酪蛋白胨、酵母浸粉、提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸钠、硫酸镁、盐酸硫胺素、氯化锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
MC培养基
用于食品中乳酸菌检测的
APT肉汤
用于异质发酵乳酸杆菌和其它需高含量盐酸硫酸胺素菌的培养。
酵母浸粉、蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子，葡萄糖是可发酵糖，氯化钠维持均衡的渗透压，磷酸盐是缓冲剂。
Rogosa琼脂（RogosaAgar）
大豆蛋白胨、牛肉浸粉和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。乳酸球菌和乳酸杆菌在本培养基上典型特征为红色,有明显溶钙环

乳酸菌培养及诱导培养基

嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[J]. 中国酿造，20091、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0 g脱脂奶粉，蒸馏水100 mL，pH自然，115℃灭菌20 min。

2、MRS固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，无水乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.33g，琼脂15g，pH 6.8左右，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min。

3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。

1 出发菌株的活化及纯化保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体MRS培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。

划线接种到MRS固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖*。

长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。

嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在MRS琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。

10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。

革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。

肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。

1）500mL MRS液体培养基2）5个250mL的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个接种环，酒精灯，打火机，酒精2 种子的制备活化的菌种接种于基础培养基，于36℃恒温培养24 h，保藏备用。

增菌培养基最佳接种量为3%（活菌数为108个/mL）★3 产酶诱导培养用脱脂乳配成12%的产酶液体培养基，每250mL三角瓶中装入100mL(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，加入1mL吐温80，115℃灭菌30 min后，接入2 mL 种子液(每mL含菌体5×108个)，36℃培养36h。

乳酸菌菌种的分别挑选方法

乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。

为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。

营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。

在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。

通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。

乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。

当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。

对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。

M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。

嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。

其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。

粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。

乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。

革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。

在MRS培养基上菌落小，呈白色。

沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。

乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。

分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。

培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。

乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。

分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。

也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。

一.筛选方法：1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。

其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。

筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。

MRS培养基的组织成分（百度知道）：组成成重量(g)牛肉蛋白粉 10鱼肉汁 10酵母浸出汁粉 5葡萄糖 20醋酸钠 5柠檬酸二铵 2吐温80 0.1硫酸镁 0.58硫酸锰 0.28蒸溜水 1000ml备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4 1．改良的MRS培养基（用于保加利亚乳杆菌的生长繁殖）：胰陈10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温80ml、K2HPO42g、乙酸钠5g、柠檬酸胺2g、MgSO4·7H2O 0.02g、MgSO4·4H2O 0.05g、蒸馏水1000ml、pH(5.6～5.8)。

3. 葡萄糖-酵母膏培养基（用于嗜热链球菌的生长繁殖）：酵母膏 2.5g, 蛋白胨5g, 葡萄糖1g, 蒸馏水1000ml ,pH7.0。

4. 改良M17基础培养基(用于嗜热链球菌的平板计数):胰陈10g、牛肉膏5g、酵母膏2.5g、磷酸甘油二钠10g、MgSO4·7H2O 0. 25g、异维C0.5g、琼脂15g、蒸馏水950ml、pH(7.1～7.2)。

2. M17培养基(2号)：大豆胨5g；蛋白胨2.5g；酪蛋白胨2.5g；酵母浸粉2.5g；牛肉粉5g；乳糖5g；抗坏血酸钠0.5g；β-甘油磷酸钠19g；MgSO 4 0.25g；琼脂12.75g；蒸馏水1000ml，pH7.0～7.4；121℃，15min灭菌。

LBS培养基(5号)：酵母浸粉5g；胰酪蛋白胨10g；葡萄糖20g；柠檬酸铵2g； KH2PO4 6g；FeSO40.034g；MgSO40.575g；CH3COONa 25g；MnSO40.12g；Tween80 1ml；冰乙酸1.3ml；蒸馏水1000ml，pH5.5±0.2；118℃，15min灭菌。

改良MC琼脂（g/l）：用于乳酸菌的培养和计数。

大豆蛋白胨5.0，牛肉膏粉5.0，酵母粉5.0，葡萄糖20.0，乳糖20.0，碳酸钙10.0，琼脂粉14.0，中性红0.05，pH6.0±0.1，121℃、15分钟灭菌SL培养基：蛋白胨 10g；酵母粉 5g；葡萄糖 20g；柠檬酸二铵 2g；醋酸钠 25g；硫酸镁 0.58g；硫酸锰 0.15g；吐温-80 ml；磷酸二氢钾 6g；硫酸亚铁 0.03；琼脂 15——20gElliker琼脂培养基（用于乳球菌的分离）：胰蛋白胨 20g；蔗糖 5.0g；酵母粉5g；氯化钠 4.0g；明胶 2.5g；乙酸钠 1.5g；葡萄糖 5g；抗坏血酸 0.5g；乳糖 5.0g；琼脂 15—20g明串球菌的分离和培养，选择性培养基：1.HP培养基植物蛋白胨 20g；柠檬酸铵 5g；酵母粉 6g；硫酸亚铁 0.04g；牛肉膏 10g硫酸镁 0.2g；吐温80 1ml；硫酸锰 0.05g；葡萄糖10g2.蔗糖硫胺培养基蔗糖 100g ；磷酸氢二钾 5g；酵母粉 2.5g；硫酸镁 0.2g；硫酸铵 0.2g；氯化钠 0.6g；琼脂 15—20g友情提示：本资料代表个人观点，如有帮助请下载，谢谢您的浏览！。

微生物实验室常见20种培养基配方大全

微生物实验室常见20种培养基配方大全1.肉汤培养基成分：牛肉膏或牛肉汤500克，葡萄糖10克，胰蛋白胨10克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于各种需有机氮源的细菌的培养。

2.十倍腌盐水成分：NaCl300克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于耐盐真菌和嗜盐细菌的培养。

3.果胶培养基成分：果胶5克，葡萄糖5克，NaNO32克，K2HPO40.2克，MgSO4·7H2O0.1克，CaCO30.02克，FeSO4·7H2O0.01克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于果胶酶产生菌的培养。

4.大肠杆菌选择性培养基成分：土豆提取物4克，蛋白胨2克，乳糖10克，NaCl10克，胆盐0.75克，碱性蓝2克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于分离大肠杆菌的选择性培养。

5.卡波培养基成分：石蜡300克，肉浸膏100克，大豆酪蛋白胨20克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于致病真菌的培养。

6. Nutrient Broth培养基成分：肉膏1克，酵母提取物2克，葡萄糖2克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于细菌和真菌的常规培养。

7. Luria-Bertani（LB）培养基成分：酵母提取物5克，酪蛋白胨10克，NaCl10克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于E. coli等细菌的培养。

8. Sabouraud葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖40克，醇20克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于真菌的培养。

9. MacConkey琼脂培养基成分：鱼精膏20克，胆盐胆红素15克，玛琪琼脂25克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于肠道杆菌的培养、分离。

10.马加提琼脂培养基成分：马加提琼脂50克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于细菌、酵母和霉菌的常规培养。

11.酵母醇葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖20克，醇30克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。

乳酸菌培养及诱导培养基

乳酸菌培养及诱导培养基嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[j].中国酿造，20211、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0g脱脂奶粉，蒸馏水100ml，ph自然，115℃杀菌20min。

2、mrs固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，浓硫酸乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，mgso47h2o0.58g，mnso4h2o0.33g，琼脂15g，ph6.8左右，加蒸馏水至1000ml，121℃灭菌20min。

3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。

1启程菌株的活化及提纯保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体mrs培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。

划线接种到mrs固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖。

长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。

嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在mrs琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。

10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。

革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。

肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。

1）500mlmrs液体培养基2）5个250ml的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个注射环路，酒精灯，打火机，酒精2种子的制备活化的菌种注射于基础培养基，于36℃恒温培育24h，中草药水泵。

增菌培养基最佳注射量为3%（活菌数为108个/ml）★3产酶诱导培养用脱脂乳硝酸锶12%的产酶液体培养基，每250ml三角瓶中放入100ml(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，重新加入1ml吐温80，115℃杀菌30min后，互连2ml种子液(每ml含菌体5×108个)，36℃培育36h。

乳酸菌生长最佳培养基的筛选

乳酸菌生长最佳培养基的筛选Prepared on 22 November 2020乳酸菌生长最佳培养基的筛选摘要：文中通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基。

实验表明,在添加胡萝卜汁的乳酸菌分离固体培养基上,乳酸菌生长最好,活菌数含量最高,菌落和溶钙圈最大。

同种培养基,半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长,前者出菌快,活菌数多。

关键词：乳酸菌固体培养基半固体培养基菌落乳酸菌是有益于人体健康的益生菌,主要存在于人体肠道,其有助于宿主调整正常菌群,维持肠道微生态环境的平衡。

乳酸菌的代谢产物能降低肠道内的pH值,抑制肠道中腐败菌的生长和减弱腐败菌在肠道的产毒作用,并有帮助消化、防止便秘,防止细胞老化,降低胆固醇,抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用[1-5]。

在食品向天然型、功能型发展的今天,乳酸菌制品正愈来愈受到人们的重视,通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数,菌落和溶钙圈的大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基,用于乳酸菌制品的研究与开发一、材料及方法111菌种及来源保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus),由西北农业大学微生物室提供。

(以下简称乳酸菌)。

112培养基11211固体培养基的筛选RJP培养基(1号):牛肉膏3g;蛋白胨3g;酵母膏3g;乳糖20g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH610。

LAB培养基(2号):牛肉膏10g;酵母膏10g;乳糖20g;琼脂15g;吐温80110ml;CaCO310g;KH2PO42g;蒸馏水950ml;pH616。

214号培养基(3号):牛肉膏3g,胰胨10g;NaCl5g;酵母膏6g;葡萄糖2g;半胱氨酸013g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH714~715乳酸菌分离培养基(4号):牛肉膏1g;蛋白胨1g;酵母膏1g;葡萄糖1g;蕃茄汁20%;吐温800105%;CaCO32g;溴甲酚绿0101%;琼脂115g;蒸馏水100ml;pH615。

乳酸菌的培养和生理功能-2019年文档

乳酸菌的培养和生理功能乳酸菌和人类的生活有密切的关系，它是一类能利用糖类并产生乳酸的细菌，主要以无芽孢、革兰氏染色阳性细菌为主，目前大致可分为18 个属，共有200 多种。

除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。

随着研究的深入，乳酸菌对人类的贡献被越来越多的人认同并惊讶，也使更多的人尝试培养利用乳酸菌。

一、乳酸菌的培养1．乳酸菌的家庭培养家庭乳酸菌的培养其目的常常不是为了获得优质菌种，而是为了食用。

所以乳酸菌的产生常不单单是乳酸菌，往往有其他的杂菌。

它们都是某种食物的伴生产品。

主要有以下几种产菌方式：(1)自制酸奶产菌。

原料纯牛奶、原味酸奶4：1。

在消毒过的容器中倒入牛奶 (加热消毒放温过) ，在温牛奶中加入酸奶，用勺子搅拌均匀，盖盖。

然后保温发酵8〜10小时后，乳酸菌大量生成，此时食用口感佳。

( 2)酸菜制菌法。

在洗干净的非金属容器中码入去了老帮的白菜，压实，然后加满开水加一点盐，不加也行，用石头压上，防止白菜漂起，不要让白菜露出水面，把容器口用塑料膜封好与空气隔绝。

放置在10〜20C且20天以上，温度越高发酵时间越短。

酸菜的发酵是乳酸杆菌繁殖的过程，乳酸杆菌是厌氧菌，霉菌杂菌是需氧菌，加开水就是为了把水中的氧气清除掉，让其他菌无法繁殖，给乳酸杆菌创造生存条件，用塑料膜封口是为了防止空气重新溶入水中，酸菜经乳酸杆菌 (乳酸菌是对人有利的菌) 发酵后，产生大量乳酸，食用口感好。

在我国也有大量人群食用泡菜，其制作原理和泡菜类似也可产生大量乳酸菌，只不过要加入更多的辅料。

2．乳酸菌的实验室培养主要方法是把菌种种植于不同的培养基中，乳酸菌的培养基有很多种，依据不同的菌种而定，大多数乳酸菌在37〜42C下培养，［1］现列举常用培养基如下：(1)MRS培养基成分：蛋白胨10.0g ，牛肉粉5.0g ，酵母粉4.0g ，葡萄糖20.0g，吐温80 1.0mL，K2HP04•7H2O 2.0g 醋酸钠•3H2O5.0g ，柠檬酸三铵2.0g ，MgSO4•7H2O0.2g ，MnS04•4H2O 0.05g 琼脂粉15.0g，pH值为6.2。

工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方

工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方产品要菌体,菌种是复合菌种,做进一步的发酵用的,十分感谢!其实工业培养基跟实验室培养基只是说原料粗糙度或者说是原料选择的区别,品级不一样而已,要看楼主对于乳酸菌培养的要求了,比如楼主是要做高密度培养呢,还是直接就获取代谢产物,菌体离心收集后洁净度是否要高,还有发达就是楼主选择的工艺是否时候使用低品级的工业培养基呢,这些问题需要综合考虑才能最后定论培养基的内容。

1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克,蛋白胨1.0克,氯化钠0.5克,琼脂1.5克,水100毫升在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。

待NDS烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。

等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二马铃薯培养基取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。

在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。

过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。

每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。

配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。

2、放线菌培养基配方一淀粉琼脂培养基(高氏培养基)可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。

在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。