大鼠海马损毁与学习记忆进展
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缺点： 冲击后装置内压力不能立即释放，脑组织可再次受 损伤，伴有不同程度局部脑挫伤的弥漫性脑损伤，挫伤范围及 周围水肿程度随打击力度增加而增大。如果想对海马结构进 行有效打击，则液 压 打 击 部 位 的 选 择 和 打 击 力 度 的 控 制 尤 为 重要。如不加以重视，则会对海马以外脑组织造成较大范围损 伤，加重大鼠意识及运动功能等障碍，掩盖因海马结构损伤所 致的学习记忆功能障碍，致使实验结果不准确。如果打击冲击 道波和（ 或） 经过鼠脑中线部位，甚至会对脑干、丘脑等重要结 构造成直接损害，明显增加实验组大鼠的伤情和死亡率。
海马是边缘系统重要组成部分，参与了情绪、学习和记忆、 行为、免疫等的调节，目前发现成年海马神经发生可能有几种 潜在的功能，包括学习和记忆的适应作用、对新环境的适应、与 低沉情绪的潜在联系以及对损伤的可能反应〔1〕。海马结构和 功能的研究是当前脑科学领域研究的热点，损毁法是研究脑海 马功能定位的常用方法之一。
大鼠海马损毁与学习记忆研究进展
黄晓科 银晓勇 黄艳秋1 李艳君1 （ 河北省峰峰集团邯郸医院海马损毁模型 〔中图分类号〕 R74 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 1005-9202（ 2012） 10-2199-03； doi： 10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2012. 10. 108
胡谋先等〔4〕用手术的方法直接横切大鼠双侧隔一海马通 路。腹腔麻醉大鼠，固定于脑立体定位仪上，用一把三面有刃 的特制刀片在前囟后 1. 8 mm、距中线 1 mm，自颅骨表面垂直插 入 5 mm 横切距离 4 mm 切断双侧海马伞及部分穿隆。术后大 鼠记忆力显著下降。He 等〔5〕采用单侧弯窿伞损伤，主要破坏
目前海马毁损的实验动物模型的滞后制约了海马的研究， 随着海马损毁模型的完善，我们将能够越来越好地研究海马与 认知的关系。已有的毁损海马模型，总的来说，包括物理损毁， 化学损毁和电损毁。
1 物理方法 1. 1 切断开穹窿海马伞通路 早在 1954 年，Daitz 等人就采 用横断穹窿海马伞系统来研究观察神经元的退化过程。后来 人们为了进行 AD 方面的研究，采取了真空抽吸、横断或电解 等方法损毁单侧或双侧穹窿海马伞通路建立 AD 模型〔2，3〕。此 种方法主要是通过切断隔海马通路 （ 如扣 带 束、背 穹 窿 海 马 伞） ，破坏胆碱能及非胆碱能纤维传入，导致实验动物行为及神 经化学方面的缺损，造成动物空间定向和记忆障碍及胆碱能神 经元的丢失。步骤： 将大鼠用以 10% 水合氯醛 3. 5 ml / kg 剂 量，对实验大 鼠 行 腹 腔 注 射 将 其 麻 醉 后，固 定 于 脑 立 体 定 位 仪，常规 消 毒、剪 毛，正 中 切 开 头 皮，暴 露 出 颅 骨，于 前 囟 自 后 1. 5 mm，中线外左右 1. 0 mm 处，用电动开颅器凿开颅骨，切开 硬脑膜，用自制的双刃刀先置于上述部位的脑表面（ 相当于弯 窿部位） ，续降刀 6 mm，切断弯窿，降刀时间约 1 min，假手术组 降刀 2 mm，（ 未切弯窿） ，刀在脑中均停留 5 min。清洁颅面，缝 合头皮。用此方法建立模型，周期短（ 约 2 w） ，但手术定位难 以控制，很难避免手术区邻近组织的受损。
林云鹏〔10〕用改进的液压打击海马损伤模型观察大鼠伤后 空间学习能力发现： 各实验组大鼠均可见程度不同的 MR 影像 特征、病理学特征改变； 除轻型打击组外，水迷宫逃避潜伏期及 游泳距离均与对照组间存在显著差异。
2 电损毁 近年来电毁损建立模型在实验研究中得到广泛应用。电
毁损即用金属电极通过直流电在中枢神经系统内造成损伤，其 机制是离子流能诱发细胞发生不可逆性代谢改变，最终导致细 胞死亡。由阳极电流造成的损伤，无论在损伤的大小及形状上
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中国老年学杂志 2012 年 5 月第 32 卷
均易于重复，而且损伤的程度可以通过电流强度及通电时间进 行调节〔11〕。
以 水 合 氯 醛 （ 35 mg / kg ） 腹 腔 麻 醉，麻 醉 生 效 时 间 3 ～ 5 min，麻醉生效后将常规备皮、消毒，顶部正中切口，分离暴露 顶骨。选择前囟后 3. 5 mm，矢状缝两侧 3 mm 处钻孔开骨窗， 骨窗直径为 3 mm，注意保持硬脑膜的完整性，按《大鼠立体定 位图谱》确定海马位置海马结构基本位于前囟后1. 8 ～ 6. 0 mm， 中线旁 0. 5 ～ 5 mm 范围内皮层下，用直流电阳极电解双侧海 马。电解损毁的最大不足是损毁特异性不强，它不仅定位损毁 神经元，同时也损毁输入纤维和过路纤维，往往导致损毁部位 与损毁效应关系的不确定。
基金项目： 佳木斯大学重点课题（ Sz2009-006） 1 佳木斯大学基础医学院 通讯作者： 李艳君（ 1965-） ，女，教授，硕士生导师，主要从事神经干细胞
基础与应用研究。 第一作者： 黄晓科（ 1980-） ，男，在读硕士，主要从事神经干细胞基础与
应用研究。
胆碱能通路，致使其中枢神经系统的完整性破坏，海马胆碱能 纤维减少，大鼠学习记忆力下降。 1. 2 液压打击 液压损伤法（ FPI） 由 Lindgren 于 1966 年首先 报道，1976 年 使 用 于 猫 及 兔 正 中 液 压 打 击，1987 年 Dixon 等〔6，7〕建立了大鼠液压冲击颅脑损伤模型。至 1989 年改进为 啮鼠动物单侧半球液压冲击〔8，9〕。侧方液压冲击模型在 2002 年后广泛用于小动物 TBI 模型的制备。其原理是通过液压装 置有然改变密闭颅腔内压力而间接造成脑损伤。根据颅骨钻 孔的位置不同，可将模型分为正中冲击和侧位冲击两种。该法 受外界因素如 动 物 头 颅 发 育 的 差 异 影 响 小，稳 定 性 和 重 复 性 好，定性及可控性较强。
海马损伤模型的建立参照大鼠脑立体定位图谱明确海马 结构对应脑皮层位置（ 海马结构基本位于前囟后1. 8 ～ 6. 0 mm， 中线旁 0. 5 ～ 5 mm 范围内皮层下） ，确定于顶骨开骨窗部位。 以 10% 水合氯醛 3. 5 ml / kg 剂量，对实验大鼠行腹腔注射，常 规备皮、消 毒，顶 部 正 中 切 口，分 离 暴 露 顶 骨。选 择 前 囟 后 3. 5 mm，矢状缝右侧 3 mm 处钻孔开骨窗，骨窗直径为3 mm，注 意保持硬脑膜的完整性。连接固定颅骨连接管，封闭液压打击 系统。待大鼠恢复角 膜 反 射 及 夹 尾 反 射 后 再 进 行 液 压 打 击。 此模型借助国际上通用的 MODEL01-B 液压打击装置对大鼠进 行分组打击。
海马是边缘系统重要组成部分，参与了情绪、学习和记忆、 行为、免疫等的调节，目前发现成年海马神经发生可能有几种 潜在的功能，包括学习和记忆的适应作用、对新环境的适应、与 低沉情绪的潜在联系以及对损伤的可能反应〔1〕。海马结构和 功能的研究是当前脑科学领域研究的热点，损毁法是研究脑海 马功能定位的常用方法之一。
大鼠海马损毁与学习记忆研究进展
黄晓科 银晓勇 黄艳秋1 李艳君1 （ 河北省峰峰集团邯郸医院海马损毁模型 〔中图分类号〕 R74 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 1005-9202（ 2012） 10-2199-03； doi： 10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2012. 10. 108
胡谋先等〔4〕用手术的方法直接横切大鼠双侧隔一海马通 路。腹腔麻醉大鼠，固定于脑立体定位仪上，用一把三面有刃 的特制刀片在前囟后 1. 8 mm、距中线 1 mm，自颅骨表面垂直插 入 5 mm 横切距离 4 mm 切断双侧海马伞及部分穿隆。术后大 鼠记忆力显著下降。He 等〔5〕采用单侧弯窿伞损伤，主要破坏
目前海马毁损的实验动物模型的滞后制约了海马的研究， 随着海马损毁模型的完善，我们将能够越来越好地研究海马与 认知的关系。已有的毁损海马模型，总的来说，包括物理损毁， 化学损毁和电损毁。
1 物理方法 1. 1 切断开穹窿海马伞通路 早在 1954 年，Daitz 等人就采 用横断穹窿海马伞系统来研究观察神经元的退化过程。后来 人们为了进行 AD 方面的研究，采取了真空抽吸、横断或电解 等方法损毁单侧或双侧穹窿海马伞通路建立 AD 模型〔2，3〕。此 种方法主要是通过切断隔海马通路 （ 如扣 带 束、背 穹 窿 海 马 伞） ，破坏胆碱能及非胆碱能纤维传入，导致实验动物行为及神 经化学方面的缺损，造成动物空间定向和记忆障碍及胆碱能神 经元的丢失。步骤： 将大鼠用以 10% 水合氯醛 3. 5 ml / kg 剂 量，对实验大 鼠 行 腹 腔 注 射 将 其 麻 醉 后，固 定 于 脑 立 体 定 位 仪，常规 消 毒、剪 毛，正 中 切 开 头 皮，暴 露 出 颅 骨，于 前 囟 自 后 1. 5 mm，中线外左右 1. 0 mm 处，用电动开颅器凿开颅骨，切开 硬脑膜，用自制的双刃刀先置于上述部位的脑表面（ 相当于弯 窿部位） ，续降刀 6 mm，切断弯窿，降刀时间约 1 min，假手术组 降刀 2 mm，（ 未切弯窿） ，刀在脑中均停留 5 min。清洁颅面，缝 合头皮。用此方法建立模型，周期短（ 约 2 w） ，但手术定位难 以控制，很难避免手术区邻近组织的受损。
林云鹏〔10〕用改进的液压打击海马损伤模型观察大鼠伤后 空间学习能力发现： 各实验组大鼠均可见程度不同的 MR 影像 特征、病理学特征改变； 除轻型打击组外，水迷宫逃避潜伏期及 游泳距离均与对照组间存在显著差异。
2 电损毁 近年来电毁损建立模型在实验研究中得到广泛应用。电
毁损即用金属电极通过直流电在中枢神经系统内造成损伤，其 机制是离子流能诱发细胞发生不可逆性代谢改变，最终导致细 胞死亡。由阳极电流造成的损伤，无论在损伤的大小及形状上
·2200·
中国老年学杂志 2012 年 5 月第 32 卷
均易于重复，而且损伤的程度可以通过电流强度及通电时间进 行调节〔11〕。
以 水 合 氯 醛 （ 35 mg / kg ） 腹 腔 麻 醉，麻 醉 生 效 时 间 3 ～ 5 min，麻醉生效后将常规备皮、消毒，顶部正中切口，分离暴露 顶骨。选择前囟后 3. 5 mm，矢状缝两侧 3 mm 处钻孔开骨窗， 骨窗直径为 3 mm，注意保持硬脑膜的完整性，按《大鼠立体定 位图谱》确定海马位置海马结构基本位于前囟后1. 8 ～ 6. 0 mm， 中线旁 0. 5 ～ 5 mm 范围内皮层下，用直流电阳极电解双侧海 马。电解损毁的最大不足是损毁特异性不强，它不仅定位损毁 神经元，同时也损毁输入纤维和过路纤维，往往导致损毁部位 与损毁效应关系的不确定。
基金项目： 佳木斯大学重点课题（ Sz2009-006） 1 佳木斯大学基础医学院 通讯作者： 李艳君（ 1965-） ，女，教授，硕士生导师，主要从事神经干细胞
基础与应用研究。 第一作者： 黄晓科（ 1980-） ，男，在读硕士，主要从事神经干细胞基础与
应用研究。
胆碱能通路，致使其中枢神经系统的完整性破坏，海马胆碱能 纤维减少，大鼠学习记忆力下降。 1. 2 液压打击 液压损伤法（ FPI） 由 Lindgren 于 1966 年首先 报道，1976 年 使 用 于 猫 及 兔 正 中 液 压 打 击，1987 年 Dixon 等〔6，7〕建立了大鼠液压冲击颅脑损伤模型。至 1989 年改进为 啮鼠动物单侧半球液压冲击〔8，9〕。侧方液压冲击模型在 2002 年后广泛用于小动物 TBI 模型的制备。其原理是通过液压装 置有然改变密闭颅腔内压力而间接造成脑损伤。根据颅骨钻 孔的位置不同，可将模型分为正中冲击和侧位冲击两种。该法 受外界因素如 动 物 头 颅 发 育 的 差 异 影 响 小，稳 定 性 和 重 复 性 好，定性及可控性较强。
海马损伤模型的建立参照大鼠脑立体定位图谱明确海马 结构对应脑皮层位置（ 海马结构基本位于前囟后1. 8 ～ 6. 0 mm， 中线旁 0. 5 ～ 5 mm 范围内皮层下） ，确定于顶骨开骨窗部位。 以 10% 水合氯醛 3. 5 ml / kg 剂量，对实验大鼠行腹腔注射，常 规备皮、消 毒，顶 部 正 中 切 口，分 离 暴 露 顶 骨。选 择 前 囟 后 3. 5 mm，矢状缝右侧 3 mm 处钻孔开骨窗，骨窗直径为3 mm，注 意保持硬脑膜的完整性。连接固定颅骨连接管，封闭液压打击 系统。待大鼠恢复角 膜 反 射 及 夹 尾 反 射 后 再 进 行 液 压 打 击。 此模型借助国际上通用的 MODEL01-B 液压打击装置对大鼠进 行分组打击。