分离大鼠海马流程图
膜片钳之问题汇总
膜片钳网上问题收集汇总膜片钳之实验操作篇1、消化分离海马锥体细胞时，应该通氧气？不用通氧，直接放入CO2 孵箱里就行了。
电极内液应该过滤完分装入EPPENDORF 管，用时再拿出来。
尽量避免污染。
另外，环境中的灰尘也要考虑。
细胞外液要及时清洗。
2、全细胞破膜以后串联电阻总是在不断上升，膜渐渐的又融合起来了。
有没有什么办法解决串联电阻上升是由于破膜不完全，或者电极内液有污染堵塞电极所至。
解决方法：适当增大电极的口径，以利于破膜；电极内液使用前一定用0.22目滤器过滤；灌注电极液的器具也要保持洁净；电极现用现拉；电极下降入细胞外液时给予一定的正压防止此过程中灰尘堵塞电极。
3、破膜以后封接电阻有所降低的话，会不会影响记录到的动作电位？通常情况下offset调0，是在zero程序下，holding在0，给一个5-10mv，持续2ms的电压刺激，然后用offset补偿电极尖端电位。
axon 破膜后电阻当然会下降，根据我的经验瞬时电阻应在100M以上，之后会上升，以稳定在500M以上的为佳，越高越好。
4、第一军医大学高天明教授组分离大鼠海马神经元的方法：脑片的制备与神经元的急性分离成年Wistar大鼠(200~250 g)麻醉后(水合氯醛40 mg/100 g)迅速断头取脑, 置于0~4℃的高浓度蔗糖溶液中冷冻约2 min, 再用振动切片机(World Precision Instruments MA752-045)切成400 μm厚的脑片。
高浓度蔗糖溶液的成分为(mmol/L): 蔗糖 234、 KCl 2.5、 Na2HPO4 1、 MgSO4 4、 CaCl2 0.1、 HEPES 15、葡萄糖 11、用1 mol/L的NaOH调pH值至7.3。
将切好的脑片置于通以95% O2+5% CO2混合气的EBSS液中孵育1~6 h (室温), 然后将脑片移入低Ca2+的羟乙基磺酸钠缓冲液中, 并在解剖显微镜下用细解剖针按Paxinos图谱所示, 将海马CA1区含锥体细胞层的一小块组织从脑片上分割下来, 将组织块放入用100% O2饱和的HBSS液中(33℃)用链白蛋白酶(protease XIV, 1.1~1.4 mg/ml)消化30~45 min后取出, 置于低Ca2+的羟乙基磺酸钠缓冲液中清洗3次, 用尖端经火抛光处理的吸管(口径依次为500、 300和150 μm)将之吹打成细胞悬液, 并移数滴至盖玻片上。
大脑海马分离图谱
大脑海马分离图谱（一）step 1:This is a dorsal view of a mouse’s skull, in order to access the brain you can cut along the coronal suture and sagittal suture then pull off both sides of parietal bone and interparietal bonestep 2: Now the skull is open and you can see the brain clearly, in order to get the hippocampus you’d better keep the brain in the cranial cavity so the brain will not move when you continue with the following stepsstep 3: In order to expose the hippocampus you need to remove the cerebral cortex covering it. The first incision is at the end of the hemisphere; the incision should be about 0.7mm deep for most adult mouse that you might not hurt the hippocampus while to expose it. The 2nd incision is about 1.5-2mm in front of the first one, this incision you need cut into the lateral ventricle, both of the incisions go to the ventral of the brain and meet there. Now this piece of cortex is free, pull it up, you will see the hippocampus just like in this picture, also you can see the CSF in the opened ventricle.step 4: Keep working on the other side of the brain pull up both sides of the cortex that covering the hippocampus along the ventricle. Now you can see the dorsal part of the hippocampus. Separate the rest of the hippocampus from the cortex coveringit along the surface of the hippocampus towards the ventral part of the hippocampus.step 5: Keep working on the other side of the brain pull up both sides of the cortex that covering the hippocampus along the ventricle. Now you can see the dorsal part of the hippocampus. Separate the rest of the hippocampus from the cortex covering it along the surface of the hippocampus towards the ventral part of the hippocampus.step 6: Now you need to free the hippocampus from the surrounding tissuestep 7: Here is the hippocampus picked out from the brain.（二）大鼠的海马的分离是很容易的,具体做法是:首先对大鼠进行麻醉后断头取脑,手持头部将大鼠的颈部用剪刀剪断,用手指将其头皮拉到前端,用小剪刀沿中线位置将颅骨剪开,轻轻用剪刀将颅骨向两边翻开,这是就将这个大脑暴露出来,用神经剥离子轻轻剥出大脑,放入通入氧气的0-4度的ACSF 中降温一分钟左右取出,用剃须刀片在两个大脑半球一下切出脑干部分,并将大脑从中间切开,用剥离分针轻轻将大脑和小脑分开中间的部分就是海马,用剥离分针的钝端轻轻的挤出海马就可以了。
新生期母婴分离致大鼠海马细胞凋亡的信号机制
Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｎ ｂ ｉ ｎ ， Ｓ ｕ ｎ Ｈ ｏ ｎ ｇ ｙ ａ ｎ ， Ｄ ｏ ｎ ｇ Ｗｅ ｎ ｂ ｉ ｎ ， Ｑ ｉ ａ ｏ Ｌ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ ， Ｌ ｉ Ｑ ｉ ｎ ｇ ｐ ｉ ｎ ｇ ， Ｌ ｅ ｉ Ｘ ｉ ａ ｏ ｐ ｉ ｎ ｇ ， Ｋ ａ ｎ ｇ Ｌ ａ ｎ
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泸 州 医 学 院学 报
２ ２ ８
２ ０ １ ３年
第３ ６卷
第 ３期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｌ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ Ｖｏ １ ． ３ ６ Ｎｏ ． ３ ２ ０ １ ３
新 生期母 婴分离致大 鼠海 马细胞凋亡 的信 号机 制术
张建彬 ， 孙鸿 燕 ， 董 文斌， 乔力 媛 ， 李 清平 ， 雷小 平 ， 康 兰
（ 泸卅 １ 医学院 ： 附 属医 院 新 生 儿 科 ； 护理学院 ， 四川 Ｉ 泸州 ６ ４ ６ ０ ０ ０ ）
成年大鼠海马CA1区锥体细胞K_(ATP)通道的特性
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当细胞膜内外两侧的S T 浓度均为)N(II6;U J 时，通道的电导为CA -<，翻转电位为)@B)IV ，通道呈弱内向整流性。
在负钳制电位时，通道开放时常被短时程的关闭所打断，而在正钳制电位时，这种短时程的关闭状态明显少于负钳制电位时。
大鼠海马神经干细胞的分离培养与免疫荧光鉴定
Ｉｏａｉ ｓ ｌ ｔｏｎ， ｕｌｕｒ ｎｄ ｉ ｃ ｔ ｅ ａ ｍｍ ｕｎｏ ｕｏ ｅ ｃ ｎｃ ｄｅ ｔｆｃ ｔｏ ｆｎｅ ｒ ｌｓｅ ｃ ｌｓｉ ａｔ ｌ ｆ ｒ ｓ ｅ ｅ ｉ ｎ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｕ ａ ｔ ｍ ｅｌ ｎ ｒ ｓ ｉ
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果
从 新生大 鼠海马齿状 回分离的细胞群可不断增殖形成细胞克隆球 ， 并且呈 ｎｓ ｎ阳性 表达 ， ｅｔ ｉ 具有多 向分化能力 。 结论
分 离培 养 的细 胞 是 中 于细胞 ； 分离培养 ； 免疫荧光鉴定
中图 分 类 号 ： ３ ３ Ｑ ４ 文 献 标 志 码 ： Ａ 文章 编 号 ：６ ４ ４ ０ ２ １ 一２ ０ ０ — ４ １７ — ９Ｘ（０ ０）０ — ０ １ ０
（ ．Ｃ ｌ ｇ ｆ Ｌ －ｃｅ ｃｓ ｅ ｅ Ｕ ｉ ｒｉ ，Ｂ ｏ ｉ ｂ ｉ０ １ ０ ；．Ｃ ｌ ｇ 厂Ａ ｒ ｕｔｒ ，Ｈ ｂ ｉ １ ｏｌ ｅ ｏ ｓｉｎｅ ，Ｈ ｂ ｉ ｎ ｅｓ ｙ ａ ｄｎ Ｈｅｅ ７ ０ ２ ２ ｏｌ ｅ Ｑ ｇｉ ｌ ｅ ｅ ｅ ｅ ｖ ｔ ｇ ｅ ｃ ｕ Ｕ ｉ ｒｉ ｛Ｅ ｇｎ ｅｉ Ｈａ ｄ ｎ Ｈｅｅ ５ ０ １ ３ Ｄ ｐ ｒｍ ｎ ｅｒｌ ｙ ｆ ｌ ｅ ｏｐｔ ｊＨ ｂｉ ｎｖ ｓ ｙ ｏ ｎ ｉ ｒ ｇ． ｎ ａ ｂ ｉ０ ６ ０ ． ｅ ａｔ ｅ ｔｏ Ｎ ｕｏ ｇ，Ａｆ ｉ ｄ Ｈ ｓ ｉｌ０ ｅ ｅ ｅ ｔ ｅ ｎ ｆ ｏ ｉ ￣ ａ
胎鼠海马神经元体外原代培养与鉴定文档资料
胎鼠海马神经元体外原代培养与鉴定在神经生物学及相关学科领域中，原代培养的神经元因其排除机体生理病理状态干扰的影响而成为较为理想的实验模型，是研究神经元形态、物质代谢、分子机制及电活动的主要前提。
海马是大脑边缘系统重要的组成部分，在学习、记忆、情绪反应及中枢神经系统疾病的病理生理变化方面发挥着重要作用。
对于原代海马神经元的培养，主要供体主要有胎鼠与新生鼠两种，培养方法有含血清培养和不含血清培养两种。
我们通过实验摸索，取得一种较稳定且简便实用的方法，能获得较高存活率的海马神经元。
1 材料与方法1.1 实验动物来源清洁级孕17-19天SD大鼠上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证号：SCXK（沪）2012-0002。
1.2 主要仪器与试剂 CO2培养箱（Thermo公司），倒置相差显微镜为（Olympus公司），激光共聚焦显微镜型号为ZEISS LSM710，小鼠抗大鼠classⅢβ-Tubulin单抗（Beyotime公司），NSE免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒（武汉博士德生物工程XX公司），B27添加剂、Neuralbasal、Hoechst 33342Sigma 公司），DMEM（高糖型）培养基、胎牛血清（Gibco公司）。
1.3 培养方法与鉴定取孕17-19天大鼠，水合氯醛麻醉后70%酒精浸泡20min，颈椎脱臼法处死孕鼠，将子宫立即放入冰浴含DMEM的大平皿中，在解剖显微镜下取下海马组织，剪成约1mm×1mm×1mm大小，用0.125%胰蛋白酶于37℃、5%CO2培养箱中消化15min，中间每隔5min振荡一次，加入含10%FBS的DMEM 液终止消化，巴氏管轻柔吹打，200目筛网过滤。
1000r/min离心5min，弃上清，并加入适量的含2%B27无血清Neuralbasal培养基，用巴氏管吹打成细胞混悬液。
吹打后以0.4%台盼蓝染色计数活细胞并调整细胞悬液的细胞密度，以5×105个/ml的细胞密度接种于预先经0.05%多聚赖氨酸包被的6孔板（1.5ml/孔），置于37℃、5%CO2培养箱培养，24h后换培养基继续培养，以后每周更换维持培养基2次，每次半量换液。
海马细胞培养流程
海马细胞培养流程1．Coat板子：12孔板每孔加poly-sine缓冲液至少覆盖皿底，37℃coat至少4小时（可以过夜coat），吸去poly-sine缓冲液，PBS洗2-3遍（可以用PBS泡一段时间）。
使用前，在超净台里将PBS吸干，开盖晾干。
2．老鼠处死：19天SD孕鼠安乐处死。
3．胚胎分离：解剖老鼠腹部，取出胚胎，放到含有HBSS buffer的10cm培养皿中（冰块预冷）。
4．取头：用镊子弄断老鼠的头，将头放到含有HBSS buffer的6cm培养皿中（冰块预冷）。
5．取大脑：镊子捏住眼睛，剪刀剪开柔软的脑壳，另外一把镊子（有弯角）取出大脑，放入新的含有HBSS buffer的6cm培养皿中（冰块预冷）。
6．分离海马组织，将大脑半球翻过来，去除血网，用细镊子分离海马（带状深色，靠近大脑下半球边缘），剖离海马放入新的含有HBSS buffer的6cm培养皿中（冰块预冷）。
7．洗海马：用枪头吸取海马，放入灭菌的1.5ml EP管内（超净台内操作）吸去多余的HBSS，加入1ml PBS，待所有海马组织沉入管底后吸走PBS，再加入新的PBS，重复10次（注意不要吸走海马）。
8．消化：加0.5ml 0.25%trypsin，37℃消化30-50min。
9．吹散成单细胞：加2ml DMEM全培养基（500ml DMEM,5ml双抗，50ml FBS，5ml丙酮酸钠），吹吸悬浮细胞（不超过4次）。
10.细胞计数：从1ml中取20ul，加入20ul DMEM中，血球计数板上计数，计数后，稀释细胞，使得1ml DMEM全培养基中含有2x104个细胞，轻轻混匀。
11.Seed 12 孔板：每个孔加入1ml DMED全培养基细胞悬液（过夜培养，37℃，5%CO2）。
12.换选择培养基：培养12h后吸去DMEM，加入Neurobasal选择培养基。
Neurobasal配方：Neurobasal 50mlB-27 10mlGlutamaX 5ml双抗3ml。
胎鼠、新生大鼠原代海马神经元培养及鉴定
胎鼠、新生大鼠原代海马神经元培养及鉴定熊丽娇;郭阗廷;曾治平;黄志华;曾靖【摘要】目的:建立胎鼠、新生鼠海马神经元体外培养方法.方法:分别取胎鼠、新生鼠海马,消化后种植,用含有2%B27的neurobasal培养液培养,第3天加入5 μmol·L-1的阿糖胞苷,换液后继续培养,以获得纯度较高的海马神经元.培养第3、7天观察细胞生长及突起情况,用neurofilament抗体以免疫荧光方法鉴定神经元细胞.结果:海马神经元种植24 h后贴壁,7天时神经元突起相互连接成网络.经neurofilament染色,培养细胞阳性率高,新生鼠原代培养海马神经元阳性率达(89±3.4)%,胎鼠海马神经元阳性率达(98±1.5)%.结论: 本方法培养出的胎鼠、新生大鼠海马神经元纯度较高,可作为海马神经元模型用于进一步研究.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)003【总页数】3页(P354-356)【关键词】海马神经元;细胞培养;胎鼠;新生鼠【作者】熊丽娇;郭阗廷;曾治平;黄志华;曾靖【作者单位】赣南医学院第一附属医院全科医学VIP科;赣南卫生健康职业教育学院外科教研室,江西赣州 341000;赣南医学院第一附属医院全科医学VIP科;赣南医学院;赣南医学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5海马是大脑边缘系统重要部分，神经元分布高度集中，在认知、记忆、情绪、植物神经系统方面起着不可替代的作用[1-3]。
海马神经元体外培养模型已经成为研究神经元发育分化、神经疾病的发生机制的重要技术手段[4-6]。
海马神经元体外培养文献报道方法多样，动物来源主要有胎鼠和新生鼠，根据实验条件，我们摸索出了原代胎鼠、新生大鼠的海马神经元培养方法，并进行了细胞鉴定，获得了高纯度的胎鼠、新生大鼠海马神经元。
1.1 材料1.1.1 实验动物孕17天SD大鼠及出生24 h内的SD大鼠。
1.1.2 主要试剂 DMEM培养基、neurobasal培养基、胎牛血清(FBS)和B27培养基添加剂(Gibco公司)、青链霉素、胰酶、多聚L赖氨酸(sigma公司)。
SD大鼠海马神经干细胞体外培养与鉴定
SD大鼠海马神经干细胞体外培养与鉴定目的采用改良方法分离新生24h内SD大鼠海马神经干细胞（neural stem cells，NSCs），观察海马NSCs体外培养的生长状况及多向分化潜能，为后续实验研究奠定基础。
方法采用改良方法分离海马NSCs，用含终浓度为20ng/ml 的bFGF和EGF、2% B27添加剂、1%双抗、1%L-谷氨酰胺的DMEM/F12（1∶1）培养基进行传代培养，每天定时在显微镜下观察NSCs生长状况。
应用免疫荧光细胞化学技术检测原代NSCs的巢蛋白（Nestin）及第3代的NSCs加胎牛血清诱导分化7d后的神经元（NSE）、星形胶质细胞（GFAP）及少突胶质细胞（MBP）的表达。
结果倒置显微镜下观察，培养的细胞具有不断增殖、成球的能力，接种24h后，细胞即呈现倍数增长，原代培养4d即可传代培养。
免疫荧光细胞化学技术鉴定结果，Nestin、NSE、GFAP及MBP表达阳性。
结论采用改良方法分离新生24h内SD大鼠海马NSCs，经典无血清NSCs条件培养基体外培养可获得的NSCs具有较强的存活、增殖和成球能力及多向分化潜能。
标签：海马；神经干细胞；培养；鉴定神经干细胞（neural stem cells，NSCs）存在哺乳动物胚胎期的大部分脑区，而成体NSCs主要存于脑室周、海马齿状回的颗粒下层、脊髓等部位，其中以海马齿状回的颗粒下层分布较多[1]，因此成体NSCs的研究多以海马脑区多见。
传统分离细胞方法采用胰蛋白酶消化方法结合机械吹打方法。
但胰蛋白酶消化方法分离细胞存在许多弊端，比如消化过度及终止消化所用的血清对NSCs生长干扰的问题。
本实验通过单纯机械吹打方法分离提取乳鼠的海马NSCs，可以完全将海马组织吹打成单个的细胞，所获得的细胞在体外培养的过程中，表现出较强存活、增殖、成球能力和多向分化的潜能。
1.材料1. 1动物1.1 清洁级、新生24h内、雌雄不限SD大鼠10只，由广州中医药大学实验动物中心{许可证号：SCXK（粤）2008-0020}提供。
大鼠海马神经元的培养及细胞培养注意事项
1.成年大鼠海马神经元的培养●步骤1.获得海马细胞◆大鼠乙醚麻醉，断头处理；◆迅速解剖海马组织，置于含有2ml 4℃的HibernateA/B27的35mm的培养皿中；◆随后将其移入含有同上培养基的培养皿，去除脑膜及多余的脑白质（？）；◆将海马移入组织切碎机冷处理台面上事先用HibernateA/B27润湿的滤纸上，沿海马长轴将组织切成0.5mm的薄片，随后将其移入含有5ml4℃的HibernateA/B27的离心管中；◆30℃震荡8min。
◆大吸管将其移入含有木瓜蛋白酶（预热至30℃）的离心管，置于170rpm的旋转平台（保持组织片悬浮状态），30℃水域温育30min；◆将海马组织切片移入15ml含有2mlHibernateA/B27的离心管中，30℃温育5min，吸管吹打10次（30s），静置2min，将上清移入另一离心管，重复上述步骤2次；2.梯度分离◆将细胞悬液加入Nycoprep gradient（4ml）的上方，室温，1900rpm，离心15min；去除最上方的碎片；吸管收集含有细胞的部分；用5mlHibernateA 稀释；第三层富含神经元；将第四层用2 ml B27:NeurobasalA重悬，1100rpm离心1min；3.盖玻片处理：50ug/mL多聚-D-赖氨酸（无菌水溶解）包被过夜，吸去多余的多聚赖氨酸，无菌水漂洗一次，自然干燥1h；4.◆细胞接种：以目标密度稀释于B27:NeurobasalA，以每盖玻片60到120 Ul接种，置于5% CO2:9% O2中孵育1h；◆将盖玻片移入24孔培养板中,每孔以0.4ml 37℃ B27/NeurobasalA漂洗一次，去除未贴壁细胞及细胞碎片；改用0.4ml的生长培养基；◆培养后4天，每3-4天更换一半培养基；新的培养基中的FGF2含量是远培养基的2倍；1.培养器皿的准备：1）溶液瓶——装配各种溶液——输液瓶；2）螺口瓶——血清或培养基；3）培养瓶——细胞培养——一般采用带螺口的，清洗时注意防止盖子中垫片的丢失；4）培养皿——细胞组织的分离、培养、染色——包括直径为30mm、60mm、120mm5）血球细胞计数板——细胞计数6）移液管——连接上手动（吸耳球）或电动负压吸取装置——在移液管尾部塞入少量脱脂棉；7）离心管——分离、漂洗、收集细胞——一般选用螺口带盖的；Eppendorf——塑料尖底带盖的离心管8）磁力搅拌器：用于神经细胞的分离机溶液的配置；最好配合使用可调温度的加热装置；可用高压蒸汽消毒。
大鼠海马神经元钠离子通道电流的记录与分析
大鼠海马神经元钠离子通道电流的记录与分析摘要：离子通道是生物电活动的基础。
自1976年德国的E.Neher和B.Sakmannw创立了膜片钳技术以来使得研究细胞膜上单个离子通道的特性成为可能。
膜片钳技术是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上单一的或者多个离子通道分子活动的技术。
l980年以来，由于吉欧姆阻抗的封接方法的确立，此技术被越来越多地应用于细胞研究，点燃了细胞和分子水平的生理学研究的革命之火。
在国内也掀起了一股离子通道的研究热潮。
本文主要介绍了运用膜片钳技术测量大鼠海马神经元钠离子通道电流的方法，同时对测量的数据进行了分析处理，实验结果表明：钠离子通道具有电压依赖性，钠通道的激活曲线反映了通道开启的速度非常迅速(几个毫秒)，钠通道的I-V曲线反映了通道的激活过程、阈电位大约-50mV左右、反转电位60mV、内向整流特性等。
此实验结果可以做为辐射组细胞的对照组。
关键词：海马神经元、钠离子通道、膜片钳技术、全细胞记录模式、I-V曲线引言过去的二十世纪是一个伟大的时代，人类在科学技术方面得到了巨大的发展。
人类不再仅仅局限在单一的学科内进行研究，而是将各种学科相互结合，产生了诸如生物物理学、生物化学等交叉学科，取得了巨大的成就。
生物电的研究便是其中最重要的成就之一。
科学家在很早便注意到了生物组织中存在生物电流的现象，并进行了初步研究与探索。
18世纪，电学研究逐渐兴起，Galvani首次在生物体(蛙)上发现了生物电现象。
1902年J.伯恩斯坦在他的膜学说中提出神经细胞膜对钾离子有选择通透性。
1939年A.L.霍奇金与A.F.赫胥黎用微电极插入枪乌贼巨神经纤维中，直接测量到膜内外电位差。
1949年A.L.霍奇金和B.卡茨在一系列工作基础上提出膜电位离子假说，认为细胞膜动作电位的发生是膜对纳离子通透性快速而特异性地增加,称为“钠学说”。
尤其重要的是,1952年A.L.霍奇金和A.F.赫胥黎用电压钳技术在枪乌贼巨神经轴突上对细胞膜的离子电流和电导进行了细致地定量研究，结果表明Na+和K+的电流和电导是膜电位和时间的函数,并首次提出了离子通道的概念【1】。
新生大鼠海马神经干细胞的分离培养及鉴定
小鼠大脑皮层和海马神经元的分离与培养20110110
小鼠大脑皮层和海马神经元的分离与培养一、玻片的准备A．玻片的清洗1. 第一天，将玻片(12mm，633009，Carolina) 逐片置于装有浓硝酸(HNO3) 或者洗液的平皿中，混匀，然后浸泡过夜。
2. 第二天，将玻片放在有单蒸水的陶瓷盘中，搁在摇床上晃动，速度为200rpm，将玻片上的硝酸残液清洗干净。
每10min换水一次，要换20次以上。
晚上置于双蒸水中浸泡过夜。
3. 第三天，换双蒸水，重洗两次，每次速度为200rpm ，时间为60min，去除玻片上的离子和其它杂质，最后再换用无水乙醇，清洗三次以上。
洗完后置于小烧杯中，拿到细胞房超净台将玻片浸泡在无水乙醇中室温保存。
4. 解剖小鼠取细胞前两天将玻片从无水乙醇中取出，在酒精灯焰上烘干，稍微在空气中停一下，再放到灭菌的parafilm膜上。
玻片高温易碎，速度要快。
完成后在紫外下照射1h。
B. 玻片的包被（PDL包被）用0.1M的硼酸钠溶液将PDL配成0.01mg/ml PDL的溶液(pH 8.4)。
1.准备500ml 0.1M的硼酸钠（Na2B4O7·10H2O, B3545-500G，Sigma）溶液。
2.在超净台中，往一整瓶Poly-D-Lysine（PDL，5mg/ml，Sigma, P6407-5MG）中加入25ml的该硼酸钠溶液。
盖上瓶盖，溶解5min，可以轻轻晃动。
然后将该溶液加到剩下的硼酸钠溶液中。
即为所配溶液，0.22μm过滤，用锡纸包好，4℃避光保存。
3.使用的时候，6/12/24孔板每孔加1ml/500μl/250ul的PDL溶液，12mm盖玻片每片加50μl的PDL溶液，放在超净台中，室温包被4hrs或者过夜。
4.第二天，紫外照射超净台1-2hrs，再将PDL吸干。
将板和玻片盖揭开，室温晾过夜。
5.第三天，将每个孔/玻片用灭菌水洗两遍，吸干，盖上盖，避光待用。
二. 大脑皮层与海马的解剖A. 解剖前的准备1.解剖器械的灭菌解剖前将器械放在铝饭盒中，倒入75%乙醇，并在超净台中放入适量卷纸，打开紫外杀菌1-2hrs。