徒手切片法
1石蜡制片 2电镜 3徒手切片法
切片伸直、展平，倾斜载片，使水流去并烘干。
9.脱蜡、染色、脱水透明和封片：粘片后要经过脱蜡、 染色、再次脱水透明，然后封片永久保存。
脱蜡、染色和脱水透明的过程仍采用等
级法逐渐进行。最后加拿大树胶封片，然后
贴标签镜检及保存。
以上是石蜡制片的一般步骤；为了获得
良好的制片效果，需要制片者的大量实践并 在实践中不断摸索、积累经验方可。
（五）干燥
是制片关键一步。目的是去除样品中的游离水或已取代游离水的 脱水剂，使样品中不含有液态物质 。临界点干燥法是目前公认的较好
方法。
（六）粘样 将干燥好的样品用导电胶将样品粘在样品台上，并做
好标记。常用的有银粉导电胶、石墨粉导电胶、双面胶带、
普通胶水等。 （七）镀膜（喷涂） 是把粘贴到样品台上的样品和样品台表面同时喷涂上 一层金属膜，使样品具有良好的导电性，以便下一步观察。
是逐级进行，可减少材料收缩。
5.浸蜡：逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。常用
的包埋剂是石蜡。浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有 材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入 到材料的细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代， 以便切片。 6.包埋：将浸蜡后的材料包埋在石蜡中。此步骤要 迅速，且不要使石蜡块中有气泡。注意将样品编号
切片刀准备：超薄切片刀有两种，一是金刚刀，二是玻
璃刀。前者价格昂贵、质地坚硬、经久耐用；后者制作方
便、价格低廉、但刀刃较脆、不耐用、不能切硬质材料。 制刀用玻璃为硬质玻璃，含硅量72-75%以上。
切片：是用超薄切片机切出50nm后左右的超薄切片，
以供观察。 展片与捞片：切下的超薄切片漂浮在刀槽液面上，需
（一）取样 要求取样要有代表性、迅速、准确、及时、体积小、 低温、防损伤。一般要求体积0.5-1.0mm2。 （二）固定
徒手切片技术
植物病理徒手制片技术徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。
限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。
(一)整体封藏法对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。
常用方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。
1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辨不清。
2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。
刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原体蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。
浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。
3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。
如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。
4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。
用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。
(二)徒手切片法欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。
徒手切片技术
徒手切片法（临时装片） 徒手切片法（临时装片）
1、准备工作： 、准备工作： 刀具：安全第一! 刀具：安全第一 切片维持物：胡萝卜片、 切片维持物：胡萝卜片、土豆片
– 规格：2cm×1cm×0.3cm胡萝卜片 规格： × × 胡萝卜片培养皿：清水 培养皿：
– 将欲切材料断面和刀口附近刀面蘸上水 – 切面，刀面保持润湿，以减小摩擦阻力 切面，刀面保持润湿，
5、夹竹桃叶的横切面 、 叶的表皮细胞壁厚， 叶的表皮细胞壁厚，角 质层发达， 质层发达，栅 栏组织层数往往较多， 栏组织层数往往较多， 海绵组织和细胞间隙却 不发达
6、鸭跖草叶横切面（后含物） 、鸭跖草叶横切面（后含物）
7、花柱横切 、
2、选材 选材： 选材
叶片： 叶片：长、宽约1cm 宽约 叶柄： － 叶柄：1－2cm长的小段 长的小段
徒手切片法——实验步骤 实验步骤 徒手切片法
3、切片 、 （1）夹取： ）夹取：
样品不宜太厚， 样品不宜太厚，否则难以夹取
（2）持刀： ）持刀：
– 左手的大拇指、食指和中指：拿住材料 左手的大拇指 食指和中指： 的大拇指、 要求：材料突出在指尖上面， 要求：材料突出在指尖上面，以免误伤 – 右手拿刀片 ，平放在左手食指上，刀口向内 右手拿刀片 平放在左手食指上，刀口向内
徒手切片法——实验步骤 实验步骤 徒手切片法
（3）运刀： ）运刀：
• 刀法要领：从刀片刀口下方起，斜向后拉切， 刀法要领：从刀片刀口下方起，斜向后拉切 由左前方向右后方一次切下 • 用力诀窍：臂力，非腕力， 用力诀窍：臂力，非腕力， • 忌：用力太猛；反复拉锯式切割 用力太猛； • 宜：常用水湿润切面
徒手切片法——实验步骤 实验步骤 徒手切片法
徒手切片制作方法
、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。
二、材料、用品1、用品显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤1、选材所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5〜6毫米，长1〜1.5 厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。
使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。
2、切片（1 ）盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2〜3毫米，材料的切面必须保持水平方向。
(2) 右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。
(6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存，可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。
生物实验 临时装片及徒手切片方法
临时装片及徒手切片方法一、目的与要求1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。
2、学习徒手切片技术。
3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。
二、材料和用品1、自备材料：解剖器（镊子、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。
2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。
三、实验内容1、临时装片的制作方法2、徒手切片方法四、实验方法要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制成各种制片，放在显微镜下才能观察。
制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。
1、临时装片的制作方法临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。
这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。
此法一般多做为临时观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。
临时装片的制作方法和步骤如下：（1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。
注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏破。
（2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵……），放在载玻片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。
实验一植物切片制作
3．选片
挑选出薄而完整的切片（薄的切片一般沉在水底）， 制作临时水装片，置于显微镜下观察。
4．切片的方向
2）径向切面：是通过中心 而切的纵切面
1）横切面：是垂直于茎或 根的长轴而切的切面
3）切向切面：是垂直于半径而 切的纵切面
香樟幼茎横切面
（二）生物绘图法
1．仔细观察； 2．正确构图； 3．用HB铅笔正确勾画轮廓图，然后用2H铅笔正确描
画；
4．线条要均匀平滑；用圆点衬阴表示明暗和颜色的 深浅；点要圆而整齐，大小均匀，根据需要灵活掌 握疏密变化；
5．细胞图和轮廓图； 6．最后将画好的图与实物对照，检查确认无遗漏或
错误后，注明各部分的名称和图题。（用平行线引 出，最好在图右侧排列整齐）
细胞壁
细胞核 液泡
洋葱鳞叶表皮内细胞示意图（10×40）
四、实验内容与方法
（一）徒手切片法
徒手切片是植物形态解剖学实验中最简便的 一种切片方法。其优点是工具简单，方法简单易 学，即切即可观察；可看到自然状态下的形态与 颜色。
徒手切片姿势
徒手切片的过程
切片时，如切草本植物的幼茎，先将材料切成长约3cm 小段。用左手三个指头夹住材料，并使其高于其手指之上， 拿正。右手持刀片，平放在左手的食指之上，刀口向内，且 与材料断面平行，然后右手用臂力(不要用腕力)，自左前方 向右后方拉刀滑行切片，即切又拉，充分利用刀锋，把材料 切成正而平的薄片。
维
髓射线
管 柱
髓
表皮
皮层 维管 束
髓
髓射线
表皮
厚角组织 初生韧皮部 初生木质部 髓
髓射线
束中形成层
维管束：初生木质部和初生韧皮部共同组成的束 状结构。
维管束类型：
石大生药学实验指导14显微标本片的制作方法
二、显微标本片的制作方法生药的显微鉴定是使用显微镜检查药材内部构造特征,因此必须将药材制作成适当的显微标本片，才能在显微镜下进行观察。
显在鉴别根据观察对象、目的、要求的不同，制作不同的标本片，一般可分为徒手切片、石蜡切片、表面装片、粉末制片、组织解离片等。
一、徒手切片徒手切片法可以直接而又准确地观察和了解药材组织的本来面目，其设备简单、操作方便，不需经过复杂的处理，但是，此法对微小、柔软、硬型或水分过多及肉质药材不易切成薄片以供观察。
］、基本操作⑴取材：选取材料时要注意有一定的坚韧性，材料不宜太硬或太软。
⑵切片：先将材料的断面削平，用左手的姆指和食指夹住材料，材料上端伸出1〜2111111的长度，右手执刀，刀口向里（刀片可用单面刀片或剃刀），刀口与材料的断面平行，切时自左方向右方斜滑，亦可自内向外切，同时挥刀要快，用力要均匀，不可拉锯样切割。
每切1〜2片，用毛笔蘸水取下切片放于水中或50〜70%乙醇中，同时用水湿润材料的切面和刀口，不可使之干燥。
如材料较薄或较小，可用萝卜或向日葵茎等解剖一切口将材料在切口内夹住再切。
选取较好的切片备用或直接放置在载玻片上，在显微镜下观察。
2、制片临时观察的切片，可自水或乙醇中取出切片，放置在载玻片上，加一滴水或甘油或先滴水或甘油，再放入材料，盖上盖玻片，置显微镜下观察。
二、永久制片法（略）三、粉末标本片粉末标本片主要用作粉末、丸、散、膏、丹等成药材料的观察，所用材料不宜有粗颗粒混入，否则可将盖玻片顶起，不便观察，故须将材料用三号筛（60目）筛筛过。
1、临时性粉末标本片用解剖针尖挑取少量粉末药材放置在载玻片的中央偏右一些，根据需要加入适宜的试液1~2滴，用解剖针或细玻棒（试液为酸或碱时）轻轻搅匀，然后用小镣子（或盖片镒）夹住盖玻片的一边，使相对一边与液面接触，将盖玻片轻轻放下（注意放盖玻片时动作要轻而慢，以免产生气泡或使材料溢出），盖玻片放好后，若有液体溢出，可用滤纸吸去溢出的液体，最后在载玻片左端做上标记。
徒手切片法
徒手切片法用光学显微镜观察的样品必须是透明的，因此，无论是临时装片还是永久制片的玻片标本，制作前都必须先将材料切成薄片。
徒手切片法简称手切片法，即以手持刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法。
是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的切片方法，也是最重要的基本技能之一。
这种切片方法简便易行，节省时间；而且所需工具简单，只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就可以操作。
还有一个独特的优点，就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜色。
其缺点是不易做到将整个切面切得薄而完整，往往厚薄不一；过软过硬的材料比较难切。
徒手切片一般处理的是新鲜材料，有时也可将材料预先固定好。
一般材料的徒手切片的方法如下：1.材料的准备：一般选择正常、软硬适中的植物器官或组织为材料，直接切成长约2〜3厘米的小段，削平切面。
所取的新鲜材料应及时放入水中，以免萎蔫。
取材的大小，一般直径不超过5mm,长度以15-25mm为宜。
过于柔软或微小的材料，难以直接执握手切，可夹入坚固而易切的夹持物中切。
常用的夹持物有去除木质部的胡萝卜根、土豆块茎、接骨木的髓部等。
切前先将夹持物切成长方小体,上端削平。
对于较薄的叶状体材料,可将夹持物纵切一缝,材料夹于其中即可；如不是叶状体,即将材料夹于其中,或在缝里挖一个和材料形状相似、大小相同的凹陷,把材料夹在凹陷里。
然后用手握住夹持物,采用上述方法将夹持物和其中的材料一齐切成薄片,除去夹持物的薄片,便得到材料的薄片。
坚硬的材料要经软化处理后再切。
软化的方法：对于比较硬的材料，切成小块煮沸3〜4 h,再浸入软化剂（50%酒精：甘油 =1 : 1）中数天至更长些时间，而后再切。
对于已干或含有矿物质，更为坚硬的材料,要先在15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周,充分浸洗后,再置入甘油里软化后再切。
2.执握刀片和材料的方法：左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使之固定不动。
为防止刀伤，拇指应略低于食指，并使材料上端超出手指2〜3毫米，不可高出过多，否则切片时材料容易弯折，也不容易切薄。
徒手切片技术
植物病理徒手制片技术徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。
限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。
(一)整体封藏法对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。
常用方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。
1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辨不清。
2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。
刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原体蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。
浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。
3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。
如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。
4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。
用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。
(二)徒手切片法欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。
徒手切片方法(精品)
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------徒手切片方法（精品）徒手切片法特特点化学学、、生点不不需需要要机机械械设设备备，，能能保保持持活活体体的的情情况况。
主主要要用用在在组组织织化生药药鉴鉴定定、、石石蜡蜡切切片片选选材材等等。
方方法法要茎的的横横切要领切面面，，无领切切片片最最要要紧紧是是平平而而薄薄，，无无需需切切成成完完整整的的。
例例如如茎无须须切切成成整整圆圆形形，，只只需需一一角角就就足足够够了了。
步步骤材料料，，使骤①①一一般般用用左左手手的的大大拇拇指指、、食食指指和和中中指指这这三三个个手手指指拿拿住住材使材材料料突突出出在在指指尖尖上上面面，，使使刀刀片片不不会会割割伤伤它它们们。
用用右右手手拿拿刀刀片片。
两两只只手手应应该该可可以以自自由由活活动动，，不不1 / 5要要使使它它们们靠靠紧紧身身体体，，或或压压在在桌桌子子上上。
②②刀刀片片刀刀口口放放在在切切面面上上，，从从刀刀片片刀刀口口下下方方起起，，斜斜向向后后拉拉切切，，切切时时要要用用臂臂力力，，不不用用腕腕力力。
不不必必太太用用力力，，否否则则就就不不易易切切薄薄。
③③连连续续切切几几片片后后，，取取下下切切片片，，转转移移到到载载玻玻片片上上的的一一滴滴水水中中，，放放在在低低倍倍显显微微镜镜下下检检查查。
假假如如切切片片充充分分透透明明，，细细胞胞重重叠叠不不明明显显，，就就可可使使用用。
否否则则得得重重切切。
④④过过于于柔柔嫩嫩的的植植物物器器官官，，如如叶叶片片，，难难以以直直接接拿拿住住，，可可以以用用坚坚固固而而易易切切的的材材料料夹夹后后再再切切，，如如胡胡萝萝卜卜片片。
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徒手切片 (2)
徒手切片概述徒手切片是一种基本的厨房技巧，可以用来切割各种食材，如水果、蔬菜、肉类等。
掌握徒手切片技巧可以提高厨艺水平，使切片更加均匀、美观，并提高工作效率。
本文将介绍徒手切片的基本步骤、注意事项以及常见的切片技巧。
基本步骤徒手切片的基本步骤如下：1. 准备食材：选择新鲜的食材，并清洗干净。
2. 切割边缘：将食材的边缘切割平整，去除不均匀或瑕疵的部分。
3. 稳定食材：将食材放在切割板上，并用手掌或手指轻轻按住，以稳定食材。
4. 切割角度：根据需要，选择适当的切割角度。
常见的切割角度有垂直切割和斜切割。
5. 切割动作：使用锋利的刀具，将刀刃对准食材，用轻轻的压力进行切割。
注意保持手指的安全距离，避免意外伤害。
注意事项在进行徒手切片时，需要注意以下事项： - 使用锋利的刀具：使用锋利的刀具可以更加容易地进行切割，同时也能减少意外伤害的风险。
- 保持手指的安全距离：切割时，手指应尽量远离刀刃，以免发生意外伤害。
可以使用手指拇指把食材按住，保持手指与刀刃的距离。
- 注意切割方向：切割方向应根据食材的形状和切割需求来确定。
对于圆形食材如苹果、橙子等，可以采用垂直切割或水平切割。
对于长条形食材如胡萝卜、黄瓜等，可以选择斜切割。
- 切割均匀：切割时应尽量保持均匀的切割厚度，以保证食材的外观和口感。
- 控制力度：切割时要控制好用力的程度，不要用过大的力量，以免食材被切得太厚或过度破坏。
常见切片技巧除了基本的切片步骤和注意事项外，还有一些常见的切片技巧可以提高切片的效果和表现力。
以下是一些常见的切片技巧： - 拇指支撑法：可以使用拇指将食材按住，并保持手指与刀刃之间的安全距离，以更好地掌握切割的角度和力度。
- 平行切割：将食材切割成平行的薄片，可以用于制作蔬菜沙拉、水果拼盘等。
- 花切：将食材切割成像花朵一样的形状，可以用于装饰菜肴或水果摆盘。
- 千层切割：将食材切割成多层的薄片，可以用于制作千层面、千层酥等菜肴。
第三章 徒手切片法
第三章徒手切片法徒手切片法是指用手拿刀片（或剃刀）把新鲜材料切成薄片，徒手切片法所作的切片通常不经染色或经简易染色后，封藏于水中即可观察，但也可制成永久制片。
观察但也可制成永久制片优点不需用切片机等贵重仪器有一刀片或剃刀就可 不需用切片机等贵重仪器，有一刀片或剃刀就可以进行切片；制片简单迅速能及时观察植物生活组织结构 制片简单、迅速，能及时观察植物生活组织结构和颜色。
缺点微小、柔嫩、含水过多以及坚硬的材料，很难用此法切成薄片。
此法切成薄片不经过严格的操作训练，易切成薄厚不均或不完整的切片。
切出的片子厚于切片机切片，也不适合对植物子房及胚胎等材料做连续切片。
操作步骤选取待观察的植物材料初步切取大约3长的小块1.取材选取待观察的植物材料，初步切取大约3cm长的小块，再依切片的具体要求，将组织块修整为0.5cm的材料块。
2.切片以左手夹住材料，用右手平稳地握住刀片。
切片时，使刀片与材料的断面保持平行刀口自左上方斜向使刀片与材料的断面保持平行，刀口自左上方斜向右下方，动作要均匀有力。
材料与刀片须常以水湿润。
切下的薄片立即用毛笔蘸水后粘取移入盛有清水的培养内培养皿内。
胡萝卜木髓观察材料剃刀双面刀片切片33.选片切片完整，在培养皿中选择薄而均匀且切面完整的组织切片，捞在载玻片上作临时水装片，然后置于显微镜下观察，如结构能被清晰地显示出来，则可制成永久保存封片。
4.固定与染色FAA中固定15分钟至1小时，取镜检合格的切片投入小时将切片移入蒸发皿或小培养皿中，依次用50%、0%浓度乙醇脱水然后60%、70%各级浓度乙醇脱水，然后放入含1%番红的70%乙醇溶液中染色30min以上。
5. 脱水染好色的切片移入70%、80% 、90%、95%乙醇各级脱水5min 。
滴加含1%固绿的95%乙醇溶液染色30s 。
再换入95%乙醇中分色，最后进入无水乙醇脱水5min 。
切片移入1二甲苯混合溶液6. 透明1 ：1的无水乙醇：二甲苯混合溶液4min ，再移入纯二甲苯5min ，组织切片呈透明状。
植物徒手切片法
植物徒手切片法植物徒手切片法是一种基于人工操作的植物组织切片技术，在植物科学领域中被广泛应用。
与机械切片法和冷冻切片法相比，植物徒手切片法具有操作简便、花费低廉、得到的切片形态更完整等优点。
下面将详细阐述植物徒手切片法的具体操作流程及其在各个领域中的应用。
一、操作流程植物徒手切片法主要是通过手工操作来制备植物组织切片，其步骤如下：1、准备植物材料首先应选择质地较软的植物组织，如果肉、嫩叶、茎尖等部位。
在制备切片前，需要将植物材料沿着纵向切开成薄片，并在切片表面涂上几滴液体切片液，使切片更易于切割。
2、切片将植物材料置于平板上，使用手工刀片沿着组织指定的方向进行切割，制备出薄片。
为使切片均匀，则需细心、耐心地调整刀片角度和切割力度，避免损伤植物组织。
3、染色和封片经过切片制备后，需要进行染色和封片处理，以保证切片的结构完整和细胞形态的清晰显示。
不同的组织染色方法不同，一般采用常见的克罗姆酸盐染色或吉姆萨染色。
然后用封片剂将切片封装，保证切片在显微镜下不受光线干扰。
二、应用领域在植物科学领域中，植物徒手切片法得到了广泛的应用。
以下为其在各个领域中具体的应用。
1、生理学和解剖学研究植物徒手切片法可以用于研究植物组织器官的内部结构和功能，进而揭示植物生理生态的内在机理。
该方法也被广泛应用于植物生长发育、光合作用及植物对环境适应性等方面的研究。
2、细胞学研究植物徒手切片法也可用于分析植物细胞的形态和功能，进一步研究细胞在不同生理生态条件下的变化。
例如，在植物育种中，利用植物徒手切片法可以对遗传育种材料进行细胞形态学评价，从而为植物品种改良提供理论和技术支持。
3、药物和化学物质筛选研究植物徒手切片法可应用于筛选具有抗氧化、抗肿瘤、复含、抗病毒等生物活性物质的植物成分。
通过对植物样品进行切片、染色、显微镜观测等步骤，可以对植物中所含物质的活性和生理效应等进行初步研究。
4、教学与科普植物徒手切片法是学生学习植物科学的基础实验，在学校的植物科学教学中经常用到。
徒手切片法有哪四种 徒手切片法的介绍
徒手切片法有哪四种徒手切片法的介绍1, 徒手切片法的介绍通过分析可知：(1)[2]是上表皮，因为它靠近栅栏组织，栅栏组织排列比较紧密和整齐.[6]是下表皮，因为它靠近海绵组织，海绵组织列比较疏松.上表皮和下表皮都属于表皮，它对叶片起保护作用.(2)[3]是栅栏组织，[5]海绵组织，它们都属于叶肉，在细胞中含有叶绿体，所以属于营养组织.(3)[4]是叶脉，里面有导管和筛管，导管把水分和无机盐从根运向茎和叶，筛管把叶制造的有机物运到茎和根等部位.故答案为：(1)上表皮；靠近排列比较紧密和整齐的栅栏组织；下表皮；靠近排列比较疏松的海绵组织；保护(2)栅栏组织；海绵组织；叶肉；营养(3)4；叶脉；导管；筛管.2, 你认为徒手切片法进行切片,影响切片质量的主要因素有哪些？(1)制作临时装片的材料必须是薄而透明的，所以叶片越薄越好，应该选择双面刀片，取两个刀片中间的叶就可以了.(2)取下的叶片没有了表皮的保护，会由于水分的蒸发而失水变形，所以要放在清水中，用毛笔蘸取最薄的一片，制成临时切片放在显微镜下观察，观察到如题干中图所示的结构：1是角质层，2是上表皮，3是栅栏组织，4是叶脉，5是海绵组织，6是气孔，7是保卫细胞.①6是气孔是气体交换的“窗口”，又是水分散失的“门户”，又7成对的保卫细胞围成.②3是栅栏组织，5海绵组织，它们都属于叶肉，在细胞中含有叶绿体，所以属于营养组织.③）6气孔在呼吸、蒸腾作用等气体代谢中，是空气和水蒸汽的通路，其通过量是由保卫细胞的开闭作用来调节；4叶脉就是生长在叶片上的维管束，它们是茎中维管束的分枝，其中同样包括导管和筛管两种管道，形成叶片内的运输通道，被称为叶片的“骨架”，具有支持和输导作用.故答案为：(1)并排的两个刀片；(2)清水；最薄；临时切片；①气孔；保卫细胞；②栅栏组织；海绵组织；叶肉；营养；③气孔；叶脉，相关概念表皮表皮，定义1：组成翼腮纲和笔石纲群体外骨骼的硬蛋白物质，通常由纺锤层（内）和外皮层（外）构成。
徒手切片制作方法
一、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。
二、材料、用品1、用品显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤1、选材所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。
使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。
2、切片（1）盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。
（2）右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。
(6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存，可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。
徒手切片制作方法
一、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。
二、材料、用品1、用品显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤1、选材所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。
使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。
2、切片（1）盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。
（2）右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。
(6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存，可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。
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徒手切片法
用光学显微镜观察的样品必须是透明的，因此，无论是临时装片还是永久制片的玻片标本，制作前都必须先将材料切成薄片。
徒手切片法简称手切片法，即以手持刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法。
是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的切片方法，也是最重要的基本技能之一。
这种切片方法简便易行，节省时间；而且所需工具简单，只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就可以操作。
还有一个独特的优点，就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜色。
其缺点是不易做到将整个切面切得薄而完整，往往厚薄不一；过软过硬的材料比较难切。
徒手切片一般处理的是新鲜材料，有时也可将材料预先固定好。
一般材料的徒手切片的方法如下：
1. 材料的准备：
一般选择正常、软硬适中的植物器官或组织为材料，直接切成长约2～3厘米的小段，削平切面。
所取的新鲜材料应及时放入水中，以免萎蔫。
取材的大小，一般直径不超过5mm，长度以15-25mm为宜。
过于柔软或微小的材料，难以直接执握手切，可夹入坚固而易切的夹持物中切。
常用的夹持物有去除木质部的胡萝卜根、土豆块茎、接骨木的髓部等。
切前先将夹持物切成长方小体，上端削平。
对于较薄的叶状体材料，可将夹持物纵切一缝，材料夹于其中即可；如不是叶状体，即将材料夹于其中，或在缝里挖一个和材料形状相似、大小相同的凹陷，把材料夹在凹陷里。
然后用手握住夹持物，采用上述方法将夹持物和其中的材料一齐切成薄片，除去夹持物的薄片，便得到材料的薄片。
坚硬的材料要经软化处理后再切。
软化的方法：对于比较硬的材料，切成小块煮沸3～4 h，再浸入软化剂（50%酒精∶甘油＝1∶1）中数天至更长些时间，而后再切。
对于已干或含有矿物质，更为坚硬的材料，要先在15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周，充分浸洗后，再置入甘油里软化后再切。
2. 执握刀片和材料的方法：
左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使之固定不动。
为防止刀伤，拇指应略低于食指，并使材料上端超出手指2～3毫米，不可高出过多，否则切片时材料容易弯折，也不容易切薄。
右手大拇指和食指捏住刀片的右下角，刀口向内，并与材料切面平行，切片前先将材料和刀口上蘸些水，使之切时滑润。
3. 切片：
左手保持不动，以右手大臂带动前臂，使刀口自外侧左前方向内侧右后方拉切，同时观察切片的进展情况。
注意只用臂力而不要用腕力或指关节的力量，不要两手同时拉动，两手不要紧靠身体或压在桌子上，并且动作要敏捷，材料要一次切下，切忌中途停顿或推前拖后作“拉锯”式切割。
关键是要切得薄而平。
如此连续切片，切下数片后，用湿毛笔将切片轻轻移入培养皿的清水中备用。
4. 注意：
在切片过程中刀口和材料要不断蘸水，以保持刀口锋利和避免材料失水变形。
所切的材料和刀片一定要保持水平方向，不要切斜，否则细胞切面偏斜，同样会影响观察。
5. 镜检：
连续切片，从中挑选薄而平的切片做成临时装片供镜检，必要时也可以制成永久装片。
挑选切片时，材料关键是切得平而薄，不要求切得很完整，有时只要有一小部分就可以看清
其结构了。
一次可多选几片置于载玻片上，制成临时装片，通过镜检再进一步选择理想的材
料用以观察。