全身用药的毒性研究

四、资料整理要求
1、首页写明试验题目，试验单位，课题负责 人签名、试验参与人名单，职称，试验开 始即结束时间，实验原始资料保存地点， 申请注册单位等。 2、第二页 试验摘要
3、内容 试验报告的内容 包括试验方法、目 的、供试品（品名、批号、生产单位、规 格、包装情况、性状等等。），实验动物 情况（来源、数量、品系、雌雄、动物证、 试验环境温湿度、饲料来源等），试验方 法，结果，结论，参考文献等。 4、要客观的描述大体解剖及病理学检查结果， 提供病理照片的材料。
五、结果评价
1、试验结果数据进行统计学处理。 2、根据试验目的，结合所观察到的毒性表现 作出恰当的评价。 3、对获得的数据进行科学全面地分析。 4、对于某些项目的试验，可安排在该实验中 同时观察，并提供符合要求的实验结果。
第三节 制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验 血管刺激性试验 体外溶血试验 全身毒性试验 过敏性试验 热原试验
家兔耳缘静脉血管
二）体外溶血试验
1、目的-静脉注射剂对红细胞状态的影响 、目的2、动物-家兔1只 、动物-家兔1 3、方法 1）2%红细胞悬液的制备 2%红细胞悬液的制备 2）受试物的制备-临床使用浓度 ）受试物的制备3）试验方法
体外溶血试验加样表 试管号 1 2 3 4 5 6 7 2%红细胞 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2%红细胞 生理盐水 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 蒸馏水 2.5 受试物 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 4、判定方法-溶血、无溶血、红细胞凝聚 、判定方法5、结果评价-3小时内无溶血，可以注射使用 、结果评价-
1、目的-判定受试物是否有致热作用 、目的2、动物-家兔 、动物3、方法 3只家兔，侧正常体温，注射药物，每 小时测体温一次，共3 小时测体温一次，共3次。最高一次温度 减正常体温。如三只家兔中有一只升温超 过0.6℃或三只家兔升温总和超过1.4℃时; 0.6℃或三只家兔升温总和超过1.4℃时 应另取5 应另取5只家兔复试，方法通上。
对一期临床的指导意义
4、为新药药学研究提供参考
二、试验方法 （一）半数致死量（LD50)的测定 试验方法 1、实验动物选择
啮齿类动物 动物 非啮齿类动物 动物性别、年龄、数量。
2、动物随机分组
按性别、体重采用分层随机法
3、剂量设计
预试验得出0-100%的死亡剂量范围 内，设计5-6个剂量组。各剂量组间距 为1:0.65-0.85,高剂量70%死亡率以 上，低剂量死亡率30%以下。
第三节 制剂的全身毒性 试验 一、静脉注射制剂的全 身毒性试验 1、血管刺激性 2、体外溶血试验 3、过敏性试验 4、热原试验
二、局部用药的全身毒 性试验
（四）特殊检查
可能引起眼、耳毒性的药物，应增加 眼、耳毒性的检查。 有些药物尚需研究对酸碱平衡、水盐 代谢的影响。
（五）系统尸体解剖
1、脏器系数 心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲 状腺、睾丸、子宫、脑等 2、组织学检查 内容为：脑、脊髓、视神经、眼、 垂体、心脏、肝、脾、肺、肾、肾上腺、 甲状腺、睾丸、子宫等。
第十七章 全身用药的毒性研究
第一节 新药急性毒性试验 急性毒性试验
毒性反应类型 定性 出现和消失时间 可能的靶器官和死亡原因 致死量 最大给药量 半数致死量
定量
一、目的和意义 1、了解新药急性毒性的强弱 LD50 ED50 治疗指数（ LD50/ED50） 相对毒性 安全系数（ LD5/ ED95）
4、判定方法
反应级数 0 1 2 3 4 豚鼠过敏反应判定标准 反应症状 无明显反应 有轻微抓鼻、颤抖或竖毛 有几次咳嗽、抓鼻、颤抖或竖毛 多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难 或痉挛、抽搐等 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡
5、结果评价 反应级数2级（包括2 反应级数2级（包括2级）为阳性
四）热原试验
（四）固定剂量试验
试验不以死亡为观察终点，而以明显 的毒性体征为评价指标。 据资料，用5、50、500和2000mg/kg 4个国定剂量中的一个做初试剂量，单次 给药。给药前禁食6-12小时，给药后禁食 3-4小时。
（五）近似致死剂量试验
主要用于非啮齿动物的誓言。常用 Beagel犬或猴。 1、估计可能的致死范围。 2、按50%递增法，设计10-20个剂量的 序列表。 3、在剂量的序列表中找出可能致死剂 量范围。
4、判定方法 1）3只家兔升温总和不超过1.4℃而且每 只家兔升温总和不超过1.4℃而且每 只家兔升温不超过0.6℃。 只家兔升温不超过0.6℃。 2）5只家兔升温总和不超过3.5℃而且升 只家兔升温总和不超过3.5℃而且升 温超过0.6℃的家兔不超过1 温超过0.6℃的家兔不超过1只。 5、结果评价
（六）其他方法
1、上下法（阶梯法、序贯法） 2、累积剂量设计法（金字塔法）
三、急性毒性试验中常用LD50计算方法
1、Bliss法 2、寇氏法 3、改良寇氏法 4、何尔恩法
第二节 新药长期毒性试验
长期毒性试验 对动物反复多次连续给药的毒性试验。 长期毒性试验的目的 1、反复多次给药的情况下，实验动物 出现的毒性反应、量效关系、主要的靶器 官、损害程度及其可逆性。 2、获得反复给药情况下，实验动物能 耐收的剂量范围及完全无毒性反应的安全 范围。
5、给药容量 应根据体重增长情况调整给药量，按 等量不同浓度法配制药物。 6、试验周期
临床试验用药 动物试验用药 ＜ 5天 2周 ＜ 2周 4周 2-4周 3个月 1-3个月 6个月 ＞ 3个月 啮齿类6个月、非啮齿类9个月 一般给药时间为临床给药试验周期的3-4倍时间
二、检测项目
（一）一般观察 外观体征和行为活动，流涎等腺体分泌、 粪便性状与颜色、毛色、行为、给药局部 反应、食量及体重变化。对死亡动物应进 行系统病择及分组 啮齿类 非啮齿类 溶剂对照组 高剂量组 给药试验组 中剂量组 低剂量组
2、实验室条件 应尽量符合GLP标准。 应尽量符合GLP标准。 3、剂量设计 低剂量组-无毒剂量（临床用量2 低剂量组-无毒剂量（临床用量2-3倍） 中剂量组中剂量组-高、低剂量几何平均数 高剂量组高剂量组-毒性剂量 4、给药途径 拟推荐的临床用药途径
4、给药
两种给药途径
5、观察
观察时间及观察内容
6、结果处理与评价
对数据进行科学全面分析，概括出 药物急性毒性总体情况。
（二）最大给药量试验
在受试药物合理的最大容积和最大 浓度条件下，单次给予试验动物不产生 死亡最大给药量试验。
（三）最大耐受量试验
单次给药引起动物出现明显中毒反 应而未发生死亡的剂量。 一般使用20只动物，连续观察7 一般使用20只动物，连续观察7-14 天。
2、为长期毒性试验和特殊毒性试验 剂量设置提供依据
致突变作用评价为核试验的最高剂量 为1/2半数致死量。 生殖毒性试验中，雌性动物最高量为 急毒中的最大耐受量。 长期毒性试验中为急性毒性的最大耐 受量。
3、获取新药毒性反应信息
毒性反应症状、靶器官、致死原因等
一般情况 毒性大小 特殊情况 无明显种属差异 有明显种属差异
三、检测指标的时间
（一）检查间隔（给药期间的检查间隔）
毒性试验周期 2周 4周 3 个月 6 个月 12 个月 给药期间检查次数 1 1 2 2 3 检查间隔 1周 2周 1 个月 2 个月 3 个月
（二）恢复性观察 最后一次给药后24小时，每组活杀部 最后一次给药后24小时，每组活杀部 分动物监测各项指标。留下部分动物，根 据药物的特点和毒性情况，继续观察2 据药物的特点和毒性情况，继续观察2-4周， 以了解毒性反应的可逆性和可能出现的延 迟性毒性。
一）血管刺激性试验
1、目的-观察静脉注射剂多次给予后对血管 的刺激性情况。 2、动物-家兔（每组至少3只动物） 3、方法-分成两组（阴性对照组、给药组） 分别对家兔耳缘静脉注射给药，连 续5次，末次注射后24小时处死部分动物， 肉眼观察并对组织进行病理学检查；余下 的动物14天后进行同样检查。 4、判定方法 5、结果评价
三）过敏性试验
1、目的-观察供试物对动物有无过敏反应 、目的2、动物-雄性豚鼠18只（三组-每组6只） 、动物-雄性豚鼠18只（三组-每组6 3、方法 溶剂组溶剂组-生理盐水或葡萄糖注射液 1）分组 阳性组-1%新鲜鸡蛋清 阳性组-1%新鲜鸡蛋清 给药组给药组-受试物 2）每组分别腹腔注射，隔日一次，共三 次，首次注射第14日、21日每组取3 次，首次注射第14日、21日每组取3只动物 静脉注射，观察过敏反应。
（二）血液学指标
红细胞、网织红细胞计数 血红蛋白 血液学指标 白细胞总数级分类 血小板 凝血时间
（三）血液生化指标
天门冬氨酸氨基转换酶(AST) 丙氨酸氨酸氨基转换酶(ALT) 碱性磷酸酶(ALP) 血液生化指标 尿酸氮(BUN) 、总蛋白(TP) 白蛋白(Alb) 、血糖(ALU) 总胆红素(T-BIL)、肌酐(Crea) 总胆固醇(T-CHO)
二、局部用药的全身毒性试验
主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻 剂、吸入剂及直肠、阴道制剂等引起的全 身毒性试验。见第十九章。
小结
第一节 新药急性毒性试验 一、目的和意义 二、试验方法 1、半数致死量的测定 2、最大给药量试验 3、最大耐受量试验 4、固定剂量试验 5、近似致死量试验 三、急性毒性试验中常用的 LD50计算方法 第二节 新药长期毒性试验 一、一般原则 二、检测项目 1、一般观察 2、血液学指标 3、血液生化指标 4、特殊检查 5、系统解剖 三、检测指标时间 1、检查时间 2、恢复性观察 四、资料整理要求 五、结果评价