热休克蛋白70

本科生毕业论文（设计）册

学院生命科学院

专业生物科学

班级（届） 2015届

学生张川

指导教师李东明

任务书编号 2015届103

河北师范大学本科毕业论文（设计）任务书

编号： 2015届103

论文（设计）题目：急性低氧刺激下树麻雀HSP70基因的适应性变化

学院：生命科学院专业：生物科学班级（届）： 2015届

学生姓名：张川学号： 2011012028 指导教师：李东明职称：副教授

1、论文（设计）研究目标及主要任务

研究目标：在急性低氧刺激下，树麻雀肝脏组织中HSP70基因水平的变化。

主要任务：分析低氧刺激对树麻雀HSP70基因水平的影响。

2、论文（设计）的主要内容

热休克蛋白是一种高度保守的应激蛋白，在受到外界刺激时，机体的HSP70会有一定变化，以保护组织器官等。本研究以树麻雀为研究对象，研究其在低氧刺激下肝脏组织中HSP70基因的变化。

3、论文（设计）的基础条件及研究路线

基础条件：本实验室主要研究动物对环境的适应性，具备研究树麻雀HSP70的基础条件，实验室仪器设备齐全，并具有野外取材的条件和能力。

研究路线：将树麻雀放入模拟各种海拔高度低氧的环境生活一定时间，然后提取其肝脏组织，对肝脏组织中HSP70基因的mRNA表达量进行分析对比。

4、主要参考文献

[ 1 ] Welch WJ. Mammalian stress response: cell physiology, struc2 ture / function of stress p roteins, and imp lications for medicine and disease[ J ]. Physiol Rev, 1992, 72 (4) : 1063 - 1081.

[ 2 ] Suzuki k, Sawa Y, Kagisaki k, et a l. Reduction in myocardial apop tosis associated with overexp ression of heat shock p rotein 70 [ J ]. Basic Res Cardiol, 2000, 95 (5) : 397 - 403. [ 3 ] 任宝波,王玉艳,王纯净,等. HSP70 家族的分类及基因结构与功能[J ]. 动物医学进展,2005 , (26) :98 - 101.

[ 4 ] Ishii T ,VdonoH ,Yamano T ,et al. Isolation of MHC class I - restricted tumor antien peptide and its precursors asso2 ciated with heat shock proteins HSP70 , HSP90 and gp96 [J ]. Immunol ,1999 ,162 :1303 - 1309.

[ 5 ] 陈劲松. 热休克蛋白的分子遗传学研究进展[J ] . 国外医学一遗传学分,2001 ,24 (3) 128 - 132.

指导教师：年月日

教研室主任：年月日

河北师范大学本科生毕业论文（设计）开题报告书

本科生毕业论文设计

题目：急性低氧刺激下树麻雀HSP70等基因的适

应性变化

作者姓名张川

指导教师李东明

所在学院生命科学院

专业（系）生物科学

班级（届） 2015届

完成日期 2015 年 4 月 13 日

目录

摘要 (2)

关键词 (2)

1 前言 (2)

2材料与方法 (2)

2.1 样品采集用具 (2)

2.2 样品的采集及处理 (2)

2.3 HSP70基因的克隆 (2)

2.3.1实验药品及仪器 (2)

2.3.2 缓冲液及试剂的配制 (3)

2.3.3 提取RNA (3)

2.3.4 RNA反转录成cDNA (3)

2.4 HSP70的定量分析 (4)

2.4.1 实验仪器及药品 (4)

2.4.2 实验原理 (4)

2.4.3 实时荧光定量PCR (4)

2.4.4 数据处理与分析 (5)

3 结果 (5)

3.1 肝脏总RNA的抽提 (5)

3.2 mRNA的比较 (6)

4 讨论 (6)

5 结论 (7)

参考文献 (7)

英文摘要 (9)

英文关键词 (9)

急性低氧刺激下

树麻雀HSP70基因的适应性变化

作者：张川指导教师：李东明

摘要：氧是动物生命活动中不可或缺的元素。在低氧或缺氧刺激下，动物组织细胞会受到损害或死亡。热休克蛋白70（HSP70），是一种高度保守的应激蛋白。在各种理化因素的刺激下，HSP70对细胞内的蛋白质具有稳定性，以保护有机体组织和结构少受损害。目前，针对HSP70的研究主要集中于哺乳动物，对鸟类的研究尚少。本研究以树麻雀(Passer montanus)为研究对象，研究其在急性低氧条件下(不同低氧程度和不同处理时间)肝脏中HSP70 mRNA的表达量的高低。实验数据显示，树麻雀肝脏组织处的HSP70 mRNA的表达量在3km-8h组和3km-24h组中呈上升趋势，但并无显著性。在3km-8h组和6km-24h组中，树麻雀肝脏组织处的HSP70 mRNA的表达量有不同程度的降低。但通过LSD多重比较只有6km-24h低氧处理组显著低于其他组。

关键词：热休克蛋白70（HSP70）；急性低氧刺激

1 前言

热休克蛋白是一种高度保守的应激蛋白。正常情况下，热休克蛋白表达并不多，而在机体受到外界刺激时，热休克蛋白迅速大量表达，维持细胞内蛋白质的稳定，减少有机体组织结构的损害。在热休克蛋白中，又以热休克蛋白70（HSP70）诱导表达最多。目前，研究发现HSP70对动物的心肌保护具有很重要的作用。在低氧刺激下，它能维持心肌的正常心律，减少心肌受损面积，减小心肌因缺血而坏死的范围。同时，还能增加有机体组织结构的耐受性。不过，就目前而言，这些研究大多集中于哺乳动物，而对同样是高等动物的鸟类的研究却很少。本研究是以树麻雀为研究对象，研究其在不同低氧程度及不同处理时间后，肝脏中HSP70 mRNA的表达量，以增加对HSP70的了解。

2材料与方法

2.1 样品采集用具

解剖刀、圆头剪、解剖镊、尖头剪、止血钳、冰盒、液氮罐（10升）、苯巴比妥、模拟低压低氧舱。

2.2 样品的采集及处理

采用雾网法捕捉野生树麻雀，测量体重等各项指标后，放入低压氧舱适应15分钟，根据不同处理时间和不同低氧程度进行低氧处理，分为五组：对照组（N=9）、3km-8h组（N=6）、3km-24h组(N=8)、6km-8h组(N=5)、6km-24h组(N=7)。

低氧处理后，注射麻醉剂（苯巴比妥，7.5μl/g体重），断头处死，迅速获取麻

雀肝组织置于液氮中速冻保存后，移至-80℃超低温冰箱备用，用于提取总RNA。

2.3 HSP70基因的克隆

2.3.1实验药品及仪器

实验仪器：匀浆器（sigma）、吸头(Axygen)、振荡器（生工）、1.5ml EP管（Axygen）、