热休克蛋白70与心肌保护

【关键词】hsp70；心肌缺血/再灌注损伤；心肌保护
热休克蛋白(heat shock proteins, hsps),也称应激蛋白，是生物体或离体培养细胞在应激状态下产生的一类内源性保护蛋白，根据同源程度及相对分子质量大小可分为hsp110、hsp90、hsp70、hsp60、小分子hsps等几个家族。

由于hsp70在正常细胞中水平较低，应激状态下可显著升高，目前成为hsps中最为关注、研究最深入的一个家族［1］。

近年研究发现，缺血/再灌注心肌中有hsp70的表达，通过多种机制产生心肌保护作用。

1概述
1.1 hsp70的分类、表达及分布hsp70家族主要包括hsp72、hsp73、grp78、grp75四个成员，按表达情况分为诱导型和结构型】1-2］。

hsp72为高度应激诱导，存在于胞浆中，胞核在正常条件下不表达或少见合成，为诱导型；hsp73固定表达并存在于胞浆和胞核中，为结构型；grp78、grp75为葡萄糖调节蛋白，分别固定存在于内质网和线粒体。

正常细胞可表达结构型hsp70，在应激下略增加，而诱导型hsp70仅出现于应激细胞，可以在各种应激状态下被诱导，如高热、缺氧、运动、缺血、氧化应激、心衰、射线、内毒素、某些药物等。

hsp70存在于细胞内，并在细胞内发挥作用。

应激时，大部分诱导型hsp70位于细胞核内并包围核仁，恢复后则移入胞浆，再次应激又重回胞核。

1.2应激状态下hsp70的表达机制及调节hsp70表达的原因估计与应激情况下未折叠或变
性蛋白质的出现，或者细胞内游离钙、蛋白激酶、dna等的改变有关。

热休克基因的表达是对变性蛋白的应答，其应答机制被认为与热休克转录因子(heat shock transcription factor， hsf)和热休克元件(heat shock element， hse)有关。

hsf是一种胞浆内的多肽，通常以单体形式存在，少数与hsp70结合；hse为位于hsp70基因启动子中特定的核苷酸序列。

应激情况下，变性蛋白失去正常的三维结构，暴露出内部的hsp70结合位点，hsp70与受损蛋白结合后释放出游离的hsf，游离hsf倾向于聚合成三聚体，向核内移位并与hse上游的起动序列相结合，起动hsp70转录合成。

应激状态下hsp70的表达与细胞的生理状态有关，随着机体衰老和细胞老化，hsp70 mrna 和hsp70的合成和功能均有所降低。

实验表明，青年鼠比老年鼠心肌细胞hsp70表达量明显增多，肥厚的心肌细胞比正常的心肌细胞hsp70表达量减少°hsp70合成还依赖于预存的hsp70 含量和应激反应的严重度，hsp70可作为一种负性调节物质调节hsp70的表达。

应激原刺激可使即早基因(immediately early genes，iegs)先于hsp70基因在细胞内表达，有研究推测 hsp70基因可能是iegs的靶基因之一。

xu等】3］提出，gtp结合蛋白ras和rac 可以显著抑制hsp70合成和hsf的活性。

1.3 hsp70的细胞保护作用hsp70的细胞保护作用是指机体细胞在受到各种应激，如高热、氧化等有害应激时，产生的hsp70可以增强细胞对损害的耐受程度，维持细胞的正常功能代谢，提高细胞生存率，是一种内源性的自我保护机制。

其可能机制为：①提高细胞对应激原的耐受性；②“分子伴侣”作用；③抗细胞凋亡的作用；④减轻过氧化及炎性损伤。

几乎全身所有的细胞都能表达hsp70,心脏的组织细胞在应激状态下亦可产生hsp70，而且产生的主要部位是在血管的内皮细胞，在应激时对心肌收缩功能和内皮功能具有保护作用，以抵抗各种应激原对心肌的损害，如高热、缺血及缺血/再灌注损伤等。

因此，调动心脏内源性的保护机制，以提高心肌细胞自身耐受缺氧的能力，是近年来人们实施心肌保护方面研究的主要着重点。

2hsp70与心肌缺血/再灌注损伤
1988年currie等用全身42°C高温维持15min造成大鼠热休克模型，24 h后心脏离体灌注，形成缺血/再灌注损伤，与对照组相比，热休克组心脏收缩功能显著恢复，肌酸激酶释放减少，过氧化氢酶增多，同时心肌hsp70增多。

后来大量实验证实，多种非致死性应激刺激能诱导心肌合成hsps，如缺血、压力或容量负荷、重金属盐、药物等。

心肌缺血是常见的应激反应，可以诱导心肌细胞表达hsp70。

实验证明短暂的心肌缺血预处理可以诱导hsp70的表达，而且反复多次短暂缺血诱导hsp70表达的量更多，hsp70合成的量与心脏保护的程度有关。

1996年junichiro等研究发现，缺血/再灌注可以诱导热休克转录因子-i(hsf-1)的明显激活，从而调节热休克蛋白基因的转录，促进hsps的合成，而且该研究也证实，在鼠心肌缺血/再灌注后，是再灌注而不是缺血诱导热休克反应。

心肌缺血/再灌注时hsp70产生的主要原因，可能为氧自由基的产生扰乱了蛋白质代谢，产生了分子作用的底物，激活hsf-1，诱导hsp70 mrna基因的表达和hsp70产生［4］。

3hsp70对缺血/再灌注心肌的保护作用
由热应激诱导的hsp70对随后发生的缺血/再灌注损伤具有保护作用，1996年mohamed等在研究热应激后离体鼠心肌缺血/再灌注时发现，心脏机械功能和内皮功能在心肌缺血后的恢复明显改善，如心输出量、左室舒张末期压力变化及冠状动脉血流量均明显增加。

通过hsp70 基因转染技术使心脏过度表达hsp70，也可以促进心肌缺血/再灌注后心脏功能的恢复［5-6］。

1995年marber等将大鼠诱导型hsp70基因插入小鼠基因后，导致小鼠hsp70 mrna超水平表达，与对照组(单纯热休克)相比，缺血/再灌注后心肌梗死面积减少40%，肌酸激酶释放减少50%，收缩功能恢复增加2倍。

非致死性应激和hsp70相互关联，它们通过细胞内在途径起保护作用；非致死性应激可造成细胞内蛋白变性，从而诱导合成hsp70，实现其保护作用［7］。

实验证明多种药物可以诱导hsp70表达，从而增加心脏的保护作用。

在体实验发现，去甲肾上腺素通过a 1-肾上腺素受体诱导鼠心肌c-fos和hsp70的表达，对缺血后心肌功能失调具有延迟性保护作用。

katori等［8］通过预先应用一氧化氮释放剂诱导hsp70表达而减轻鼠心脏移植模型中的心肌缺血/再灌注损伤；xu等［9］在鼠心缺血/再灌注前使用重组人促红细胞生成素预处理，诱导hsp70表达，缩小心肌梗死面积；mc guinness等［10］也在新西兰白兔缺血/再灌注模型中发现，预先应用3-3脂肪酸灌注，可以上调hsp70表达，降低心肌梗死面积；oxman等［11-12］应用乳酸杆菌和gga诱导hsp70过度表达而获得心肌保护作用；国内学者应用参麦注射液、川芎嗪、左旋尼卡汀等药物诱导hsp70表达，达到保护心肌的目的［13-14］。

4hsp70心肌保护作用的可能机制
心肌细胞遭受缺血/再灌注应激后，诱导hsp70表达，发挥“分子伴侣”作用，与新生、未折叠、错折叠或聚集的蛋白质相结合，使某些蛋白质解离，减少产生不溶性聚集物的危险性，并帮助需要折叠的蛋白正确折叠；维持某些肽链的伸展状态，以利于其跨膜转运，在线粒体、内质网等不同区域内发挥作用；同时还能促进某些变性蛋白的降解和清除；维持酶的动力学特征，以维护细胞的功能，抵抗缺血/再灌注损伤，促进心肌细胞功能恢复。

血管内皮细胞的功能是反映心肌状况的一项重要指标，缺血造成的血管内皮损伤将导致冠状血管阻力增加和心肌灌注不足，使再灌注时出现“无灌流现象”［15］。

实验证实热处理后hsp70 在心肌细胞和内皮细胞均有表达；如果将hsp70 cdna转染大鼠冠脉内皮细胞，再置于缺氧环境18h，恢复2h后，细胞内atp浓度较对照增加54%，乳酸脱氢酶漏出减少8%，内皮通透性降低59%。

因此，hsp70的内皮保护功能是其保护缺血心肌的重要保护机制。

心肌缺血/再灌注时氧自由基产生增加，它可以损伤细胞膜、破坏细胞酶系统、细胞核和核糖体蛋白，导致心肌功能失常［16］。

hsp70理论上能减少氧自由基释放，具有稳定细胞膜和溶酶体、防止蛋白质变性的作用。

su等发现，大鼠h9c2细胞经热休克处理后10〜60h细胞耐受低浓度h202损伤的能力增强，耐受较高浓度h202损伤的能力于热休克处理后20〜44h 出现增强o mn-sod是重要的抗氧化酶，可减轻氧自由基损伤，具有心肌保护作用。

研究表明［17］，大鼠心脏转染hsp72基因后，可提高缺血/再灌注后心肌mn-sod活性，保护线粒体功能，抑制心肌细胞凋亡，缩小心肌梗死面积。

因此，hsp70除直接导致细胞抗氧自由基酶活性增加外，还可作为“分子伴侣”保护mn-sod等细胞内抗氧自由基酶免受损伤，从而达
到清除自由基的作用。