病原微生物实验考试总结

【培养基】

【填空】

真菌培养（条件、培养基）：三高三低：高糖、高湿度、高氧；低营养、低温、低ph。

真菌培养基：沙保弱培养基

真菌三种类型的菌落：酵母型菌落、类酵母型菌落、丝状菌落

细菌在液体培养基中可呈现的生长方式（3）：均匀浑浊，絮状沉淀，菌膜生长（或腐败性恶臭）。

半固体培养基两种生长状态：穿刺线两侧羽毛状生长，为动力阳性。无鞭毛菌沿穿刺线线状生长，为动力试验阴性。观察细菌的计量单位为μm，油镜观察，1000倍

革兰染色可观察细菌的：大小，形态，排列，染色性。

细菌分类：球菌、杆菌、螺旋菌

细菌的几种特殊结构：荚膜、鞭毛、芽孢。

常见的细菌变异现象：L型变异；菌落变异；鞭毛变异；耐药性变异

S-R变异（中文名称、原理）：菌落变异。菌落有光滑（S）型和粗糙（R）型两种。S型菌落表面光滑湿润、边缘整齐；细菌经人工培养多次传代后，菌落表面粗糙干燥、边缘不整齐。由光滑型变为粗糙型，称为S-R变异。

H-O变异（中文名称、原理）：鞭毛变异。有周鞭毛的变形杆菌，普通琼脂培养基上具有迁徙生长的现象，菌落形似薄膜，为H菌落；若将此菌点种在0.1%苯酚的培养基上，鞭毛形成收到抑制，不再出现迁徙现象，在点种处形成不向外扩展的单个菌落，为O菌落。失去鞭毛的变异为H-O变异。

血凝试验：流感病毒表面具有血凝刺突，其成分为糖蛋白，能与某些动物或人红细胞表面的糖蛋白受体结合，出现红细胞凝集的现象。

血凝效价：血凝试验中‘++’表示有半数鸡红细胞凝集，在管低铺成薄膜，不凝集的红细胞在管底中心形成小圆点。以出现‘++’的病毒液的最高稀释度为~

平板划线原理：在划线过程中，线上的微生物越来越少，进而达到分离的目的，经培养后可获得由单个细胞生长而成的菌落。

鞭毛观察（3）：电镜观察，鞭毛染色后光镜下观察，半固体接种（或悬滴观察活菌运动）。

最重要的消毒方法：高压蒸汽灭菌，可达121度，维持15'-30'

小白鼠拖腿实验常用于鉴定破伤风梭菌的破伤风痉挛毒素

H2S生成实验：判断细菌分解含硫氨基酸的能力，培养基中出现黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀

白喉棒状杆菌：阿伯特（Alert）染色法，异染颗粒。

病毒三个培养方法：动物接种，鸡胚培养，组织细胞培养。

紫外线灭菌（原理、特点、用于何种灭菌）：使DNA链上两个相邻的胸腺嘧啶以共价键结合，形成二聚体，干扰DNA复制转录。穿透力弱，对人体皮肤眼睛有损伤。空气消毒，不耐热物品表面消毒。

实验菌对抗菌药物敏感程度：抑菌圈的直径大小。

【单菌】

结核分枝杆菌（培养基、菌落特点）：营养丰富的培养基。常用的有罗氏固体培养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿。菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明

金黄色葡萄球菌（色素、表现）：金黄色，

铜绿假单胞菌（色素、表现）：青色，

名解

【抗酸染色】

1.原理：

抗酸染色是指细菌脱色后不被盐酸乙醇脱色的染色方法。分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使苯酚复红渗透使其着色。脂质的主要成分为分枝菌酸，表现出抗盐酸乙醇脱色的能力，故菌体被染成红色；非抗酸菌被苯酚复红着色后，被盐酸乙醇脱色，被亚甲蓝染成蓝色。

2.步骤：

1)初染：苯酚复红5min

2)脱色：3%盐酸乙醇，30~60s

3)复染：碱性甲基蓝1min

4)吸水纸吸干油镜下观察

3.结果：抗酸阳性菌被染成红色；非抗酸菌被染成蓝色

4.意义：鉴定细菌的抗酸性

【革兰染色】

1.原理（细胞壁学说为重点）（3分）：

革兰阳性菌细胞壁结构致密，肽聚糖含量高且交联度大，脂质含量少。乙醇脱色溶解细胞壁脂质形成小孔，但脱水所用使细胞壁收缩构成屏障，通透性降低，阻止结晶紫-碘复合物溢出，细胞保留初染的紫色。革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层较薄，外膜含有丰富脂质，乙醇脱色时溶解脂质，细胞壁通透性增高，胞内结晶紫-碘复合物溢出，细菌脱色经复染后成红色。

2.步骤（4分）：

1)涂片：一滴0.9%NaCl于载玻片，取菌苔涂成菌膜

2)干燥

3)固定

4)结晶紫初染：一二滴1min，水洗

5)碘液煤染：一二滴1min，水洗

6)95%乙醇脱色：一二滴0.5min，水洗

7)复红复染：一二滴1min，水洗

8)吸水纸吸干油镜下观察

3.结果（2分）：

革兰阳性菌（表皮葡萄球菌）染成紫色；革兰阴性菌（大肠埃希菌）染成红色

4.意义（1分）：

观察细菌的形态、大小、排列方式，根据染色结果将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两大类，有助于鉴别细菌，并为分析细菌的致病性和选用抗菌药物提供依据。

【H2S生成实验】判断细菌是否能分解硫氨基酸，（沙门菌、普通变形杆菌）分解含硫氨基酸，产生H2S，与培养基中的铅或铁离子结合，生成黑色的硫化铅或硫化亚铁，为试验阳性。

【H-O变异】有周鞭毛的变形杆菌，普通琼脂培养基上具有迁徙生长的现象，菌落形似薄膜，为H菌落；若将此菌点种在0.1%苯酚的培养基上，鞭毛形成收到抑制，不再出现迁徙现象，在点种处形成不向外扩展的单个菌落，为O 菌落。失去鞭毛的变异为H-O变异

【糖发酵实验】糖发酵实验又称五管糖实验，包括葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖。判断细菌对不同单糖的分解利用能力。指示剂为溴甲酚紫，溴甲酚紫遇酸变黄色。

-：不分解该糖，发酵管中液体变浑浊，仍为紫色。

+：分解该糖产酸，发酵管中液体变黄色。

O：产酸并产气，发酵管中液体变黄，倒置小管中有气泡

【培养基】是根据细菌的营养类型，按照一定的培养目的而人工配制的，满足细菌或其他微生物生长繁殖或累计代