5种酵母菌的体外抑菌实验
体外抑菌实验方案
体外抑菌实验方案一、实验目的1.探究不同抑菌剂对特定细菌的抑制效果。
2.优化抑菌剂的配方，提高抑菌效率。
3.为临床应用提供理论依据。
二、实验材料1.实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等。
2.抑菌剂：酒精、碘伏、过氧化氢等。
3.实验器材：培养皿、移液器、酒精灯、生物安全柜等。
三、实验方法1.菌株活化：将实验菌株从冻存管中取出，接种至斜面培养基，37℃培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.抑菌剂配制：按照实验设计，配制不同浓度和配比的抑菌剂。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，置于37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
四、实验步骤1.活化菌株：从冰箱取出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等菌株，接种至斜面培养基，放入37℃培养箱培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.配制抑菌剂：按照实验设计，配制酒精、碘伏、过氧化氢等抑菌剂的不同浓度和配比。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，放入37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
五、实验结果1.不同抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑制效果：酒精浓度为75%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；碘伏浓度为5%时，抑菌率为99.95%。
2.不同抑菌剂对大肠杆菌的抑制效果：过氧化氢浓度为3%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；酒精浓度为75%时，抑菌率为99.90%。
3.不同抑菌剂对白色念珠菌的抑制效果：碘伏浓度为5%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；过氧化氢浓度为3%时，抑菌率为99.95%。
5种酵母菌的体外抑菌实验
王旗 王祎丹 耿旭浩 河北农业大学5种酵母菌的体外抑菌实验Ｈ计， 梅特勒－托利多仪器 （上海） 有限公司。
指示平板法（１）指示平板的制备试验菌株酵母菌制备：将５种酵母菌接种于ＹＰＤ培养基中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定吸亮度以测其菌液量，使其菌液量达到１０６ＣＦＵ／ｍ Ｌ。
（２）指示菌液的制备将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 分别接种于ＬＢ肉汤中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定其吸光值使其菌液量达到１０６ＣＦＵ／ｍ Ｌ。
牛津杯法测定结果与分析酵母菌抑菌结果分析 注：＋＋＋，抑菌圈直径（ｄ）＞２０ｍｍ，表示极其敏感；＋＋，２０ｍｍ＞ｄ≥１５ｍｍ，表示高度敏感；＋，１５ｍｍ＞ｄ≥１０ｍｍ，表示中度敏感；－，ｄ＜１０ｍｍ，表示抗药。
从表结果可以看出，胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌抑菌能力最强，胶红酵母对大肠杆菌抑菌能力相对较弱，另外三种酵母无明显抑菌性能；胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌抑菌能力强于胶红酵母，克鲁斯假丝酵母Ｍ５－１３对金黄色葡萄球菌抑菌能力相对较弱，另外两种酵母无明显抑菌性能。
本实验所选取的５种酵母菌通过体外抑菌实验表明：隐球酵母ＡＰ－２０、毕赤克鲁维酵母ＢＰ－１８对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无明显抑制作用，而葡萄有孢汉逊酵母、胶红酵母、克鲁斯假丝酵母Ｍ５－１３对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。
验室或临床实践研究表明，酵母菌对肠道细菌如大肠杆菌、沙门氏菌等引起的肠道感染、腹泻等疾病有保护预防性作用。
酵母菌代谢后产物对致病菌的拮抗、竞争排斥作用是产生上述功能的主要因素。
酵母菌拮抗作用产生的原因是多方面的： （１）酵母菌产酸，如乙酸、丙酸、乳酸等，酸对有害菌起生长抑制作用。
（２）酵母菌产抗生素或细菌素类物质，对有害菌有杀菌作用。
本试验从上述观点出发，用牛津杯法对５株酵母菌在体外的抑制菌能力及抑菌作用物质进行研究，为下一步动物实验打下基础。
抑菌实验方案
抑菌实验方案抑菌实验方案一、菌种大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538二、培养基LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15~20g，用10mol/LNaOH调pH，范围7.0~7.4倒平板（平板培养基）1.将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。
高压灭菌或干燥灭菌后备用。
2.取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内，先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞) ,同时将三角瓶转换至右手，而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝，至瓶口刚好伸入。
三角瓶口经火焰烧灼后，倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁)，迅速盖好皿盖，置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。
有时凝固后的培养基表面有冷凝水，可将平皿盖打开倒置于37℃温箱，除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。
为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。
培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。
一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用三、器械培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管四、实验步骤（一）、抑菌圈的测定(滤纸片法)1、菌种接种将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌反复转种2次，使菌种新鲜，置30℃恒温培养箱培养1d，备用。
2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃混匀。
3、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板4、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。
每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的指定位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。
体外抗真菌药物敏感性试验ATB FUNGUS 3法与微量肉汤稀释法的对比评价
１１３ 抗 真 菌 药物 氟 康 唑 （ Ｃ 辉瑞 制 药 有 限 ．． Ｆ Ａ， 公 司 ）伊 曲康 唑 （Ｔ Ａ， ； ＩＲ 西安 杨 森 制药 有 限公 司 ） ； 伏立 康唑 （ Ｒ 珠 海亿 邦 制 药 有 限公 司 ） 两 性 霉 Ｖ Ｃ， ； 素 Ｂ（Ａ ， 海新 先锋制 药有 限公 司 ） ＭＢ 上 。水 溶性 药
为临床微生物实验室抗真菌 药物氟康 唑的敏感性 实验 的筛
选方 法。
１ １ １ 菌株 来 源 收集 ２ ０ ． ． ０ ６年 ｌ ２月份 ～ ０ ７年 ２０ ６月份 安徽 医科大 学第一 附 属 医院 临床感 染 患 者 的 标本（ 、 痰 咽拭 子 、 液 、 便 、 液 、 腹 水 、 尿 粪 血 胸 胃液 、
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５ ６。 ７
安徽 医科 大学学报
Ａｔ ｎｖ ｓａｉＭｅｉｎ ｌ ｎ ｕ ０ ８Ｏ ｔ ３ ５ ｃ Ｕ ｉｒ ｔ ｓ ｄｃ ａｉＡ ｈｉ ０ ｃ； （ ） ａ ｅ ｉ ｔ ｉ ｓ ２ ４
体 外抗真菌药物敏感性试验 Ａ Ｂ Ｆ Ｎ Ｕ Ｔ Ｕ Ｇ Ｓ３法与 微量 肉汤稀释法的对 比评价
近 年来 ， 真菌病 发病率 呈 明显 上升 趋势 ， 特别是 条件致病 性真 菌感 染 更 为常 见 ， 真 菌药 物 合 理有 抗 效 的使 用 已越 来越 引起重 视 ， 是 ， 但 由于抗真 菌药 物 的广泛 应用 ， 别 是 随着 吡 咯类 药 物 的 耐药 菌 株不 特 断增 多 ， 临床 采用 合适 的实 验 方法 进 行抗 真菌 药 物 敏感性 测定 已是 当务之 急。评 价抗 真菌药物 敏感性 的最 基本 方法之一 是测 定其最 低抑 菌浓度 ＭＩ Ｃ值 。 美 国国家 临床 实 验 标 准 化 委 员 会 （ ＬＩ Ｍ ７Ａ 方 ＣＳ） ２一
抑菌实验步骤
抑菌实验步骤受试菌液浓度的确定：使用麦氏比浊管校准！0.5单位的麦氏比浊管的配置如下：取0.048mol/L的氯化钡0.5ml，加入到99.5ml的0.18mol/L的硫酸中即可。
此比浊管在625nm下吸光度为0.08---0.1之间，相当于10的8此方个菌体浓度！1 配药粗提物高、中、低剂量：50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL2 供试阳性药的制备阿米卡星：无菌条件下，分别吸取1.28mL、0.64mL硫酸阿米卡星注射液于50mL无菌容量瓶中，以pH7.8的磷酸盐缓冲溶液溶解定容，密封并冷藏保存。
庆大霉素：无菌条件下，分别吸取3.2mL、1.6mL硫酸庆大霉素注射液于50mL 无菌容量瓶中，以pH7.8的磷酸盐缓冲溶液溶解定容，密封并冷藏保存。
氯霉素：无菌条件下，分别吸取0.512mL氯霉素注射液于25mL、50mL容量瓶中，以pH6.0的磷酸盐缓冲溶液溶解定容，密封并冷藏保存。
头孢曲松钠：无菌条件下，取1.0g注射用头孢曲松钠溶于5mL pH6.0的磷酸盐缓冲溶液中，分别吸取0.32mL、0.64mL定容于50mL无菌容量瓶中，密封并冷藏保存。
以上供试阳性药的有效浓度均为2.56mg/mL和1.28mg/mL。
3 供试培养基MH（Mueller-Hinton）培养基（0.6%牛肉膏、1.75%蛋白胨、0.5%氯化钠，pH为7.4）；MHA培养基（0.6%牛肉膏、1.75%蛋白胨、0.5%氯化钠、1.7%琼脂，pH为7.4-7.6）。
4细菌培养无菌条件下，以移液枪吸取0.01mL菌种于MH培养基内，密封并轻轻摇匀，置37℃摇床(转速200r／min)中培养16-18h。
取直径为90mm灭菌的培养皿，每培养皿倒入20mL熔化并冷却至40℃左右的MHA培养基，待培养基完全凝固后，用移液枪吸取所需的供试菌悬液0.1mL于培养皿中，用涂布棒涂匀，使菌悬液均匀分布在培养基上。
取直径为7mm的圆形滤纸片蘸取供试溶液（完全浸透且无液滴滴落），将该滤纸片均匀摆放在涂有菌悬液的培养基上。
七组美容祛斑复方药的体外抑菌实验
外抑菌 活性 的筛 选实 验 ， 研究 在未 添加抗生 素 、 化学 药品 的情况 下 ， 菌悬 液 的浓度大 约为 １ ０ ｃ ／ 。菌悬 液需现配现 用 。 ×１ ｆ ｍｌ ｕ
对 １ 种常见 病原微 生物 的抑菌效 果 以及 它们 的最小 抑 菌浓度 。现 ２ ３ 含 茵平板 的制备 ６ ． 将 实验结果 报告 如下 。
２８ ２
《 求医问药》 下半月刊 Ｓｅ ｄｃ ｌ ｎ ｓ ｈ ｄｃ ｅ ０ １ 第 ９卷 ｅｋＭｅ ｉ ｄＡ ｋＴ ｅ ａＡ Ｍｅ ｉ ｎ ２ １ 年 ｉ
第７ 期
七组美容祛斑 复方药 的体 外抑菌 实验
姜 国银 杨 本寿 王 所 荣
（ 曲靖医学高等专科学校 云南 曲靖 ６ ５ ０ ） ５ ０ ０
白附子 防风 组方 五 ： 白丑 白蔹 细辛
内澄清透 明 ， 明无微生物生 长 ； 除观察试 管液 体清 亮透 明外 ， 证 真菌
还 需观察 是否有悬 浮物和 沉淀 ， 无悬 浮物 、 淀、 沉 混浊 证 明无 微生物
生长 ， 悬浮物 ， 有 沉淀 、 浊其 中任 何一 项 为有 微生 物 生 长； 混 以肉 眼 无 无沉 淀管 的 最低 药物 浓度 为 该药 的 ＭＩ 。 Ｃ 组方六 ： 白芨 白附子 白芷 白蔹 白僵 虫 细辛 益母 草 观察到 混 浊 、 悬浮 物 、 抑菌圈 直径 １ 以上 为抑 菌作 用 强 ， ～９ｍｍ 为具 有 中 等抑 菌 ０ｍｍ ８ 苦参 皂角刺 重楼 等 ２ 种 中药 。 ２
中医中药祛 斑是我 国传 统的 医疗美 容方 法 ， 一直 以来都 是市 场 ２１ 七组 纯 中药美容祛斑 复方 药旋 蒸液的制备 各 组 中药严 格按 ． 混匀 。用 ５ 倍体 积的 ５ 乙醇浸 提 中药 ２ ， 次放 ０ 次 每 开 发和科 学研究 的热点 。 目前 ， 市场 上很多 美容祛 斑产 品是 中药加 照配 比称取 ， 化 学药 品 ， 中药 美容 祛斑制 剂还很 少见 。根据 临床使 用效 果及 经 置 ４ 。过 滤除渣 ， 次滤液合 并后旋蒸 、 缩至终 浓度为 １ ／ 。 纯 ８ｈ 两 浓 ｍｌ ｇ
酵母样真菌体外抗菌活性检测报告
酵母样真菌体外抗菌活性检测报告发表时间：2010-06-02T08:32:45.140Z 来源：《中外健康文摘》2010年第4期供稿作者：陶萍[导读] 随着抗生素和细胞毒药物的广泛使用，导致真菌尤其是酵母菌的感染日益增多陶萍（湖北省荆州市第二人民医院湖北荆州 434020）【中图分类号】R978.5 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)04-0006-01【摘要】本文旨在了解临床常见真菌对常用抗真菌药物的敏感性，为临床使用抗真菌药提供依据；对试剂盒的质量与适用性进行评价。
【关键词】酵母样真菌药物敏感性试验随着抗生素和细胞毒药物的广泛使用，导致真菌尤其是酵母菌的感染日益增多，在免疫功能缺损者和AIDS患者中，真菌感染是最常见的并发症之一。
本文以法国生物梅里埃公司生产的ATB Fungus体外抗酵母菌药物敏感性试剂盒对临床分离的深部真菌予以试验研究，结果如下：1 材料和方法1.1实验菌株为近年来从临床送检的痰咽拭子（45株）、生殖道分泌物（31株）、血（2株）等样本中分离的菌株，其中白色念珠菌55株，热带念珠菌15株，光滑球拟酵母10株，克柔氏念珠菌2株，近平滑念珠菌1株，高里氏念珠菌5株，未定型3株。
1.2 ATB Fungus试剂盒成分该试剂盒具有32个孔的塑料条，含6种抗真菌剂，即5—氟胞嘧啶（5—FC）、两性霉素B（AmB）、制霉菌素（NYS）、咪康唑（MIZ）、益康唑（ECO）和酮康唑（KET）。
药物共占22孔，塑料条的前、中、后共有10孔为不含药的生长对照孔。
1.3标准参照株白色念珠菌ATCC90028为中科院皮肤病研究所馈赠。
1.4培养基 ATB Fungus试剂盒带有ATBF半液体培养基，实际上就是酵母氮源基础加天冬酰胺和葡萄糖培养基。
1.5缓冲液称取含3个结晶水的磷酸氢二钾157.5g，加水至100ml溶解pH9.8～10.0的缓冲液。
1.6方法按ATB Fungus操作指南进行菌液制备及接种。
真菌抑菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解真菌的抑菌特性及其应用。
2. 探究不同真菌对特定细菌的抑菌效果。
3. 学习微生物实验的基本操作技能。
二、实验原理真菌是一种广泛存在于自然界中的微生物，具有多种生物活性物质，如抗生素、酶、生物碱等，可以抑制或杀死其他微生物。
本实验通过培养特定细菌，然后分别用不同真菌提取物进行抑菌实验，观察并记录其抑菌效果。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细菌菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌- 真菌菌种：曲霉菌、青霉菌、酵母菌- 琼脂、牛肉膏、蛋白胨- 有机溶剂：甲醇、乙醇、氯仿- 其他试剂：pH试纸、NaCl、KCl、CaCl2等2. 实验仪器：- 培养箱、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、无菌操作台、无菌试管、滴管、培养皿等四、实验方法1. 细菌和真菌的培养：- 将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 将曲霉菌、青霉菌、酵母菌分别接种于PDA培养基，置于25℃恒温培养箱中培养5天。
2. 真菌提取物的制备：- 将培养好的真菌分别用甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂提取，制成真菌提取物溶液。
3. 抑菌实验：- 将培养好的细菌菌液均匀涂布于琼脂平板上。
- 将真菌提取物溶液滴加于平板上，形成抑菌圈。
- 将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察并记录抑菌效果。
4. 结果分析：- 记录不同真菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径。
- 比较不同真菌提取物的抑菌效果。
五、实验结果1. 曲霉菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为10mm和8mm。
2. 青霉菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果次之，抑菌圈直径分别为8mm和6mm。
3. 酵母菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为5mm和4mm。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，曲霉菌、青霉菌和酵母菌均具有一定的抑菌作用，其中曲霉菌的抑菌效果最好。
酵母菌药敏实验解释标准
酵母菌药敏实验解释标准
酵母菌药敏实验是一种用于测试酵母菌对不同抗生素或抗真菌药物的敏感性的实验。
在这个实验中，酵母菌会被暴露在不同浓度的药物中，然后观察其生长情况，以确定药物对酵母菌的杀菌或抑菌效果。
以下是对酵母菌药敏实验解释的一些标准：
1. 实验步骤，首先需要培养酵母菌，并将其接种到含有不同浓度抗生素或抗真菌药物的琼脂平板上。
然后在一定时间内观察酵母菌的生长情况，比较不同药物对其的影响。
2. 结果解读，根据实验结果，可以判断出酵母菌对不同药物的敏感性。
通常会使用药物最低抑菌浓度（MIC）来表示酵母菌对药物的敏感程度，MIC值越低，表示酵母菌对药物越敏感。
3. 实验条件，在进行酵母菌药敏实验时，需要严格控制实验条件，包括温度、湿度、培养基成分等，以确保实验结果的准确性和可重复性。
4. 应用范围，酵母菌药敏实验通常用于临床医学和科研领域，帮助医生选择最有效的治疗方案，也可用于评估新药物的抗菌或抗
真菌活性。
总的来说，酵母菌药敏实验是一种重要的实验方法，可以帮助人们了解酵母菌对药物的敏感性，为临床治疗和药物研发提供重要参考依据。
抗菌实验—抑菌圈法
抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。
通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。
用具和材料精品文档，你值得期待霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。
试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。
2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。
3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。
4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。
注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。
2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。
3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。
也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。
5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。
结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。
抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。
在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。
抑菌试验测定方法
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纸片法、牛津杯法等，但原理都是一样的，纸片法做起来比较简单，不用特殊的材料，可能比较适合你：
1.把实验室用的普通滤纸用打孔器打成0.5cm直径的圆片，装在试管中密封灭菌（121度，20分钟）。
2.将已经培养好的菌制成一定浓度的悬浮液，取1ml该菌悬液至灭过菌的（121度，20分钟）培养皿中，倒入适量（约4毫米厚吧）已灭菌的培养基（温度约45度，用手摸瓶壁不感觉烫手即可），轻轻转动培养皿，使培养基与菌液混匀，静置凝成平板。
3.将用于试验的农药配制成几个所需的浓度，用无菌镊子夹起一片滤纸放入药液中浸透，夹出时在容器边缘停靠片刻，滤掉多余的药液，把滤纸片放在平板中凝好的培养基的中心，用镊子稍用力按一下，使之与培养基充分紧贴。
4.按上述方法，每个浓度做3个重复，以灭菌水浸湿的滤纸片做空白对照。
5.在适当温度下培养一定时间后观察，用直尺或游标卡尺测量抑菌圈的大小，计算抑菌率就OK了！
希望能对你有帮助，有什么问题可以短消息我：）
2。
抑菌实验步骤
抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸取进行划线！涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂布法1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）培养基MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5gMH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。
菌悬液的配制将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h ，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。
具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL 菌悬液）于5 mL 的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的浓度100μL 做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL 药品溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB 培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，使其含菌体数为103 cfu/mL ，即为供试菌悬液。
抑菌作用初步筛选将灭菌固体培养基加热至熔化，待冷却至50℃时，每20ml 培养基倒入无菌培养皿中。
待平板自然晾干后，分别移取0.1ml 待测药品，0.1 mL 供试菌悬液，均匀涂布于加药平板上，每个处理3次重复。
抑菌实验检测操作规程
文件编号： SC-SOP-00300 第 1 页共 1 页
1. 目的：规范抑菌实验检测操作
2. 范围：适用于抗菌肽抑菌实验检测
3. 职责：实验室人员对本操作规程的实施负责。
4. 内容：
准备待检液：于离心管中按照300ul待检液加入1.2ml甲醇，浸提60min，然后3500rpm 离心15min，取上清液用孔径为0.22um的一次性过滤器过滤，滤液置于无菌容器待用待用。
准备培养基：LB液体培养基、NA固体培养基（胰蛋白胨5g/L、蔗糖10g/L、酵母浸粉2g/L、牛肉浸膏4g/L、氯化钠3g/L、琼脂粉20g/L），NA液体培养基（胰蛋白胨5g/L、蔗糖10g/L、酵母浸粉2g/L、牛肉浸膏4g/L、氯化钠3g/L），（备注：此处指示菌为黄单胞菌，如以其他菌作为指示菌请使用对应培养基。
灭菌：NA培养基115℃灭菌20min，LB培养基、移液枪头、打孔器等121℃灭菌20min。
活化：将黄单胞菌菌种转接到NA固体培养基上，30℃过夜培养然后转接到NA液体培养基中30℃、200rpm培养至液体浑浊待用。
抑菌：吸取黄单胞菌菌液50ul滴在NA固体培养基上，用灼烧过的涂布棒或灭菌过的玻璃珠涂布均匀，然后将打孔器灼烧后冷却，在该培养基上打孔四个，用灭菌牙签将琼脂块挑出，往一个孔中加入20ul无菌水或生理盐水作为对照，其他三个孔加入20ul待检液，30℃培养24小时观察
∗100%
抑菌率：抑菌率=对照菌落直径−菌落直径
对照菌落直径−打孔器外直径
5. 注意事项
5.1 注意无菌操作
5.2 必须进行重复以增加数据准确性。
体外抑菌实验报告
为了评估不同抗生素药物的抗菌能力，本实验通过体外抑菌实验，观察并记录抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等常见细菌的抑菌效果，以期为临床合理用药提供参考。
二、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等。
2. 药物：头孢克洛、氨苄西林、阿莫西林、庆大霉素、红霉素等。
3. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、M-H肉汤培养基。
4. 实验器材：培养皿、移液器、无菌试管、锥形瓶、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。
三、实验方法1. 菌株培养：将菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，37℃培养24小时。
2. 药物制备：将抗生素药物溶解于M-H肉汤培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
3. 抑菌实验：将培养好的菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，制成平板。
将不同浓度的药物溶液滴加于平板上，37℃培养24小时，观察抑菌圈直径。
4. 数据记录：记录不同浓度药物溶液的抑菌圈直径，计算抑菌率。
四、实验结果1. 头孢克洛对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为18mm、15mm、13mm。
2. 氨苄西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为12mm、10mm、5mm。
3. 阿莫西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为10mm、8mm、4mm。
4. 庆大霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为20mm、18mm、16mm。
5. 红霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为14mm、12mm、6mm。
1. 头孢克洛、庆大霉素等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌具有较强的抑菌效果，可作为临床治疗此类细菌感染的首选药物。
2. 氨苄西林、阿莫西林等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，但对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，临床应用时需注意。
复方中药洗剂单药的体外抑菌实验研究
复方中药洗剂单药的体外抑菌实验研究郭姝彤;艾彩莲;李宝莉【摘要】目的在复方中药洗剂的最佳提取工艺条件下,通过体外抑菌实验初步验证其体外抑菌作用,观察其对阴道常见致病标准菌的抑菌效果.方法采用渗漏法提取并干燥白芷、五倍子、川芎、当归、丁香、石斛、人参、珍珠8味药;采用细菌培养法进行体外抑菌实验,观察并记录8味中药提取物对白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、厌氧消化链球菌和阴道加德纳菌5种ATCC标准菌的抑菌作用,并对其进行统计学分析.结果 (1)8味中药提取物对5种ATCC标准菌的MIC中白芷对白色念珠菌和金黄色葡萄球菌、厌氧消化链球菌MIC最低,五倍子和白芷对大肠杆菌和阴道加德纳菌MIC最低.(2)8味中药提取物对5种ATCC标准菌的体外抑菌作用,与生理盐水组比较,P＜0.05.结论 8味中药提取物对白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、厌氧消化链球菌和阴道加德纳菌5种ATCC标准菌均有抑菌作用,MIC不同,且以白芷为优.【期刊名称】《延安大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2018(016)001【总页数】4页(P68-71)【关键词】复方中药洗剂;致病菌;体外抑菌【作者】郭姝彤;艾彩莲;李宝莉【作者单位】延安大学医学院,陕西延安716000;延安大学医学院,陕西延安716000;延安大学医学院,陕西延安716000【正文语种】中文【中图分类】R285据WHO统计，全球每年生殖道感染的新发病例数高达3.33亿[1]。
在我国，近半数城乡育龄妇女患有一种或多种下生殖道感染，其中，细菌性阴道炎、真菌性阴道炎和滴虫性阴道炎的检出率最高。
细菌性阴道炎是育龄妇女最常见的阴道炎感染性疾病。
全世界有数百万妇女患念珠菌性阴道炎(也叫真菌性阴道炎)，随着抗生素和皮质类固醇药的普遍应用，阴道念珠菌逐渐增多，直接影响到妇女的身心健康与生活质量。
目前治疗的阴道炎药物已有许多，但不良反应明显，研究有效且不良反应少的药物显得尤为重要。
布拉酵母体外抑菌效果初步研究
布拉酵母体外抑菌效果初步研究作者：赵宝顶宋平张怡刘敬为乔璐童应凯来源：《农业与技术》2018年第04期摘要：本文通过对布拉酵母分别在YEPD培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、混合培养基（YEPD+肉汤）中与3种菌（大肠杆菌，藤黄八叠球菌，枯草芽孢杆菌）的混合培养，通过稀释涂布、抑菌圈与液体发酵的方式来测定布拉酵母对于3种菌的抑菌性，结果显示，布拉酵母在不同培养基中队3种菌的抑菌效果不同，而抑菌圈实验没有出现抑菌圈，布拉酵母对不同菌的抑菌效果和生存环境有关。
关键词：布拉酵母；抑菌性；混合培养基中图分类号：S816. 7 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20180233007酵母菌也是在饲料中应用最早、最广泛的微生物之一[1]。
伴随着生物的高速发展，酵母菌的研究与开发利用也在不断深化，新发现的布拉酵母菌有促进肠道有益微生物的活性、抑制病原菌和促进肠黏膜免疫功能等作用[2]，布拉酵母菌（Saccharomyces boulardii）是益生菌的一种，它属于酿酒酵母，布拉酵母菌具有促进肠道内有益微生物的活性、中和肠道病原菌产生毒素的毒性、促进肠黏膜的免疫功能与降解病原菌毒素及肠黏膜毒素受体等作用，布拉酵母还拥有生物学优势，它可以耐高温，在37℃环境中仍然生长良好，在耐酸性环境细胞存活率仍能达到75%[3]。
现在食品安全的问题受到人们重视，造成人们肠道疾病的的发病率越来越高[4]，抗生素的弊端越来越引起人们的重视，抗生素对于一些特异性体质的人会产生过敏反应，严重时会导致死亡[5]。
而布拉酵母菌作为一种益生菌，能构建起抵抗病原体的第一道防线[6]。
布拉氏酵母作为一种非病源酵母对抗生素相关的腹泻和复发性艰难梭菌结肠炎具有保护作用，其机制与增强宿主肠道免疫应答有关[7]。
布拉氏酵母菌还能够促进肠道内短链脂肪酸的活性，可以迅速地恢复肠道的正常生理功能[8]，另外，在酵母细胞还能够作为饲料添加物，它含有丰富的氨基酸以及多种的维生素，这是动物生长所必需的营养物质[9]。
抗菌实验—抑菌圈法
抑菌圈实验抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。
通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。
实验器具：霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。
试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。
2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。
3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。
4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。
注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。
2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。
3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。
也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。
5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。
结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。
抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。
在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。
此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。
参柏祛毒袋泡剂抗炎镇痛抑菌和药物安全性研究
参柏祛毒袋泡剂抗炎镇痛抑菌和药物安全性研究贾菲;曲牟文;李国栋;王彦云;潘健;李峨;李宇飞【期刊名称】《辽宁中医药大学学报》【年(卷),期】2024(26)6【摘要】目的观察参柏祛毒袋泡剂抗炎镇痛抑菌药效学和药物安全性情况。
方法(1)抗炎实验:采用小鼠耳廓肿胀法,选取昆明小鼠60只,体质量18~24 g,按体质量分层使用随机数字表分为空白组、参柏高剂量组(1.750 g生药/mL)、参柏中剂量组(0.875 g生药/mL)、参柏低剂量组(0.438 g生药/mL)、阿司匹林组(100mg/kg)5组,每组12只。
涂抹70μL二甲苯在预先给药的小鼠右耳上,处死后对比左右耳片重量,计算肿胀度。
(2)镇痛实验:采用热板致痛法,选取昆明小鼠48只,雌性,体质量18~24 g,按体质量分层使用随机数字表随机分成空白组、参柏高剂量组(1.750 g生药/mL)、参柏中剂量组(0.875 g生药/mL)、参柏低剂量组(0.438 g生药/mL)4组,每组12只。
测定小鼠基础痛阈,再以40℃药浴各组分别泡足20 min,测量给药后5个时间点小鼠痛阈,计算痛阈提高百分率。
(3)体外抑菌实验:将观察药制备成原液、1∶1、1∶2、1∶4、1∶85个浓度梯度,分别加入5种共25菌株,培养后读取各组最低抑菌浓度值。
(4)安全性实验:采用家兔皮肤刺激性实验,选取健康大耳白家兔16只,使用随机数字表随机分为单次给药正常皮肤组、破损皮肤组及多次给药正常皮肤组、破损皮肤组4组,造模破损皮肤组,一侧去毛区涂参柏祛毒袋泡剂0.5 mL,另一侧对照区涂等量蒸馏水作空白对照,单次给药(1次/d)和多次给药(1次/d,连续7 d)进行对比,观察皮肤刺激性。
采用实验家兔皮肤急毒实验,选取新西兰家兔24只,使用随机数字表随机分为完整组和破损皮肤组,每组再随机分为参柏高、低剂量及空白组,共6组,药物均匀涂抹于家兔背部除毛区,于去掉受试药物后1、24、48、72 h至14 d,每日观察动物皮肤及全身情况做出评价。
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5种酵母菌的体外抑菌实验
作者：王旗王祎丹耿旭浩
来源：《食品界》2018年第08期
实验室或临床实践研究表明，酵母菌对肠道细菌如大肠杆菌、沙门氏菌等引起的肠道感染、腹泻等疾病有保护预防性作用。
酵母菌代谢后产物对致病菌的拮抗、竞争排斥作用是产生上述功能的主要因素。
酵母菌拮抗作用产生的原因是多方面的：（1）酵母菌产酸，如乙酸、丙酸、乳酸等，酸对有害菌起生长抑制作用。
（2）酵母菌产抗生素或细菌素类物质，对有害菌有杀菌作用。
本试验从上述观点出发，用牛津杯法对5株酵母菌在体外的抑制菌能力及抑菌作用物质进行研究，为下一步动物实验打下基础。
目前，在动物养殖中抗生素被大量使用，由抗生素残留引发的食品安全问题日益增多，因此，健康养殖已成为保障动物性食品安全的关键。
酵母菌是一种常见的适应性很强的兼性厌氧微生物。
因其含有丰富的蛋白质、核酸、维生素、微量元素等营养物质，且具有易发酵、增殖成本低等优点，被广泛应用于食品、化工、药物、饲料、环境治理和生物工程等行业。
本文前期研究发现，5种常见酵母菌具有一定的抑菌性。
对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌效果显着，为其微生态制剂的开发及应用奠定基础。
材料与方法
材料与试剂
（1）菌种
试验菌种：毕赤克鲁维酵母BP- 18、胶红酵母、隐球酵母AP- 20、克鲁斯假丝酵母M5-13、葡萄有孢汉逊酵母、枯草芽孢杆菌、沙雷氏菌、巨大芽孢杆菌（本实验室保存）
指示菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌（本实验保存）
（2）培养基
营养琼脂培养基（NA）、LB肉汤培养基、YPD培养基。
（3）试剂
LB肉汤培养基，北京路桥技术有限责任公司；YPD培养基，北京路桥技术有限责任公司；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、氯化钠、葡萄糖，北京奥博星生物技术有限公司，以上试剂均为分析纯。
仪器与设备。
ZSD- A1160生化培养箱、ZHWY- 2102C恒温摇床、ZHJ H- C1109B型超净工作台，上海智城分析仪器制造公司； FE20 p H计，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。
指示平板法
（1）指示平板的制备
试验菌株酵母菌制备：将5种酵母菌接种于YPD培养基中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定吸亮度以测其菌液量，使其菌液量达到106CFU/m L。
（2）指示菌液的制备
将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于LB肉汤中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定其吸光值使其菌液量达到106CFU/m L。
牛津杯法测定
结果与分析
酵母菌抑菌结果分析
从表结果可以看出，胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌抑菌能力最强，胶红酵母对大肠杆菌抑菌能力相对较弱，另外三种酵母无明显抑菌性能；胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌抑菌能力强于胶红酵母，克鲁斯假丝酵母M5- 13对金黄色葡萄球菌抑菌能力相对较弱，另外两种酵母无明显抑菌性能。
本实验所选取的5种酵母菌通过体外抑菌实验表明：隐球酵母AP- 20、毕赤克鲁维酵母BP- 18对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无明显抑制作用，而葡萄有孢汉逊酵母、胶红酵母、克鲁斯假丝酵母M5- 13对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。