生物样本样品前处理ppt
诺如病毒标本处理和实验室检测技术方案ppt课件
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1 标本前处理
1.4 食品
1.4.1 贝类 1.4.2 三文鱼
1.4.3 草莓、蓝莓
1.4.4 生菜和苗芽菜
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1 标本前处理
• 1.4 食品 • 1.4.1 贝类 • 1.4.1.1 设备和材料 诺如病毒质控样（中国食品药品检定研究院）、 高速离心机（可离心15mL~50mL 体积）、台式 离心机、碎花制冰机、生物安全柜、实时荧光定 量PCR 检测系统、眼科剪、眼科镊、一次性无菌 培养皿、恒温摇床、高压灭菌器、电磨均质器 （LX134MO）、一次性研磨杵（上海生工）、 15mL 去RNAase 离心管、1.5mL 去 RNAaseEppendorf 管、20μL、200μL、1000μL 微量移液器、 PBS 溶液 pH7.2 （Gebico）、蛋 白酶K（PCR 级 Roche）。 17
DEPC水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压 灭菌的MiliQ纯水，无色液体。经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质。
1 标本前处理
• • • 氯仿、丁醇。 1.2.2 操作方法 1.2.2.1 过滤装置准备 （1）使用无菌的镊子将滤膜放在滤器架上，滤膜有 三层，型号分别为Millipore HA filter、AP15 和AP20， 放置顺序为Millipore HA filter→AP15 →AP20。 注意：暴露出滤膜表面使其能与水样接触，请将滤 膜光滑表面的那边向下。所有的玻璃器皿应干净无 菌。每批水样使用不同的漏斗。
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1 标本前处理
20壳撬开，将消化腺用镊子直接 夹下，同时尽量将肠道取下。由于海虹的消化腺 相对牡蛎较小，所以需要增加取样的海虹个体数， 以使得总质量达到2.0g，用于后续的检测。海虹 的解剖结构见下图，图中镊子所指的位置为海虹 的消化腺。
生物样本分析
1、生物样本种类，特点，及前处理方法1）血液。
分为血浆/血清或全血。
测定血浆或血清中的药物浓度能较好的反映体内药物浓度变化。
若专门测定平均分布于血细胞内外的药物浓度，则用全血。
血浆采集应加入抗凝剂。
离心，取上清液，血清静置，移走血饼，离心，取上清液。
处理方法有沉淀蛋白法、液液萃取法、固相萃取法。
2）尿样，用于药物剂量回收研究、药物尿清除率、生物利用度研究。
易收集，但易受生理情况影响。
方法：酸解或酶解可使药物从缀合物中游离出来。
3）唾液：易收集，采集后应立即出去泡沫部分的体积，放置后易分层，离心，取上清液。
4）组织：为药物的吸收、分布、代谢、排泄等体内过程提供重要信息。
组织处理方法：匀浆化法，蛋白沉淀法，酸碱水解，酶水解5）头发：取样方便，无伤害，检样的掺伪可能性低，可测微量元素。
头发采集后需洗涤，处理方法有提取法，有机破坏法。
6）其他：乳汁，精液。
2、生物样品前处理方法及特点1）有机破坏法：包括湿法破坏、干法破坏和氧瓶燃烧法，适合人发样品的破坏破坏能力强，反应激烈。
2）直接沉淀法：将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清液进样。
当样品中待测物浓度较高，所用方法的特异性和灵敏度达到检测要求时可以考虑用直接沉淀法。
注意沉淀剂体积、沉淀剂的选择及对药物稳定性的影响（氧化、酸不稳定）。
可使接合型药物释放出来，缺点容易乳化。
3）液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋，离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。
多数药物亲脂，在适当有机溶剂中溶解度大于水相，而血样或尿样中含有的大多数内源性杂质是强极性水溶性物质，液液萃取可除去大部分杂质，从大量样品中提取药物经浓集后用于分离。
注意水相pH值，提取溶剂以及有机相和水相的体积，优点在于选择性，这依赖于有机溶剂的选择。
药物能与多数内源性物质分离，缺点在于乳化现象的产生：有机溶剂易挥散、有毒性、对环保不利及不能自动化。
4）固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到吸附或分配或离子交换或其它亲和力作用时，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂洗出杂质，再用适当溶剂洗脱药物。
微生物标本的采集方法(共52张PPT)
用2%碘酒从穿能刺点。向外除画圆非消无毒，法至消作毒区静域直脉径达穿5cm刺以上取，涂血擦穿，刺否皮肤则2遍，不待干应从留置导管内取血。
1、采样时间：消毒处理后4小时内进行采样
1◎、经日人常工记气录道：吸使引⑤用分后泌抽进物血行消前毒时应间累将积，标使签用超贴过1于000小血时培的应养加强瓶监测颈或更上换，建立标紫外签线消内毒使容用包登记括本，病每周人用7基5%本酒精信擦拭息灯管、并记录 其他使用中消采毒液血染菌时量：间≤1、00cf采u／m血l 部位。注意不要把标签贴在培养瓶条形码上，否则
无1、关采物样品时不间得段进：入在手消术毒室处，理洁后净，区操的作物前品进需行经采清样洁消毒处理方可进入
※ 抽血后未及时混匀血液凝固 不得检出致病性微生物
☂ Ⅰ类环境：洁净手术室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ级：
手术用房各种物体表面在每日术前和术后湿式擦拭清洁、消毒；
☂手术器械、穿刺针等：无菌生长 ☂血培养次数和采血时间 四、对可疑中心静脉导管相关血流感染 经支气管镜直接吸引 无痰可用3%---5%NaCI 5ml雾吸约5min导痰
※ 储存环境标本来源4℃冰箱----痰、尿液、粪便、活检组织、 气枪冲洗物、导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等
※ 室温（25℃）---血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、眼、耳、 鼻、喉、血管导管尖、体液、厌氧菌培养标本。
美国的理念
1970年以前，美国的医院定期对空气和环境表面（如地面、墙壁、台
面）进行培养。到了1970年，CDC和美国医院协会（AHA）主张 停止对环境的常规培养，因为医院感染发生率与空气或环境表 面中总的微生物污染水平不相关。且环境表面或空气中微生物 含量的允许水平也没有有意义的标准。1970---1975年，美国有 25%的医院减少了这种常规的环境培养工作--------一个已经持续 的趋势。
标本采集PPT课件
温即可，温度过低会导致对温度敏感的细菌死亡。
培
血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、
凝血等其它标本要高，所以要最先采集血培养
标本
1、成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每
养
血培养瓶（厌氧优先） 凝血试管（蓝色） 其 它有抗凝剂管（黑-绿-紫） 无添加剂管（红色，
处理程序
1、护士发现采集标本错误，立即停 止送检，重新采集标本，并做好解释。 2、发现标本有误或检验结果有质疑， 立即核查，通知医生，做好解释，重 新采集标本。 各类标本在采集、暂存与运送过程中 发生标本撒漏、标本容器破损等紧急 意外事件时，立即按医疗垃圾处理标 本，重新采集标本。
谢谢
苏朦朦 2017/11/26
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2024/5/22
要看懂胸水的报告，首先要分清是漏出液还是渗出液
成功项胸目水展示
漏出液可见于：充血性心力衰竭、上腔静脉阻塞、缩窄性 心包炎、肝硬化、肾病综合征、急性肾小球肾炎、腹膜透 析、粘液性水肿、药物过敏和放射反应等。
渗出液又可分： 1.浆液性：①感染性疾病：结核性胸膜炎，肺炎、病毒、真菌和寄生 虫感染；②恶性肿瘤；③肺栓塞；④结缔组织疾病；⑤Meigs综合征 等。 2.脓胸：①结核性脓胸；②肺部感染引起脓胸；③外伤、食管穿孔、 气胸、胸腔穿刺或术后继发化脓性感染等。 3.血胸：①恶性肿瘤；②外伤；③血气胸；④胸主动脉瘤破裂；⑤肺 栓塞等。 4.乳糜胸：①外伤致胸导管破裂；②丝虫病；③肿瘤致胸导管阻塞等。
血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集
后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报
告阴性，则继续采集2套血培养。
年度工血作液概述
生物样本库的建立与管理PPT课件
是指标准化地收集、保存用于各种研究的正常 或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、 血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、 RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临 床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其 质量控制、信息管理与应用系统。
政策法规
ISO标准 实验室安全 临床实验室 伦理 运输
生 物 样 技术标准 本 库
标准操作规范 （SOPs）
质量控制标准
知情同意书
伦理规范
伦理委员会 伦理审查
质量审查
样本运输
样本采集 样本处理 样本质量检验 样本储存 样本运输
DNA质量鉴定、RNA质量 鉴定、蛋白质质量鉴定
样本转移协议
ISO标准
公众对于肿瘤组织库建立的认知程度
有调查显示，多数公众对于利用外科手术切除组织进行肿瘤发病 机制或分子标志物的研究持肯定态度，并认为这是对手术切除组 织的最好利用。在一项对住院、门诊、急诊5 000例患者的随机调 查中发现，89.3％的患者同意将其样本的遗传信息用于研究，但 要求采用匿名形式。美国的Vanderbilt大学医学中心2005年启动了 一项旨在将准备丢弃的患者血样再收集以建立DNA数据库计划。 该计划估计，未来5年内可收到30万份以上的患者血样，以进行 疾病的基因型与表型相关性分析。越是大规模的人群遗传学研究 越是需要大样本的生物资源，故得到社会公众的认可很有必要。 目前，许多国家的大型医疗机构已建立组织样本库与数据库，但 因遗传信息属个人隐私，应当受到保护，也招致不少担忧。1998 至2002年间就曾有8个国际机构提出建立以群体为基础的遗传资 源库计划，主要内容是收集与储存血液及组织等生物样本，并收 集与这些样本相关联的医学与生活方式等信息。该计划的共同目 标是通过此项计划的实施，阐明某些疾病的遗传易感性和基因的 复杂性，从而达到改善人类健康与医学诊疗水平的目的。但由于 伦理学、涉及个人隐私等原因，该计划在一些国家搁浅。
生物样本样品前处理
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常用液液提取溶剂
溶剂名称 二氯甲烷 乙酸乙酯 氯代正丁烷
乙醚 戊烷 环己烷 正己烷 甲苯 异丙醇* 四氢呋喃* 乙腈* 正丁醇* 水*
分子量 84.9 88.1 92.6 74.1 72.2 84.2 86.2 92.2 60.1 72.1 41.1 74.1 18.0
注：“*”表示与水互溶
沸点（℃） 40
5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富
集与净化；但成本较高
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液液提取法
利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配 系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。
➢两相的分离需借助两相的密度差来实现
➢原理：相似相溶
➢分配系数：kA=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率
常见表面活性剂：Triton-X-100，吐温等
Tips
1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。 2、样本已经采集，考虑将待测物从容器中解离出来。
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讨论和问题
Thank you!
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0.08 0.36 1.66 1.63 3.92 1.50 1.84
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固相提取法
◇HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance Copolymer)材料的优点
△水可浸润 △反相保留 △PH1-14范围内稳定 △没有裸露硅羟基
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固相提取法
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固相提取法
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固相提取法
改变化合物PH，酸性 保留，碱性洗脱
77.1 77
34.5 36.1 80.7
69 110.6 82.4
66 81.6 117 100
密度（g/mL) 1.33 0.90 0.89 0.71 0.63 0.78 0.66 0.87 0.79 0.89 0.78 1.00 1.00
《生物样本分析》PPT课件
通过安装在线稀释旁通流路，可大量注入血浆（血清） 样品。
这便是Co-Sense的关键技术！
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在线稀释流路
导入泵
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自动进样器
在线稀释流程图
前处理柱
样品处理柱的容量
• 进样体积对色谱图的影响 • 当进样体积加大的时候，由于样品处理柱子容量
的限制会发生峰展宽的现象.
100 uL 50 uL 10 uL
背景
样品前处理是目前分析化学的瓶颈，是分析化学研究的难点和 热点问题之一。由于样品数量极多，且分析物含量越来越低、 基体越来越复杂，迫切要求发展高通量、高选择性、高效率的 在线样品前处理技术。因此，开展这方面的研究具有极为重要 的意义。
HPLC/LC-MS广泛应用于血浆或血清的代谢物分析和 原药分析，一般的血浆和血清分析，需要对样本进行 预处理，以除去蛋白质，这样会降低精确度和工作效 率。引入了具有限制性通路媒介（restricted access media -RAM）的预柱，可对血浆样本进行直 接分析，而不必进行预处理。这样，可提高精确度、 简化操作和提高工作效率 。但是，使用限制性通路 媒介柱，也存在一些问题，需解决的问题：回收率、 灵敏度、耐用性。
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98
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100mM phosphate (Na) buffer <pH=6.9>
629其中酸性化合物145碱性化合物675两性化合物180分子量一般离子化质谱分析编辑ppt血浆样品的特点基质复杂选择性强待测物含量低灵敏度高浓度差异大线性范围宽编辑ppt除蛋白质分离纯化浓缩液液萃取法固相萃取法规模缩小的柱色谱法直接沉淀法超滤法编辑ppt血浆样品加入提取溶媒酸化或碱化涡旋离心取上清液吹氮气浓缩残渣溶解过滤进样色谱分析编辑ppt药代动力学研究面临的挑战高效液相色谱法hplc的特点和局限
生化检验常见问题及处理方法课件
二、检验过程常见问题及处理
（2）检验项目间的交叉污染
相邻检验项目的干扰，A项目试剂或产物中含有B项目 的测定物质或影响B项目反应，而导致B试验结果的改变。 如：Mg放在ALP项目后面测定，可能会使检测结果偏高或重 复性差。因ALP试剂中含有Mgcl2，使测定结果偏高等。
处理方法：
① 调整实验的前后顺序来消除这种影响； ② 在两个项目之间设定其他项目或设置清洗剂并设定清洗 次数。
基本概念
检测系统：一个检验项目所涉的仪器、试剂、校准品、 测量程序（操作程序、质控程序、维护保养程序、检测 用水）、操作人员、消耗品、质控品等组合。
➢ 量值溯源：是通过一条具有规定不确定度的不间断的 比较链，使测量结果能够与规定的参考标准联系起来 的一种特性。（通常是国家计量基准或国际计量基准）
检验前的质量管理是检验质量管理中最薄弱、 最易出现问题、最难控制的环节，标本质量不符合 要求占60%-80% 。
按时间顺序包括： 检验申请 患者准备和识别 原始样本采集、运送和实验室内传递。
检验前常见问题及处理
1、患者的准备的常见问题及处理: （1）饮食：餐后、饮料、烟酒等，影响患者的检测 结果。 处理方法：患者空腹（8-12小时）。 （2）药物等其他因素的影响:如含VC、抗肿瘤药物、 降脂药物、输液等。 处理方法：尽量停止使用药物。超过药物的半衰期。
1、患者的准备问题； 2、标本的采集、运输、验收等问题。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证ppt课件
可编辑课件
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②加入中性盐
中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来，从而使蛋 白质脱水而沉淀。常用的中性盐：饱和硫酸胺、硫酸钠、 镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等。盐析的方法与有机溶剂提 取法常并用，药物的回收率较高。
质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。常用
的沉淀剂有：CuS04-Na2W04 ,ZnS04-NaOH等。含药物血 清与沉淀剂的比例为1:2混合，高速离心、分离后得上
清液。
可编辑课件
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④酶解法
在测定一些酸不稳定及蛋白结合牢的药物时，常需用 酶解法。
在测定尿中的药物浓度时，由于尿中药物主要以缀合 物的形式排除，较原型药物具有较大的极性，不易被 有机溶剂提取，常用酶水解的方法。
尿液中药物浓度较高，但尿液浓度受尿量的影响，通常变 化较大，应测定一定时间内排入尿中药物的总量。
可编辑课件
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5 唾液
唾液中所含成分比较简单，且容 易获得，但是只有少数药物的唾 液浓度和血浆游离药物浓度具有 相关性，实际使用不多，当药物 血浆结合率高的时候，唾液中药 物的浓度极低，很难检测。
可编辑课件
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1.沉淀蛋白
①有机溶剂沉淀法 加入水溶性的有机溶剂，可使蛋白质的分子内及分子间
的氢键发生变化而使蛋白质凝聚。常用的有机溶剂有：乙 睛、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。
血浆或血清与有机溶剂的体积比为1:3时，就可以将90% 以上的蛋白质除去，采用低温高速速离心机16000r/min离 心10min 便可将析出的蛋白质完全沉淀。
可编辑课件
《生物实验报告》课件
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数据处理
对实验数据进行统计、分析和图表展 示，以得出准确的结果。
工具与试剂
离心机
用于样本离心分离和沉淀。
恒温水浴
提供稳定的温度环境，用 于样本处理和实验反应。
毛细管管柱
用于样本分离和纯化，以 获得目标化合物。
溶液定容器
用于准确配制实验溶液的 容器。
分析天平
用于准确称取试剂和样品。
高效液相色谱仪 （HPLC）
2 实验操作中需要改进的地方
对实验操作中存在的问题和不足进行反思，提出改进建议。
3 实验结果的意义及应用
分析实验结果的意义和应用价值，探讨进一步研究的方向和可能性。
参考文献
1 姓名, 文章标题. 期刊名, 年份, 卷(期):页码. 2 姓名, 书名. 出版社, 出验用样本及试剂
收集适当的生物样本和所需试剂，并
样本预处理
2
进行预处理以准备实验所需。
对生物样本进行适当的预处理，例如
去除杂质、提取目标化合物等。
3
样本分离与纯化
使用毛细管管柱等方法对样本进行分
样本浓度测定
4
离和纯化，以获得目标化合物。
使用高效液相色谱仪（HPLC）或气相
色谱仪（GC）等设备测定样本中目标 化合物的浓度。
实验结论
1 生物样本中特定化合物的浓度已经经过确认
通过本实验，成功测定了生物样本中目标化合物的浓度。
2 实验数据的分析结果表明...
根据实验数据的分析，得出了关于目标化合物浓度的结论和相关发现。
实验总结
1 实验设计中应注意的问题
总结实验设计过程中需要注意的关键问题和要点，以提高实验可靠性和准确性。
用于测定样本中目标化合 物的浓度。
通用课件病原微生物样本的采集保存与运输定稿
细菌性食品中毒的主要检验样本
主要检验样本
粪便 、食品、血液 粪便 、食品 食品、呕吐物 食品、呕吐物
粪便 、食品
食品、呕吐物 粪便、食品 食品、呕吐物 食品、粪便 、呕吐物
病原微生物样本
采 集
保 存
运 输
基本原则 采集条件 采集要求 采样时间 样本种类 样本数量 采集方法
样品种类
饮用水 液体食品 固体食品 呕吐物 洗胃液 腹泻物 血液 脑脊液 皮损分泌物
• 采样管外贴上标签，注明患者的姓名、样本种类、采样时间采样人等基本 信息。
• 当患者出现神经系统症状时采集，检测IgM只需一份脑脊液。而检测IgG 则需收集两次，分别于发病初期和恢复期采集。
病原微生物样本
采 集
保 存
运 输
基本原则 采集条件 采集要求 采样时间 样本种类 样本数量 采集方法
• 血液样本
食物中毒细菌
沙门菌 副溶血性弧菌 金黄色葡萄球菌
蜡样芽胞杆菌
常见食品
肉类、蛋品 水产品、醃制品 肉类、乳品、淀粉制品
米饭、肉、乳、淀粉制品
致泻性大肠杆菌
凉拌菜、肉制品
椰毒假单胞菌 产气荚膜梭菌
肉毒梭菌
变形杆菌
玉米面、银耳
肉制品
堆放牛羊肉、罐头、 香肠、鱼、豆制品
动物性食品 特别是熟肉和内脏制品、冷盘
病原微生物样本
采 集
保 存
运 输
基本原则 采集条件 采集要求 采样时间 样本种类 样本数量 采集方法
• 咽拭子
采集病人发病3日内的咽拭子样本，用于病原检测（病原分离、核酸检测的阳性 率较高）。用压舌板将舌向下向外压，用专用拭子在咽后壁或悬雍垂后侧适当 用力涂抹数次，应避免触及口腔及舌部，迅速将棉签放入装有3-4mL保存液 （Hank氏液或生理盐水）的15mL外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签， 注明患者的姓名、样本的种类、采样时间、采样人等基本信息。 （5岁以下婴童采样时先将拭子用保存液蘸湿，在试管壁挤干后在进行采样）
生物样本样品前处理
包括抗凝、分离血清或血浆等步骤，为血液学实验提 供合格的样本。
THANKS
感谢观看
对于光敏感的样品，在处理和 保存过程中应避免直接光照， 采用避光容器或包装材料。
添加稳定剂
根据样品的性质，可以添加适量 的稳定剂，如抗氧化剂、防腐剂 等，以保持样品的稳定性。
减少处理时间
尽量缩短样品前处理的时间，减 少样品暴露在不利环境中的机会
，从而降低样品变质的风险。
05
样品前处理中的质量控制
质量控制标准制定
稳定性和可重复性。
前处理流程简介
样本收集与保存
根据研究目的和实验设计，选择合适的生物样本（如血液、尿液、组织等），并进行适当的保存和处理，以避免样本 变质或目标分析物的损失。
样本预处理
对收集到的生物样本进行初步处理，如离心、过滤、稀释等，以去除杂质和干扰因素，为后续的分析步骤提供纯净的 样本。
目标分析物的提取与富集
03
代谢物衍生化
利用色谱、质谱等技术对代谢物 进行分离和纯化，去除干扰物质。
对于某些难以检测或不稳定的代 谢物，可以通过衍生化反应提高 其检测灵敏度和稳定性。
其他生物样本前处理技术
组织样本前处理
包括组织固定、脱水、包埋、切片等步骤，为后续组 织学观察和实验提供基础。
细胞样本前处理
包括细胞培养、传代、冻存等步骤，为细胞实验提供 充足的细胞来源。
03
样品分离与纯化
分离技术介绍
01
02
03Leabharlann 色谱分离技术利用不同物质在固定相和 流动相之间的分配系数差 异，实现样品的分离，如 液相色谱、气相色谱等。
电泳分离技术
利用物质在电场作用下的 迁移速度差异，实现样品 的分离，如凝胶电泳、毛 细管电泳等。
扫描电镜高真空模式微生物样本的前处理
扫描电镜高真空模式微生物样本的前处理一、取材将菌株接种中液体培养基中，培养至一定时间后，离心收集菌体，弃上清，留沉淀。
二、固定戊二醛固定向沉淀中加2.5 %（v/v）戊二醛（将25%的戊二醛母液用pH值6.8的磷酸缓冲液（PBS，配置方法见文后）稀释十倍）1ml，4℃固定12 h，用pH值6.8磷酸缓冲液洗涤3次，离心收集回收菌体，弃上清。
三、脱水乙醇梯度脱水将沉淀依次在30 %、50 %、70 %、80 %、90 %、95 %、100 %、100 %乙醇中浸泡10 min进行梯度脱水，每个梯度乙醇脱水后离心收集菌体，再进行下一个梯度的脱水处理。
最后再离心收集菌体。
四、媒介剂置换（临界点干燥法此步可省略）乙酸异戊酯置换乙醇乙酸异戊酯置换乙醇两次，每次20 min，每次置换后8000 rpm，离心5 min回收菌体。
五、干燥方法一：空气干燥法（效果不好）将样品从醋酸异戊酯中取出，放置于干燥钵中干燥2~4 h。
方法二：临界点干燥法将样品从乙醇中取出，充入液体二氧化碳，液体二氧化碳置换乙醇，20－60分钟，升温升压达到二氧化碳临界点(31℃, 72.8大气压)，维持4分钟，保持温度和压力并缓慢放出二氧化碳，大约持续30分钟。
方法三：冷冻干燥法将样品从醋酸异戊酯中取出，分别于-20℃、-40℃、-80℃冷冻12 h，于冷冻干燥仪中干燥12 h备用。
六、导电处理离子溅射镀膜法将样本固定到导电胶布上，竖直放置到离子溅射仪的样品台上，按照抽真空1 min，离子溅射30 s对样本进行离子溅射镀膜。
七、电镜观察将样品从离子溅射仪中取出，放入扫描电镜中，高真空模式观察。
生化标本样本前处理流程
生化标本样本前处理流程英文回答：Pre-processing of Biomarker Specimens.Pre-processing of biomarker specimens is a critical step in biomarker discovery and validation. The goal ofpre-processing is to prepare the specimens in a way that maximizes the yield and quality of the biomarkers while minimizing the introduction of bias.The pre-processing steps typically include:1. Collection: Specimens are collected from patients or healthy controls according to a specific protocol. The collection method and storage conditions must be carefully controlled to minimize degradation of the biomarkers.2. Processing: Specimens are processed to remove impurities and to concentrate the biomarkers. This mayinvolve centrifugation, filtration, or precipitation.3. Storage: Processed specimens are stored at a controlled temperature and humidity to prevent degradation.4. Transportation: Specimens are transported to the laboratory for analysis. The transportation conditions must be carefully controlled to minimize degradation of the biomarkers.The choice of pre-processing steps depends on the type of specimen and the biomarkers being analyzed. For example, plasma specimens may be centrifuged to remove cells and debris, while urine specimens may be filtered to remove particulates.Pre-processing is a critical step in biomarker discovery and validation. By carefully following the pre-processing steps, researchers can ensure that the specimens are of high quality and that the biomarkers are accurately measured.中文回答：生物标志物标本的预处理流程。
病原微生物菌毒种样本的管理ppt课件
• 本规定中所涉及病毒的操作级别主要指野生型 病原微生物，重组体另加说明
有 关 说 明（二）
根据国内的实际情况，有些病原体的防护标准低于国外
病原体
国内
国外
乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 肾综合征出血热病毒 乙型脑炎病毒
登革病毒 戊型肝炎病毒
BSL-2 BSL-2 BSL-2 BSL-2 BSL-2 BSL-2
中华人民共和国国家标准（GB194892004）
《实验室生物安全通用要求》
4 生物危害评估 当实验室活动涉及传染或潜在传染性生物因子时，
应进行危害程度评估。危害程度评估应至少包括下列内 容：生物因子的种类（已知的、未知的、基因修饰的或 未知传染性的生物材料）、来源、传染性、致病性、传 播途径、在环境中的稳定性、感染剂量、浓度、动物实 验数据、预防和治疗。
甲类传染病是指：鼠疫、霍乱。 乙类传染病是指：传染性非典型肺炎、艾 滋病、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、人感染高致 病性禽流感、麻疹、流行性出血热、狂犬病、 流行性乙型脑炎、登革热、炭疽、细菌性和阿 米巴性痢疾、肺结核、伤寒和副伤寒、流行性 脑脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生儿破伤风、 猩红热、布鲁氏菌病、淋病、梅毒、钩端螺旋 体病、血吸虫病、疟疾。 丙类传染病是指：流行性感冒、流行性腮 腺炎、风疹、急性出血性结膜炎、麻风病、流 行性和地方性斑疹伤寒、黑热病、包虫病、丝 虫病，除霍乱、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒 和副伤寒以外的感染性腹泻病。
危害程度评估应由适当的有经验的专业人员进行。
中华人民共和国国家标准（GB194892004）
《实验室生物安全通用要求》
5.2 生物安全水平分级 根据所操作因子的危害程度和采取的防护
透射电镜生物样品前处理步骤
透射电镜样品制备步骤取材醛类前固定缓冲液漂洗饿酸固定（后固定）缓冲液漂洗脱水剂梯度脱水丙酮/环氧丙烷臵换浸透（先于不同比例包埋剂-脱水剂再纯包埋剂长时间浸透）加热聚合修快超薄切片铀铅染色1、取材：4℃冰块上迅速取材，1mm3大小，立即放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）脑、胰等柔软组织先切成较大厚片于戊二醛固定数分钟增加硬度，再切成小块臵于新的戊二醛固定液小肠、周围神经、肌肉等方向性、易扭曲样本可绑在小波棒上固定，待硬化后纵行方向切成长方形固定2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作）注：饿酸固定时间过长会导致脂蛋白复合体溶解，使组织变脆，不利于切片3、再漂洗：吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察骨组织漂洗后需脱钙，EDTA-2Na脱钙液4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷臵换；Cell的固定脱水无需臵换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，臵换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。
植物组织脱水时间延长，100%脱水剂中加入烤干的无水CuSO4、无水Na2SO45、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300 ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。
生物样本前处理技术
【讨论】生物样本前处理技术样本前处理技术在分析方法中占有极其重要的地位，很多分析问题都可以通过样本前处理解决，本文将对样本前处理过程中遇到的问题和样本前处理方法进行综述，以期形成一个系统。
本文将分为1.样本分类及采集2.初步处理3.游离药物分离4.萃取技术5.萃取后过程五个部分进行分别阐述。
其中有不少为个人观点，希望各位战友能不吝指正（纠正错字，纠正观点，进行讨论都欢迎），希望和园内战友共同学习。
-------------------------------------------------------------------------------- 楼主快点介绍吧。
-------------------------------------------------------------------------------- 1.1 生物样本分类生物样本多种多样，有血浆、血清、全血、淋巴、唾液、各种组织、毛发、尿液、胆汁、泪液、脊髓液、汗液、乳汁、羊水、粪便以及呼出的气体。
（以下文字主要摘自《体内药物分析》姚彤伟编著 2001年）生物样品可大致分为①均匀样品：血液、尿液、唾液、胆汁、脑脊液、淋巴液、乳汁和性腺分泌液等体液；②非均匀样品：心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、生殖器官、脑、体脂、胸腺肾上腺和骨骼肌等11种器官、组织。
Ruth Endacott[1]总结了临床样本采集时需要注意的问题以使采样够用和适用。
[1]:Endacott R, Botti M. Clinical research 3: sample selection. Intensive Crit Care Nurs. 2005 Feb;21(1):51-5.1.2 生物样品采集1.2.1 血样1.2.1.1 组成血样包括血浆、血清和全血，其中最常用的是血浆。
一般认为，药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度是与药物在作用点的浓度紧密相关的，即血浆中药物浓度可以反映药物在体内(靶器官)的状况，而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。
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Tips
1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。 2、样本已经采集，考虑将待测物从容器中解离出来。
SUCCESS
THANK YOU
2020/1/8
生物基质中的磷脂化合物易导致基质效应，大多数表现为基质抑制。 建议：LC-MS-MS方法时监测 m/z184 → m/z184离子对。
LC-MS-MS方法需考虑的问题
◇非特异性吸附
※在低蛋白含量的生物基质（尿液，脑脊液，透析液等）中，化合物在存放/转移 过程中与容器材料发生特异性结合的现象。 ※在相应的生物基质中或水中测试，做转管实验。 ※通常更换储存材料，或者在基质中加入一定量表面活性剂可消除非特异性吸附现象。
注：“*”表示与水互溶
沸点（℃） 40
77.1 77
34.5 36.1 80.7
69 110.6 82.4
66 81.6 117 100
密度（g/mL) 1.33 0.90 0.89 0.71 0.63 0.78 0.66 0.87 0.79 0.89 0.78 1.00 1.00
偶极矩越小，极性越小
耐酸耐碱、抗氧化还原、耐热、无腐蚀。6、安全性好。7、经济性好。
Tips: PH和温度对萃取有一定影响。
常用液液提取溶剂
溶剂名称 二氯甲烷 乙酸乙酯 氯代正丁烷
乙醚 戊烷 环己烷 正己烷 甲苯 异丙醇* 四氢呋喃* 乙腈* 正丁醇* 水*
分子量 84.9 88.1 92.6 74.1 72.2 84.2 86.2 92.2 60.1 72.1 41.1 74.1 18.0
偶极矩（D) 1.60 1.78
1.15 0 0
0.08 0.36 1.66 1.63 3.92 1.50 1.84
固相提取法
◇HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance Copolymer)材料的优点
△水可浸润 △反相保留 △PH1-14范围内稳定 △没有裸露硅羟基
固相提取法
范亚新
简介
富集样品，提高检测方法灵敏度
最终进样提取物与流动相及色谱柱兼容
生物基质样品太“脏”：各类生物基质中存在大量蛋白、盐 分和磷脂类化合物等，可能干扰目标化合物的测定
前处理技术
1、直接稀释法：简单、回收率高、成本低，但选择性差，应用有限 2、超滤法：多用于测定游离药物浓度 3、蛋白沉淀法：几乎适用于所有小分子化合物，简单快速，回收率
高，但选择性差，基质效应严重
4、液液提取法：基质效应降低，低成本，重复性好；但难以自动化，
不适用于水溶性化合物的提取，极性相差较大的化合物同时提取困难
5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富
集与净化；但成本较高
液液提取法
利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配 系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。
两相的分离需借助两相的密度差来实现
原理：相似相溶分配系数：源自A=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率
选择性系数（分离系数）：β=kA/kB=
yA / yB x /x
A
B
萃取剂的选择：
1、选择性好：表现为选择性系数大。2、萃取容量大：表现为分配系数大。3、
萃取剂与原溶剂的互溶度。4、萃取剂和原溶剂有较大的密度差。5、化学稳定性
固相提取法
SUCCESS
THANK YOU
2020/1/8
固相提取法
改变化合物PH，酸性 保留，碱性洗脱
固相提取法
改变化合物PH，碱性 保留，酸性洗脱
固相提取法
改变吸附剂PH，碱性 保留，酸性洗脱
固相提取法
改变吸附剂PH，酸性 保留，碱性洗脱
LC-MS-MS方法需考虑的问题
◇基质效应
※样品中除被检测化合物外的成分，对化合物测定造成影响的效应。 ※两种方式检测基质效应：柱后灌流法（定性），样品处理比较法（定量）。 ※解决方案： 1、改变样品前处理方法。（液液提取和固相提取法可降低基质效应） 2、优化色谱条件。（将干扰物和待测物分离） 3、优化质谱条件。（更换离子源，APCI源优于ESI源） 4、同位素内标。（终极办法，最有效）