硕士生《中药化学专论》思考题(完全版)

硕士研究生《中药化学专论》思考题（一）一、二极管阵列检测器在光路上与可变波长检测器有何不同？在中药化学成分检测中有何运用？1.可变波长检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入流动池。

而二极管阵列检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检。

2.以光电二极管阵列作为检测元件的UV-VIS检测器。

可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。

二、用于区分苷与苷元的特征性检识反应是？中药化学成分中酚羟基的特征性检识反应是？内酯环的特征性检识反应是？结构中含有酚羟基或内酯环的化合物可考虑用什么方法进行提取、分离？1.Molish反应；2.三氯化铁溶液反应成绿色至墨绿色沉淀；3.异羟肟酸铁反应；4.碱溶酸沉法。

三、HPLC仪的基本组成模块有哪些？你认为HPLC仪在日常使用过程中有哪些注意事项？1.高压输液系统、进样系统、色谱分离系统、检测系统、数据处理和控制系统组成。

2.注意事项：（1）流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0。

45um或更细的膜过滤)。

（2）流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

（3）不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

（4）使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。

对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

（5）长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。

（6）每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

（7）C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

（8）气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

（9）如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

（10）要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

（11）更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。

更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

四、中药或中药制剂含量测定的方法学考察包括哪些内容，各项实验的意义是什么？1.提取条件的选定；2.净化分离方法的选定；3.测定条件的选择；4.空白试验条件的选择；5.线性关系考察：考查在某一个浓度或峰高（面积）情况下进行样品分析是否准确。

6.测定方法的稳定性考察：考察原料药或者药物制剂在温度，湿度，光线等影响下随时间变化规律。

7.精密度实验：精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。

减少实验误差，使得试验更准确。

8.重复性试验：相同的方法，同一试验材料，在相同的条件下获得的一系列结果之间的一致程度。

重复实验，避免偶然误差。

9.检测灵敏度及最小检出量：检测灵敏度是指改变单位待测物质的浓度或质量时引起该方法检测器响应信号(吸光度、电极电位或峰面积等)的变化程度；最小检出量又称为检测下限，是指能以适当的置信概率检出待测物质的最低浓度或最小质量。

灵敏度和检出限是两个从不同角度表示检测器对测定物质敏感程度的指标，前者越高、后者越低，说明检测器性能越好。

10.回收率试验：在含量测定方法的建立过程中，以回收率估计分析方法的误差和操作过程的损失，以评价方法的可靠性。

五、用于鉴定中药化学成分结构的四大波谱是？它们分别提供什么样的结构信息？1.紫外可见吸收光谱：用于判断分子内的共轭体系情况；2.红外光谱：用于羟基、羰基、苯环、双键等官能团的确认；3.核磁共振光谱：用于有机化合物的结构鉴定；4.质谱：通过分子离子峰获得分子量信息六、一般中药化学成分HPLC分析时用的是反相柱还是正相柱？为什么？一般用的是反相柱。

当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱。

若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱。

在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相。

正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

这种填料做成的柱子就称为正相柱。

反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相，常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

这种填料做成的柱子就称为反相柱。

正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。

若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。

通常为反相柱应用较多。

所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。

反相色谱也是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术，主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。

大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的，含有疏水的机制也能以同样的保留方式分离。

正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。

七、中药或中药制剂含量测定的方法学考察实验中，加样回收率实验如何设计？加样回收率结果应该符合什么范围？重复性实验如何设计？其结果应该符合什么样的要求？1.加样回收：就是在已知浓度的样品里加该样品量的80%、100%、120%的对照品（低、中、高三个不同浓度样品），然后测定结果各3次共9次，结果减去已知的量再除以加入量就是回收率，一般都要求达到95%以上，即于已知被测成分含量的成药中再精密加入一定量的被测成分纯品，依法测定。

测定值应在线性范围内，用实测值与原样品含被测成分量之差，除以加入纯品量，计算回收率。

%%100回收率=⨯-BA C A ：样品所含被测成分量B ：加入纯品量C ：实测值一般要求在95-105%范围内，RSD 一般在3%以内。

2.重复性试验：是指在同一条件下对同一批样品，从样品供试品液制备始，制备多份供试品溶液。

每份供试品液再分别进行测定，测定所得到的数据进行统计学处理，计算其含量的平均值和相对标准偏差（RSD%）。

具体如下：同一批号样品，分别取低、中、高三个样品量，每个样品量3份，按样品测定方法操作。

或在规定范围内，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价。

相对标准偏差RSD ％不得大于2。

0％。

八、对中药或中药制剂中的有效部位如总黄酮、总多糖进行含量测定可采用什么方法？1.总黄酮（1）紫外可见分光光度法： ①紫外可见分光光度法：是以分子吸收光谱为基础的紫外-可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I(300～400 nm)和峰带Ⅱ(220～280nm)光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。

②比色法：是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al(NO3)3为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。

③差示分光光度法简称ΔA 法：使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。

而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。

④双波长和导数分光光度法：用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。

（2）色谱测定方法：①薄层扫描法：样品经薄层分离后直接测定或经适当处理后使之显色或产生荧光，在特定波长下用光度计测定其吸光度或荧光强度的方法。

②高效液相色谱法：是在液相色谱的基础上引入气相色谱的理论和技术，并加以改进而发展起来的一种重要的分离分析方法。

③超临界流体色谱法：近年来出现的一种新方法，在分析领域得到应用，该法在国际上发展很快，但在我国还处于探索阶段。

（3）毛细管电泳法：是以电场驱动离子或荷电粒子，在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速的电泳分离新技术。

（4）荧光分光光度法：利用黄酮类化合物与某些金属离子的络合物在紫外线照射下可产生荧光，在一定条件下，荧光强度与该物质的浓度成正比的性质可建立黄酮类化合物的荧光光度法。

2.总多糖（1）化学法①3，5－二硝基水杨酸（DNS）比色法②苯酚－硫酸法③蒽酮－硫酸法（2）色谱法①气相色谱法②液相色谱法③高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测④体积排除色谱⑤薄层色谱（3）毛细管电泳法（4）红外光谱定量分析（5）生物传感器法硕士研究生《中药化学专论》思考题（二）一、简述超临界流体萃取法、大孔吸附树脂分离的主要影响因素，各举一例。

1.超临界液体萃取法的影响因素有：压力、温度、流体比、CO流量、操作时间、物料粉碎的粒度、夹带剂。

温度不变，随着压力的增加，流体密度会显著增加，对溶质的溶解能力也就增大，萃取效率提高。

但是压力不可以无限制增加，过高的压力会使生产成本明显提高，而萃取率的增加却有限。

例：对丹参进行超临界CO2萃取仅用时2～3小时，为醇提法的1/6左右，避免了传统方法的长时间回流、浓缩、干燥等过程对有效成分的破坏，丹参酮类化合物的萃取率明显高于传统回流提取法和超声提取法。

2.大孔吸附树脂分离的影响因素有：化合物极性的大小、化合物体积的大小、溶液的pH。

极性较大的化合物一般适于在极性大的大孔树脂上分离，而极性小的化合物则适于在极性小的大孔树脂上分离。

例：对薄荷采用水煮提取，提取液浓缩后用大孔吸附树脂吸附，先用水洗脱出去水溶性杂质，再利用乙醇进行洗脱，得到薄荷总黄酮提取物，再进一步进行分离提纯，最后分离出一系列黄酮类化合物。

二、简述3种二维NMR技术的主要用途？(1H-1H相关谱，13C-1H相关谱，13C-1H远程相关谱)1. 1H-1H相关谱用于测定氢-氢间相互偶合的二维图谱；适用于氢信号相对复杂，在1H-NMR中不易观测的偶合关系的确定。

2. 13C-1H相关谱可得到直接相连的碳与氢的偶合信息，季碳没有相关峰信号3. 13C-1H远程相关谱可突出表现相隔2个键和相隔3个键的碳氢之间的偶合。

可用于获得碳碳连接信息。

三、简述生物碱、黄酮、蒽醌三类化合物的酸碱性主要影响因素，述性质在提取分离中有何用途？各写出一个化学鉴定反应。

1.影响因素：（1）生物碱：生物碱的碱性大小与氮原子的杂化方式、电子云密度、空间效应及分子内氢键形成等因素有关。

（2）黄酮类：黄酮类化合物的酸碱性强弱与酚羟基的数目和位置有关。

（3）蒽醌类：酸性强弱与分子内是否存在羧基以及酚羟基的数目和位置有关。

2.用途：（1）生物碱可利用碱性差异进行分离，即采用PH梯度萃取法进行分离。

（2）黄酮类利用酸性强弱采用PH梯度萃取法进行分离。