填充色谱柱的柱效测定

高效液相色谱法中国药品检验标准操作规范2010年版

高效液相色谱法高效液相色谱法(《中国药典》2010年版二部附录V D)系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱,对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品,由流动相带入柱内,各组分在柱内被分离,并依次进入检测器,由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪,由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成,仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期鉴定并符合有关规定。

1.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂,以十八烷基键合硅胶最为常用,辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等)也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂,常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂;分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂;对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等)以及色谱柱的填充,直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm(1nm=10?)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物,分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外,分析柱的填充剂一般在3~10μm之间。

粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。

使用微径柱时,输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配;如有必要,色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时,应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

以硅胶为载体的键合固定相的使用温度不超过40℃,为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度,但不宜超过60℃。

流动相的pH指应控制在2~8之间。

当pH指大于8时,可使载体硅胶溶解;当pH指小于2时,与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。

当色谱系统中需使用pH值大于8的流动相时,应选用耐碱的填充剂,如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等;当需使用pH值小于2的流动相时,应选用耐酸的填充剂,如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂,或有机-无机杂化填充剂等。

气相色谱中常用的术语和参数

1.典型的色谱图在用热导检测器时，往色谱仪中注入带有少量空气的单一样品时，得到图1-3-4的典型气相色谱图。

在图1-3-4中当没有样品进入色谱仪检测器时0t是噪声随时间变化的曲线，一般是一条直线，叫作“基线” 。

h是峰高，其他符号将在后边解释。

2. 区域宽度区域宽度是色谱流出曲线中很重要的参数，它的大小反映色谱柱或所选色谱条件的好坏。

区域宽度有以下三种表示方法：（1）半高峰宽（peak width at half height）（Wh/2）是在峰高一半处的色谱峰的宽度，即图 1-3--2中的CD ，单位可用时间或距离表示。

（2）峰宽（peak width）（W ）是在流出曲线拐点处作切线，在图1-3-2中于基线上相交于E，F 处，此两点间的距离叫峰宽，有些色谱书上叫做“基线宽度” 。

（3）标准偏差（σ ）在图 1-3-2中AB距离的一半叫标准偏差。

在这三种表示方法中以前两者使用较多，三者的关系是：3. 保留值（retention value）保留值是总称，具体参数的名称有以下一些：（1）死时间（dead time）(tM) 一些不被固定相吸收或吸附的气体通过色谱柱的时间，如用热导池作检测器时，从注射空气样品到空气峰顶出现时的时间，以s或min为单位表示。

（2）死体积（dead volume）（Vm）指色谱柱中不被固定相占据的空间及进样系统管道和检测系统的总体积，等于死时间乘以载气的流速。

（3）死区域（dead zone）（ Vg）指色谱柱中不被固定相占据的空间。

（4）保留时间（retention time）（ tR）从注射样品到色谱峰顶出现时的时间，以s或min为单位表示。

（5）调整保留时间（adjusted retention time）保留时间减去死时间即为调整保留时间（tR-tM）。

（6）保留体积（retention volume）（ Vr）从注射样品到色谱峰顶出现时，通过色谱系统载气的体积，一般可用保留时间乘载气流速求得，以mL为单位表示。

色谱柱柱效标定方案2015.12.31

色谱柱柱效标定方案：我们目前的柱子均是很新的色谱柱，但是随着时间推移，柱子的柱效会越来越低，此外我们可能要借用QC或者二楼的比较老的色谱柱，来进行方法开发或者验证与样品测定。

用柱效差的色谱柱可能误导我们实验的方向，以及影响实验的测定结果。

总之因为种种原因，在使用一根色谱柱前，对其进行柱效标定已经显得尤为必要，因此制定本方案，来对柱子柱效进行测定。

对于如下情况，我们在使用色谱柱前需要对其进行柱效测定，且柱效测定时不要接保护住：1.柱子使用两年之后且柱效明显下降的情况下再启用。

2.柱子用过离子对试剂之后，再使用的。

3.其它特殊原因：如柱子经过反接后使用的。

不耐受纯水的柱子经纯水相冲洗的。

超过柱子柱温或者pH耐受范围使用的等。

因为柱子的种类很多，C18、C8、苯基柱、氨基柱、氰基柱、离子交换柱、手性色谱柱、聚合物型色谱柱等等。

不同填料的柱子可能需要选用不同的标准物质对其柱效进行标定。

我们报买色谱柱后首先要保留其使用说明书，以备经后柱效标定时参考。

因为柱子说明书上一半都会有该色谱柱的柱效标定出厂报告以及其合格接受标准。

对于实在无法找到使用说明书的柱子我们可以根据其性质来拟定一个通用的标定规则。

1.C18、C8类型色谱柱：对于该类型色谱柱，一般常用含苯环化合物进行柱效标定。

常见的如：苯、苯酚、甲苯、萘、尿嘧啶等。

理论塔板数不低于2000/米。

拖尾因子在0.9~1.1之间。

最终柱效的接收标准还是首选参考柱说明书的要求来定。

例如：UV254nm检测波长；乙腈-水（60:40）或甲醇-水（70:30）等度洗脱15min，进样体积10μl。

2.氨基柱该种类型色谱柱常用于糖类物质测定，可以选择常见类型的糖类，并选用视差或者ELSD、CAD等通用型检测器对柱效进行标定。

常见的可以选用甘露醇、乳糖等物质标定，理论板数不低于8000。

以TOSOH TSKgel Amide-80 5μm4.6*250mm柱为例：采用RI检测器，75%乙腈作为流动相，1.0ml/min流速，25℃柱温，2g/L的甘露醇（75%乙腈溶解）作为供试品溶液，进样20μl。

色谱柱柱效

色谱柱柱效关于“色谱柱柱效”色谱柱是色谱分析中的核心部件，其质量的好坏对于分析结果具有重要的影响。

色谱柱柱效是衡量色谱柱品质好坏的重要指标。

本文将对色谱柱柱效进行详细介绍。

一、什么是色谱柱柱效？色谱柱柱效是用于描述色谱柱分离性能的一个指标，用来反映某一物质在色谱柱中距离占总色谱柱长度的百分数，即某一物质在色谱柱中的保留时间。

通俗地说，色谱柱柱效就是描述色谱柱在分离上表现的能力或强度的量化指标。

色谱柱柱效的高低取决于柱内填料的特性和柱的设计。

它与分离石英管的长度和直径、填料颗粒大小、填料类型、填充密度等有关。

二、色谱柱柱效的计算方法在分析中，某一物质在色谱柱中的保留时间（tR）除以色谱柱的总长度（L）即可得出该物质在色谱柱中占据的百分比，即柱效（N）。

柱效（N）=保留时间（tR）/ 总柱长（L）×100%其中，保留时间的计算方法是在一定的条件下，测量该物质的到达时间（ta）和流出时间（tf）后，减去流出时间，即tR=tf – ta。

三、如何影响色谱柱柱效？总的来说，影响色谱柱柱效的因素主要有以下几点：1、填料类型锥形管填充材料是影响柱效的重要因素之一。

柱效随填料活性的增加而增加。

2、填料粒径填料粒径可以影响柱效。

通常情况下，细小的颗粒（即小粒径）的柱比粗颗粒（大粒径）的柱效果更好。

3、填料形状填料形状也会影响色谱柱柱效。

颗粒形状越规则，柱效越高。

4、柱直径随着柱直径的不断增加，柱效不断降低。

5、流速在某些情况下，流速的增加可能会提高柱效。

但随着流速的继续增加，柱效会逐渐降低。

四、如何提高色谱柱柱效？了解了色谱柱柱效的影响因素后，提高色谱柱柱效的方法也就很清晰。

1、选择合适的填料和填料粒径，根据分析需要进行选择，最大化柱效的作用。

2、保持柱内工作温度的稳定。

在色谱柱用于样品分离过程的过程中，温度波动会导致柱效下降。

3、注意选择适当的流量。

流量过大或过小都会影响柱效。

4、柱的维护保养。

柱就像人的身体一样，需要保持良好的状态才能发挥出良好的性能。

c18柱色谱填料使用

c18柱色谱填料使用
C18色谱柱是一种常用的色谱柱，其填料具有亲脂性，常用于反相色谱中。

以下是使用C18色谱柱的注意事项：
1. 流动相的选择：C18色谱柱通常使用正己烷和甲醇作为流动相。

正己烷可以增加分离物与固定相的相互作用力，甲醇则有助于溶解非极性溶剂。

根据分析需要，可以调整正己烷和甲醇的比例。

2. 预处理：在使用C18色谱柱之前，需要进行预处理以去除可能存在的杂质和保证柱子的稳定性。

常见的预处理方法包括使用高压液相系统进行洗脱、使用有机溶剂或酸碱溶液进行洗脱等。

应避免用过酸性或过碱性的洗脱剂，以免对C18柱填料造成损害。

3. 样品准备：样品的溶解度和纯度对分离效果有很大影响，因此在分析前需要充分溶解样品，并通过滤器除去杂质。

4. 色谱柱平衡：在使用C18色谱柱之前，需要将其平衡至最佳状态。

可以通过逐步增加流动相的流速并监测基线来找到最佳流速。

在达到最佳流速之前，应缓慢增加流速以避免对色谱柱造成过度压力。

5. 柱效测定：在使用C18色谱柱之前，需要测定其柱效。

可以通过使用标准品进行测定，并比较标准品和样品的保留时间和峰形来进行评估。

6. 清洗和维护：在使用C18色谱柱过程中，需要定期清洗和维护以保持其性能和寿命。

需要定期更换流动相、清洗柱子并检查其性能。

总之，使用C18色谱柱需要了解其特点和注意事项，并进行充分的预处理、样品准备、色谱柱平衡、柱效测定以及清洗和维护。

这些步骤对于获得准确、可靠的色谱结果非常重要。

实验1气相色谱分析条件的选择和色谱峰的定性鉴定(精)

实验1 气相色谱分析条件的选择和色谱峰的定性鉴定一、目的要求1.了解气相色谱仪的基本结构、工作原理与操作技术；2.学习选择气相色谱分析的最佳条件，了解气相色谱分离样品的基本原理；3.掌握根据保留值，作已知物对照定性的分忻方法。

4.掌握归一化法测定混合物各组分的含量。

二、基本原理气相色谱是对气体物质或可以在一定温度下转化为气体的物质进行检测分析。

由于物质的物性不同，其试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，虽然载气流速相同，各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定时间的流动后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。

根据出峰位置，确定组分的名称，根据峰面积确定浓度大小。

对—个混合试样成功地分离，是气相色谱法完成定性及定量分析的前提和基础。

而其中气相色谱分离条件的选择至为关键。

主要涉及以下几个方面：1. 载气对柱效的影响：载气对柱效的影响主要表现在组分在载气中的扩散系数D m(g)上，它与载气分子量的平方根成反比，即同一组分在分子量较大的载气中有较小的D m(g) 。

根据速率方程：（1）涡流扩散项与载气流速无关；（2）当载气流速u 小时，分子扩散项对柱效的影响是主要的，因此选用分子量较大的载气，如N2、Ar，可使组分的扩散系数D m(g)较小，从而减小分子扩散的影响，提高柱效；（3）当载气流速u 较大时，传质阻力项对柱效的影响起主导作用，因此选用分子量较小的气体，如H2、He 作载气可以减小气相传质阻力，提高柱效。

2. 载气流速（u）对柱效的影响：从速率方程可知，分子扩散项与流速成反比，传质阻力项与流速成正比，所以要使理论塔板高度H最小，柱效最高，必有一最佳流速。

对于选定的色谱柱，在不同载气流速下测定塔板高度，作H-u 图。

色谱柱柱效的评价和提高方法总结

色谱柱柱效的评价和提高方法总结
柱效
色谱柱的柱效能是评价色谱性能的一项重要指标，混合物能否在色谱柱中得到分离，除取决于选择合适的固定相外，还与色谱操作条件及色谱柱的装填状况等因素有关。

在一定的色谱操作条件下，色谱柱的柱效可用理论塔板数或理论塔板高度来衡量。

一般说来塔板数愈多，或塔板高度愈小，色谱柱的分离效能愈好。

如何对柱效进行评价
实验仪器与试剂
仪器：高效液相色谱仪（带自动进样器，或配置微量进样器）、分析天平。

试剂：苯、萘、联苯（均为分析纯）、甲醇（色谱纯）、纯净水。

实验步骤
色谱条件：色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm；流动相：甲醇-水（80：20，v/v）；
检测波长：254nm；流速：1mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10μL。

操作步骤：
分别精密配制含苯、萘、联苯浓度均为约1mg·mL-1的3份对照品溶液各10mL。

分别精密吸取上述对照品溶液各2mL置于10mL容量瓶中，加流动相稀释，并定容至刻度，摇匀，得到含苯、萘、联苯的混合对照品溶液。

按照上述色谱条件操作，进样，记录色谱图。

计算各色谱峰的理论塔板数及各峰间分离度。

实验数据处理。

常用液相色谱柱的柱效测定方法应趋于统一化

参考文献
［１］ＨＡＰＰＣＥＳＲＯＫＴＣＯＭＰＥＵＴＲＭＯ－ＤＥＰ－５０ＳＲＴＯＭＡＡＬＬＣ１０ＩＴＵＣＩＮＮＵ．Ｎ
［］Ｃ —１５２Ｐ —！００湔浼扑慊褂檬植幔本┘扑
五厂。
［］３计算机基础教程，清华大学出版社。（收稿日期：１８年１月８）９４１日
应该大致相同。
建议流速为１分左右；温度采用室温；半峰宽毫升／
应为半峰宽处峰的一边的外侧到另一边的内侧，测量工具应精确到０１．毫米。．或０２００不难看出，影响柱效测定的因素是很多的。测定的方法不同，测得的柱效肯定不同，所以测得的柱效应附有上述的所有实验条件，否则只说某一填料和某一预装柱的柱效达到多少实在是笼统的很。所以如果生产填料的厂家，使用单位和装柱单位对同一填料的色谱性能有争议的话，最好看一下填料的批号是否一致，然后再看一下柱效的测定方法和测试条件是否一致（大体）。所以最好的办法还是价在大体相同的条件下测定柱效，这样对填料的评就有了共同的语言，使厂家找到了要质量控制的依据，用户了解到了填料的性能，以便更好地选用。（公安部１２研究所李冶）１９
常用液相色谱柱的柱效测定方法应趋于统一化
柱效的高低，不仅反映出填料性能，有时也反映出装填技术的好坏。所以测定柱效无论对于生产填料或预装柱的厂家，还是对于使用填料或预装柱的色谱工作者来说，都是很重要的。厂家通过柱效测定，达到对填料生产的质量控制；色谱工作者通过测定柱效，可选择色谱柱并监察色谱柱使用过程中是否受到污染之目的。可见柱效的测定很重要。但是如何进行柱效的测定，是值得研究的一个问题。不同的色谱柱，柱效固然不同；就是同一根色谱柱，由于柱效的测定方法不同，诸如所用的化合物、流动相、流速、测量温度、测量工具及仪器等等的不同，那么所得到的理论板数也不尽相同。这样往往对同一种填料或同一根柱子的评价就缺乏共同语言，往往使填料的生产厂家、用户及装柱单位之间产生误解，有碍协作。因此柱效的测定方法应趋于统一化，测定条件

高效液相色谱柱效能的测定

紫外检测器（ultraviolet photometric detector）
应用最广，对大部分有机化合物有响应。
特点：灵敏度高； 10-9g·mL-1 线性范围宽；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。
高效液相色谱柱效能的测定
一、实验目的： 1.学习高效液相色谱柱效能的测定方法。 2.了解高效液相色谱仪的基本结构及工作原理。 3.初步掌握高效液相色谱仪的操作及使用。
应的流动相并过滤脱气。二、开机 1.依次打开2130高压泵、检测器和计算机电源开关，
设定合适的检测波长。 2.双击桌面上的T2000P色谱工作站图标，进入工作站
系统。
三、编辑HPLC分析方法 1.双击“方法”图标，编辑HPLC分析方法。 2. 保存所编辑的HPLC分析方法。四、样品分析与采集数据 1.在文件栏中选择分析方法文件。 2.手动进样: 在方法栏中依提示输入文件名称、样品
己烷（分析纯）、甲醇（色谱纯）、水为二次蒸馏水
四、实验条件：
1.检测器：紫外光度检测器，测试波长254nm 2.流动相：甲醇：水(83：17)，流量0.8 ml/min 3.色谱柱：长250mm，内径4.6mm，装填C-18烷基键合
相(粒度5μm) 4.进样量：20 μL
五、实验步骤：
1. 根据实验条件，将仪器调至可进样状态，待基线平稳后，即可进样。 2. 吸取标准使用液（含甲苯、萘、联苯各10ug/ml的正己烷溶液）20μL，注入高效液相色谱仪。 3. 记录下色谱图。 4. 从色谱图中测得甲苯、萘、联苯的保留时间tR，半峰宽Y1/2，计算对应的理论塔板数n及分离度R。
2、主要部件
（1）、进样装置
使用高压定量进样阀(六通阀)进样装进样体积由定量管控制，进样准确，重现性好，适于定量分析。

色谱柱的柱效指标为

色谱柱的柱效指标为1色谱柱的概念色谱柱（Column）是色谱仪器的主要部件，也是色谱固定相分离的重要组成部分，它将溶剂和样品混合液平均分散在色谱固定相上，允许样品和溶剂流经色谱柱，从而达到对混合物进行色谱分离的目的。

色谱柱中间被填充有一种吸附材料，用于将混合溶液中按分子结构差异进行分配，根据其能够实现定性和定量检测的特性，色谱柱现已成为分析化学和生物化学中最常用的仪器之一，广泛应用于药物分析、食品分析、化工类检测等多个领域。

2色谱柱的类型色谱柱的类型有很多，例如：长度纤维柱、钻石柱、油管柱、立体柱等，它们均可以根据用户的不同需求进行搭配，以实现最佳的色谱效果和最佳的色谱效率。

除了上述几种标准的色谱柱，还有一些特殊的可替换柱，它们可以更有效地改变样品的流速，以提高柱效指标。

3色谱柱的柱效指标色谱柱的柱效指标是指由色谱柱进行分离的样品的有效度，常用的柱效指标包括柱效（Column Efficiency）、峰宽（peak width）和不均匀度（unevenness）。

柱效是色谱柱的一个重要指标，它反映了柱中分离混合溶液的能力，它是以每升样品经过柱时通过柱口体积（Cav）来表示的，其数值越高，柱效指标越高。

其他指标中，峰宽表示溶剂和样品组分从柱口压力出来的宽度；不均匀度表示柱中溶剂和样品组分有没有重结合该成不规则形状，它越低，柱效指标越高。

4色谱柱的应用色谱柱的应用十分广泛，可以用于实验室分析化学和生物学研究，也可以用于各种类型的产品实际检测，比如：药物分析，食品分析，精细化工检测，农产品分析等。

它还应用于八大类分子的检测，比如抗生素的分析检测，维生素的分析检测，矿物质的分析检测等，可以为我们带来更多丰富的知识以及深刻的认识，带来新的发展空间。

总之，色谱柱是色谱仪器中重要的部分，也是色谱仪器决定色谱效率和色谱效果的关键。

在实验室或检测领域中，使用不同种类的色谱柱根据分析要求，搭配合适的色谱仪器，可以达到色谱分析的最佳效果，帮助我们快速准确的分析检测更多的物质或物质，为我们的生活带来更多的快乐！。

仪器分析实验

仪器分析实验一气相色谱分析法实验1 填充色谱柱柱效能的测定1.测定H-u关系曲线有何实用意义？2.如何选择最佳载气流量？实验2 大气中苯系物的色谱分离3.样品采集与处理中应注意些什么？二气相色谱-质谱联用分析法实验1 有机混合物气-质联用分离与鉴定1.在进行GC-MS分析时需要设置合适的分析条件。

假如条件设置不合适可能会产生什么结果？扫描范围过大或过小结果如何？2.如果把电子能量由70eV变成20eV，质谱图可能会发生什么变化？3.进样量过大或过小可能对色谱和质谱产生什么影响？4.如果计算机检索结果可信度差，还有什么办法进行辅助定性分析？5.写出苯质谱图中几个主要碎片峰的裂解方程式。

实验2 天然产物中挥发性（油）成分分析1.拿到一张质谱图如何判断分子量？如果没有分子量，还有何方法得到分子量？2.根据柠檬烯的质谱图解释不同质荷比的离子是怎样形成的？三高效液相色谱法实验1 高效液相色谱法分离芳烃1．解释所得色谱图上观察到的洗脱次序。

2．你认为苯甲酸在本实验所用的柱上滞留是强还是弱。

实验2 高效液相色谱法测定咖啡和茶叶中的咖啡因1．用标准曲线法定量的优、缺点是什么？2．设法查找咖啡因的结构式。

根据结构式，咖啡因能用离子交换色谱法分析吗？为什么？3．若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何者优越？为什么？实验3 有机酸的分析1．若用50%的甲醇或乙醇作流动相，有机酸的保留值是变大还是变小。

分离效果是变好，还是变坏。

说明理由。

实验4 高效液相色谱法测定磺胺类药物1．写出磺胺甲噁唑和磺胺嘧啶的分子式。

2．试分析HPLC法与GC法的原理和仪器的异同点。

四离子色谱分析法实验1 离子色谱法分析混合阴离子1．离子色谱进行阴离子检测时，为什么会出现负峰（倒峰）？2．化学自再生连续阴离子抑制反应的原理是什么？实验2 水中阴离子的定性和定量分析1.影响阴离子分析的主要因素是什么？2.单柱理型离子色谱和双柱离子色谱主要区别是什么？五高效毛细管电泳分析法实验1 有机化合物的毛细管区带电泳分析1．根据3种物质的酸碱离解常数，确定各自在分离条件下的形态及其极性，试解释3种组分的出峰次序。

HPLC柱效测定

HPLC柱效测定
以第一主数据为例
n=)2=2=201.881
柱长25cm
H===0.001238
思考题
1、高效液相液相色谱采用3~10微米的固定相有何优点?同时它又给实验带来什么问题?如何克服？
答：这个是从色谱理论H-u曲线推导出来的结果.在100kg压力左右,5微米的柱效最高.但随加工制造技术的提高,更高压力的泵如400kg,也能够大量的普及.而在400kg左右,1-3微米的固定相柱效更高,所以在HPLC的基础上又有UPLC仪器了.
2、紫外光度检测器是否适用于检测所有的有机化合物,为什么?
答：不是理由有2 ，第一是并不是所有的有机物都有强的特征紫外吸收，只有特定的集团会有这样的情况。

第二是有频率相近的吸收峰的物质很多，不能完全区分开来。

3、若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件色谱柱？
答：色谱柱使用时间长了，柱效会降低，会影响到分离度的，改善方法是更换新的色谱柱。

如果已经是新的色谱柱了，分离度还不好，那可以采用更长一些的色谱柱，也会增加分离度；流动相的调节，通过调节流动相中各组分的比例，使流动相的极性发生变化，分离效率会不一样，这要针对要检测的成分具体情况进行分析确定；改变柱温，相同条件下升高柱温，会增大色谱柱的分离能力而提高分离度。

高效液相色谱（HPLC）柱效测定

实验六高效液相色谱(HPLC)柱效测定一. 实验目的1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。

2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。

3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。

二. 实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。

在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。

反之，则称为正相色谱分离系统。

反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。

定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。

分离度（R）的计算公式为：R＝ 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(Y1/2＋Y1/2)式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； Y1/2 与Y1/为此相邻两峰的半峰宽。

除另外有规定外，分离度应大于1.5。

本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。

它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。

但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。

待测物性质见表1。

表1色谱柱测试条件出峰次序样品组成1 邻苯二甲酸二甲酯（DMP）2 邻苯二甲酸二乙酯(DEP)3 邻苯二甲酸二丁酯(DBP)如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。

三.仪器与试剂1、仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。

2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四. 实验步骤1、色谱条件色谱柱：苯基柱，柱温：室温流动相：初始为高纯水：30％，甲醇：70％检测器：DAD检测器(二极管阵列检测器)；检测波长：220nm；进样体积：20µl定量环，实际注射每次可控制在40µl。

柱效测定以及影响因素

4.检测系统的滞留体积（系统死体积）外体积（Vext）应尽量保持足够的低。这一体积指的是上游体积（从上样点到柱体之间）和下游体积（从
柱底系统设置也会影响所测试的柱效柱效。因此用于
、
检测的管路应尽可能的短，并且内径应最小且不会造成过大压降。作为一个普遍的经验法则，一个生物过程层析使用的典型层析柱的柱效检测应保证外体积小于柱体积的 5%，
停留时间（停留体积）
折合的塔板高度
h=HETP/d/P
对称性 As
**达到最大峰高的时间（或洗脱体积）所对
应的停留时间（停留体积）。
相对峰宽通常用理论塔板（N），理论塔板数（HETP）或折合为塔板高度（h）来迚行描述：
() σ
σ ()
对称因子 As 描述了与理想高斯峰形状的偏差，通过对 10%峰高处的峰宽迚行计算得到：
统为水-丙酮和盐系统，这些系统可分别通过测定吸收值和电导迚行监测。根据层析介质的化学属性，推荐以下样
品和洗脱液：
介质除疏水合成聚合物， RPC 和 HIC 介质以外的所有介质 RPC 和 HIC
所有介质
洗脱液水
样品 1 -2% 丙酮水溶液
20%乙醇
1 -2%丙酮，至少 20%
的乙醇
0.4 M NaCl（溶于水） 0.8 M NaCl（溶于水）
术语塔板数平均停留时间* 方差*
2
停留时间** 停留体积** 半峰高峰宽床高颗粒半径理论塔板数
N μ1
σ
tR VR Wh
L d/P HETP
最佳柱效
对于生物过程色谱中使用的有孔介质，其最佳柱效时实验测定的塔板高度 h 小于等于 3。就峰的对称性而
言，理想对称性为接近 As=1。当工作中折合塔板高度 h ≤ 3 时，一般能接受的范围通常在 0.8-1.8 之间。需要谨记

苯甲酸红外吸收光谱高效液相色谱库伦滴定法利用紫外吸收光谱气相色谱填充柱的柱效重铬酸甲滴定

用重铬酸钾电位滴定硫酸亚铁溶液一、实验目的1.学习电位滴定的基本原理和操作2.熟悉酸度计的使用方法二、实验原理电位滴定法定义: 是根据滴定过程中指示电极电位的突跃来确定滴定终点的一种滴定分析方法。

与直接电位法的区别：定量参数不同；与化学滴定法的区别：确定滴定终点方法不同。

重铬酸钾法电位滴定硫酸亚铁铵溶液中亚铁离子含量测定原理:用K2Cr2O7滴定Fe2+,其反应式如下Cr2O72- + 6 Fe2+ + 14H+ =2Cr2+ + 6 Fe3+ +7H2O利用铂电极作指示电极,饱和甘汞电极作参比电极,与被测溶液组成工作电池。

在滴定过程中,随着滴定剂的加入,铂电极的电极电位发生变化。

在化学计量点附近铂电极的电极电位产生突跃,从而确定滴定终点。

实验装置如右图三、仪器与试剂酸度计移液管（10ml）磁力搅拌器铂电极量筒（10ml）饱和甘汞电极酸式滴定管 0.010mol/L K2Cr2O7标准溶液硫酸亚铁铵溶液二苯胺四、实验内容和步骤用移液管准确移取10ml 0.1mol/L硫酸亚铁铵溶液于烧杯中，加入1.5mol/LH2SO4溶液20ml，加水至约50ml，将饱和甘汞电极和铂电极插入溶液中，放入转子，开动搅拌器，然后用K2Cr2O7标准溶液滴定，待到达滴定终点时仪器停止工作，记录仪器最终现实的数据，重复操作两次，计算硫酸亚铁铵溶液的准确浓度。

五、数据记录和结果分析电位滴定数据记录表V/ml 9.952 9.991 9.936E/mV 682.7 659.1 668.5c/1⋅0.016637 0.016704 0.016610Lmol-取平均值c=0.0166501L⋅mol-六、思考题1.为什么氧化还原滴定可以用铂电极作指示电极？答：在氧化还原滴定中，Fe 2+ 在阳极发生氧化反应，失去电子，电子通过电极和导线传递到阴极，Cr 2O 72-在正极得到电子被还原，发生还原反应，所以产生了电流。

在这个过程中铂电极并不参与任何化学反应。

气相填充色谱柱的柱效测定(精)

气相色谱填充柱的柱效测定一、实验目的1．了解气相色谱仪的基本结构和工作原理2．学习气相色谱仪的使用3．学习、掌握色谱柱的柱效测定方法二、基本原理色谱柱的柱效能是色谱柱的一项重要指标，可用于考察色谱柱的制备工艺操作水平以及估计该柱对试样分离的可能性。

在一定色谱条件下，色谱柱的柱效可用有效塔板数n 有效及有效塔板高度h 有效来表示。

塔板数越多，塔板高度越小，色谱柱的分离效能越好。

有效塔板数及有效塔板高度的计算公式如下：2'221')(16)(54.5Y t Y t n R R ==有效有效有效n L h =M R R t t t -='式中：R t 为组分的保留时间。

'Rt 为组分的调整保留时间。

M t 为空气的保留时间（死时间）。

Y 1/2为色谱峰的半峰宽度。

Y 为色谱峰的峰底宽度。

L 为色谱柱的长度。

由于不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因而同一色谱柱对不同组分的柱效也不相同，所以在报告n 有效时，应注明对何种组分而言。

三、仪器和试剂1．气相色谱仪（热导检测器）2．填充色谱柱（固定相：SE-30；担体：硅烷化白色担体；柱内径：3mm ；柱长：2m ）3． FJ-2000色谱工作站4．微量进样器：50μl5．注射器：2ml6．载气：氮气7．试剂：正己烷、正庚烷、正辛烷均为分析纯（体积比1:1:1）四、实验步骤1．开启仪器，设定实验操作条件。

按气相色谱仪器操作步骤开启仪器。

设定柱温为80℃，汽化室温度为150℃，检测器温度为110℃，载气流量为10-15ml/min 。

2．开启色谱工作站，进入数据采集系统。

按照色谱工作站操作步骤开启计算机，进入色谱工作站，监视基线，待仪器上的电路和气路系统达到平衡，基线平直时，即可进样，同时记录数据文件名。

3．测定试样的保留时间R t 。

用微量进样器吸取3μl试液进样，记录试样色谱图文件名。

填充柱气相色谱柱介绍

填充柱气相色谱柱介绍填充气相色谱柱简称填充柱，在实际工作中应用非常普遍，日常色谱工作的80%都是采用填充柱完成的。

色谱柱主要由柱管和固定相组成。

而固定相是色谱柱中最为关键的部分，根据所填充的固定相的情况来分，气相色谱的固定相主要分为固体固定相和液体固定相。

下面分别对相关内容进行讨论。

一、填充柱柱管的选择与处理柱管材料的选择应依据分析样品的性质和实验的操作条件而定。

填充色谱柱的柱管有不锈钢管、铜管、铝管、铜镀镍管、玻璃管以及聚四氟乙烯管等。

铜管和铝管由于催化活性太强，并且容易变形，现已不太常用。

若待分析的样品容易分解或具有腐蚀性，应考虑使用玻璃管或聚四氟乙烯管。

玻璃柱具有化学惰性好，制备的柱子柱效高，便于观察柱子情况，使用温度范围较宽等优点，但它也有易碎的缺点。

聚四氟乙烯管的优点是耐腐蚀，缺点是不耐高温高压。

在填充柱中最为常用的不锈钢管，其最大优点是不破碎，传热性能好，柱寿命长，能满足常见样品的分析要求。

缺点是内壁较为粗糙，有活性，较难清洗干净。

填充柱的柱管在使用前应该经过清洗处理。

不锈钢柱管的清洗方法为：1、先用10%的热的氢氧化钠水溶液浸泡，除去管内壁的油污，然后用自来水洗至中性。

2、根据情况，可选用1：20的稀盐酸水溶液重复处理一次，以降低柱内壁的吸附作用。

玻璃柱的清洗方法：1、用冼液浸泡，除去管内壁的油污，然后用自来水洗至中性。

2、为减少玻璃柱内壁的活性，可用5%二甲基二氯硅烷的甲苯溶液浸泡处理，然后用甲苯和甲醇分别沖洗干净。

分析用的填充柱内径一般为2～4mm，长度一般小于10m。

柱子的形状可以是螺旋形的，也可以是U型的。

U型柱易获得较高的柱效，若是使用螺旋型的柱，应注意柱色谱柱圈直径的大小对柱效会产生一定的影响，一般柱圈的圈径应比柱管的内径大15倍。

色谱柱管也存在漏气的现象，为此可对色谱柱管进行检漏。

检漏方法较为简单，将柱管泡在水里，堵死柱的一端，在另一端通气，若无气泡冒出则说明柱子无泄漏现象。

气相色谱定性和色谱柱效的测定

符合规定标准。
农药残留检测
色谱柱效的测定对于检测食品中的农药残留至关重要，可以提高检测的灵敏度和准确性，确保食品中农药残留量在安全范围内。
营养成分分析
在食品安全检测中，色谱柱效的测定也用于营养成分的分析，如脂肪、蛋白质和维生素等，以评估食品的营养价值。
实际应用中气相色谱定性与色谱柱效的结合使用
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定性分析与色谱柱效的相互影响
定性分析结果影响色谱柱效评估
通过对比不同色谱柱在相同条件下的定性分析结果，可以评估色谱柱效的优劣。
色谱柱效的提高有助于改进定性分析
不断改进色谱柱的填料和制备技术，可以提高色谱柱效，从而改进定性分析的准确性和可靠性。
提高色谱柱效的方法与技巧
选择合适的固定相
根据待测物的性质选择合适的固定相，是提高色谱柱效的关键。
定性分析与色谱柱效的关联
定性分析依赖于色谱柱效
色谱柱效的高低直接影响到定性分析的准确性，因为只有高效的色谱柱才能确保样品中的各组分得到有效的分离，从而准确地进行定性分析。
色谱柱效与定性分析的分辨率
分辨率是定性分析的一个重要指标，高效的色谱柱能提高分辨率，使样品中的组分更好地分离，便于定性分析。
控制操作条件
如温度、流量和进样量等，这些因素都会影响色谱柱效，因此需要严格控制。
维护色谱柱
定期清洗和再生色谱柱，可以保持其高效性能，延长使用寿命。
04
实际应用与案例分析
气相色谱定性分析在环境监测中的应用
空气质量检测
土壤和沉积物分析
气相色谱定性分析可以用于检测空气中的有害气体和挥发性有机物，如苯、甲苯、二甲苯等，以评估空气质量状况。
质谱定性

气相色谱定性和色谱柱效测定

实验五气相色谱定性和色谱柱效测定（TCD ）一、目的要求1. 了解气相色谱仪的基本结构、工作原理与操作技术；2. 学习色谱柱的柱效测定方法；3. 掌握有效塔板数及有效塔板高度的计算方法；4. 学习利用保留值和相对保留值进行色谱对照定性方法。

二、色谱法概述（基本概念、术语及有关实验原理详见课件）色谱法是一种重要的分离、分析技术混合试样→分离→单组分→检测各组分色谱法由来、分类。

色谱图、基线、半峰宽保留值、调整保留值、相对保留值、气相色谱仪器结构，工作流程：进样→气化→分离→检测→数据采集与处理色谱柱效能是色谱柱的一项重要指标：保留值定性的依据：一定色谱条件下每一种物质都有一个确定的保留值和它相对应。

相对保留值计算：三、仪器、试剂1. SP-6800A 型气相色谱仪，热导池检测器（TCD ），N2000色谱数据工作站；2. SPH-200氢气发生器。

3. 色谱柱： 1m ×3mm i.d 不锈钢填充柱4. 固定相：GDX －103（80～100目）5. 微量进样器:10ul6. 95%乙醇，乙酸乙酯，均为分析纯试剂。

四、实验条件1. 载气（H 2）：0.05 MPa;2. 桥电流：175Ma;222/1')(16)(54.5wt w n R Rt'==有效有效有效n L H =tt t tMM isR R si--=γ3.色谱柱室温度：160℃，检测器温度：170℃，汽化室温度：180℃;4.灵敏度：002，衰减：002五、实验步骤1.按仪器操作规程开机运行至基线平直（查看基线）。

2.用10ul微量进样器吸取5ul空气，注入色谱仪，同时启动遥控按钮，待出现完整色谱图，停止采集数据，记录空气峰保留时间。

重复三次。

3.用专用注射器分别吸取试剂乙醇、乙酸乙酯、试样各1ml分别置于三只5ml具塞刻度试管中，贴标签，备用。

4.用微量进样器吸取乙醇1ul注入色谱仪，同时启动遥控按钮，待出峰完毕，停止采集数据，记录保留时间,重复进样三次。