南开大学细胞生物学实验-实验八细胞内核酸的分布与显示
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导编者梁亦龙张继承生物信息学院2004年9月前言细胞是一切生物(包括人类)最基本的结构和功能单位。
生命科学中的各个学科领域，甚至非生命科学的许多学科领域中的学者们，越来越多地投入到对细胞生命现象的研究。
细胞是生命的载体，不理解细胞就不理解生命。
在现代生命科学教学中，不设置细胞生物学课，所培养出来的学生就称不上是完全的生命科学家。
在细胞生物学放学中，实验课不可或缺。
实验课的基本任务是，让学生学习细胞生物学基本技术，使他们具有一定的实验操作技能，并培养他们树立独立设计实验的思考观念和进行科研的基本素质。
我们借鉴兄弟院校的经验编写了这本《细胞生物学实验指导》•，供我院开设的各专业选用。
由于我们主客观条件所限，而且编写时间仓促，肯定会有不少缺点和错误，请提出批评意见，帮助我们不断改进教学。
编者梁亦龙2004年9月目录实验是规则与操作要求 (1)实验一细胞形态及大小的观测 (2)实验二相差和暗视野显微镜的原理、使用及标本观察 (5)实验三荧光显微镜原理及应用 (9)实验四电镜参观 (12)实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察 (14)实验六人淋巴细胞染色体标本制作 (15)实验七人淋巴细胞姐妹染色体区分染色 (17)实验八碱性磷酸酶的显示 (19)实验九叶绿体的制备及其对染料的还原 (22)实验十人体细胞核型图的制作 (24)实验十一线粒体的分离及活性测定 (27)实验十二联会复合体的染色与观察 (32)实验十三细胞融合 (33)实验十四死、活细胞鉴别 (39)实验十五细胞固定染色法 (41)实验十六早熟染色体凝集（PCC） (43)实验十七细胞同步化 (46)实验十八动物染色体分带技术 (48)实验十九线粒体的显示 (50)实验二十植物愈伤组织培养以及再分化 (52)实验二十一肿瘤细胞培养实验步骤 (57)实验二十二细胞器的分离 (62)实验二十三石蜡切片的制作 (66)实验室规则与操作要求为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希望实验者能严格遵守。
高中生物必修1教学课件知识点-核酸在细胞中的分布
原核细胞：
DNA集中在拟核。
RNA：在细胞质中
练习巩固
1．核酸在真核细胞里的分布情况下列那项最合适 （D ） A．DNA全部分布在细胞核中、RNA全部分布在细胞质中 B．DNA和RNA全部都分布在细胞核中 C．RNA主要分布在细胞核中、DNA主要分布在细胞质中 D．DNA主要分布在细胞核中、RNA主要分布在细胞质中 2.若以人的口腔上皮细胞为材料进行“观察 DNA和 RNA在细胞中的分布”实验，最终可 能观察到的结果是（ A ） A．细胞核呈绿色，细胞质呈红色 B．细胞核呈红色，细胞质呈绿色 C．仅细胞质呈红色 D．细胞基本不被染色
知识点——核酸在细
胞中的分布
一、核酸在细胞中的分布
实验原理: 1、甲基绿使DNA染成绿色，
吡罗红使RNA染成红色；
2、稀盐酸改变细胞膜的通透性， 加速染色剂进入细胞；稀盐酸使 染 色体中的DNA和蛋白质分离， 有利于DNA与染色剂的结合。
实验过程： 一、制片 二、水解 三、冲洗 四、染色 五、观察
（0.9%的NaCl，维持细胞 正常的形态） （8%HCl，能改变细胞膜的通透性， 同时使染色体中的DNA与蛋白质分离） （蒸馏水,冲洗多余盐酸） 甲基绿、吡罗红染色剂 先低倍后高倍
实验结果
小结：
真核细胞：
DNA：主要在细胞核，细质中的线粒体和 叶绿体中也含有少量的DNA。 RNA：主要在细胞质。
实验五观察细胞中DNA和RNA的分布
实验三 观察DNA和RNA在细胞 中的分布
原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对 DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使 DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。 利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞 染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的 分布。盐酸能够改变细胞膜的通透性， 加速染色剂进入细胞，同时使染色体中 的DNA与蛋白质分离，有利于DNA和染 色剂结合。
洋葱表皮细胞
结论：通过各种动植物实验材料的观察， 同学们观察到的结果非常相似，在细胞 核部分被染成了绿色，而在细胞质部分 被染成了红色。说明DNA主要分布在细 胞核中，RNA主要分布在细胞质中。
注意事项
1.材料的选择 ① 选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察； ② 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有 颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞) 2.取材要点 ① 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质； ② 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。 3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。 4.安全要点 ① 用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来 回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂； ② 烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分 钟。 5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺 旋。
Unna染色法：
Unna染色法： 1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛 宁（mehtyl-green-pyronim）染色法。1902 年Unna对这一方法进行了改良。1940年 Brachet研究证明用甲基绿—哌洛宁对DNA和 RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌 洛宁混合染料处理细胞后，由于DNA、RNA 对染料具有的亲和力不同， 而使这两种染料 对两类核酸具有了选择性。 DNA被甲基绿染 成绿色，RNA被哌洛宁染成红色， 这样就能 使细胞中两种核酸分布显示出来。
细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 , 细胞内DNA和RNA的原位显示 ppt课件
1、检查显微镜
2、清点检查器材
3、清洁公共实验区、打扫卫生
镜检后作业与工作
1. 完成实验报告；
4、送交动物尸体 5、检查水电门窗安全
2. 将动物尸体送到实验室门口动物尸体篓；
3. 清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊子等是否齐全）；
4. 做好显微镜使用登记，盖好防尘罩；
5. 将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中;
pp碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的 分布情况；
2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的 原理和方法。
ppt课件
3
[实验原理]
1. 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理
6. 盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。
（弃入水槽中会引起下水道堵塞）
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16
核酸的存在会影响实验结果用三氯醋酸处理甲基绿和派洛宁是互不混淆互不影响的两种染色剂由于其自身分子结构的特点它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合从而同时显示细胞内dna和rna的分布部位
细胞生物学与遗传学教研室
ppt课件
1
第二次实验
Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示
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11
[小结]
• 评价本次实验的得失 • 本次实验需要巩固的概念
细胞化学法 • 本次实验需要掌握的实验技能
1. 血涂片制作方法 2. 染色的规范操作方法 3. 洗涤方法（流水冲洗） 4. 正确的镜检方法（显微观察技术）
ppt课件
细胞生物学实验报告
细胞⽣物学实验报告[5]注意：这⼀步，动作要⾮常迅速，否则鸡⾎会凝固。
或者先把抗凝剂加⼊到烧杯中，再加⼊新鲜的鸡⾎，边加边震荡即可。
[6]为什么新鲜的鸡⾎会凝固？[7]为什么这⼀步要使⽤0.17 M 的 NaCl 溶液？实验六细胞膜的渗透性⼀、实验⽬的了解细胞膜[1]的渗透性及各类物质进⼊细胞的速度[2]⼆、实验原理1、在等渗溶液中，细胞对各种溶质的透过性不同。
有的溶质可以进⼊，有的溶质不能渗⼊。
2、渗⼊的溶质能提⾼细胞的渗透压，促进⽔分⼦进⼊细胞，引起溶⾎现象[3]。
3、不同的溶质渗⼊到细胞内的速度不同，因此溶⾎时间也不同。
三、实验材料新鲜⾎液（鸡⾎、猪⾎、⽜⾎等）四、实验器材试管（1.5 cm X 18 cm ）、试管架、10 ml 移液管、1 ml 移液管、200 ml 烧杯（2个）、250ml 容量瓶、移液枪、胶头滴管、菜⼑、吸球、电⼦天平、显微镜、盖玻⽚、载玻⽚、秒表五、实验药品及试剂 0.17 M NaCl 、 0.17 M NH 4Cl 、 0.17 M NH 4Ac 、 0.17 M NaNO 3、 0.12 M Na 2SO 4、 0.12 M 草酸铵、 0.32 M 葡萄糖、 0.32 M ⽢油、 0.32 M ⼄醇、 0.32 M 丙酮、肝素抗凝剂[4]六、实验步骤 1、制备⾎液稀释液（1）抗凝剂的制备：⾸先称取1克肝素钠粉末，然后加⼊0.17 MNaCl 溶液 10 ml （1∶10的⽐例），混合均匀，制成肝素抗凝剂。
（2）⾎液稀释液的制备：取新鲜⾎液，按⽐例（肝素抗凝剂:⾎液=1∶10）混合均匀，配制成经肝素抗凝的⾎液[5] [6]。
（3）按⽐例（经肝素抗凝的⾎液∶0. 17 M NaCl 溶液=1∶10）混合均匀，形成⼀种不透明的红⾊液体[7]。
2、低渗溶液（空⽩对照）的观察取试管⼀只，加⼊10 ml 蒸馏⽔，然后再加⼊1 ml 稀释的⾎液。
注意观察溶液颜⾊的变化。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导2009 年11 月目录前言 (1)细胞生物学实验守则 (2)实验一：动物细胞的基本形态观察和细胞计数 (3)实验二：细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察 (6)实验三：聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合 (8)实验四：线粒体和液泡系的超活染色与观察 (9)实验五：植物细胞微丝束的光学显微镜观察 (10)实验六：叶绿体的分离与荧光观察 (13)实验七：DNA的显示——Feulgen反应 (15)实验八：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察 (18)实验九：小鼠骨髓染色体标本的制备与观察 (20)实验十：染色体C-带技术 (23)实验十一：细胞内化学成分的显示方法——酸性磷酸酶的显示 (25)实验十二：开放性实验——蚕豆（Vicia faba）根尖细胞微核监测技术 (27)细胞生物学实验考试大纲····························································错误！未定义书签。
实验考试试题示例········································································错误！未定义书签。
细胞生物学实验智慧树知到课后章节答案2023年下宁波大学
细胞生物学实验智慧树知到课后章节答案2023年下宁波大学宁波大学第一章测试1.在单克隆抗体制备过程中，需要使用下列哪项技术？（）A:显微操作技术 B:细胞转染 C:细胞核移植 D:细胞融合答案:细胞融合2.团队协作精神体现在下列哪些课堂活动中。
（）A:实验视频制作和校对 B:预习实验流程，并进行分工 C:实验结果评估 D:实验期间卫生打扫答案:实验视频制作和校对;预习实验流程，并进行分工;实验结果评估;实验期间卫生打扫3.预习需要完成的任务包括（）。
A:观看网上视频 B:小组内讨论实验流程及分工 C:准备实验流程图 D:完成预习习题答案:观看网上视频;小组内讨论实验流程及分工;准备实验流程图;完成预习习题4.下面不属于本课程开设的实验是（）。
A:动物细胞培养 B:叶绿体的分离与观察 C:细胞凋亡诱导 D:细胞转染 E:细胞骨架观察 F:细胞融合答案:细胞转染5.期末考核不包括下面哪一项内容。
（）A:随堂作业 B:实验报告 C:理论考试 D:操作考试答案:随堂作业第二章测试1.细胞是（）过程精巧的结合的综合体。
A:物质（结构） B:遗传 C:能量与信息 D:代谢答案:物质（结构）;能量与信息2.细胞（）的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。
A:长度 B:体积 C:周长 D:面积答案:长度;体积;面积3.细胞实际长度按照哪个公示计算。
（）A:目镜测微尺的每小格的刻度=（镜台测微尺的格数×10 μm）÷目镜测微尺的格数 B:目镜测微尺的每小格的刻度=（镜台测微尺的格数×10 μm）×目镜测微尺的格数 C:目镜测微尺的每小格的刻度=（10 μm÷镜台测微尺的格数）÷目镜测微尺的格数答案:目镜测微尺的每小格的刻度=（镜台测微尺的格数×10 μm）÷目镜测微尺的格数4.如果是在10×目镜下测定目镜测微尺每小格的实际长度，那么在接下来目标细胞大小可换其他倍镜进行观察。
实验八细胞内溶酶体与线粒体的荧光标记
荧光标记的实施
荧光染料标记
将选定的荧光染料按照说明书要求的 浓度和时间添加到细胞培养液中，使 染料与细胞充分接触，完成荧光标记 。
清洗与观察
荧光标记完成后，清洗细胞，去除多 余的染料，然后进行荧光显微镜观察 。
荧光显微镜观察
显镜设置
根据所选荧光染料的激发和发射波长，设置 显微镜的光源、滤光片和曝光时间等参数。
观察记录
在显微镜下观察细胞的荧光标记情况，记录 荧光信号的分布、强度和形态等特征。
图像采集与分析
图像采集
使用显微镜配备的摄像系统或图像采集卡，将荧光显微镜下的细胞图像采集下来。
图像分析
利用图像处理软件对采集的图像进行处理和分析，测量荧光信号的定量数据，如荧光强度、面积和比例等。
04
结果与讨论
荧光标记效果的评价
荧光物质能够吸收特定波长的光并发出荧光，从而在显微镜 下被观察到。不同的荧光物质可以发出不同颜色的荧光，便 于区分和识别不同的目标分子。
学习细胞内溶酶体与线粒体的荧光标记方法
溶酶体是细胞内的重要细胞器，负责分解衰老的细胞器和 外来物质。线粒体是细胞的能量工厂，负责提供能量。了 解这两种细胞器的功能和位置对于研究细胞生物学至关重 要。
对未来研究的展望
基于本实验的研究结果，我们可以进一步探索溶酶体和线 粒体在细胞生长、发育、代谢等方面的功能和相互作用机 制。
我们可以通过比较不同类型细胞中溶酶体和线粒体的分布 和数量，研究它们在不同生理条件下的功能差异。
随着荧光标记技术的发展，我们可以尝试使用更先进的荧 光染料和技术手段，提高标记的灵敏度和特异性，以更深 入地研究细胞器的功能和相互作用。
溶酶体与线粒体的功能
溶酶体是细胞内的重要细胞器，主要 功能是分解和消化细胞内的无用物质 。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验目录:实验一：特殊显微镜的原理及其使用实验二：电子显微镜的原理及使用实验三：细胞膜的渗透性实验四：细胞的凝集反应实验五：诱导细胞融合—聚乙二醇法实验六：线粒体和液泡系的超活染色与观察实验七：叶绿体的荧光原位观察实验八：细胞骨架的观察实验九：细胞中DNA、RNA的显示实验一特殊显微镜的原理及其使用I.暗视野显微镜的原理和使用一、实验目的1.了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理；2.了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；3.掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。
二、原理和结构特点在日常生活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。
暗视野显微镜就是利用此原理设计的。
它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗视野聚光器，常用的是抛物面聚光器，使光源的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜。
从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。
在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像．并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。
但被检物体为非均质时，并大于1/2波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。
一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004μm以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2μm)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
三、仪器、材料与试剂（一）仪器具有暗视野聚光器的显微镜（二）材料牙垢微生物，洋葱内表皮细胞，载玻片，盖玻片，牙签，尖头镊子，滤纸条，指甲油，擦镜纸等。
（三）试剂生理盐水四、实验步骤1.样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，用牙签取牙垢或用镊子撕洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上一片无划痕、清洁的盖玻片，用滤纸条吸取盖片四周多余的水分，用指甲油封片（或不封片）。
实验DNA和RNA在细胞中的分布
吡罗红甲基绿混合染色剂与斐林试剂 使用方法相似，都是混合使用、现配 现用。
注意事项：1、烘烤时要来回移动玻片， 以免受热不均炸裂；2、烘烤后，等玻片 冷却后再放入盛HCl的烧杯中，以免炸裂。
二、水解
目的：杀死细胞，改变细胞膜的 通透性，加速染色剂进入细胞； 使染色质中DNA与蛋白质分离，有 利于DNA与染色剂的结合
1、在小烧杯中加入30ml质量分数为 8%的HCl，将烘干的载玻片放入小烧 杯中； 2、再将小烧杯放入盛有30℃温水大 烧杯中保温5min。
。 ①能改变细胞膜的通透性 →加速染色剂进
盐酸 入细胞
②能使染色质中的 DNA和蛋白质 分离→有
利于 DNA和染色剂 结合
目的要求： 初步掌握观察DNA和RNA在细胞中 分布的方法
实验材料：人的口腔上皮细胞； 洋葱鳞片叶内表皮细胞；
尽量避免材料上 带叶肉组织细胞
1、能否用哺乳动物成熟的红细胞？无细胞核 2、能否用紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞？
实验
观察DNA和RNA 在细胞中的分布
2021011-11-01-08-8
实验原理：
DNA主要分布在 细胞核 内，RNA大部分存在于 细胞质 中。
甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力
不同，甲基D绿NA使
呈吡现罗绿红色，RNA
使 呈现红色。甲利基用绿示DNA和RNA在细胞中的分布
注意事项：时间长，会严重破坏细胞结构， 干扰DNA和RNA的观察； 时间短，水解不彻底，染液不 易进入细胞，染色不充分。
三、冲洗 目的：防止HCl与染色剂发生
中和作用而影响观察效果
取出载玻片，用蒸馏水的 缓水流冲洗载玻片10秒
注意事项：冲洗时一定要用缓流， 防止细胞被冲走
实验报告：观察DNA和RNA在细胞中的分布.doc
实验报告3：观察DNA 和RNA 在细胞中的分布实验原理①DNA 主要分布在细胞核内，RNA 大部分存在于细胞质中。
②两种染色剂对DNA 和RNA 的亲和力不同：利用两者的 （混合还是单独）染色剂将细胞染色，可以显示DNA 和RNA 在细胞中的分布。
③盐酸能够改变 ，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的 和 分离。
+DNA →绿色；+RNA →红色。
目的要求：初步掌握观察DNA 和RNA 在细胞中的分布的方法。
材料用具：实验步骤：一、取口腔上皮细胞制皮1、在洁净的载玻片上，滴一滴质量分数为 溶液。
2、用消毒牙签在自己漱净的 上轻轻地刮几下，把牙签上 的一端，放在上述载玻片上的液滴中涂抹几下。
3、点燃酒精灯，将涂有口腔上皮细胞的载玻片 。
二、水解1、在小烧杯中加入 ml 质量分数为 ，将烘干的载玻片放入小烧杯中。
2、在大烧杯中加入 ℃温水。
3、将盛有 和载玻片的小烧杯放在大烧杯中水浴保温 min 。
三、冲洗涂片：用 的 冲洗载玻片。
四、染色1、用 吸去载玻片上的水分。
2、将 染色剂滴2滴在载玻片上，染色 min 。
3、吸去多余染色剂，盖上盖玻片。
五、观察1、用低倍显微镜观察：选择、的区域，移至视野中央，将物像调节清晰。
2、换用高倍显微镜观察：调节，观察细胞核和细胞质的染色情况。
实验现象及结论：绿色明显集中且接近细胞中央，绿色周围的红色范围较多。
这说明，主要分布在细胞核中，广泛分布在细胞质中。
说明..............................................................................................................................①真核细胞的DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中，但在细胞核中也有少量分布。
②原核细胞的DNA主要分布在拟核，RNA主要分布在细胞质中；病毒只含有DNA或RNA。
细胞生物学实验--设计性实验方案--二组
设计性实验方案课程名称细胞生物学题目名称 DNA的原位显示专业生物科学学号学生姓名指导教师时间邯郸学院生命科学与工程学院说明一、实验设计的目的实验设计是培养学生综合运用所学知识与技能，初步训练学生获得分析和解决实际问题的能力的实践性教学环节之一。
通过实验设计培养学生运用所学知识设计课题的能力，为毕业论文的开展，以及今后从事生产、教学、科研等相关工作打下坚实基础。
二、实验设计的要求1、以小组为单位，提出与专业、课程有关的课程设计题目。
命题要求既有代表性，又有实际意义。
2、设计应包括以下几个部分构成：（1）研究的目的与意义。
应说明此项研究在生产实践上或对某些技术进行改革带来的经济、生态与社会效益。
有的课题过去曾进行过，但缺乏研究，现在可以在理论上做些探讨，说明其对科学发展的意义。
（2）国内外同类研究的概况综述。
在广泛查阅有关文献后，对该类课题研究已取得的成就与尚存在的问题进行简要综述并提出自己对一些问题的看法。
（3）课题研究方案：包括研究内容、研究方法和技术路线。
研究内容要重点突出；研究方法要具有科学性、先进性；技术路线有清晰。
（4）研究的预期结果和创新性。
3、格式要求（1）表格内容，字号用小4号，中文字体用宋体，英文字体、数字用Times New Roman；（2）正文字数1500字以上。
4、内容要求（1）立题依据充分（实验目的明确、意义定位准确，对拟解决的问题有合理预测，对国内外研究现状阐述全面）；（2）研究方案（包括实验的技术路线、实验的进程安排、具体操作过程、设立的实验指标和指标的检测手段）可操作性强；（3）实验结果的记录及分析方法可行性强；（4）对实验中可能发生的问题有正确预测并提出相应的解决方法；（5）经费预算合理；（6）附有5篇以上主要参考文献。
三、实验设计题目（自拟）一、选题依据（拟开展研究项目的目的、意义）实验目的1、掌握孚尔根反应和Brachet反应的原理。
2、掌握孚尔根反应和Brachet反应显示细胞内DNA的方法。
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实验流程
洋葱鳞茎内表皮 ↓
置于已滴MP-染液的载玻片上染色1min ↓
洗去浮色 ↓
制片镜检
实验结果
• 细胞核呈绿色或蓝绿色 • 细胞质和核仁呈粉红色
染料说明
N(CH3)3
(H3C)2N
O
N(CH3)2
(H3C)2N
C
N(CH3)2
甲基绿(methyl green)
C H
派洛宁(pytonin)
洋葱表皮细胞Unna反应
实验原理
孚尔根反应显示脱氧核糖核酸
主要包括DNA解离和显色两个步骤：标本 经稀盐酸解离后（1mol/L HCL, 60oC ） ，DNA 分子中的嘌呤碱基与脱氧核糖连接的键 被打开，从而在脱氧核糖的一端形成了 游离的醛基。 Schiff试剂中的无色品红 可与醛基反应， 形成含有醌基的化合物 (紫红色) ，从而显示出DNA的分布 。 通过显微分光光度计亦可做定量分析。
O
+C
H
R
水解后形
成有醛基
的DNA
R
R
H C OH
H C OH
OSO
O
SO
NH
NH
Cห้องสมุดไป่ตู้
NH
紫红色化合物
实验结果
• 细胞核的DNA被染成紫红色, 其主要分布于染色质(或染 色体)内,核仁和细胞质被亮 绿复染成绿色.
实验原理
甲基绿-派洛宁染色方法
细胞经甲基绿-派洛宁染液处理后,其中的 DNA和RNA出现不同的呈色反应. 一般认为 这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料甲 基绿和派洛宁具有亲和力，但因此两种染 料所带电荷密度不同，当pH4.6 时与核酸 发生竞争性结合，具高电荷密度的甲基绿 将高聚分子的DNA染成蓝绿色，具低电荷密 度的派洛宁将低聚分子的RNA染成粉红色. 由此可对细胞中的DNA和RNA进行定位、定 性和定量分析。
Feulgen反应示DNA
Feulgen反应示DNA
实验报告要求
摘要及关键词 前言 材料和方法 结果与分析 参考文献
实验材料及试剂
仪器：显微镜 水浴锅 材料：洋葱鳞茎；大蒜根尖 试剂：MP染液；
蒸馏水； 5%三氯乙酸； 1N HCl； Schiff 试剂； 亚硫酸水； 0.1%亮绿
实验流程
蒸馏水 （CK 2 ）
大蒜根尖 (经Carnoy固定液固定)
70%乙醇 1N HCl1~2min 1N HCl 60oC 8min
实验八 细胞内核酸 的显色与分布
孚尔根反应显示脱氧核糖核酸 Unna反应鉴定两种核酸在细胞内的分布
（必做， 综合实验, 6学时）
实验目的
掌握原位显示细胞内核酸的 细胞化学方法和原理
➢ 掌握Feulgen DNA reaction方法和原理
概述
核酸的细胞化学显示方法
核酸是细胞中的重要组分, 主要包括DNA和 RNA。DNA是遗传信息的载体（细胞核）, RNA 传递DNA的遗传信息， 指导细胞合成各种蛋 白质。
蒸馏水 Schiff反应(避光30min) 亚硫酸氢钠溶液(1~2min) 亚硫酸氢钠溶液(1~2min)
蒸馏水 0.1%亮绿（30~40s)
制片镜检
5%三氯乙酸 90oC,15min （CK 1 ）
大蒜根尖的培养
Feulgen 反应(示意)
H OSO
NH
H OSO
NH
C SO3H
NH2
Schiff 试剂
1924年(Feulgen and Rossenbeck)发明了显示DNA的特 异反应 (Feulgen DNA reaction) ，对DNA的显示具有 高度的专一性。
1940年(Brachet)发明了甲基绿-派洛宁染色方法 (Methyl Green-Pytonin method) 用以区别细胞中的DNA和 RNA。