流式细胞术
流式细胞术——原理,操作及应用(一)
流式细胞术——原理,操作及应用(一)流式细胞术——原理,操作及应用1. 原理•流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数悬浮在溶液中的个体细胞的技术。
•通过利用激光器激发细胞或微粒上荧光探针或吸光染料产生的荧光信号或散射光信号进行检测和分析。
2. 操作步骤样本制备•通过细胞培养、组织消化等方法获得需要检测的细胞样品。
•样本可能需要进行染色或标记以便于特定细胞或分子的检测。
流式细胞仪设置•调整激光器和探测器以适应所用标记物的激发和发射波长。
•设置仪器参数，如流速、放大倍数等。
数据采集和分析•将样本注入流式细胞仪，使其以单个细胞的方式流过激光束。
•通过荧光或散射光信号来检测和记录每个细胞的特征。
•利用专业软件对采集到的数据进行分析和解读。
3. 应用免疫表型分析•流式细胞术可以用于检测和分析细胞表面标记物的表达情况。
•可以用于分离和鉴定各种免疫细胞亚群，如T细胞、B细胞和NK 细胞等。
细胞周期分析•通过染色剂标记DNA，流式细胞术可以区分细胞的不同周期阶段。
•可以用于评估细胞增殖能力和细胞周期的营养、药物等因素影响。
细胞凋亡检测•利用荧光探针标记凋亡标记物，流式细胞术可以检测和计数凋亡细胞比例。
•可以用于评估药物对细胞凋亡的影响以及疾病状态的分析。
粒子分析•可以用于分析和鉴定不同大小、不同形状的微粒，如细胞、细胞器、胞外囊泡等。
•可以用于研究细胞的分泌和吞噬过程等。
其他应用•流式细胞术还可用于检测和分析细胞内钙离子浓度、细胞内蛋白、RNA和DNA含量等。
•可以应用于疾病诊断、药物筛选、生命科学研究等领域。
以上是流式细胞术的原理、操作步骤及一些常见应用的介绍。
流式细胞术的广泛应用使其成为现代生命科学研究和临床实践中必不可少的技术之一。
流式细胞术基础知识
讲者：***
目录
1、流式细胞术基本定义 2、流式细胞仪介绍 3、荧光染料介绍 4、不同型号流式细胞仪简介 5、流式细胞仪应用
流式细胞术定义
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、 准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多 项特性（多参数）的技术，同时可以对特定群体加以分选
淋巴细胞亚群分析可以了解机体在不同条件下的免疫功能 状态，主要包括细胞免疫功能和体液免疫功能。在临床上，主要用 于对免疫系统造成明显干扰的相关疾病的辅助诊断，分析疾病的发 病机理，监控疾病的病程进展，观测疗效及监测预后等等。
流式细胞仪临床应用
临床意义 CD3+ CD3+ CD4+ CD3+ CD8+ CD4+ / CD8+ B细胞 NK细胞
FITC, PE,ECD,PC5 or PECy5.5,PE-Cy7
APC, APC-Cy7
国食药监械(进)字 2014第2403463号
FITC, PE,ECD,PC5 or PC5.5,PC7
红光:638nm 紫光：405nm
APC，APC-Cy5 or APCAlexa Fluor 700, APC-Cy7 or APCAlexa Fluor
谢谢！
部分演示内容来源于网络，如有侵权，请联系删除！谢谢！
APC, APC-Cy7
浙械注准 20192220121
流式细胞仪应用
临床研究
血液，肿瘤， 药理，免疫…
环境研究
湖泊，海洋 生态研究…
生物学研究
遗传，生殖， 微生物，细胞 生物，毒理， 分子生物…
食品制药工业
食品检测、药物筛 选，疫苗研究…
流式细胞术原理
流式细胞术原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数溶液中单个细胞的技术。
它结合了细胞生物学、免疫学和光学原理，可以对细胞的形态、大小、表面标记物、细胞内分子和细胞功能进行高度灵敏和高通量的检测。
流式细胞术在医学研究和临床诊断中被广泛应用，例如免疫表型分析、癌症诊断、染色体分析和细胞周期分析等。
流式细胞术的基本原理是将细胞溶液通过一个微小的流动池，细胞在流动池中被依次单个地通过一个激光束，同时检测和测量细胞的荧光信号和散射光。
这里主要介绍基于光散射和荧光信号的流式细胞术原理。
光散射是指细胞与入射光发生相互作用后，在各个方向上散射出的光。
光散射信号主要包括前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）。
前向散射光与细胞的大小相关，大细胞产生强烈的散射信号，小细胞产生较弱的散射信号。
侧向散射光与细胞的内部复杂性和粒子的复杂性相关，比如细胞的细胞器、蛋白质聚集体和细胞颗粒等。
荧光信号是基于染料的荧光分子在光激发下发射出的荧光信号。
细胞表面的抗原可以通过荧光标记的抗体进行特异性检测。
荧光染料可以与抗体结合，并通过激光的作用激发染料分子，产生荧光信号。
通过使用不同波长的激光器和荧光探针，可以同时检测多个不同的荧光信号。
为了实现对不同细胞类型的准确检测和计数，流式细胞仪使用光学系统和电子学系统进行信号采集和处理。
光学系统包括激光器、光学滤镜和光电二倍频管（PMT）。
激光器产生高能量、单色的激光束，通常使用激光器输出的可见光波长，如蓝色（488nm）、绿色（532nm）和红色（633nm）等。
光学滤镜用于选择和隔离特定波长范围的光信号。
PMT是用来接收荧光信号和散射光信号的光电器件，能够将光信号转换为可计量的电信号。
电子学系统包括脉冲幅度分析器、数据采集系统和计算机。
脉冲幅度分析器将接收到的电信号转换为数字信号，并分析信号的幅度、持续时间和频率等参数。
数据采集系统将脉冲信号转换为数字数据，并存储在计算机中。
流式细胞术名词解释
流式细胞术名词解释
流式细胞术（flow cytometry）是一种高速、高效的单细胞分析
技术，广泛应用于生命科学中。
该技术利用激光束和多重探针对单个
细胞进行多参数分析，可以快速获取细胞表面、内部分子以及细胞特
性的详细信息。
在流式细胞术中，细胞被分散在流动液体中，通过细胞分流器进
入流式细胞仪的测量单元。
激光器对细胞进行激发，然后由散射仪和
荧光仪收集并分析激发光信号。
散射光可以提供关于细胞大小和形状
的信息，而荧光探针可以用于检测细胞表面抗原、内部蛋白、DNA含量、RNA含量等多种细胞特征。
流式细胞术的优势在于可以快速高效地处理大量的样本，适用于
单细胞和多种细胞的分析。
同时，该技术还可以对细胞进行有效的分
选和分离，具有极高的精确性和灵敏度。
因此，流式细胞术在生物学、医学、生物工程等领域中得到了广泛的应用。
例如，在癌症诊断中，
通过流式细胞术可以区分不同类型的癌细胞，进一步指导治疗方案的
设计和实施。
总之，流式细胞术已经成为现代生命科学中不可或缺的工具之一。
其在高通量、高精度分析和细胞分选中的优势，可以为研究细胞和疾
病提供重要的科学基础。
流式细胞原理
流式细胞原理
流式细胞术是一种生物学技术，用于分析和计算单个细胞的特性和数量。
该技术结合了光学、电子、计算机和细胞生物学等多个领域的知识，可以实现对细胞数量、大小、形态、染色质性质、蛋白质表达、表面标志物、细胞周期、细胞凋亡等多个方面的分析。
流式细胞术的基本原理是将标记有特定抗体的细胞以悬浮液形式通过流式细胞仪进行分析。
首先，将待测细胞样品制备成单细胞悬浮液。
然后，在细胞表面或细胞内特定的蛋白质或其他分子上结合特异性的荧光标记物，形成带有荧光的复合物。
这些标记物可以是单色或多色的，用于检测不同的细胞特性。
接下来，将标记的细胞悬浮液通过流式细胞仪。
流式细胞仪通过调节样品流速，将单个细胞通过一个聚焦的激光束。
当细胞经过激光束时，荧光标记物会发出荧光信号，并被细胞仪中的光电池探测器捕获。
光电池探测器会测量荧光信号的强度和颜色，从而确定细胞的各种特性。
流式细胞仪可以高速、连续地分析细胞，并将数据记录下来。
通过分析荧光信号的特点，可以获得关于细胞的许多信息。
常见的分析参数包括细胞数量、表面标志物的表达水平、细胞大小和形态、核酸含量等。
此外，流式细胞仪还可以用于细胞之间的排序和分离，以实现纯化或进一步的实验操作。
在实际应用中，流式细胞术被广泛用于基础科学研究、临床诊断和药物研发等领域。
它可以帮助科学家更好地了解细胞的生
理和病理过程，探索细胞之间的相互作用和信号传递机制。
同时，流式细胞术也可以用于临床诊断，如血液细胞计数和免疫表型分析等。
流式细胞术的不断改进和发展，为细胞生物学和医学研究提供了有力的工具。
流式细胞术基本原理_
流式细胞术基本原理_流式细胞术（flow cytometry）是一种通过激光照射、细胞荧光标记和单个细胞分析的技术，用于研究和识别细胞的性质和功能。
它可以分析多种类型的细胞，包括细菌、酵母、植物细胞和动物细胞。
流式细胞术具有高通量、快速并且可以同时分析多个参数等优势，因此被广泛应用于生物学研究、临床诊断和治疗等领域。
1.激光照射：流式细胞仪使用一束高能激光照射通过细胞悬液。
通常使用的激光有紫外线、蓝色、绿色和红色等多种波长。
激光束通过透镜系统聚焦，使细胞悬液中的细胞逐个经过照射点。
2.细胞荧光标记：在流式细胞仪实验前，细胞需要进行荧光染色，以便能够准确地测量和分析不同细胞参数。
荧光标记通常是通过将细胞与特定的标记分子（包括化学荧光染料、抗体或融合蛋白等）结合。
这些标记物可以与细胞的特定结构（如表面抗原、内源性蛋白等）相互作用，从而使细胞在流式细胞仪中发出荧光。
3. 光散射和荧光检测：经过激光照射后，细胞会散射光线。
光散射可以分为两种类型：前向散射（forward scatter，FSC）和侧向散射（side scatter，SSC）。
FSC反映细胞的大小，而SSC反映细胞的复杂性和内部结构。
同时，通过引入适当的滤光片和光学分束器，可以同时检测细胞所发出的荧光信号。
流式细胞仪通常具有多个荧光探测器，可以同时检测多个荧光染料。
4.数据分析：通过流式细胞仪获得的数据是复杂的多维数据，需要进行后续的数据分析和解释。
常见的数据分析方法包括数据精炼、数据规范化、聚类分析、细胞子群分析等。
可以通过计算机软件对数据进行处理和可视化，以获得有关细胞种群组成和特征的更深入的理解。
流式细胞术在许多研究领域和临床应用中发挥着重要作用。
例如，通过流式细胞术可以定量检测一些细胞亚群的数量和频率，用于检测和监测疾病的发生和发展，如肿瘤、免疫性疾病等。
此外，流式细胞术还可以用于筛选新药的有效性和安全性评估，以及研究细胞信号转导、基因表达和细胞分化等生物学过程。
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
流式细胞术简介及应用进展课件
流式细胞术简介及应用进展
15
▪高速度：分析细胞数：1000个/s→60000个/s ▪高灵敏度：荧光分子数/细胞：3000→100个FITC； ▪高准确度：区分两个细胞：参数：相差5% →1%； ▪高精度：CV值：7% →< 1%; ▪多参数：荧光：1个 →12个参数； ▪高纯度：分选细胞：80-90% →99.9%; ▪其 它：荧光信号：线性检测→对数检测
电子程序化单细胞分选仪——Electronically programmable individual cell sorter, EPICS (Coulter公司）
流式细胞术简介及应用进展
5
BD FACSCalibur型 FCM （单L，3F）
流式细胞术简介及应用进展
6
Coulter EPICS XL/XL-MCL （单L，4F）
流式细胞术简介及应用进展
11
BD FACSAria
BD FACSCount
CD3\4\8 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪
流式细胞术简介及应用进展
12
BD FACSCanto 2L 6C
流式细胞术简介及应用进展
13
BD FACS Calibur 1L 4C
流式细胞术简介及应用进展
14
三、流式细胞术应用的新进展
流式细胞术简介及应用进展
17
2、cytometric bead array (CBA)
微球流式芯片技术(CBA)是一种微球多参数检测分析技 术，它用一系列的微球组合来捕获并结合流式细胞术检 测溶液中被检测物质的量，其采用夹心法分析策略。用 已知的标准品和对照标准曲线就可得出被测样品的浓度。 这种检测方法，既不受样品量的限制，也可同时检测多 项指标参数；客观、省时、人为因素影响小。
流式细胞术简介
流式细胞术简介一、流式细胞术发展简史流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。
其特点是：①测量速度快，最快可在1秒钟内计测数万个细胞；②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；③是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果；④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。
概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采集和分析技术等。
FCM目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。
1934年，Moldavan1首次提出了使悬浮的单个血红细胞等流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置计测的设想，在此之前，人们还习惯于测量静止的细胞，因为要使单个细胞顺次流过狭窄管道容易造成较大的细胞和细胞团块的淤阻。
1953年Crosland -Taylor根据雷诺对牛顿流体在圆形管中流动规律的研究认识到：管中轴线流过的鞘液流速越快，载物通过的能力越强，并具有较强的流体动力聚集作用。
于是设计了一个流动室，使待分析的细胞悬浮液都集聚在圆管轴线附近流过，外层包围着鞘液；细胞悬浮液和鞘液都在作层液。
这就奠定了现代流式细胞术中的液流技术基础。
1956年，Coulter在多年研究的基础上利用Coulter效应生产了Coulter 计数器。
其基本原理是：使细胞通过一个小孔，只在细胞与悬浮的介质之间存在着导电性上的差异，便会影响小孔道的电阻特性，从而形成电脉冲信号，测量电脉冲的强度和个数则可获得有关细胞大小和数目方面的信息。
1967年Holm等设计了通过汞弧光灯激发荧光染色的细胞，再由光电检测设备计数的装置。
1973年Steinkamp设计了一种利用激光激发双色荧光色素标记的细胞，既能分析计数，又能进行细胞分选的装置。
流式细胞术在免疫学中的应用
流式细胞术在免疫学中的应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种利用流式细胞仪对细胞或其他生物颗粒进行快速、多参数、定量分析和分选的技术。
在免疫学领域，流式细胞术具有广泛的应用，为免疫学家提供了一种强大的研究工具。
1. 免疫细胞分型和计数：流式细胞术可以通过标记抗体与细胞表面或内部的特定抗原结合，从而对不同类型的免疫细胞进行分类和计数。
这对于监测免疫系统的状态、研究免疫疾病以及评估免疫治疗效果非常重要。
2. 细胞活化和功能分析：流式细胞术可以检测细胞表面标志物的表达水平，从而评估免疫细胞的活化状态和功能。
例如，通过检测 CD69、CD25 等活化标志物的表达，可以研究T 细胞的活化；通过检测细胞因子的表达，可以分析 Th1、Th2、Th17 等不同类型的 T 细胞亚群。
3. 免疫细胞凋亡检测：流式细胞术可以通过 Annexin V/PI 双染色法等技术，检测免疫细胞的凋亡情况。
这对于研究免疫细胞的生存和死亡调节机制、评估药物对免疫细胞的影响以及探讨免疫相关疾病的发病机制具有重要意义。
4. 免疫细胞分选：流式细胞仪可以根据细胞的物理或生物学特性，将目标细胞从混合细胞群体中分离出来。
这一技术在细胞培养、基因转染、单细胞分析等方面具有重要应用。
5. 高通量筛选：流式细胞术可以同时分析大量样本，实现高通量筛选。
这对于药物筛选、抗体发现以及寻找新的免疫治疗靶点等研究具有重要价值。
总之，流式细胞术在免疫学中的应用非常广泛，为深入了解免疫系统的结构和功能、探索免疫相关疾病的发病机制以及开发新型免疫治疗策略提供了重要的技术支持。
流式细胞术实验报告
一、实验目的本实验旨在通过流式细胞术技术，对细胞群体进行快速、精确的分析和定量测定，研究细胞的物理与化学性质，并对细胞进行分类和分选。
通过本次实验，掌握流式细胞仪的工作原理，了解其在细胞生物学研究中的应用。
二、实验原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。
其基本原理是将经过荧光标记的细胞或微粒，在流动系统中以高速通过，同时利用激光束照射细胞，通过光散射和荧光信号来获取细胞的大小、形态、表面标记物等信息。
最后，通过数据分析和可视化展示，对细胞进行计数、分类和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细胞样本：小鼠脾细胞、Jurkat细胞- 荧光标记抗体：CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC- 溶液：磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、荧光染料（如PI）2. 实验仪器：- 流式细胞仪（如BD FACS Calibur）- 离心机- 恒温培养箱- 移液器四、实验步骤1. 细胞制备：- 收集小鼠脾细胞或Jurkat细胞，用PBS洗涤后，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
- 加入荧光标记抗体，室温下孵育30分钟。
- 用PBS洗涤细胞两次，去除未结合的抗体。
2. 流式细胞术分析：- 将处理好的细胞加入流式细胞仪，设置合适的参数进行检测。
- 收集数据，进行细胞分类和分析。
3. 数据分析：- 利用流式细胞术分析软件（如CellQuest、FlowJo）对数据进行分析，包括细胞计数、分类、DNA含量分析等。
五、实验结果与分析1. 细胞分类：- 通过流式细胞术，成功将小鼠脾细胞和Jurkat细胞分为不同的亚群，如T细胞、B细胞等。
2. DNA含量分析：- 通过PI染色，检测细胞的DNA含量，发现小鼠脾细胞和Jurkat细胞均处于G0/G1期。
3. 表面标记物分析：- 通过CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC抗体检测，发现Jurkat细胞为T细胞，小鼠脾细胞中含有B细胞和T细胞。
流式细胞术的原理
流式细胞术的原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种通过检测细胞在流动状态下的物理和化学特性来进行分析和分类的技术。
它是一种高通量、高灵敏度的细胞分析技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断、药物研发等领域。
本文将介绍流式细胞术的原理及其在生命科学研究中的应用。
首先，流式细胞术的原理是基于光学原理的。
当细胞悬浮液通过流式细胞仪时，它们会被单个地吸引到一束激光光束中。
这束光会激发细胞中的荧光染料或荧光标记抗体，使其发出荧光信号。
流式细胞仪会同时检测细胞的散射光和荧光信号，通过这些信号可以得到有关细胞大小、形状、表面标记物等信息。
因此，流式细胞术可以实现对数以千计细胞的高速分析，从而为生物学研究提供了强大的工具。
其次，流式细胞术的原理还涉及细胞分类和计数。
通过流式细胞仪可以对细胞进行精确的分类和计数，这对于研究细胞的表型和功能非常重要。
通过选择不同的荧光标记物，可以实现对不同类型细胞的鉴定和分类，从而为疾病诊断和治疗提供重要依据。
此外，流式细胞术还可以用于研究细胞的功能和活力。
通过检测细胞内的荧光信号强度和分布，可以了解细胞的代谢活性、蛋白质表达水平等信息。
这对于研究细胞的生物学特性和疾病机制具有重要意义。
最后，流式细胞术在生命科学研究中有着广泛的应用。
它可以用于免疫学研究，如免疫细胞表面标记物的鉴定和分析；用于肿瘤学研究，如检测肿瘤细胞的表型和数量变化；用于细胞生物学研究，如细胞周期和凋亡的研究等。
此外，流式细胞术还在临床诊断、药物筛选和药效评价等领域有着重要的应用价值。
总之，流式细胞术作为一种高通量、高灵敏度的细胞分析技术，其原理基于光学原理，可以实现对细胞的精确分类、计数和功能分析。
它在生命科学研究中有着广泛的应用前景，为科学家们提供了强大的工具，促进了生命科学领域的发展和进步。
流式细胞术
流式细胞术
流式细胞术是现代生物学中一项重要的技术。
它是一种针对单个细胞进行分析的高通量技术，可以分析细胞表面和胞内分子的表达、功能状态和亚细胞定位等信息，广泛应用于免疫学、细胞学、肿瘤学等领域，尤其在流行病学、诊断学和临床治疗中发挥着重要作用。
流式细胞术的基本原理是：将单个细胞通过高压速度流动进入光束中，利用各种光学、光电、电子学以及计算机技术，对其进行精密的测量和分类。
细胞进入光束时，会被加上一个荧光标记，从而使光线反射出细胞的特征，这些特征被探测器捕捉到之后，被转换成电信号，通过计算机处理分析，最终得到细胞的信息。
流式细胞术的优点在于它具有高通量、高灵敏度、高分辨率、高自动化和较低的样品消耗等优点。
同时，流式细胞术也存在一些局限性，如需要专业的应用和分析软件、标记试剂的选择和设计、实验条件的控制等问题。
流式细胞术常常被用于单个细胞表型和功能的分析。
针对免疫学，它可以用于细胞免疫表型的分析，了解细胞表面受体、淋巴亚群体等重要的表型信息。
同时，流式细胞术也可以用于肿瘤学的研究，检测瘤细胞表面受体和异质性表达。
在临床诊断中，流式细胞术可以用于血液学和肿瘤学等领域中单个细胞的感染或肿瘤状态的分析，为诊断和治疗提供重要的信息。
总的来说，流式细胞术是一种应用广泛、非常重要的技术。
无
论是在研究领域中分析细胞的性质，还是在临床领域中进行个性化治疗，流式细胞术都扮演着至关重要的角色。
我们相信，在不久的将来，随着流式细胞术技术的更进一步完善和发展，该技术的应用范围将会更加广泛，为生命科学领域的发展注入更多的动力。
流式细胞术的工作原理及临床应用
流式细胞术的工作原理及临床应用引言流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，其工作原理基于细胞在液体流动环境中的特定性质。
该技术广泛用于细胞表型分析、细胞计数、细胞分类和细胞排序等领域，为研究人员和医生提供了重要的工具。
一、流式细胞术的工作原理流式细胞术利用细胞在液体中的流动来实现细胞的分析和排序。
其工作原理可以分为三个主要步骤：细胞的悬浮、细胞的单独通过和细胞的检测。
1. 细胞的悬浮：首先，需要将待分析的细胞样本进行处理，使其转化为单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液处理等方法获得。
继续使用细胞培养基、酶消化或机械碎解等方法，将细胞组织分散成单个细胞，并获得细胞悬浮液。
2. 细胞的单独通过：接下来，将细胞悬浮液通过微小通道，通常是称为流式细胞仪的仪器。
在流速适中的条件下，细胞会单个通过通道，并在通过过程中因其特定特征而会发生特别的反应。
3. 细胞的检测：在细胞通过过程中，流式细胞仪能够感应细胞的数量、大小、形状和表面标记物等特征。
通过使用激光器的激光束照射细胞，并测量其散射光、荧光光谱等信息，流式细胞仪能够对细胞的特征进行定量分析。
二、流式细胞术的临床应用流式细胞术作为一种高效、灵敏和准确的细胞分析方法，在临床上有着广泛的应用，以下是一些常见的临床应用：1. 免疫学研究：流式细胞术在免疫学领域的应用非常广泛。
通过对细胞表面的抗原和抗体的特异性结合，可以对免疫细胞进行表型分析，了解不同亚群细胞的比例和功能状态。
这对于研究免疫相关疾病的发生机制、免疫细胞治疗的效果评估等方面非常重要。
2. 癌症诊断和监测：流式细胞术在癌症的诊断和监测中也起着关键作用。
通过检测癌细胞的特定标记物，可以对肿瘤进行识别、分类和判断其恶性程度。
此外，流式细胞术还可以监测肿瘤的治疗反应，评估抗癌药物的疗效，并预测患者的预后。
3. 血液学检测：流式细胞术在血液学检测中也占据重要地位。
通过检测血液中的各种细胞类型和亚群细胞的比例，可以帮助诊断和监测临床上的血液疾病，如白血病、淋巴瘤等。
流式细胞
写在课前的话流式细胞术融合了流体动力学、激光技术、电子工程、计算机技术和单克隆抗体染色技术等多学科的知识，成为一个专门的领域。
它不仅应用于细胞生物学、植物学、分子生物学、生物化学、微生物学等理论科学的研究，以及血液学、免疫学、病理学、肿瘤学、遗传学等临床医学的疾病诊断和治疗，而且可以应用于农林畜牧养殖业及环境、食品、药品等检测等，因此学习其原理极其重要。
一、流式细胞术概念(一) 概念流式细胞术(Flow Cytometry，FCM):是上世纪70年代的一项高新技术，是利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。
其研究对象为生物颗粒，包括各种动物植物细胞、微生物及人工合成微球等。
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并同时进行定量的一项技术。
目前这项技术已广泛应用于生物学和医学的各个领域，已成为细胞学分析领域中不可替代的重要工具。
(二) 流式细胞术的特点1. 快极短时间内可分析大量细胞，只要标本中的细胞数量足够，流式细胞仪（Flow cytometer）可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量，测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个。
2. 准可同时分析单个细胞的多种特征，当同时用多种分子探针，如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色，通过流式细胞分析，即可获得单细胞的多种信息，使细胞亚群的识别、计数更为准确。
3. 精通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度、酶活性以及细胞的功能等均可进行单细胞水平的定性与定量分析。
（三）流式细胞术（Flow Cytometry ，FCM ）操作流程流式细胞术的操作流程简单概括为：培养细胞、新鲜组织、石蜡包埋组织、骨髓、外周血、脱落细胞等不同类型的样品。
首先制备成单细胞悬液后，再经过荧光染色就可以上机进行检测。
如果需要分选，可以通过细胞分选把感兴趣的细胞分选出来进行进一步培养或者进行其他生物学行为的研究。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用一、流式细胞术的原理流式细胞术是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。
通过将单个细胞与特异性抗体结合，实现对细胞表面和内部抗原的定量和定性分析。
抗体通常与荧光染料标记，以便在流式细胞仪中产生光信号。
细胞在流式细胞仪中通过激光束，产生的荧光信号被光电倍增管收集并转换为电信号，从而实现对细胞特性的定量分析。
二、流式细胞术的应用1. 免疫表型分析流式细胞术可用于免疫表型分析，以了解免疫细胞群体的多样性、功能和活性状态。
通过检测特定免疫细胞表面标记物的表达水平，可以评估其发育阶段、激活状态和功能特性。
这种分析对于研究免疫系统功能、疾病发生机制和疫苗开发具有重要意义。
2. 细胞功能分析流式细胞术可用于分析细胞的生理功能，如细胞增殖、凋亡和吞噬作用等。
通过向流式细胞仪中添加特定的荧光染料或抗体，可以检测细胞内关键分子如DNA、RNA、蛋白质等，从而评估细胞的增殖和凋亡状态。
此外，还可以通过检测细胞表面的吞噬标记物，研究细胞的吞噬能力。
3. 基因表达分析流式细胞术可用于基因表达分析，以了解特定基因在细胞中的表达水平。
通过将RNA与特异性抗体结合，并使用荧光染料标记，可以检测细胞中特定基因的表达水平。
这种分析有助于研究基因功能、疾病诊断和药物筛选。
4. 病原体检测流式细胞术可用于病原体检测，以快速准确地识别和计数感染性疾病的病原体。
通过将特异性抗体与病原体结合，并使用荧光染料标记，可以在流式细胞仪中实现对病原体的定量和定性分析。
这种分析对于疾病诊断和治疗具有重要意义。
5. 肿瘤诊断和治疗流式细胞术在肿瘤学中也有广泛的应用。
通过对肿瘤细胞的表面抗原、基因表达和细胞功能进行分析，有助于肿瘤的诊断、分类、预后评估和治疗策略的制定。
此外，流式细胞术还可以用于监测肿瘤细胞的耐药性和对治疗的反应，为个体化治疗提供依据。
流式细胞术的原理及应用ppt课件
➢适用于高速分选和 多色分析
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在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
流式细胞仪检测范围
细胞大小
细胞粒度
细 细胞表面面积
胞 结
核浆比例
构 DNA含量与细胞周期
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散射光
它反应细胞的物理特性,根据前侧向散射光，可以把不同 类型的细胞群加以区分
FSC（小角散射光)它反 应细胞的相对大小和截 面积的大小
SSC (90度角散射光)代 表细胞的颗粒度和精细 结构的变化
1.液流系统： 细胞悬液被吸入检测室后，在鞘液
(sheath)的约束下，通过喷嘴，使其形成单细 胞悬液。
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2.光学系统： 激光是较常用的光源, 稳定性好、单色性好。 散射光和荧光信号被收集、处理转化为数字信号。
FACS Vantage DiVa
科研型（大型机）
特点： ➢多数字化 ➢适用于各类细胞分选 ➢4路分选
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FACSAria
科研型
特点： ➢分辨率高
➢选配多种波长和类 型激光器
成,将产生的光信号引导至检测器
流式细胞术——原理,操作及应用(二)
流式细胞术——原理,操作及应用(二)流式细胞术原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种通过流式细胞仪对细胞进行高速连续检测和分析的技术。
它利用细胞与荧光标记的抗体等特异性反应，通过流式细胞仪的高速流体流动和多通道探测系统来实现对数千个细胞的快速检测和分析。
操作1.细胞准备：首先需要从样品中获得待检测的细胞，并进行细胞的染色。
常用的染色方法包括直接染色和间接染色，可以利用荧光标记的抗体或荧光染料对细胞进行染色。
2.样品处理：将染色后的细胞悬浮液注入流式细胞仪的进样室中，通过机械或压力的方式使细胞以单细胞的形式通过流式细胞仪。
3.流式细胞仪操作：设置流式细胞仪的相关参数，包括激光光源的波长、光学滤波系统、探测器的选择等。
4.数据获取和分析：流式细胞仪会记录每个细胞的各项参数，包括细胞形态、大小、荧光强度等。
可以利用专门的数据分析软件对获取的数据进行分析和图表的制作。
应用流式细胞术在生命科学研究中有广泛的应用，以下是一些常见的应用：1.免疫学研究：利用流式细胞术可以对免疫细胞进行表面标记，例如CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、B细胞等的检测和分析，以研究免疫应答、免疫细胞的亚群分布等。
2.血液学研究：流式细胞术可以用于血液中不同细胞类型的检测和分类，例如红细胞、白细胞以及不同亚群的白细胞等，有助于了解血液疾病的发生机制。
3.肿瘤学研究：利用流式细胞术可以检测肿瘤细胞的特定标记，例如细胞表面抗原、细胞周期相关蛋白等，帮助进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度、增殖活性等。
4.微生物学研究：流式细胞术可以用于微生物的检测和计数，例如细菌、酵母菌等，有助于研究微生物的生长特性、代谢活性等。
5.细胞生物学研究：流式细胞术可以用于对细胞周期的分析、细胞凋亡的检测、细胞增殖速度的测定等，有助于了解细胞生物学的基本过程和调控机制。
总结：流式细胞术是一种非常强大和多功能的技术，在生命科学研究中得到广泛应用。
流式细胞术原理
流式细胞术原理流式细胞术（flow cytometry）是一种常用的细胞分析和分选技术，通过对悬浮细胞进行连续的、高通量的单细胞多参数分析，能够准确地获得细胞的多种信息，如大小、形态、表面标记物、蛋白质表达水平、细胞周期等。
流式细胞术的原理基于光学系统和流式细胞仪的相互配合。
其基本原理如下：1. 细胞样品制备：将待分析的细胞样品进行预处理，如去除细胞碎片、异物、血细胞混杂等，使其成为适合流式细胞仪分析的单细胞悬浮液。
2. 光源和染料：流式仪器利用一束单色、高能、激光光源对悬浮细胞进行照射。
细胞内染料的选择取决于研究目的，如荧光染料可用于标记特定蛋白质、细胞器或细胞表面受体。
3. 光学系统：经过光源照射后，激光光线经过特定的滤光片进行滤波，以选择特定波长的荧光信号。
光线通过一个透镜经过流式细胞仪的进样通道瞬间击中正在流动的细胞。
击中细胞的激光光线会被散射，产生前向散射光和侧散射光。
4. 散射光检测：前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）是流式细胞仪最基本的检测参数。
FSC反映细胞的大小和形态，SSC则反映细胞的复杂度和内部结构。
5. 荧光信号检测：流式细胞仪在经过细胞后会收集产生的荧光信号。
通过特定的荧光滤光片，选择出目标染料所发射的波长范围，并通过光电倍增管转化为电信号。
这些电信号被记录下来，并转化为数据。
6. 数据分析：流式细胞术生成的数据会在计算机中进行分析和解读。
通常会用分析软件对荧光信号进行解析，进一步分析细胞表型、蛋白质表达、细胞周期等信息。
通过上述原理，流式细胞术能够快速准确地进行细胞的高通量分析和分选，为生物学、医学等领域的研究提供了重要工具。
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BM/PB/ Lymph node
79a+/19+ 5+ 5 10 11c+
23+ 20 sIg FM C7 23 20+ + sIg+ + FM C7+ FCL 10+ 20+ sIg+ 25+ + 103++ FM C7+ MZL MALT SLvL Plasma Cells NK T-cell Disorde rs 25 38+ 56+ 45 16+ 56+ 45+
Mantal cell + lymphoma Follicle center lym Marginal zone lym HCL PLL +
Scoring system in the diagnosis in CLL
Scores in CLL >3,
Other B cell malignances<3
免疫分型的原理
白血病细胞本身未发现特殊性的白血病抗原。免疫分
型的原理是基于白血病细胞病变时分化阻滞学说。白 血病细胞与正常髓系和淋巴祖细胞一样，会出现某个 细胞发育阶段的抗原表达特征。由于细胞分化级系缺 乏绝对的界限，所以免疫分型常采用一组级系相关的
单抗来确定其相关抗原的存在。
AL免疫表型特点: 紊乱表型
流式细胞仪结构
•激光光源及光束形成系统 • 流动室及液流驱动系统 • 光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源， 收集不同波长的荧光信号。 • 信号检测与分析：光电倍增管（PMT）、补偿 电路。荧光信号转换为电信号，并将信号放大。 • 存储、显示、分析系统：计算机。 • 细胞分选系统
液流系统 光学系统 电子系统 分选系统
+
III
+
+
+
+
+/-
-/+
-
双表型急性白血病诊断的积分系统(EGIL,1998)
分值 B系 T系 髓系
2 **
CD79a
cCD22 cIgM CD19 CD20 CD10 TdT CD24
CD3
anti-TCRα/β anti-TCRγ/δ CD2 CD5 CD8 CD10 TdT CD7 CD1a
常用各系血细胞CD抗原 1、T系：CD1-CD8（CD6不用） 2、B系：CD10, CD19-CD24, FMC7 3、髓系：CD11b,CD13-CD16,CD33,CD64 4、干祖：CD34, CD117, CD38, HLA-DR
正常BM各系细胞比率
淋巴20-25%: T: 70%, B: 20%, NK:10%;
Mar ker % Gated All 100.00 M1 98.00
Mean 319.37 325.75
Gating
流式细胞仪在血液学中的应用
白血病和淋巴瘤的免疫分型 淋巴细胞亚群分析 CD34+造血干/祖细胞的检测 细胞增殖周期测定和DNA倍体分析 凋亡检测 活化血小板及网织血小板的检测 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH） 网织红细胞计数 白细胞分类计数 细胞因子的测量 细胞分选
CD117 / CD33 / CD13 / CD10 / CD15 / CD20 / CD56 / CD11b /
CD45 CD45 CD45 CD45 CD45 CD45 CD45 CD45
R2 R5 R3
R4
R6
R2 R4 R3
正常血细胞分化发育过程中免疫标志变化特 点以及白血病细胞免疫标志特点
工作原理
流式细胞术 （Flow Cytometry, FCM）
流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种可以快
速、 准确、客观，同时检测单个微粒（通常是细胞） 的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群
体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合 成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以 定量
NK细胞：16，56，18，（3 /19） 浆细胞：138，38+45 ，56+45
BM/PB BLASTS
cMPO +
CD13+CD33+
cCD3+
CD117
cCD79a+
CD3 2+/7+ CD3+ 2+/7± CD10+ 19+ 20± 34± DR+ CD10– 19+ 20+ 34– DR+
1. 系列交叉(cross-lineage): AML表达CD2,CD19 2. 表达不同步(asynchronous): 早期与晚期抗原同时表达 3. 表达量异常(over- or under-expression): 4. 与细胞大小不匹配(abnormal light scatter profile):
如大CD2+细胞或小CD13+细胞
AL免疫表型检测意义
鉴别淋髓系列
区分亚型 杂合型 Mo、M7、AUL 提示细胞遗传学异常
部分与预后相关
MDR监测
CD45/SSC设门法 (gating): 排除正常细胞干扰
CD45--白细胞抗原 淋巴细胞>单核细胞>原幼细胞>成熟粒细胞 红细胞不表达
Diagnosis SLL/CLL CD 5 + CD 10 + CD 19 + + + + + + CD 20 + + + + + +/CD 23 + -/+ + CD FM 79b C-7 + +/+/+/+ +/+/+/+/CD 25 -/+ -/+ +/CD 11c +/+ + -/+ CD 103 + -
流式细胞术分析参数
细胞固有参数（散射光参数）
Forward scatter(FSC) Side scatter(SSC)(SSC)
荧光参数
Hale Waihona Puke FL1-FITC FL2-PE FL3-PerCP PL4-APC
FCM²Î ² Ê £ Ö ö Î ý º
1.É É ¹ ² Ê £ ¢ ä â Î ý º
R3
R4
File: Yi Yuping 04.10.18.001 R2 R5 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 3.92 R3 15.45 R4 15.35 R5 22.13 R6 36.58
R3
R4
R6
R2 R5 R4
File: Shang Shuji e 04.10.12.001 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 3.53 R3 14.32 R4 11.47 R5 0.52 R6 65.65
33 13 15 11b 14
+ + ++ ++ + + + + /+ + + + + TdT,7 /+ t(8;21)--19+ 9+ 64+,4+ 45,glyA,
M4/5 /+ M6
+/ /+ +/
71+
M7 41,61+
成熟粒、单核细胞主要区别
79a/19 3 3+
2+/5+/7+/ 4/8+/45+
CLL
MCL
HCL
File: Wang Yanq iang 04.11.2.001 R2 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 6.33 R3 86.99 R4 1.74
R3
R4
R2 R5 R3
File: Jia Fengshan04.11.17.003 Region % Gated R1 100.00 R2 11.13 R3 5.23 R4 76.78 R5 1.08 R6 1.63
cyMPO
1
0.5
CD117 CD13 CD33 CD65 CD14 CD15 CD64
*当髓系和一个淋系积分均>2分时，则诊断为 BAL. **用anti-MPOMcAb或细胞化学方法证明
Common phenotyes of B-cell lymphoproliferative disorders
R3 R6
R2
标本来源
PB BM BM活检标本 淋巴组织穿刺液 浆膜液 脊髓液 皮肤 粘膜 其他组织穿刺标本
标本的储存
短时间储存：室温（16-28） 长时间储存：室温 16为宜 肝素：48-72小时 EDTA:12-24小时（髓细胞在此条件下会 裂解） 柠檬酸钠：PB>72小时，但高浓度的 ACD会引起PH值变化导致BM细胞死亡。
++ + ++ － ++ － ++ ++ －
—
++ + ++ ++ ++ + ++ ++ －