生物指示剂相关参考资料
生物指示剂
制备生物指示剂用微生物的基本要求
不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生 物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性： ①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染 微生物的耐受性； ②菌种应无致病性； ③菌株应稳定。存活期长，易于保存； ④易于培养。 • 若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要 在90%以上。
Verify TM自含培养基式生物指示剂
生物指示剂采购来源和要求
一个合格的生物指示剂供应商必须符合如下条件： （1）制造商负责确定生物指示剂的最初的性能指标。 制造商应该为每批生物指示剂附加一份 COA（分 析报告） ，用于说明生物指示剂性能指标。 （2）制造商应该标明生物指示剂的用途，即用于评 估灭菌工艺类型。 （3）制造商还应该提供如下信息：D 值、D 值测定 的方法、微生物数量、生物指示剂在有效期内耐 受能力、推荐的储存条件、使用指令等。 （4）生物指示剂制造商还应该提供使用后生物指示 剂处置的注意事项，确保实验人员安是一群特定的微生物和载体 结合而制成，对相应的灭菌模式有高度抵 抗，指示微生物的死亡真实可靠地反映灭 菌状况.能正确反映灭菌过程中有关时间、 温度和湿度的关系。
生物指示剂的组成形式
目前，常用于灭菌工艺验证的生物指示剂主 要有三种形式，它们都是用对特定灭菌工艺具有 一定耐受性并已知其种类的微生物芽孢制备而成。 有些生物指示剂可能含有两种不同类微生物，并 且两种微生物的含量也不相同。 1 .芽孢条（spore strip) 2.芽孢悬浮液（spore suspension) 3.自含型生物指示剂（self-contained indicator)
生物指示剂 相关知识
目录
• 生物指示剂的定义 • 生物指示剂的组成形式 • 生物指示剂的制备 • 生物指示剂的选择和使用
生物指示剂培养器用途和领域
生物指示剂培养器用途和领域一、生物指示剂培养器的定义和原理生物指示剂培养器是一种用于检测和监测生物灭菌器有效性的工具。
它通常由一种生物指示剂和培养基组成。
生物指示剂是一种含有特定微生物的载体物质，通过观察和分析微生物的生长情况来评估灭菌器的消毒效果。
培养基则提供了微生物生长所需的营养物质和环境条件。
生物指示剂培养器的原理是基于微生物的生长和繁殖。
当生物指示剂暴露于灭菌器中，如果灭菌器的消毒过程成功，微生物将被杀灭，生物指示剂培养器中的培养基不会有任何生长。
反之，如果灭菌器的消毒过程不成功，微生物将存活并在培养基中生长，从而形成可见的生长结果。
二、生物指示剂培养器的应用生物指示剂培养器在许多领域有着广泛的应用。
以下是几个重要的领域：1. 医疗领域：生物指示剂培养器被广泛用于医疗器械和设备的灭菌监测。
通过在灭菌器中放置生物指示剂培养器，可以评估灭菌过程是否达到了要求的消毒效果，确保医疗器械和设备的安全使用。
2. 食品安全领域：食品加工过程中的灭菌和消毒也是保障食品安全的重要环节。
生物指示剂培养器可以用于检测和监测食品加工设备的灭菌效果，确保食品加工过程中的微生物污染得到有效控制。
3. 环境监测领域：生物指示剂培养器也被用于环境监测中，例如水质监测、空气质量监测等。
通过监测生物指示剂培养器中微生物的生长情况，可以评估环境中的微生物污染程度，及时采取相应的措施进行处理和改善。
三、生物指示剂培养器的重要作用生物指示剂培养器在上述领域中发挥着重要的作用。
以下是几个方面的重要作用：1. 评估消毒过程的有效性：生物指示剂培养器可以直接反映出消毒过程的有效性。
通过观察生物指示剂培养器中微生物的生长情况，可以判断消毒过程是否达到了预期的效果，及时采取相应的补救措施。
2. 提高消毒控制的精确性：生物指示剂培养器能够提供一种客观而准确的评估方法，对消毒控制提供了更加精确的数据和指导。
通过定期使用生物指示剂培养器进行检测，可以及时发现和解决存在的问题，确保消毒控制的有效性。
3m生物指示剂说明书
3m生物指示剂说明书
3M生物指示剂的使用说明书可能因具体型号而有所不同。
以下是1292型
生物指示剂的使用说明：
1. 适用范围：适用于121℃下排气及132℃预真空压力蒸汽灭菌器灭菌效果监测。
2. 使用方法：将生物指示剂放入生物测试包中，置于压力蒸汽灭菌器内最难灭菌的位置处，执行正常装载灭菌过程。
灭菌完毕后，取出指示剂冷却10
分钟后，将指示剂内部安瓿瓶压碎，在专用的3m快速生物阅读器内培养3小时左右，在3m快速生物阅读器上观察荧光反应。
3. 结果阅读：荧光阳性表示灭菌失败，荧光阴性表示灭菌合格。
只有对照管为阳性，其生物监测结果才算有效。
4. 注意事项：该生物指示剂不能用于121℃预真空和132℃下排气压力蒸汽灭菌锅，及干热、化学蒸汽、环氧乙烷和其他的低温灭菌过程。
5. 有效期：24个月。
此外，有些型号的生物指示剂使用方法可能包括将指示剂放于标准测试包中，按国家规范，分别将各测试包放于锅内不同位置，灭菌处理完毕，取出生物指示剂。
挤破内含的安瓿，与一支对照管一起放于37℃恒温箱，48小时后，
阅读结果。
灭菌管不变色（呈绿色），表示灭菌通过；灭菌管变色（呈黄色），表示灭菌不通过；同时培养的对照管应为阳性（黄色）。
以上信息仅供参考，具体使用方法请参照相应型号的生物指示剂说明书。
生物指示剂的培训资料
生物指示剂相关知识与使用1.生物指示剂概念生物指示剂（BI）：系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。
2.生物指示剂形式2.1 一定数量的孢子附着在惰性载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等。
2.2 孢子悬浮液密封于安瓿中。
3.生物指示剂特性3.1 具有较高的耐受性、贮存稳定性、批与批之间的一致性、无致病性、易于培养和制备的细菌芽孢。
3.2 耐受性要高于灭菌前产品中污染菌的耐受性。
3.3 符合地方、国内、国际相关法规要求。
3.4 可根据灭菌程序的设计要求而制备。
4. 生物指示剂分类4.1 第一类生物指示剂：由微生物孢子和载体包装而成。
4.2 第二类生物指示剂：由可接种在产品表面或内部的孢子悬液构成。
4.3 第三类生物指示剂：包含微生物恢复生长培养基的类型。
5 生物指示剂选择7. 生物指示剂采购、验收、质量信息登记7.1 生物指示剂使用部门根据年度验证总计划内容及临时需求说明填写生物指示剂购买申请，采购部门根据申请从有资质的生产厂家及供应商处购得相应生物指示剂，购买的生物指示剂应附有相应的合格质量检验报告单。
7.2 生物指示剂进厂验收部门为库房，库房人员应该仔细核对品名、规格、批号、数量、生产日期、有效期、生产厂家，检查外包装应完好，封口严密，标签完整，内容清晰，不合格的生物指示剂退回厂家处理。
8. 生物指示剂储存、发放8.1 验收合格的生物指示剂由使用部门领回并填写《生物指示剂接收与发放记录》，生物指示剂使用部门负责按照该种生物指示剂使用说明书储存要求进行储存。
9. 生物指示剂使用9.1 生物指示剂放置位置及放置数目。
9.1.1 放置位置按照确认与验证方案执行，建议放置位置：①在灭菌器中最大包装的中心；②灭菌器排气口，往往不易达到灭菌温度；③靠灭菌器的门口和底部；④不同的生物指示剂摆放要求不同。
生物指示剂
生物指示剂：1.芽孢悬液CICC芽孢悬液采用国际通用标准菌株，参照国家药典、相关标准、卫生部《消毒技术规范》等、经严格质量控制制备而成。
芽孢悬液中含有一定数量、具有特定抗性的细菌芽孢，可直接接种，也可用于自制生物指示剂。
萎缩芽孢杆菌芽孢悬液产品名称芽孢悬液菌种名称萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）ATCC 9372（曾用名：枯草芽孢杆菌黑色变种）产品规格B9372-9 芽孢数：109CFU/ml；包装：5 ml/瓶B9372-8 芽孢数：108CFU/ml；包装：5 ml/瓶B9372-7 芽孢数：107CFU/ml；包装：10 ml/瓶B9372-6 芽孢数：106CFU/ml；包装：10 ml/瓶用途可用于各种化学消毒剂、干热、环氧乙烷等灭菌效果的验证和评价，无菌冷灌装生产线的性能验证，染菌载片的制备以及生物安全柜灭菌效果的验证等。
贮藏条件2~8℃，避免阳光直射和接触灭菌剂。
有效期生产日起12个月嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢悬液短小芽孢杆菌芽孢悬液注：CICC亦可按照客户要求提供不同规格包装。
另外根据客户要求可提供：生孢梭菌（Clostridium sporogenes），枯草芽孢杆菌（B. subtilis），巨大芽孢杆菌（B. megaterium），蜡状芽孢杆菌（B. cereus）等的芽孢悬液。
2.工业生物指示剂工业生物指示剂是根据工业企业实际情况，按照标准要求定制加工而成，以满足企业的特殊需求，通常采用不同的载体材料和包装形式，例如钢片、钢线、纸片、棉线、塑料片和滑石粉等，它与芽孢条、自含式等标准生物指示剂相比更具优势。
CICC可按照客户要求提供定制工业生物指示剂。
染菌滑石粉CICC研制的标准专用染菌滑石粉，以符合标准要求的滑石粉为载体，选用CICC 自行生产的微生物材料萎缩芽孢杆菌ATCC 9372芽孢悬液，按标准要求精制而成，每批染菌滑石粉产品均经过芽孢含量检验，确保质量稳定。
生物指示剂的原理
生物指示剂的原理随着科学技术的不断进步，人们对生物指示剂的应用越来越广泛。
生物指示剂是指一种能够反映环境污染程度的生物物种，它们可以作为环境监测和评估的工具，帮助我们了解环境质量的变化和趋势。
那么，生物指示剂的原理是什么呢？本文将从生物指示剂的概念、分类、应用和原理等方面进行介绍。
一、生物指示剂的概念和分类生物指示剂是指一种能够反映环境质量的生物物种，它们可以作为环境污染的指示器或监测工具。
根据其生物学特性和对环境污染的敏感程度不同，生物指示剂可以分为以下几类：1. 植物指示剂：植物是地球上最早出现的生命形式之一，它们在生长和发育过程中受到环境的影响非常大。
因此，植物可以作为环境污染的指示器，反映出环境中污染物的类型、浓度和分布等信息。
例如，苔藓植物可以用于检测大气中的重金属污染，水生植物可以用于检测水体中的有机物和微量元素污染等。
2. 动物指示剂：动物是生物链中的重要组成部分，它们对环境的反应和适应能力也很敏感。
因此，动物可以作为环境污染的指示器，反映出环境中污染物的类型、浓度和分布等信息。
例如，鱼类可以用于检测水体中的有机物和重金属污染，蜜蜂可以用于检测大气中的有机物和重金属污染等。
3. 微生物指示剂：微生物是生物界中数量最多、种类最多的一类生物，它们对环境的反应和适应能力也非常敏感。
因此，微生物可以作为环境污染的指示器，反映出环境中污染物的类型、浓度和分布等信息。
例如，细菌可以用于检测土壤中的有机物污染，真菌可以用于检测空气中的微生物污染等。
二、生物指示剂的应用生物指示剂的应用非常广泛，主要包括以下几个方面：1. 环境监测和评估：生物指示剂可以作为环境监测和评估的工具，帮助我们了解环境质量的变化和趋势。
通过对生物指示剂的观察和分析，可以判断环境中污染物的类型、浓度和分布等信息，从而指导环境保护和治理工作。
2. 污染源识别和溯源：生物指示剂可以帮助我们识别和溯源污染源，找出污染物的来源和传播途径。
生物指示剂技术资料
本发明公开了一种常压蒸汽灭菌生物指示剂及其制备方法，它包括有干培养基、指示菌片。
所述的指示菌片为指示菌的芽孢附着在染菌载体片上，在该染菌载体片表面涂布有石蜡、石蜡乳液或脂肪酸。
制备方法为：将指示菌接种至生芽孢细菌培养基斜面上培养，芽孢生成后制成指示菌悬液；吸取指示菌芽孢悬液，滴加在染菌载体片上，即制成染菌载体片；将染菌载体片放置在融化的石蜡或脂肪酸液体或石蜡乳液中浸渍，然后干燥即制成防水指示菌片；将防水指示菌片与干培养基组合成一体。
本发明指示剂进行常压蒸汽灭菌效果测定时，不论指示剂瓶内加水时间早晚，都能够保证指示菌芽孢实际接触水的时间是基本一致，从而有效避免了同一灭菌锅的指示剂由于加水时间前后不一，而导致通过指示剂指示灭菌能力不一的问题。
灭菌操作中生物指示剂的相关研究
菌/除菌后微生物残存的概率。该值越小，表明产品中微
生物存在的概率越小。生物指示剂就是为了保证整个灭菌 过程达到SAL 水平而应用的,它能综合反映影响灭菌效果 的各种因素。
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二、生物指示剂的定义
• 生物指示剂（Biological Indicators ，
BI’ s）是一类特定微生物经过确定制备
方法制造的生物试剂。生物指示剂对 验证时的生物指示剂分布、腔室内的产品 装载及指示剂的控制要求均与过热灭菌工 艺验证时生物指示剂的使用原则相同。 • 生物指示剂验证的结果评价：在上述验证 条件下，只有连续3次试验的所有结果均合 格（均呈阴性）方可证明相应灭菌工艺的 可靠性。
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三、在无菌生产工艺验证中的应用
种灭菌工艺具有特定的耐受性。
——USPS<1035>《BIOLOGICAL
INDICATORS FOR STERILIZATION》
4
二、生物指示剂的应用范围
• 灭菌设备性能确认的辅助工作
• 研发和建立对于特定物质的具体灭菌工艺 • 监控已经验证有效的灭菌工艺的定期再验 证
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二、生物指示剂的分类
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三、生物指示剂验证实例
• 验证时，腔室内的物品应按实际生产时的要求进
行装载，生物指示剂的使用数量应足以反映整个 物品内、外部的灭菌状况，生物指示剂既要遍布 整个腔室，又要尽可能地放在热效应最差的部位， 如物品中央、管路拐角以及腔室的排水口（干热 灭菌的排风口）等。
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三、生物指示剂验证实例
• 应尽可能地将生物指示剂与物理测定用温度探头
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三、生物指示剂采购来源和要求
• 一个合格的生物指示剂供应商必须符合如下条件： • （1）制造商负责确定生物指示剂的最初的性能指标。制 造商应该为每批生物指示剂附加一份 COA（分析报告） ， 用于说明生物指示剂性能指标。 • （2）制造商应该标明生物指示剂的用途，即用于评估灭 菌工艺类型。 • （3）制造商还应该提供如下信息：D 值、D 值测定的方 法、微生物数量、生物指示剂在有效期内耐受能力、推荐 的储存条件、使用指令等。 • （4）生物指示剂制造商还应该提供使用后生物指示剂处 置的注意事项，确保实验人员安全和避免对环境造成破坏 影响。
生物指示剂标准-概述说明以及解释
生物指示剂标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以描述生物指示剂标准的基本概念和背景。
可以包括以下内容：生物指示剂是一种用来评估、监测和验证环境中生物多样性和生态系统健康状况的工具。
它们可以是某种生物物种、种群或者生态系统，在发生环境变化或者受到干扰时，表现出特定的反应或者指示作用。
生物指示剂广泛应用于环境监测、生态研究、生态风险评估以及环境污染和气候变化等方面。
生物指示剂标准的制定是为了确保生物指示剂的使用和结果的准确性、可重复性和可比性。
标准的制定需要考虑多个因素，包括生物指示剂的选择、监测方法和指标以及数据分析和解释等。
通过制定生物指示剂标准，可以实现对于环境变化和生态系统健康的准确评估和监测。
标准可以提供统一的指导和规范，确保不同机构和研究者使用相同的方法和指标进行生物指示剂的研究和应用。
标准还可以促进不同研究和监测结果的比较和合理解释，从而增加生物指示剂在环境保护和生态恢复中的可信度和可行性。
本文将重点介绍生物指示剂标准的制定过程、应用领域以及其重要性、优势和限制，并对未来发展趋势进行展望。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下几点：1.2 文章结构本文将按照以下结构来探讨生物指示剂标准的问题：第一部分是引言部分，概述了生物指示剂标准的背景和相关的重要性。
其中1.1部分简要介绍了生物指示剂的概念和应用领域，1.2部分则详细介绍了本文的文章结构，以便读者了解整个文章的框架和逻辑。
最后，1.3部分明确了本文的目的，即通过探讨生物指示剂标准的制定、重要性、优势与限制以及未来发展趋势，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴。
第二部分是正文部分，主要分为3个小节。
首先，2.1节将详细阐述生物指示剂的定义，以便读者对该概念有更深入的理解。
接着，2.2节将介绍生物指示剂在不同领域的应用，包括环境监测、食品安全、生物疫苗等。
最后，2.3节将探讨生物指示剂标准的制定过程，涉及到相关的标准机构、制定流程和参考标准等内容。
生物指示剂讲课教案
目录
• 生物指示剂的定义 • 生物指示剂的组成形式 • 生物指示剂的制备 • 生物指示剂的选择和使用
生物指示剂的优点
生物指示剂是一群特定的微生物和载体 结合而制成，对相应的灭菌模式有高度抵 抗，指示微生物的死亡真实可靠地反映灭 菌状况.能正确反映灭菌过程中有关时间、 温度和湿度的关系。
生物指示剂的制备
• 生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确 定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指 一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示） 等。菌株应用适宜的培养基进行培养。培养物应制成悬浮 液，其中孢子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液 体中保存。
• 生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成 多种形式，通常是将一定数量的孢子在惰性的载体上，如 滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密 封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。生物指 示剂应选用合适的材料装，并设定有效期。载体和包装材 料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭 菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触。载体和包装应设计 原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。
Verify TM自含培养基式生物指示剂
生物指示剂采购来源和要求
一个合格的生物指示剂供应商必须符合如下条件：
（1）制造商负责确定生物指示剂的最初的性能指标。 制造商应该为每批生物指示剂附加一份 COA（分 析报告） ，用于说明生物指示剂性能指标。
（2）制造商应该标明生物指示剂的用途，用于评 估灭菌工艺类型。
芽孢条
将芽孢加在载体上，如接种于滤纸片、 玻璃/塑料等薄片或条状物，并用特定的材 料包起来以保持其完整性和生物活性，俗 称芽孢条。此类指示剂比较适用于验证和 监控非溶液类物品的灭菌工艺。
生物指示剂相关参考资料
保证产品无菌是注射剂产品质量保证的核心问题。
无菌生产工艺是保障注射剂产品无菌的关键手段。
而只有经过充分验证后的灭菌（无菌）生产工艺，才能保证生产出无菌的产品。
微生物挑战试验是无菌生产工艺验证的重要环节。
而选择适当的生物指示剂则是微生物挑战试验结果获得认可的关键。
本文将围绕如何为终端灭菌工艺（过度杀灭和残存概率法）选择适当的生物指示剂进行讨论。
灭菌是指杀灭所有形式微生物的过程。
在业界，常用“无菌保证水平”（Sterility Assurance Level,SAL）概念来评价灭菌（无菌）工艺的效果，SAL的定义为产品经灭菌/除菌后微生物残存的概率。
该值越小，表明产品中微生物存在的概率越小。
为了保证注射剂的无菌安全性，国际上一致规定，采用湿热灭菌法的SAL不得大于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。
生物指示剂就是为了保证整个灭菌过程达到SAL 水平而应用的,它能综合反映影响灭菌效果的各种因素。
因此为了保证验证结果的重复性，生物指示剂应当采用标准化的菌株（即变异性小，各项生物学特征均一性好的菌种），并且应当具备合乎要求的抗力。
更重要的是，参照USP的要求“It must be esta blished that the biological indicator system provides a challenge to the sterilization process that exceeds the challenge of the natural microbial burden in or on the product.”，我们应当选择比现有生产线自然环境下所发现的菌株更难杀灭的菌株来作为生物指示剂。
举例来说，比如通过对现有车间环境，生产线，人员，物料两年的的连续观测，发现在现有生产条件下所发现的菌株的D 值最高不超过0.8，则选择D值在0.8～1.5之间的生孢梭菌( Clostridium sporogenes；ATCC7955)为生物指示剂进行验证就是不合适的。
压力蒸汽灭菌生物指示剂
压力蒸汽灭菌生物指示剂是由嗜热指肪杆菌(ATOC 7953)芽抱菌片、恢复培养基和外管组成。
菌片含菌量为5.0 X〜5.0 xcfU片。
生物指示剂的抗力符合国际标准和国家标准的规定：既在121C饱和蒸汽作用下，存活时间〉3.9min杀灭时间＜19min D10值1.3〜1.9min °【适用范围】适用于121 C下排气式压力蒸汽灭菌器、132C〜134C预真空或脉动真空压力蒸汽灭菌器、134C〜136C台式或卡式压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测和制药工业、医院制剂生产等各行业使用的压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测。
【使用方法】，，，1使用时，将生物指示剂放入标准检测包的中心或待灭菌物品包的中心，置于灭菌器的难消毒的位置按规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理。
2灭菌完毕，即刻将生物指示剂取出，盖朝上垂直握于手中，用专门工具夹碎管内安瓶，让培养液流出浸没菌片，置于56C恒温培养箱内或配套的微型培养器内培养24小时观察初步结果，48小时观察最终结果，按规定每月至少用生物指示剂进行一次灭菌效果监测。
【结果判定】培养后生物指示剂中的漠甲酚紫培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体即表示有菌生长，判定为灭菌不合格；培养液仍为紫色澄清液体为无菌生长，同时阳性对照管中的嗜热脂肪杆菌生长正常即培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体，判定为灭菌合格。
【注意事项】1将生物指示剂管从灭菌器内取出或从冰箱内取出后，需在室温下放lOmin左右，再夹碎安甑，以免过热或过冷夹碎外管。
2液体培养基的pH值低于7.0或高于7.5,均可使嗜热脂肪杆菌不能生长；3培养温度须在56C〜65C之间，否则可导致嗜热脂肪杆菌生长不良，或不能生长。
4灭菌处理后，生物指示剂中的液体培养基颜色与压力蒸汽灭菌前比较会变浅，呈显浅紫色,这种变化属正常现象。
5用恢复培养液在56C培养时间过长（72小时以上），阳性对照管中培养液的黄色容易消退,培养液逐渐干燥，应注意每天观察,随时记录培养结果。
3m生物指示剂说明书
3m生物指示剂说明书一、产品介绍3M生物指示剂是一种高效而可靠的指示剂，用于监测和验证灭菌过程中的杀菌效果。
本产品由3M公司研发，采用先进的生物化学技术制备而成。
其主要成分为含菌培养基和特定的生物指示菌。
在灭菌过程中，当指示菌被完全杀灭时，3M生物指示剂将显示出特定的颜色变化，以表明灭菌过程的有效性。
二、产品特点1. 高灵敏度：3M生物指示剂对一系列常见的灭菌方法均有良好的灵敏度，能够准确反映灭菌过程的效果。
2. 易于使用：3M生物指示剂采用即插即用的设计，用户只需将指示剂悬挂在需要监测的区域上即可。
3. 直观可靠：一旦灭菌过程完成，3M生物指示剂会迅速显示颜色变化，用户可以直观地判断灭菌效果是否达到要求。
4. 反应时间短：3M生物指示剂具有快速反应的特点，几乎在灭菌过程完成后立即展现颜色变化。
三、使用方法1. 确定需要监测的区域，并将3M生物指示剂悬挂在这些区域上。
2. 按照灭菌方法的规定进行杀菌处理。
3. 等待灭菌过程完成后，观察3M生物指示剂的颜色变化。
4. 根据3M生物指示剂配套的说明书，参考相应颜色变化和解读结果。
四、解读结果1. 蓝色：表示指示菌存活，灭菌过程未达到要求，需要进一步处理。
2. 绿色：表示指示菌被杀灭，灭菌过程达到要求，可继续操作。
3. 其他颜色：不同的3M生物指示剂可能采用不同的颜色变化体系，具体解读方法请参考产品说明书。
五、注意事项1. 3M生物指示剂仅作为辅助工具，不能替代灭菌监测设备和方法。
2. 在使用3M生物指示剂前，请仔细阅读使用说明，并按照说明进行操作。
3. 3M生物指示剂如需存储，应储存在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和潮湿环境。
4. 3M生物指示剂仅用于灭菌过程的监测，不能用于其他用途。
六、总结3M生物指示剂作为一种高效、可靠的灭菌监测工具，在医疗、食品加工和实验室等领域具有广泛的应用前景。
通过使用3M生物指示剂，用户可以及时了解灭菌过程的效果，确保对细菌的有效杀灭，从而保证生产和操作环境的无菌性。
生物指示剂
生物指示剂生物指示剂是指一类能够通过其活性变化来指示环境状态或变化的生物物质。
这些生物指示剂在环境监测和质量评估中起着重要的作用，其应用领域涵盖生态学、环境科学、医学等多个领域。
本文将介绍生物指示剂的定义、分类、应用以及现状。
定义生物指示剂是一类能够通过其活性、生长状态或表型变化来指示环境变化或环境质量的生物物质。
生物指示剂多种类多样，包括植物、微生物、动物等。
在环境监测和评估中，生物指示剂可以快速响应环境变化，提供及时的信息和数据。
分类根据生物指示剂的类型和应用领域，可以将其分为不同的分类。
常见的生物指示剂包括指示植物、生物标记物和环境生物感应器。
指示植物可以通过其生长状态、叶片颜色等变化来指示土壤、水质等环境的污染情况；生物标记物则是通过检测生物体内的代谢产物或细胞成分来评估环境质量；环境生物感应器则是通过植入生物体内的传感器来监测环境参数变化。
应用生物指示剂在环境监测、生态修复、医学诊断等领域都有着广泛的应用。
在环境监测中，研究人员通过监测水生态系统中的藻类、浮游植物等生物指示剂来评估水体质量；在生态修复中，生物指示剂可以帮助检测土壤污染、评估生态系统健康状况；在医学诊断中，一些生物指示剂如生物标记物被广泛应用于癌症早期筛查、疾病诊断等方面。
现状随着环境监测和评估的需求不断增加，生物指示剂作为一种简单、快速、经济且高效的监测方法，受到了越来越多的重视。
研究人员也在不断探索生物指示剂的新型应用，如基因工程改造的生物感应器等。
然而，生物指示剂在应用过程中也面临一些挑战，如生物物种选择、实验标准化、数据处理等问题仍待解决。
总的来说，生物指示剂作为一种重要的环境监测工具，在环境科学、生态学等领域具有广阔的应用前景，未来随着技术的不断更新和完善，生物指示剂的应用范围和效能会进一步扩大。
灭菌方法和生物指示剂(2)PPT讲稿
灭菌工艺验证
• 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求,
通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。
• 物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据, 来估测一
个灭菌程序对微生物的致死性。
• 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是
嗜热脂肪芽胞杆菌 孢子
SGMStrip®(SGMLF/6)
灭菌方法
液体蒸汽
辐射 干热 环氧丙烷 过氧化氢 二氧化氯
孢子
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子、枯 草芽孢杆菌孢子
SterilAmp II®(SA/4,SA/5,SA/6)
SterilAmp II “5230” (SASU/6)
MagnaAmp®(MA/5,MA/6)
常用气体：环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等
环氧乙烷法
灭菌原理：强氧化，其分子作用于菌体后， 能与菌体蛋白、核酸和酶中的—COOH、— NH2、—SH、—OH等基团起反应，而使菌 体死亡。
具有杀菌谱广，灭菌能力强的 特点，对微生物的繁殖体、芽 孢有较强的杀灭效果。
适用范围
• 塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固
对于辐射灭菌，无芽孢菌比有芽孢菌敏感得多；无 芽孢菌中革兰氏阴性菌比阳性菌敏感；而病毒敏感性很 差。
适用范围
不耐热药物的灭菌，医疗器械、容器、 高分子材料、包装材料、生产辅助用品、 不受辐射破坏的原料药及成品等均可用本 法灭菌。
常用生物指示剂
短小芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus pumilus，如NCTC 10 327、NCIMB 10 692、 ATCC 27 142)。
• 为验证说明书上的孢子数，根据美国药典及
你了解生物指示剂么？最全的生物指示剂知识来了
你了解生物指示剂么？最全的生物指示剂知识来了食品微生物检测生物指示剂的历史19世纪末，一位英国医生使用鸡蛋作为生物指示剂，以鸡蛋的凝固来判定灭菌效果，首次从概念上引入了生物指示剂。
1955年，美国国立卫生研究院（National Institutes of Health, NIH）使用嗜热脂肪芽孢杆菌制备生物指示剂，因为该菌无致病性、无热原、无毒，而且对压力蒸汽的抵抗力在所有微生物中最强。
1957年，美国AMSOO公司在芝加哥的一次全美医院协会上首先推荐市售商品化的生物指示剂。
1965年美国药典就提到已知微生物芽孢，1975年以后比较详细论述了生物指示剂的有关参数。
我国卫生部也制订了生物指示剂的有关法规。
定义和分类在美国药典中生物指示剂被定义为一种对特定的灭菌程序有确定的、稳定的耐受性的特殊微生物制成品。
生物指示剂分类：1）按结构分可分为片状生物指示剂(strip biological indicator)和自含式生物指示剂(self-contained biological indicator)；片状生物指示剂需要使用阳性对照和阴性对照，而自含式生物指示剂只需要阳性对照即可。
2）根据ISO 11138-1(2017)的分类，目前的生物指示剂有环氧乙烷灭菌用生物指示物、湿热灭菌用生物指示物、干热灭菌用生物指示物、过氧化氢低温等离子灭菌生物指示物和甲醛灭菌用生物指示物。
3）按培养时间可分为通用型生物指示剂和快速型生物指示剂。
通用型生物指示剂根据芽孢复苏后指示菌种新陈代谢引起培养液pH值改变，通过酸碱指示剂变色来进行判读，时间一般在24或48小时以上；而快速型生物指示剂根据芽孢复苏后的酶促反应，通过荧光进行判读，时间一般为3-4小时。
同时国外正在研发更加快速的生物指示剂，有望在1小时之内得出结果。
生物指示剂的应用生物指示剂的应用贯穿了灭菌工艺验证的整个流程。
灭菌工艺验证包含了灭菌工艺开发和灭菌程序确认两大部分。
Mesalabs-GRS-090生物指示剂说明书
Mesalabs-APEX气态过氧化氢生物指示剂说明书型号：GRS-090生产批号：G3074生产日期：2014年11月3日失效日期：2015年8月31日菌种：萎缩芽孢杆菌9372平均菌落：2.1×106CFU/支（在80-85℃的条件下热冲击10分钟）储存条件：2-8℃；小于50%RH；在使用之前室温下放置至少1小时。
运输条件：环境温度；在运输过程中冷藏是合适的抗力特征： D值在2mg/L的气态过氧化氢中0.3min纯度：使用标准平板计数技术时没有污染的证据培养：在30-35℃的条件下培养7天，推荐使用胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）。
处置：通过灭菌或者焚烧处理成非致病性的物质。
工艺评估：·将生物指示剂放置在之前被确定为最难进行灭菌的位置。
气流最小的地方或者气体分布不好的地方，设备的周边等。
使用的时候包装上打印字体的一侧朝向外面。
·在许多场地验证和设计工艺过程通常需要许多的生物指示剂。
·执行灭菌和换气程序。
·将生物指示剂带到实验室进行无菌实验，使用一只或更多未灭菌的生物指示剂作为阳性对照。
一旦完成灭菌挑战，应尽快将生物指示剂进行培养。
培养程序：·在层流罩下进行培养。
应一直严格遵守无菌操作技术。
至少应戴上无菌手套。
戴上帽子，口罩和外衣与实验环境相适应。
·使用灭菌剪刀无菌地打开芽孢条的外包装或在包装的一头揭掉外包装取出菌片。
·使用无菌手术钳，将菌片放置在包含已灭菌TSB培养基的试管内。
·最后无菌培养阳性对照。
·选择一管或者更多管的同样培养基进行培养作为阴性对照。
·在30-35℃的条件下培养7天。
每日检查微生物生长情况（变浑浊）。
解释说明：·浑浊对于测试的生物指示剂，浑浊表明灭菌不完全，在灭菌过程中至少有一个孢子存活下来。
对于阳性对照，变浑浊表明孢子能够复活以及培养基能够满足微生物生长的要求。
关于生物指示剂
关于生物指示剂blueski推荐 [2010-12-22]出处：来自网上作者：不详生物指示剂系一类特殊的活微生物制品。
可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。
（一）制备生物指示剂用微生物的基本要求不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性：①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染微生物的耐受性；②菌种应无致病性；③菌株应稳定。
存活期长，易于保存；④易于培养。
若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。
（二）生物指示剂的制备生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示）等。
菌株应用适宜的培养基进行培养。
培养物应制成悬浮液，其中孢子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。
生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式，通常是将一定数量的孢子附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。
生物指示剂应选用合适的材料包装，并设定有效期。
载体和包装材料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触。
载体和包装应设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。
有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。
使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。
（三）生物指示剂的应用在灭菌程序的验证中，尽管可通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。
可使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的最耐受微生物制备的孢子。
在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的耐受性，并测定孢子的纯度和数量。
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保证产品无菌是注射剂产品质量保证的核心问题。
无菌生产工艺是保障注射剂产品无菌的关键手段。
而只有经过充分验证后的灭菌（无菌）生产工艺，才能保证生产出无菌的产品。
微生物挑战试验是无菌生产工艺验证的重要环节。
而选择适当的生物指示剂则是微生物挑战试验结果获得认可的关键。
本文将围绕如何为终端灭菌工艺（过度杀灭和残存概率法）选择适当的生物指示剂进行讨论。
灭菌是指杀灭所有形式微生物的过程。
在业界，常用“无菌保证水平”（Sterility Assurance Level,SAL）概念来评价灭菌（无菌）工艺的效果，SAL的定义为产品经灭菌/除菌后微生物残存的概率。
该值越小，表明产品中微生物存在的概率越小。
为了保证注射剂的无菌安全性，国际上一致规定，采用湿热灭菌法的SAL不得大于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。
生物指示剂就是为了保证整个灭菌过程达到SAL 水平而应用的,它能综合反映影响灭菌效果的各种因素。
因此为了保证验证结果的重复性，生物指示剂应当采用标准化的菌株（即变异性小，各项生物学特征均一性好的菌种），并且应当具备合乎要求的抗力。
更重要的是，参照USP的要求“It must be esta blished that the biological indicator system provides a challenge to the sterilization process that exceeds the challenge of the natural microbial burden in or on the product.”，我们应当选择比现有生产线自然环境下所发现的菌株更难杀灭的菌株来作为生物指示剂。
举例来说，比如通过对现有车间环境，生产线，人员，物料两年的的连续观测，发现在现有生产条件下所发现的菌株的D 值最高不超过0.8，则选择D值在0.8～1.5之间的生孢梭菌( Clostridium sporogenes；ATCC7955)为生物指示剂进行验证就是不合适的。
而如果在现有生产条件下所发现的菌株的D值最高不超过0.6，则可以选择生孢梭菌为生物指示剂。
只要满足以上两个原则（标准化菌株及合乎要求的抗力），生产企业可以自行选择、研究、培养生物指示剂（前提是提供充分的生产环境和验证菌株的研究资料）；也可以选择商用的生物指示剂产品，如Bacillus stearothermophilus（嗜热脂肪芽孢杆菌）、Clostridium Sporogenes（生孢梭菌）、Bacillus subtilis （枯草芽孢杆菌）、Bacillus coagulans（凝结芽孢杆菌）等菌种的孢子。
不论采用何种验证菌株，参照USP，对湿热灭菌（121℃）的工艺验证用菌株均应证明“具备合乎要求的抗力”；通常应满足以下要求：D值在1.5～3.0之间；存活时间在4.5～14.0min之间；完全杀灭时间在13.5～32.0min之间。
为了表征菌株的“抗力”，可参照USP<55> BIOLOGICAL INDICATORS—RESISTANCE PERFORMANCE TESTS的相关标准化程序，测定D值、存活时间和杀灭时间，并提交相关的验证资料。
但在大多数情况下，在申报新药时国内企业缺乏对车间环境，生产线，人员，物料连续两年的检测资料。
在这种情况下企业不能自行选择“新”的生物指示剂，而应当选择为目前业界熟知的一些生物指示剂。
美国NIH 首先(1955 年) 使用嗜热脂肪芽孢杆菌制备生物指示剂,因为该菌的孢子无致病性、无热原、无毒，而且，对压力蒸汽的抵抗力在大多数微生物中最强。
目前，嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(A TCC 7953)已成为验证湿热灭菌程序的最常用的生物指示剂。
采用该菌株进行灭菌工艺验证通常不再需要企业提供连续两年的微生物环境监测结果。
验证过程通常为将一定量已知耐热性的孢子接入产品中, 用设定的灭菌程序灭菌, 以确认设定的灭菌工艺是否符合标准。
然而有的产品可能会增加微生物的耐热性, 有的产品可能会杀灭微生物或与之不相容, 在后一种情况下, 可考虑用生理盐水或与产品相似的溶液替代产品进行验证试验。
所以研究灭菌程序之前, 必须了解生物指示剂在产品或替代产品中的耐热性。
即参照USP<55>的要求对D值进行测定。
其中规定“The requirements of the test are met if the determined D value is within 20% of the labeled D value for the selected sterilizing temperature and if the confidence limits of the estimate are within 10% of the determined D value.”。
即测定的D值应该为标定值的80～120%（置信区间为10%以内）。
此外，企业有责任对购买的指示剂产品的纯度和分类学特征进行研究，至少应当确定该微生物的“种”；并详细说明供应商提供的菌种的D值范围、适用的灭菌条
件、存储条件、出厂时间、过期时间、菌种稳定性等资料。
当该生物指示剂存储时间较长或者拟进行验证的灭菌条件与生产商的说明不符时，必须重新测定指示剂的D值、存活时间和杀灭时间。
在使用生物指示剂时容易忽视的一点就是——所有关于满足SAL不得大于10-6的产品就是无菌产品的假设都是建立在原产品中的微生物量（bioburden，生物负荷）不超过每单位壹佰万个。
因此应当检测生物指示剂每个单剂量中的微生物孢子数。
参照USP 要求“The requirements of the test are met if the average number of viable spores per carrier is not less than 0.3 log of the labeled spore count per carrier and does not exceed the log labeled spore count per carrier b y 0.48.”；即单剂量包装中的孢子数不低于标示量的0.3Log，亦不得过标示量的0.48Log。
总而言之，选择恰当的生物指示剂，执行正确的步骤，并提供系统完整的信息，才能使无菌生产工艺验证结果令人信服。