抗坏血酸含量测定

抗坏血酸含量测定

试剂配制：

6%和10% (wt/vol) TCA（三氯乙酸），室温放置（~20℃）

43% (vol/vol) H3PO4 (1:1稀释85% H3PO4)，室温放置

3% (wt/vol) FeCl3，室温放置

75 mM phosphate buffer (pH 7.0)，用磷酸氢二钾和磷酸氢二钾配制

10 mM DTT，冰浴

0.5% (wt/vol) NEM，冰浴

4% (wt/vol) α-α-bipyridyl，用70%乙醇溶解，冰浴

ASA标品根据样品浓度配制（标曲）

试验步骤：

1.植物材料（约40mg）分装到离心管中，并立即在液氮中冷冻；

2.加入1mL 6% TCA 到2 mL离心管中，离心（13000 g, 4℃5min），并将上清

液转移到一个新的2mL离心管中。（所有提取物保持在冰上并立即开始测定）；

3.抗坏血酸试验测定空白、标准和样品，同时测定还原型AA和总AA（每个

样品四次测定）；

4.加入10µl 75mM磷酸盐缓冲液和20µl 6% TCA（空白），AA标准品(0.15

-10mM)或20µl 上清至96 孔板；

5.加10µl 10mM DTT到离心管中，室温孵育10分钟；

6.加10 0.5% NEM到提取总AA管中除去多余的DTT并孵育至少30 s；

7.加20µl水至还原型AA测定管中，将DTT和NEM的体积加到总AA测定试

管中；

8.加入50µl 10% TCA, 40 µl 43% H3PO4, 40 µl 4% α-α-bipyridyl 和20 µl 3%

FeCl3至所有测定管中；

9.37℃孵育1 h；

10.测定525nm下吸光值。

计算：