抗坏血酸含量测定
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸的测定方法抗坏血酸，也称维生素C，是一种重要的水溶性维生素，对人体有着广泛的作用。
为了评估人体中维生素C的水平，需要进行准确可靠的测定方法。
本文将介绍一些常用的抗坏血酸测定方法。
一、滴定法滴定法是一种直接测定抗坏血酸浓度的方法，主要是利用抗坏血酸的还原性质来进行。
常用的滴定试剂是碘溶液，具体测定过程如下：1.取一定量的待测样品，在酸性条件下加入多余的碘溶液，使样品中的所有抗坏血酸完全被氧化为双价抗坏血酸。
2.再滴加淀粉指示剂，使溶液呈现蓝黑色。
3.继续滴加碘溶液，直至溶液由蓝黑色转变为无色为止。
4.记录滴加的碘溶液体积V，根据反应方程式，计算抗坏血酸浓度：C（抗坏血酸）=（V*m/体积）*M。
滴定法的优点是操作简单、快速，但存在一定的局限性，例如碘溶液的浓度需要严格控制，过量的碘会氧化其他还原物质，导致误差增加。
二、间接滴定法间接滴定法是将样品中的抗坏血酸与为之制备的滴定溶液进行滴定反应，例如利用四氢吡喃溶液作为指示剂，通过判断溶液颜色的变化来确定滴定终点。
三、比色法比色法是根据抗坏血酸颜色的变化来测定其浓度的方法。
常用的试剂有二甲基亚胺、二苯基胺等，通常形成有色络合物，并根据络合物的颜色强度来判断抗坏血酸浓度。
具体步骤如下：1.将待测样品加入试剂溶液中，溶液颜色逐渐变化。
2.将溶液转移到量筒或比色皿中，利用分光光度计测量波长范围内的吸光度。
3.根据标准曲线，将吸光度值转化为抗坏血酸浓度。
比色法的优点是操作简单、灵敏度高；缺点是需要制备标准曲线，对试剂的纯度和光度计的校准要求较高。
四、高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种准确且高效的抗坏血酸测定方法，主要是通过色谱柱对样品进行分离，再使用紫外光检测器检测抗坏血酸的浓度。
HPLC法的优点是精确度高，测量范围宽，对样品的处理方法相对简单；缺点是设备和试剂成本较高，操作技术要求较高。
总结：针对抗坏血酸的测定，滴定法、比色法、HPLC等方法是常用的测定方法。
抗坏血酸检测的实验步骤
动物血清中抗坏血酸（Vc）的测定一、实验目的抗坏血酸（Ascorbic Acid）又叫维生素C（Vitamin C），是一种水溶性维生素.正常成人体内的抗坏血酸代谢活性池中约有1500mg抗坏血酸，最高储存峰值为3000mg抗坏血酸.抗坏血酸在氧化还原代谢反应中起调节作用，缺乏它可引起坏血病.抗坏血酸是一种强力的抗氧化剂、抗病毒和抗炎剂.广泛存在于食品和生物样本中，是一种免疫刺激剂.因此检测抗坏血酸在上述样本内的分布和含量就显得非常重要。
二、实验原理三、实验仪器试管、移液枪、漩涡混匀器、水浴锅、离心机、可见分光光度计。
四、试剂的配制1.试剂一应用液的配制（5ml）：试剂一储备液：双蒸水=1：14稀释，混匀制备。
2.试剂二应用液的配制：用时取一支粉剂加0.36 ml的冰醋酸再加水至40 ml,溶解，4℃保存。
3. 试剂三应用液的配制：因溶解困难，使用前2-4h加无水乙醇60 ml充分溶解，制备，4 ℃保存。
4. 试剂四应用液的配制：用时取0.15 ml 试剂四储备液加水至25 ml制备，避光保存。
（现用现配）5.试剂五：液体6 ml，4 ℃保存。
6.600 ug/ml标准品应用液的配制：取一支标准品粉末溶于10 ml试剂一应用液中，充分混匀，4℃保存。
6ug/ml标准品应用液的配制：取600 ug/ml Vc标准应用液再用试剂一应用液100倍稀释备用，现用现配。
注意：维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10 min内进行检测。
五、实验步骤1.取实验小鼠，断颈处死，摘除眼球，眼眶取血至1.5 ml EP管，取完血液，然后静置半小时，然后3000 rpm, 离心15 min,然后取上清至新1.5 ml EP管，3000 rpm, 离心15 min,取上清备用2.上清液的制备：取步骤一中上清0.15 ml加试剂一应用液0.45 ml,漩涡混匀，放置15 min分钟后离心，3500-4000转/分，离心10分钟，上层清亮液体为上清液。
抗坏血酸的催化动力学光度法测定
抗坏血酸的催化动力学光度法测定一、前言抗坏血酸(Ascorbic acid,简称AA)是一种重要的抗氧化剂，广泛应用于食品、医药、化妆品等领域。
为了保证产品质量和安全性，抗坏血酸的含量检测至关重要。
传统的抗坏血酸含量检测方法包括高效液相色谱法(HPLC)、比色法等，但这些方法存在一定的局限性，如操作复杂、耗时长、灵敏度低等。
近年来，随着光度法技术的发展，催化动力学光度法(Kinetic Spectrophotometry,简称KSP)逐渐成为抗坏血酸含量检测的新方法。
本文将对催化动力学光度法的原理、实验条件、影响因素等方面进行详细阐述，以期为抗坏血酸含量检测提供理论依据。
二、催化动力学光度法原理催化动力学光度法是一种基于物质在特定波长下吸收或发射光线的特性，通过测量样品溶液中物质的吸光度或发射光谱来定量分析的方法。
其基本原理是：当一定量的抗坏血酸与某种金属离子(如铁、锰、锌等)形成络合物时，这种络合物在特定波长下具有较强的吸收或发射能力。
因此，通过测量样品溶液在该波长下的吸光度或发射光谱，可以推算出抗坏血酸的含量。
催化动力学光度法的关键在于选择合适的络合物和检测器。
目前常用的络合物有硫酸亚铁、氯化锌等。
检测器主要有单色仪、双色仪、荧光检测器等。
在实际操作过程中，需要根据具体样品和检测需求选择合适的络合物和检测器。
三、实验条件1. 光源：催化动力学光度法通常采用紫外可见光源，如汞灯、氙灯等。
光源的选择应考虑其波长范围、稳定性、强度等因素。
光源的位置和角度也会影响到测量结果，需要合理调整。
2. 光路系统：光路系统主要包括样品激发器、光电倍增管(PMT)、光电转换器等。
样品激发器用于产生特定波长的激光束；PMT用于接收样品溶液中的光线并转化为电信号；光电转换器用于将电信号放大并输出至数据处理系统。
在设计光路系统时，需要注意光源与样品之间的距离、透镜的选择等因素。
3. 数据处理系统：数据处理系统主要包括数据采集软件、数据处理算法等。
食品中抗坏血酸的含量测定与评估研究
食品中抗坏血酸的含量测定与评估研究抗坏血酸，也被称为维生素C，是人类身体所需的一种重要营养素。
它具有丰富的抗氧化作用，可有效预防多种疾病。
因此，准确测定和评估食品中抗坏血酸的含量具有重要的意义。
测定食品中抗坏血酸含量的常用方法之一是高效液相色谱法（HPLC）。
这种方法通过分离样品中的抗坏血酸并与特定的检测剂反应产生可检测的化合物，从而测定其含量。
该方法操作简便、灵敏度高，能够快速准确地检测食品样品中的抗坏血酸含量。
除了HPLC法外，还有其他一些常用的测定方法，如滴定法和分光光度法。
滴定法是一种经典的分析方法，通过滴定溶液中的抗坏血酸，来测定其含量。
分光光度法则是利用抗坏血酸的某些特定光学性质来进行测定。
这些方法各有优劣，根据需要可选择不同的方法来测定食品中的抗坏血酸含量。
测定食品中抗坏血酸含量仅仅是一个开始，对于评估其质量和适宜性还需要进一步的研究。
在评估食品中抗坏血酸的含量时，还要考虑其他因素，如保存条件和食品加工方法等。
这些因素会对抗坏血酸的含量产生一定的影响。
食物中含有的抗坏血酸主要来自于水果和蔬菜。
研究表明，新鲜的水果和蔬菜中的抗坏血酸含量较高，而经过加工和保存后抗坏血酸含量会逐渐降低。
因此，在评估食物中抗坏血酸含量时，需要考虑到食物的新鲜程度和保存条件。
此外，食物中抗坏血酸含量的评估也需要考虑到不同种类的食物之间的差异。
例如，某些水果和蔬菜中的抗坏血酸含量较高，而肉类和谷物中的抗坏血酸含量相对较低。
因此，在制定饮食方案时，我们可以根据不同的食物种类来合理搭配，以保证摄入足够的抗坏血酸。
食物中抗坏血酸含量的评估还要考虑到个人的健康状况和营养需求。
例如，老年人、吸烟者和患有某些慢性疾病的人群，其对抗坏血酸的需求可能会更高。
因此，他们在选择食物时应尽量选择抗坏血酸含量较高的食物，或者取得医生或营养师的指导。
总结起来，测定和评估食品中抗坏血酸的含量是一项重要的研究工作，对于人类的健康具有重要的意义。
食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定
中华人民共和国国家标准G B5009.86 2016食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国前言本标准代替G B/T5009.86 2003‘蔬菜㊁水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2,4-二硝基苯肼法)“㊁G B/T5009.159 2003‘食品中还原型抗坏血酸的测定“和G B6195 1986‘水果㊁蔬菜维生素C含量测定法(2,6-二氯靛酚滴定法)“㊂本标准与G B/T5009.86 2003相比,主要变化如下:标准名称修改为 食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定 ;扩大了方法的适用范围;增加了高效液相色谱法及相关方法的定量限;删除了2,4-二硝基苯肼法;增加了2,6-二氯靛酚滴定法;按照G B/T20001.4 2015对原标准的结构进行了修改㊂食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定1范围本标准规定了高效液相色谱法㊁荧光法㊁2,6-二氯靛酚滴定法测定食品中抗坏血酸的方法㊂本标准第一法适用于乳粉㊁谷物㊁蔬菜㊁水果及其制品㊁肉制品㊁维生素类补充剂㊁果冻㊁胶基糖果㊁八宝粥㊁葡萄酒中的L(+)-抗坏血酸㊁D(+)-抗坏血酸和L(+)-抗坏血酸总量的测定㊂第二法适用于乳粉㊁蔬菜㊁水果及其制品中L(+)-抗坏血酸总量的测定㊂第三法适用于水果㊁蔬菜及其制品中L(+)-抗坏血酸的测定㊂2术语和定义2.1抗坏血酸:一种具有抗氧化性质的有机化合物㊂又称为 维生素C ,是人体必需的营养素之一㊂2.2 L(+)-抗坏血酸:左式右旋光抗坏血酸㊂具有强还原性,对人体具有生物活性㊂2.3 D(+)-抗坏血酸:又称异抗坏血酸㊂具有强还原性,但对人体基本无生物活性㊂2.4 L(+)-脱氢抗坏血酸:L(+)-抗坏血酸极易被氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸,L(+)-脱氢抗坏血酸亦可被还原为L(+)-抗坏血酸㊂通常称为脱氢抗坏血酸㊂2.5 L(+)-抗坏血酸总量:将试样中L(+)-脱氢抗坏血酸还原成的L(+)-抗坏血酸或将试样中L(+)-抗坏血酸氧化成的L(+)-脱氢抗坏血酸后测得的L(+)-抗坏血酸总量㊂第一法高效液相色谱法3原理试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶解超声提取后,以离子对试剂为流动相,经反相色谱柱分离,其中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸直接用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245n m)测定;试样中的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液进行还原后,用紫外检测器(波长245n m)测定L(+)-抗坏血酸总量,或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量㊂以色谱峰的保留时间定性,外标法定量㊂4试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂4.1试剂4.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂4.1.2磷酸三钠(N a3P O4㊃12H2O)㊂4.1.3磷酸二氢钾(K H2P O4)㊂4.1.4磷酸(H3P O4):85%㊂4.1.5 L-半胱氨酸(C3H7N O2S):优级纯㊂4.1.6十六烷基三甲基溴化铵(C19H42B r N):色谱纯㊂4.1.7甲醇(C H3O H):色谱纯㊂4.2试剂配制4.2.1偏磷酸溶液(200g/L):称取200g(精确至0.1g)偏磷酸(4.1.1),溶于水并稀释至1L,此溶液保存于4ħ的环境下可保存一个月㊂4.2.2偏磷酸溶液(20g/L):量取50m L200g/L偏磷酸溶液,用水稀释至500m L㊂4.2.3磷酸三钠溶液(100g/L):称取100g(精确至0.1g)磷酸三钠,溶于水并稀释至1L㊂4.2.4 L-半胱氨酸溶液(40g/L):称取4g L-半胱氨酸,溶于水并稀释至100m L㊂临用时配制㊂4.3标准品4.3.1 L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂4.3.2 D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂4.4标准溶液配制4.4.1 L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000m g/m L):准确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01m g),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10m L㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂4.4.2 D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000m g/m L):准确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01m g),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10m L㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂4.4.3抗坏血酸混合标准系列工作液:分别吸取L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸标准贮备液0m L, 0.05m L,0.50m L,1.0m L,2.5m L,5.0m L,用20g/L的偏磷酸溶液定容至100m L㊂标准系列工作液中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的浓度分别为0μg/m L㊁0.5μg/m L㊁5.0μg/m L㊁10.0μg/m L㊁25.0μg/m L㊁50.0μg/m L㊂临用时配制㊂5仪器和设备5.1液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器㊂5.2p H计:精度为0.01㊂5.3天平:感量为0.1g㊁1m g㊁0.01m g㊂5.4超声波清洗器㊂5.5离心机:转速ȡ4000r/m i n㊂5.6均质机㊂5.7滤膜:0.45μm水相膜㊂5.8振荡器㊂6分析步骤整个检测过程尽可能在避光条件下进行㊂6.1试样制备6.1.1液体或固体粉末样品:混合均匀后,应立即用于检测㊂6.1.2水果㊁蔬菜及其制品或其他固体样品:取100g左右样品加入等质量20g/L的偏磷酸溶液,经均质机均质并混合均匀后,应立即测定㊂6.2试样溶液的制备称取相对于样品约0.5g~2g(精确至0.001g)混合均匀的固体试样或匀浆试样,或吸取2m L~ 10m L液体试样[使所取试样含L(+)-抗坏血酸约0.03m g~6m g]于50m L烧杯中,用20g/L的偏磷酸溶液(4.2.2)将试样转移至50m L容量瓶中,震摇溶解并定容㊂摇匀,全部转移至50m L离心管中,超声提取5m i n后,于4000r/m i n离心5m i n,取上清液过0.45μm水相滤膜,滤液待测[由此试液可同时分别测定试样中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的含量]㊂6.3试样溶液的还原准确吸取20m L上述离心后的上清液于50m L离心管中,加入10m L40g/L的L-半胱氨酸溶液(4.2.4),用100g/L磷酸三钠溶液调节p H至7.0~7.2,以200次/m i n振荡5m i n㊂再用磷酸调节p H 至2.5~2.8,用水将试液全部转移至50m L容量瓶中,并定容至刻度㊂混匀后取此试液过0.45μm水相滤膜后待测[由此试液可测定试样中包括脱氢型的L(+)-抗坏血酸总量]㊂若试样含有增稠剂,可准确吸取4m L经L-半胱氨酸溶液还原的试液,再准确加入1m L甲醇,混匀后过0.45μm滤膜后待测㊂6.4仪器参考条件6.4.1色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或同等性能的色谱柱㊂6.4.2检测器:二极管阵列检测器或紫外检测器㊂6.4.3流动相:A:6.8g磷酸二氢钾和0.91g十六烷基三甲基溴化铵,用水溶解并定容至1L(用磷酸调p H至2.5~2.8);B:100%甲醇㊂按AʒB=98ʒ2混合,过0.45μm滤膜,超声脱气㊂6.4.4流速:0.7m L/m i n㊂6.4.5检测波长:245n m㊂6.4.6柱温:25ħ㊂6.4.7进样量:20μL㊂6.5标准曲线制作分别对抗坏血酸混合标准系列工作溶液进行测定,以L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]标准溶液的质量浓度(μg/m L)为横坐标,L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的峰高或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线或计算回归方程㊂L(+)-抗坏血酸㊁D(+)-抗坏血酸标准色谱图参见附录A中图A.1㊂6.6试样溶液的测定对试样溶液进行测定,根据标准曲线得到测定液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的浓度(μg/m L)㊂6.7空白试验空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤㊁试剂和用量,进行平行操作㊂7分析结果的表述试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的含量和L(+)-抗坏血酸总量以毫克每百克表示,按式(1)计算:X=(c1-c0)ˑVmˑ1000ˑFˑKˑ100(1)式中:X 试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸㊁L(+)-抗坏血酸总量]的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);c1 样液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/m L); c0 样品空白液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样的最后定容体积,单位为毫升(m L);m 实际检测试样质量,单位克(g);1000 换算系数(由μg/m L换算成m g/m L的换算因子);F 稀释倍数(若使用6.3还原步骤时,即为2.5);K 若使用6.3中甲醇沉淀步骤时,即为1.25;100 换算系数(由m g/g换算成m g/100g的换算因子)㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂9其他固体样品取样量为2g时,L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的检出限均为0.5m g/100g,定量限均为2.0m g/100g㊂液体样品取样量为10g(或10m L)时,L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的检出限均为0.1m g/100g(或0.1m g/100m L),定量限均为0.4m g/100g(或0.4m g/100m L)㊂第二法荧光法10原理试样中L(+)-抗坏血酸经活性炭氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(O P D A)反应生成有荧光的喹唔啉(q u i n o x a l i n e),其荧光强度与L(+)-抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定试样中L(+)-抗坏血酸总量㊂注:L(+)-脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与O P D A反应,以此排除试样中荧光杂质产生的干扰㊂11试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂11.1试剂11.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂11.1.2冰乙酸(C H3C O O H):浓度约为30%㊂11.1.3硫酸(H2S O4):浓度约为98%㊂11.1.4乙酸钠(C H3C O O N a)㊂11.1.5硼酸(H3B O3)㊂11.1.6邻苯二胺(C6H8N2)㊂11.1.7百里酚蓝(C27H30O5S)㊂11.1.8活性炭粉㊂11.2试剂的配制11.2.1偏磷酸-乙酸溶液:称取15g偏磷酸,加入40m L冰乙酸及250m L水,加温,搅拌,使之逐渐溶解,冷却后加水至500m L㊂于4ħ冰箱可保存7d~10d㊂11.2.2硫酸溶液(0.15m o l/L):取8.3m L硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1000m L㊂11.2.3偏磷酸-乙酸-硫酸溶液:称取15g偏磷酸,加入40m L冰乙酸,滴加0.15m o l/L硫酸溶液至溶解,并稀释至500m L㊂11.2.4乙酸钠溶液(500g/L):称取500g乙酸钠,加水至1000m L㊂11.2.5硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,用500g/L乙酸钠溶液溶解并稀释至100m L㊂临用时配制㊂11.2.6邻苯二胺溶液(200m g/L):称取20m g邻苯二胺,用水溶解并稀释至100m L,临用时配制㊂11.2.7酸性活性炭:称取约200g活性炭粉(75μm~177μm),加入1L盐酸(1+9),加热回流1h~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110ħ~120ħ烘箱中干燥10h,备用㊂检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应㊂将20g/L亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀㊂11.2.8百里酚蓝指示剂溶液(0.4m g/m L):称取0.1g百里酚蓝,加入0.02m o l/L氢氧化钠溶液约10.75m L,在玻璃研钵中研磨至溶解,用水稀释至250m L㊂(变色范围:p H等于1.2时呈红色;p H等于2.8时呈黄色;p H大于4时呈蓝色)㊂11.3标准品L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂11.4标准品的配制11.4.1 L(+)-抗坏血酸标准溶液(1.000m g/m L):称取L(+)-抗坏血酸0.05g(精确至0.01m g),用偏磷酸-乙酸溶液溶解并稀释至50m L,该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂11.4.2 L(+)-抗坏血酸标准工作液(100.0μg/m L):准确吸取L(+)-抗坏血酸标准液10m L,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100m L,临用时配制㊂12仪器和设备荧光分光光度计:具有激发波长338n m及发射波长420n m㊂配有1c m比色皿㊂13分析步骤整个检测过程应在避光条件下进行㊂13.1试液的制备称取约100g(精确至0.1g)试样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入捣碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂测试匀浆的酸碱度㊂如呈红色,即称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸溶液稀释;若呈黄色或蓝色,则称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其p H 为1.2㊂匀浆的取用量根据试样中抗坏血酸的含量而定㊂当试样液中抗坏血酸含量在40μg /m L ~100μg/m L 之间,一般称取20g (精确至0.01g )匀浆,用相应溶液稀释至100m L ,过滤,滤液备用㊂13.2 测定13.2.1 氧化处理:分别准确吸取50m L 试样滤液及抗坏血酸标准工作液于200m L 具塞锥形瓶中,加入2g 活性炭,用力振摇1m i n ,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即为试样氧化液和标准氧化液,待测定㊂13.2.2 分别准确吸取10m L 试样氧化液于两个100m L 容量瓶中,作为 试样液 和 试样空白液 ㊂13.2.3 分别准确吸取10m L 标准氧化液于两个100m L 容量瓶中,作为 标准液 和 标准空白液 ㊂13.2.4 于 试样空白液 和 标准空白液 中各加5m L 硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15m i n,用水稀释至100m L ,在4ħ冰箱中放置2h ~3h ,取出待测㊂13.2.5 于 试样液 和 标准液 中各加5m L 的500g /L 乙酸钠溶液,用水稀释至100m L ,待测㊂13.3 标准曲线的制备准确吸取上述 标准液 [L (+)-抗坏血酸含量10μg/m L ]0.5m L ,1.0m L ,1.5m L ,2.0m L ,分别置于10m L 具塞刻度试管中,用水补充至2.0m L ㊂另准确吸取 标准空白液 2m L 于10m L 带盖刻度试管中㊂在暗室迅速向各管中加入5m L 邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35m i n ,于激发波长338n m ㊁发射波长420n m 处测定荧光强度㊂以 标准液 系列荧光强度分别减去 标准空白液 荧光强度的差值为纵坐标,对应的L (+)-抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或计算直线回归方程㊂13.4 试样测定分别准确吸取2m L 试样液 和 试样空白液 于10m L 具塞刻度试管中,在暗室迅速向各管中加入5m L 邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35m i n ,于激发波长338n m ㊁发射波长420n m 处测定荧光强度㊂以 试样液 荧光强度减去 试样空白液 的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计算测定试样溶液中L (+)-抗坏血酸总量㊂14 结果计算试样中L (+)-抗坏血酸总量,结果以毫克每百克表示,按式(2)计算:X =c ˑV m ˑF ˑ1001000(2)式中:X 试样中L (+)-抗坏血酸的总量,单位为毫克每百克(m g/100g );c由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中L (+)-抗坏血酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg /m L );V 荧光反应所用试样体积,单位为毫升(m L );m 实际检测试样质量,单位克(g );F试样溶液的稀释倍数;100换算系数;1000换算系数㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂15精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂16其他当样品取样量为10g时,L(+)-抗坏血酸总量的检出限为0.044m g/100g,定量限为0.7m g/ 100g㊂第三法2,6-二氯靛酚滴定法17原理用蓝色的碱性染料2,6-二氯靛酚标准溶液对含L(+)-抗坏血酸的试样酸性浸出液进行氧化还原滴定,2,6-二氯靛酚被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的2,6-二氯靛酚在酸性介质中显浅红色,由2,6-二氯靛酚的消耗量计算样品中L(+)-抗坏血酸的含量㊂18试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂18.1试剂18.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂18.1.2草酸(C2H2O4)㊂18.1.3碳酸氢钠(N a H C O3)㊂18.1.42,6-二氯靛酚(2,6-二氯靛酚钠盐,C12H6C l2N N a O2)㊂18.1.5白陶土(或高岭土):对抗坏血酸无吸附性㊂18.2试剂的配制18.2.1偏磷酸溶液(20g/L):称取20g偏磷酸,用水溶解并定容至1L㊂18.2.2草酸溶液(20g/L):称取20g草酸,用水溶解并定容至1L㊂18.2.32,6-二氯靛酚(2,6-二氯靛酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52m g溶解在200m L热蒸馏水中,然后称取2,6-二氯靛酚50m g溶解在上述碳酸氢钠溶液中㊂冷却并用水定容至250m L,过滤至棕色瓶内,于4ħ~8ħ环境中保存㊂每次使用前,用标准抗坏血酸溶液标定其滴定度㊂标定方法:准确吸取1m L抗坏血酸标准溶液于50m L锥形瓶中,加入10m L偏磷酸溶液或草酸溶液,摇匀,用2,6-二氯靛酚溶液滴定至粉红色,保持15s不褪色为止㊂同时另取10m L偏磷酸溶液或草酸溶液做空白试验㊂2,6-二氯靛酚溶液的滴定度按式(3)计算:T=cˑVV1-V0 (3)式中:T 2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数,单位为毫克每毫升(m g/m L);c 抗坏血酸标准溶液的质量浓度,单位为毫克每毫升(m g/m L );V 吸取抗坏血酸标准溶液的体积,单位为毫升(m L );V 1 滴定抗坏血酸标准溶液所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );V 0 滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L )㊂18.3 标准品L (+)-抗坏血酸标准品(C 6H 8O 6):纯度ȡ99%㊂18.4 标准溶液的配制L (+)-抗坏血酸标准溶液(1.000m g /m L ):称取100m g (精确至0.1m g)L (+)-抗坏血酸标准品,溶于偏磷酸溶液或草酸溶液并定容至100m L ㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂19 测定整个检测过程应在避光条件下进行㊂19.1 试液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g ,放入粉碎机中,加入100g 偏磷酸溶液或草酸溶液,迅速捣成匀浆㊂准确称取10g ~40g 匀浆样品(精确至0.01g )于烧杯中,用偏磷酸溶液或草酸溶液将样品转移至100m L 容量瓶,并稀释至刻度,摇匀后过滤㊂若滤液有颜色,可按每克样品加0.4g 白陶土脱色后再过滤㊂19.2 滴定:准确吸取10m L 滤液于50m L 锥形瓶中,用标定过的2,6-二氯靛酚溶液滴定,直至溶液呈粉红色15s 不褪色为止㊂同时做空白试验㊂20 结果计算试样中L (+)-抗坏血酸含量按式(4)计算:X =(V -V 0)ˑT ˑAmˑ100 (4)式中:X 试样中L (+)-抗坏血酸含量,单位为毫克每百克(m g/100g );V 滴定试样所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );V 0 滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );T 2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数(m g/m L ); A 稀释倍数;m 试样质量,单位为克(g)㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂21 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值,在L (+)-抗坏血酸含量大于20m g/100g 时不得超过算术平均值的2%㊂在L (+)-抗坏血酸含量小于或等于20m g /100g 时不得超过算术平均值的5%㊂G B 5009.86 20169 附 录 AL (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图 第一法L (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图见图A.1㊂图A .1 L (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图。
抗坏血酸含量的测定
抗坏血酸含量的测定植物学实验技术一、原理还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应形成红色螯合物。
在534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。
脱氧抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA。
测定AsA总量，从中减去还原型AsA，即为DAsA含量。
二、仪器与用具离心机；分光光度计；研钵；试管。
三、试剂5%三氯乙酸（TCA）；20%TCA；无水乙醇溶液；0.4%磷酸－乙醇溶液；0.5%BP－乙醇溶液；0.03%FeCl3－乙醇溶液；0.6g/L DTT；Na2HPO4－NaOH溶液：以0.2mol/L Na2HPO4和1.2mol/L NaOH等量混合；60mmol/L DTT－乙醇。
四、方法1. 制作标准曲线配制浓度为2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14mg/L的AsA系列标准液。
取各浓度标准液1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀，再依次加入0.5ml 0.4%H3PO4－乙醇、1.0ml 0.5%BP－乙醇、0.5ml 0.03%FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。
将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。
以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
2. 提取取植物叶片1.0g，按1∶5（W/V）加入5%TCA研磨，4000r/min离心10min，上清液供测定。
3. 测定（1）AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
（2）DAsA测定向1.0ml样品液中加入0.5ml 60mmol/L DTT－乙醇溶液，用Na2HPO4－NaOH混合液，将溶液PH调至7~8，置于室温下10min，使DAsA还原。
然后加入0.5ml 20%TCA，把PH调至1~2。
抗坏血酸(维生素C)的测定方法
抗坏血酸(维生素 C )的测定方法(1)在测定维生素C 的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素 C 含量的第一标准方法，2、4 —二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法 1 •原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后， 与邻苯二胺(OPDA 反应生 成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline ),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正 比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为 0.022 g/ml 。
2. 适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3•仪器3. 1 •实验室常用设备。
3. 2.荧光分光光度计或具有 350nm 及430nm 波长的荧光计。
3. 3.打碎机。
4. 试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
(1 )偏磷酸—乙酸液：称取 15g 偏磷酸，加入40ml 冰乙酸及250ml 水，搅拌，放置过夜使 之逐渐溶解，加水至 500ml 。
4C 冰箱可保存 7〜10天。
(2)0.15 mol/L 硫酸：取10ml 硫酸，小心加入水中，再加水稀释至 1200ml 。
(3)偏磷酸—乙酸—硫酸液：以 0.15mol/L 硫酸液为稀释液，其余同 4.1.配制。
(4) 50% 乙酸钠溶液：称取 500g 乙酸钠(CH3COONa3H2O ，加水至1000ml 。
(5) 硼酸-乙酸钠溶液：称取 3g 硼酸，溶于100ml 乙酸钠溶液(4.4 )中。
临用前配制。
(6)邻苯二胺溶液：称取 20mg 邻苯二胺，于临用前用水稀释至 100ml 。
(7)0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1g 百里酚蓝，加0.02mol/L 氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为 10.75ml ，磨溶后用水稀释至 250ml 。
抗坏血酸含量测定(分光光度计法)
植物生理学模块实验指导李玲主编科学出版社一、维生素C含量的测定方法（分光光度计法）【实验目的】学习利用分光光度计法测定维生素C（抗坏血酸）含量的原理和方法。
【实验原理】维生素C（抗坏血酸）具有较强的还原力，可以把铁离子（Fe3+）还原成亚铁离子（Fe2+），亚铁离子与红菲啰啉（4,7-二苯基-1,10-菲啰啉，BP）反应形成红色螯合物。
此化合物在波长534nm处具有强的吸收峰，且吸光度与反应液中抗坏血酸含量呈正相关。
因此，可用比色法来测定抗坏血酸含量。
【器材与试剂】1.实验仪器与用具离心机、分光光度计、研钵、电子天平、容量瓶（50ml和100ml）、漏斗、滤纸、离心管、试管。
2.实验试剂50g/L三氯乙酸（TCA）溶液：称取5g三氯乙酸（分析纯），用蒸馏水溶解，稀释至100ml。
0.4%磷酸-乙醇溶液：量取0.47ml 85%磷酸溶液加入到无水乙醇中，并用无水乙醇稀释至100ml。
5g/L BP-乙醇溶液：称取0.25g BP（纯度>97%）加入到无水乙醇中溶解，并用无水乙醇稀释至50ml。
0.3g/L FeCl3-乙醇溶液：称取0.03g FeCl3加入到100ml无水乙醇中，摇匀。
100μg/ml 标准抗坏血酸溶液：称取10mg 抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用），用50g/L TCA 溶液溶解，定容至100ml，即1ml溶液含100μg抗坏血酸。
现用现配，保存于棕色瓶中，低温冷藏。
3.实验材料苹果、梨、香蕉、柑橘等果实。
【实验步骤】1.制作标准曲线取7支试管，编号，按表1加入各种溶液，将混合液置于30℃反应60min，然后以0号试管混合液为参照，于波长534nm处测定吸光度值。
以抗坏血酸质量为横坐标，吸光度为纵坐标汇至标准曲线，求的回归方程。
表1 制作抗坏血酸标准曲线试剂含量项目试管号0 1 2 3 4 5 6抗坏血酸标准液/ml 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 50g/L TCA/ml 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4无水乙醇/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0混匀、摇匀0.4%磷酸-乙醇溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.55g/L BP-乙醇溶液/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.3g/L FeCl3-乙醇溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5相当于抗坏血酸量/μg0 10 20 30 40 50 602.提取洗净新鲜果实，吸干，剪碎后混匀，分别称取5g 样品置于研钵中，加入20ml 50g/L TCA溶液，在冰浴条件下研磨成浆状，转入到100ml容量瓶中，并用50g/L TCA 溶液定容至刻度，混合、提取10min后，过滤收集滤液备用。
实验十五 抗坏血酸含量测定
实验十五抗坏血酸含量测定（2,6-二氯酚靛酚法）一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C 的原理和方法。
二、原理维生素C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果（如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等）和蔬菜（觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等）中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1．仪器（1）天平（2）组织捣碎机（3）微量滴定管（5ml）（4）容量瓶（50ml）（5）刻度吸管（5ml，10ml）（6）锥形瓶（100ml）2．试剂（1）l％草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水中（2）2％草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中（3）抗坏血酸标准溶液（0.1 mg／ml）：精确称取10mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）用1％草酸溶液溶解并定容至100ml。
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸（Vc）的测定方法测定Vc的国标方法中，荧光法为测定食物中Vc含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为0.022 g/ml。
2．适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3．仪器3．1．实验室常用设备。
3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。
3．3．打碎机。
4．试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
（1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。
4℃冰箱可保存7～10天。
（2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。
（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。
（4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。
（5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。
临用前配制。
（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。
（7）0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。
变色范围：pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH＞4.0 兰色（8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。
碘滴定法测定抗坏血酸
一、实验目的 1.学习碘滴定法测定抗坏血酸的原理和方法。 2.掌握滴定法的基本操作技术。 3.了解水果、蔬菜中维生素C的含量。 二、实验原理
还原型抗坏血酸可被I2氧化成脱氢抗坏酸， 而I2本身被还原为I-，以淀粉为指示剂，当I2 与还原型抗坏血酸作用时，溶液显蓝色。
三、实验操作
四、实验建议
1.实验中操作要迅速，防止还原型抗坏血酸被 氧化。
2.6％偏磷酸、2％草酸可抑制抗坏血酸氧化酶 活性，阻抑抗坏血酸氧化。
3.某些水果、蔬菜(如橘子、西红柿)浆状物泡 沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。
4.提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，取上 清液进行滴定。
5.用这种滴定方法简单、快速，适合测定水果、 V2×100％/25×10
式中：0.088为1 m1 0.001 mol／L碘溶液相 当于抗坏血酸的量(mg)；
V1为lO ml果液消耗标准碘溶液的ml数； V2为总果液的ml数； 25g为苹果重量；
10 m1为果液总体移取数；
100％为计算出100 g苹果抗坏血酸的含量。
1．样品提取
称取去皮苹果 25 g放人研钵中，先加15ml6%偏 磷酸，在组织捣碎机或研钵中捣碎成糊状，然后用4 层纱布挤出果汁或用滤纸过滤，离心、收集清液计量。
2．测定
取上清液10 m1于锥形瓶中，加蒸馏水20 ml，1 ％淀粉2 ml，迅速用5 ml微量滴定管(内有O.01 mol ／L碘液)滴定至溶液呈淡蓝色。
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸的测定方法抗坏血酸（维生素C）是一种重要的营养成分，对于人类的生理功能发挥着重要的作用。
因此，准确测定抗坏血酸的含量对于评估个体的营养状况和健康状况至关重要。
本文将介绍一些常用的抗坏血酸测定方法。
1.重量法：这是最简单的一种方法，直接通过将待测样品与标准品进行比较，确定抗坏血酸的含量。
首先，在同等条件下，将待测样品和标准品分别溶于一定体积的溶剂中，然后通过反应，测定样品和标准品的质量变化。
根据质量变化的比例计算抗坏血酸的含量。
2.N，N-二乙基对苯二胺法（DEPA法）：这是一种常用的分光光度法，通过测定抗坏血酸在酸性条件下与N，N-二乙基对苯二胺发生氧化还原反应，生成有色产物的量来确定抗坏血酸的含量。
该反应是一个比色反应，根据测定产物的吸光度可以间接计算抗坏血酸的浓度。
3.罗斯反应法：该方法通过抗坏血酸与二溴苯酚反应生成了一种呈现深红色的产物，进而通过比色法测定产物的吸光度来计算抗坏血酸的含量。
4.高效液相色谱法（HPLC法）：这是一种常用的分析方法，通过利用色谱技术对样品中的抗坏血酸进行分离和测定。
首先，将待测样品中的抗坏血酸分离出来，然后通过测定峰面积或峰高来确定抗坏血酸的含量。
5.立体显微镜法：此方法将样品中的抗坏血酸晶体置于显微镜下，通过观察形态、大小、颜色等特征来评估抗坏血酸的含量。
这种方法属于宏观定性方法，主要用于观察抗坏血酸的结晶性状。
此外，还有一些其他的测定方法包括电化学法、荧光法、原子吸收法等，这些方法都有各自的优缺点和适用范围。
需要注意的是，在进行抗坏血酸测定时，应选择适当的样品前处理方法，如酸性处理、加热处理等，以确保测定的准确性和可靠性。
同时，还应注意样品的保存和处理条件，避免抗坏血酸的氧化和分解。
综上所述，对抗坏血酸的测定方法有多种选择，根据实际需要和使用环境的不同，可以选择最合适的测定方法。
无论选择何种方法，都应遵循科学、准确、可靠的原则，以获得准确的抗坏血酸含量数据。
食品中抗坏血酸的测定实验报告
食品中抗坏血酸的测定实验报告食品中抗坏血酸的测定实验报告【导语】每天饮食中摄入足够的维生素C（抗坏血酸）对于维持人体健康至关重要。
然而，食品中抗坏血酸的含量并不总是能够被肉眼直接观察到，利用实验方法进行测量是一种可靠和准确的方式。
本文将介绍一种测定食品中抗坏血酸含量的实验方法，以及相关的结果和分析。
【目录】1. 引言1.1 抗坏血酸的重要性1.2 食品中抗坏血酸的测定方法2. 实验设计与方法2.1 实验材料和设备2.2 实验操作步骤3. 实验结果与讨论3.1 食品样品的抗坏血酸含量3.2 不同食品样品的对比分析4. 实验优化与改进4.1 提高实验准确性的措施4.2 更多食品样品的测定5. 结论5.1 对食品中抗坏血酸测定的重要性的总结5.2 实验结果及其对我们的意义【引言】1.1 抗坏血酸的重要性抗坏血酸是一种重要的维生素，对人体的健康发挥着重要的作用。
它具有抗氧化性质，有助于抑制产生自由基，减缓细胞衰老和组织损伤的速度。
抗坏血酸还能增强人体免疫力，帮助身体吸收铁元素，并促进胶原蛋白的合成。
每天合理摄入足够的抗坏血酸对于维持身体健康至关重要。
1.2 食品中抗坏血酸的测定方法食品中抗坏血酸的测定方法多种多样，其中较为常用的方法是滴定法和高效液相色谱法。
滴定法利用氧化还原指示剂对抗坏血酸进行滴定测量，而高效液相色谱法则通过将食品样品中的抗坏血酸分离出来，并利用色谱仪测量其浓度。
【实验设计与方法】2.1 实验材料和设备所需实验材料和设备有：- 食品样品（如橙子、柠檬等富含维生素C的水果）- 酸性溶液（例如1%硫酸）- 硫酸氨水溶液- 玻璃瓶- 滴定管- 定容瓶- 氧化还原指示剂2.2 实验操作步骤1. 准备食品样品：将食品样品切碎并榨汁，过滤得到无固体颗粒的液体样品。
2. 滴定测定：取一定量的食品样品溶液放入玻璃瓶中，加入适量的酸性溶液和氧化还原指示剂，用硫酸氨水溶液滴定至颜色从红色变为无色。
3. 计算抗坏血酸含量：根据滴定所需的硫酸氨水溶液体积，计算出食品样品中抗坏血酸的含量。
抗坏血酸含量的测定
抗坏血酸含量的测定：取0.2 g-1 g 番茄样品，液氮速冻，研磨成粉末保存在-80℃（鲜样也可直接在冰浴中用偏磷酸研磨）。
测定时在样品中加入5 ml 预冷的0.1% (w/v) HPO3 溶液，抽提半小时左右，4℃12000 g离心10min, 上清液转移到新离心管中，置于冰上。
在300 ul 上清液中加入等体积50 Mm DTT（二硫代苏糖醇）, 暗处常温反应15min, 测出总抗坏血酸含量；加入等体积0.1% (w/v) HPO3，测出还原态抗坏血酸含量；两者的差值即为氧化态抗坏血酸含量。
液相色谱使用方法：将装好流动相和甲醇的瓶放好，打开电源后打开230机器开关，机器自检，再将电脑打开；首先进行排气（流动相B及甲醇A，排气速度10 ml/min），旋开旋钮，点击“start”、“pump”、“A”, A开始排气，直到没有气泡为止，点击“stop”, 接着点击“start”、“pump”、“B”, B开始排气，直到没有气泡为止，点击“stop”同时旋紧旋钮，排气结束；接着进行洗柱，（洗柱流速0.5 ml/min），点开位于电脑桌面左上方的3个电脑图标，点击“instrument”, 打开其中的“230”, 点击“method”, 先用甲醇洗，设置A为100 %, 关闭对话框并确认修改，半小时或更长时间后设置A 为50 %, B为50 %, 洗柱半小时，结束后设置B为100 %, 洗柱10 或20 min 后将流速改为测定时流速1.0 ml/min继续洗柱；洗柱过程中可将检测器310打开，使基线平衡；最后是洗针，打开上样器410 , 更换新的洗针液（新鲜配制的0.1% HPO3 溶液），点击“wash”即开始洗针直到没有气泡为止，洗针结束后点击第三个键使其联机。
100% B 洗柱1 h后可开始测定样品；样品测定完毕后按照100 % B（20 min）、50 % A 50 % B(20 min)、100 % A （30 min）的顺序洗柱，完毕后关闭软件，接着关闭230、310、410。
农化分析-蔬菜中抗坏血酸含量的测定
农化分析——蔬菜中抗坏血酸含量的测定重庆•北碚西南大学那一辉1.目的及意义抗坏血酸（C6H3O6）也称维生素C（Vc），是维持人体健康的一种重要物质。
人体所需的抗坏血酸大多数是由水果、蔬菜及食品所供给。
长期缺乏抗坏血酸会得坏血病、关节疼痛、牙龈出血、发炎、感染、身体骨骼易损伤且不易愈合等多种疾病，但是也不能摄入过量的抗坏血酸，这是由于过量的抗坏血酸能够破坏人体内的DNA自由基，进而会诱发多种疾病。
因此，测定蔬菜中抗坏血酸的含量具有重要的意义，是鉴定蔬菜品质的重要指标之一。
2.实验原理抗坏血酸（Vc）含量的测定方法很多，一般有２，６－二氯靛酚滴定法、高锰酸钾滴定法、紫外分光光度法、库仑分析法、原子分光光度法和碘量法等。
这几种方法均可用于快速测定蔬菜中抗坏血酸的含量，但2,6－二氯靛酚滴定法和紫外分光光度法的准确度要优于高锰酸钾法等其他几种方法，而紫外分光光度法多用于对于深色泽样品抗坏血酸的测定。
本实验采用２，６－二氯靛酚滴定法测定蔬菜中抗坏血酸含量。
2,6-二氯靛酚，具有较强的氧化性，表现出两种反应：（1）反应决定于pH：酸性介质-----深蓝色中性或碱性介质---浅红色。
（2）反应决定于氧化还原状态：氧化状态---深蓝色还原状态---无色抗坏血酸具有很强的还原性，染料2，6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈浅红色，在中性或碱性溶液中呈深蓝色。
因此当用深蓝色的碱性2，6-二氯酚靛酚染料溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时，其中的抗坏血酸可以将2，6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。
但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后，再滴2，6-二氯酚靛酚就会使溶液呈浅红色。
借此可以指示滴定终点，根据滴定用去的标准2，6-二氯酚靛酚溶液的量，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。
3.实验材料（1）材料蔬菜（白菜、菠菜、香菜等）（2）设备不锈钢刀（一把）；搅碎机或研钵（一套）；移液管（5ml或10ml一只）；漏斗；滤纸（数张）；容量瓶（100ml一只）；半微量滴定管；量筒（100ml一只）；瓷盘；天平；小烧杯；三角瓶（50ml三只）等。
抗坏血酸含量实验报告
1. 掌握抗坏血酸含量的测定方法。
2. 了解抗坏血酸的性质及其在食品、药品中的应用。
3. 培养实验操作技能，提高分析问题、解决问题的能力。
二、实验原理抗坏血酸（维生素C）是一种水溶性维生素，具有抗氧化、增强免疫力等生理功能。
本实验采用2，6-二氯酚靛酚滴定法测定抗坏血酸含量。
该方法基于抗坏血酸具有还原性，可以将2，6-二氯酚靛酚还原成无色物质，从而通过滴定终点颜色变化来确定抗坏血酸的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：电子分析天平、滴定管、锥形瓶、研钵、漏斗、容量瓶、吸管等。
2. 试剂：2%草酸溶液、1%草酸溶液、标准抗坏血酸溶液、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液、待测样品等。
四、实验步骤1. 样品预处理：将待测样品进行研磨、过筛，准确称取一定量的样品，加入适量1%草酸溶液，搅拌均匀，提取抗坏血酸。
2. 标准溶液的配制：准确称取一定量的标准抗坏血酸，溶解于1%草酸溶液中，配制成一定浓度的标准溶液。
3. 滴定：将提取的抗坏血酸溶液置于锥形瓶中，加入适量的2，6-二氯酚靛酚溶液，搅拌均匀。
用标准抗坏血酸溶液进行滴定，直至溶液颜色由红色变为无色，记录滴定所用标准溶液的体积。
4. 计算抗坏血酸含量：根据滴定所用的标准溶液体积和浓度，计算待测样品中抗坏血酸的含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：根据实验数据，计算出待测样品中抗坏血酸的含量为X mg/g。
2. 分析：与国家标准或文献报道的抗坏血酸含量进行比较，分析实验结果的准确性。
1. 实验过程中可能存在的误差：样品预处理过程中可能存在抗坏血酸的损失；滴定过程中可能存在滴定终点判断不准确等。
2. 误差分析及改进措施：针对实验过程中可能存在的误差，提出相应的改进措施，以提高实验结果的准确性。
七、结论本实验采用2，6-二氯酚靛酚滴定法测定抗坏血酸含量，实验操作简便、准确。
通过实验，掌握了抗坏血酸含量的测定方法，提高了分析问题、解决问题的能力。
八、实验报告总结本次实验通过对抗坏血酸含量的测定，了解了抗坏血酸的性质及其在食品、药品中的应用。
食品中的抗坏血酸含量测定与分析
食品中的抗坏血酸含量测定与分析近年来，人们对健康食品的需求逐渐增加，其中包括抗坏血酸含量高的食品。
抗坏血酸，也被称为维生素C，是一种重要的营养物质，对于维持人体健康具有重要作用。
因此，食品中抗坏血酸含量的测定与分析成为了营养学和食品工业的重要研究领域之一。
首先，测定食品中抗坏血酸含量的方法多种多样。
其中最常用的方法是高效液相色谱法。
高效液相色谱法可以通过测量食品样品中的吸收峰来确定抗坏血酸的浓度。
此外，还有其他方法，如发光法、滴定法和电化学法等。
每种测定方法都有其独特的优缺点，根据实际需求选择适合的方法进行测定。
其次，食品中的抗坏血酸含量与其原材料、加工过程和储存条件密切相关。
新鲜水果和蔬菜通常含有较高的抗坏血酸，因为其在采摘后时间较短，其含量损失较少。
相反，经过长时间贮存和加工的食品则往往含有较低的抗坏血酸。
因此，在选择食品时，应优先选择新鲜的水果和蔬菜，以充分摄取抗坏血酸。
此外，食品中的抗坏血酸含量也与食品加工方法有关。
有些食品经过高温烹调和加工，会导致抗坏血酸的损失。
例如，长时间煮沸或烧烤食材，会使抗坏血酸遭受破坏，从而降低其含量。
相反，轻微加热和采用新鲜蔬菜的加工方法，能更好地保留食品中的抗坏血酸含量。
此外，食品的贮存条件也会对抗坏血酸含量产生影响。
抗坏血酸对阳光、空气和高温敏感。
因此，正确的贮存方式可以最大限度地保留食品中的抗坏血酸。
一般来说，将食品放置于阴凉、干燥和通风良好的地方能更好地保护其中的营养成分。
最后，对于饮食习惯不良或有特殊需求的人群，如吸烟者、酗酒者、孕妇和病人等，摄入足够的抗坏血酸显得尤为重要。
在这种情况下，饮食补充剂或维生素C 片剂可以作为辅助方式来满足人体对维生素C的需求。
然而，应该注意摄入合适的剂量，避免过量摄入引起的不适。
综上所述，食品中的抗坏血酸含量测定与分析是一项重要的研究领域。
选择适当的测定方法和食品选择、加工和贮存方式，能够最大限度地保留抗坏血酸含量，确保人体获得足够的营养。
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抗坏血酸含量测定
试剂配制：
6%和10% (wt/vol) TCA（三氯乙酸），室温放置（~20℃）
43% (vol/vol) H3PO4 (1:1稀释85% H3PO4)，室温放置
3% (wt/vol) FeCl3，室温放置
75 mM phosphate buffer (pH 7.0)，用磷酸氢二钾和磷酸氢二钾配制
10 mM DTT，冰浴
0.5% (wt/vol) NEM，冰浴
4% (wt/vol) α-α-bipyridyl，用70%乙醇溶解，冰浴
ASA标品根据样品浓度配制（标曲）
试验步骤：
1.植物材料（约40mg）分装到离心管中，并立即在液氮中冷冻；
2.加入1mL 6% TCA 到2 mL离心管中，离心（13000 g, 4℃5min），并将上清
液转移到一个新的2mL离心管中。
（所有提取物保持在冰上并立即开始测定）；
3.抗坏血酸试验测定空白、标准和样品，同时测定还原型AA和总AA（每个
样品四次测定）；
4.加入10µl 75mM磷酸盐缓冲液和20µl 6% TCA（空白），AA标准品(0.15
-10mM)或20µl 上清至96 孔板；
5.加10µl 10mM DTT到离心管中，室温孵育10分钟；
6.加10 0.5% NEM到提取总AA管中除去多余的DTT并孵育至少30 s；
7.加20µl水至还原型AA测定管中，将DTT和NEM的体积加到总AA测定试
管中；
8.加入50µl 10% TCA, 40 µl 43% H3PO4, 40 µl 4% α-α-bipyridyl 和20 µl 3%
FeCl3至所有测定管中；
9.37℃孵育1 h；
10.测定525nm下吸光值。
计算：。