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Waters515泵柱压不稳故障处理一例

Waters515泵柱压不稳故障处理一例

原创]Waters515泵柱压不稳故障处理一例Post By:2009-7-21 15:08:00几个月前遇到515泵柱压不稳的问题,经过处理以后,故障排除,现把处理过程介绍如下,供参考:1. 故障判断:柱压不稳,而且变化非常大,特别是当一个泵头吸液的时候,柱压下降,当它排液的时候柱压上升,可以肯定是单向阀不起作用了。

2. 清洗:取下单向阀,用超声波清洗20-30分钟,不用吹干。

装上后仍然是柱压不稳,再卸下来,再超声,反复了几次,压力还是不稳,几乎有请Waters工程师的打算了。

后来甚至把一个不太好的单向阀拆了,里边其实很简单,就一个红宝石小球,没有发现球体出现不光滑现象。

说明单向阀已经比较干净了,应该不会再出现小球粘着或者密封不严的问题。

既然单向阀没有问题,那问题出在哪里?摇晃单向阀,可以清晰的听到里边红宝石小球来回碰撞的声音,说明单向阀中的空间比较大,是否是里边的空气没有抽完。

3. 打开Draw-Off Valve阀,用注射器抽使劲抽,结果仍然是柱压不稳。

怎样才能把单向阀中的气体排干净呢4. 解决方法是,如图,断开与Draw-Off Valve链接的管路,让流动相慢慢地从每个管路流出,可以看到有一个管路有气泡被排出。

连接上以后,再用注射器抽一下,再走流动相,柱压稳定,故障排除。

总结:单向阀中的空气,有时单靠注射器抽不干净,特别是流动相中水分多的情况下,这时不妨断开两个管路,利用压力差,让流动相慢慢将单向阀润湿,并将其中的气泡赶出,效果反而比较好。

同时要注意通风,别让甲醇给熏晕了!此主题相关图片如下s2.jpg:还有一个办法就是用大拇指堵住出口单向阀,运行泵感觉有压力的时候在放手气泡一般都能排出来高效液相色谱仪压力不稳故障解析与检修示例压力不稳是高压液相色谱仪(HPLC)最为常见的故障,其表现:①压力在一段时间逐渐变化(升高或降低);②压力瞬间变化(>3kg)。

总结原因不外乎以下四种情况:⑴有气泡;(2)漏液;(3)单向阀不良;(4)泵工作相位不正确。

WATERS HPLC常见故障分析

WATERS HPLC常见故障分析

保护柱的填料应该与分析色谱柱一致
实际上,设计、装填良好的保护柱将改善分析色谱柱的分离效率
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色谱柱问题
双峰
前沿峰
所有的峰都有变化 色谱柱
— 连接
— 更换筛板
— 再生或者更换色谱柱
色谱柱被破坏
— pH<2, 键合相水解 — pH>8, 硅胶基质溶解
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无样品峰
进样器未进样,样品瓶放置不正确或者未达到所需要样品量
泵未工作或泵液不正常,没有流速或者流速变小
系统漏液 流动相或样品的问题 柱子或保护柱的问题
最简单快捷的检查 - 泵是否工作, 系统是否漏液, 进一针丙酮溶液检查 检测器读数及数据单元是否有响应
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4)其它光路问题,需要维修
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“Lamp data not found” “System not calibrated” “Method not found” 电池耗尽,更换电池
操作时注意断电,防止静电损坏仪器
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开机过程中反复重启 1)电源线老化,断电情况 下反复插拔几下
2)5V电压偏低,调整电压
R43到 5V左右,不能超 过5.2V
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Alliance 常见故障 “Bubble found on compression”
--- 压缩比超过1.5倍以上出现错误 1)Wet Primer 系统 2)流动相脱气,打开在线脱气机 3)检查溶剂过滤头,清洗或者更换 4)检查单向阀,清洗

Waters液相层析问题排除-2

Waters液相层析问题排除-2

Position the Compression Pin in the Block
Reference Valve Manifold
Install thl
Assemble the Block and Fluidic Manifold
Align and Compress the Seal and Spacer Gasket
Replace Inlet/Outlet Check-Valve
Plunger Seal Replacement
Remove the Outlet Fitting
Detach the Head Mounting Bolts
Remove the Head
Head Support
Remove the Seal
OPEN
OPEN OPEN STREAM FILL SEAL EMPTY ON
CLOSED
CLOSED CLOSED VIAL HOME OFF
Valve 3 ?
Valve 4 ? Needle ?
Syringe ?
Wash Pump ?
To execute Normal State press ENTER Pressure 0 REBUILD VLVTEST PAGE PAGE
Injection valve阻塞 Purge 自动注射器或更换阀门零件 更换新的连接管或逆冲管子 清洗或更换新的filter
测试溶解度,将移动箱和样品放入 测试管子中观察之。若溶解度不佳 时可稀释样品或更换移动相溶剂
此问题一发生即可在注射时观察到 系统压力明显升高 1.将Restrictor loop 管子拆下, Restrictor loop阻塞 反接在Pump ,利用Pump将 Restrictor loop的阻塞物冲出来 2.若无法排除请更换新的 Restrictor loop

waters报错及解决

waters报错及解决

求助,waters 液相2795型,报错“plunger homing fault”如何处理?关机重启还是不能解决仪器有灰尘,除尘泵控板积灰腐蚀除尘应该是仪器用时间长了,带动柱塞运动的电动机无法确定初始位置了,可能是积灰挡住光敏电子元件了。

我们是反复重启几次有时能恢复,实在不行请工程师来清洗检查一下,看要不要换什么部件。

11、2695出现“solvent trantion h/w faultly”则是马达驱动主板上的保险烧了“plunger homing faulty(0)”则是主泵有故障,拆下鱼雷转动一下的马达的轴承,如果转不动,只能更换,如果能转动,还有可能继续使用,“please cycle power:unable to continue due to error in uvtxtask……”则是主板电池没电了,需要更换电池waters 液相报错“plunger homing over press”如何处理?对,就是在线过滤器脏了,拆下来超声一下。

就是图中标记的部分。

仪器型号:waters2996 PDA检测器,故障现象:检测器启动后,状态灯一直闪烁,不能通过自检。

可能的故障原因:可能流动池污染;流动相中有汽泡。

解决方法:拆下色谱柱,用一个“两通”直接连接仪器主机跟检测器,然后流动相调为纯甲醇,大容量流速,如4ml/min,冲洗1小时左右。

然后重新启动检测器,恢复正常。

仪器型号:2690/5 ;仪器现象:开机自检后出现“Plunger homing over pressure” 或者“系统异常高压,取下色谱柱后压力仍然较高”可能的故障原因:在线过滤器堵塞污染。

解决方法:取下在线过滤器,再取出过滤器里的滤芯,先用纯水超声清洗10分钟,再用甲醇超声清洗10分钟,重新安装滤芯及在线过滤器,注意出入口的方向不能接反。

然后设定流速,检查有无渗漏,仪器正常。

仪器型号:waters2995故障现象:自动进样器在进行进样动作过程中,当注射器抽动时,可听到较大的噪声,可能的故障原因:主机内自动进样器立柱表面脏,不够润滑所致。

Waters高效液相色谱维护与保养ppt课件

Waters高效液相色谱维护与保养ppt课件
通过进标样建立一个校正曲线(一般是6针标 样)。校正曲线的横坐标是标样的浓度(含 量),纵坐标是峰面积;校正曲线就相当于: Y=aX+b的公式。校正曲线建立好后样品的峰 面积带入方程就可以得到相应的浓度(含量)。
.
10
第二部分HPLC的组成
输液系统 泵以及流 动相
进样系统 进样阀
分离系统 -色谱柱
.
4
术语
• 8、色谱峰:色谱柱流出组分通过检测器时产 生的响应信号的微分曲线。
• 9、峰底:峰的起点与终点间的直线
• 10、峰高:在峰的两侧拐点处所作切线与峰底 相交两点之间的距离。 11、半峰宽(W1/2):通过峰高的中点做平 行与峰底的直线,与其峰两侧相交两点间的距 离。 12、峰面积(A):峰与峰底间的面积,又称 作响应值。
• 13、拖尾峰:后沿较前沿平缓的不对称峰。
• 14、前伸峰:前沿较后沿平缓的不对称峰
.
5
术语
• 15、死时间(t0):不被固定相滞留的组分, 从进样到出峰最大之所需的时间
• 16、保留时间(tR):组分从进样到出峰最 大之所需的时间。
• 17、死体积(V0):不被固定相滞留的组分, 从进样到出峰最大之所需的流动相的体积
.
2
第一部分术语
• 1、液相色谱法:就是用液体作为流动相的 色谱法。
• 2、固定相:在色谱法中,静止不动的一相 (固体或液体)称为固定相
• 3、流动相:能运动的一相(一般是气体或 液体)称为流动相
• 4、色谱图:色谱柱流出物通过检测器时所
产生的响应信号对时间的曲线图。纵坐标
为信号强度(通常我们所说的样品浓度),
.
8
第一部分术语
22、面积归一法:将所有峰的面积总和定 为1,测量各峰的面积和色谱图上除溶剂 峰以外的总色谱峰面积,计算各峰面积 占总峰面积的百分率。是包含水分在内 的一个计算结果。

简介WatersUPLC故障排除

简介WatersUPLC故障排除
运行。
案例二:运行缓慢的故障排除
仪器响应缓慢,可能是硬件 问题、软件问题或样品问题 。
04
2. 软件优化:升级软件至最 新版本,清理不必要的软件 插件。
01 03
•·
02
1. 硬件检查:检查液相色谱 仪的硬件连接是否正常,如 泵、检测器等。
案例三:数据丢失的故障排除
数据无法导出或丢失,可 能是存储设备问题、软件 问题或人为操作失误。
避免盲目操作
在故障排除过程中,避免盲目操作,以免造成二次损 坏。
寻求专业支持
对于无法解决的问题,及时寻求专业支持,避免自行 处理。
对未来Watersup LC故障排除的展望
技术进步
随着技术的不断进步,未来Watersup LC故障排除将更加智能化 和自动化,减少人工干预。
培训和教育
加强操作人员培训和教育,提高故障排除技能和意识。
定期维护保养
按照厂家建议进行定期维护保养,可 以减少仪器故障的发生。
总结Watersup LC故障排除的经验和教训
• 故障排除步骤:遵循故障排除步骤,从简单到复杂逐一排 查,避免遗漏。
总结Watersup LC故障排除的经验和教训
及时记录故障现象
在故障发生时,及时记录故障现象,有助于后续分析 。
通过定期维护和故障排查,延长设备使用寿命, 降低维修成本。
提高设备用户的专业技能和经验,促进跨部门和 跨领域的交流与合作。
02
CATALOGUE
Watersup LC故障类型
硬件故障
泵压异常
当泵压过高或过低时,可能是泵密封圈磨损、泵 头内有异物或泵内部组件损坏。
检测器异常
检测器可能因为长时间未使用而出现基线漂移、 噪声增大等问题。

waters故障指南(中文版)

waters故障指南(中文版)

目录1 色谱柱使用寿命问:我的色谱柱进样大概100针后峰形变差了,踏板数很低,怎么回事?答:100针确实很少,一般情况下使用时间会长很多的。

首先我们要确认你的使用条件是不是导致色谱柱寿命下降的原因。

两种基本情况:1 在相同实验中以前使用的色谱柱寿命长很多2 在本实验中用过的所有的色谱柱在使用相同次数后全部损坏如果是第一种情况,应该检查一下实验是否保持一致。

样品的组成改变了吗?样品中强吸收的污染物会破坏色谱柱的柱效。

或者管路的密封圈是否完好?脱落的密封圈会堵塞色谱柱过滤器和填料的顶层,从而影响样品的分布。

如果可以确认色谱条件没有变化,那么可以推测是柱床松动的原因。

在实验室和运输过程中色谱柱剧烈的震动都会导致柱床松动。

(色谱柱有没有掉到地上?)或者也有可能使生产商的问题。

而且这种问题标准色谱柱检测中心是检测不出来的,只有在用过一段时间后才会显露出来。

这种情况生产商会免费替换色谱柱。

问:那些生产商真好,但是我的情况不是这样的。

我的色谱柱总是用不了多长时间。

有时候100针,有时候200针。

200针还可以忍受,但是100针太差了。

色谱柱开销太大了,我该怎么办?答:我完全同意你所说的。

我们必须要找到原因然后看看我们能做些什么。

最大可能是样品中的成分吸附在色谱柱的顶端。

可能是在流动相中不溶的沉淀物或者是强吸收的物质。

随着进样的增加这些污染物在色谱柱顶端累积,阻止样品正常吸附和扩散。

从而导致峰形变差。

通常这种问题和柱压升高同时出现。

问:嗯,可能就是这个原因。

我应该怎么避免这种问题呢?答:有几种方法可以采用。

一,采用合适的样品准备技术处理样品。

用和分析柱相似的固相萃取柱进行固相萃取(SPE:solid phase extraction)1效果很好。

另外一种非常有效的方法是使用保护柱。

保护柱是作为牺牲柱装在色谱柱前使用的,出现问题的时候就会被替换掉。

为了获得最好的分析效果,保护柱的填料和装填技术必须和分析柱一样。

如果用不同品牌的填料就不能获得最佳的分析性能和保护作用。

Waters 2695 PPT

Waters 2695 PPT

©2012 Waters Corporation
23
问题
1.00 1 mL/ min
0.80 0.60
AU
0.40
Vo
0.20 0.00
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Minutes
©2012 Waters Corporation
24
2695常见问题与报错(1)
Lost prime
©2012 Waters Corporation
33
2695常见问题与报错
检测器能量低 - 更换光源灯,反光镜,透镜;
温湿度的影响。尤其是五月至九月份。尽量控制实验室温度和湿度。若实 在难以控制,建议用氮气吹扫检测器光学台。注意不要把仪器置于空调风 口下;
电源问题,注意良好的接地;
定期清除仪器内部积灰,尤其是仪器的进风口和出风口。
16
2695 样品管理器主要部件
进样针筒驱动马达
进样盘驱动马达
压力传感器
进样器
©2012 Waters Corporation
洗针泵 柱温箱PCB V2 V3 V4 V1
17
2695日常维护与保养
©2012 Waters Corporation
18
2695日常维护与保养
1. 每日检查溶剂滤头。
6
溶剂管理系统 – 示意图
二级泵
单向阀
初级泵
排空阀
柱塞杆清洗泵
单向阀
压力传感器
下上
= =
二初级级泵泵
©2012 Waters Corporation
7
Alliance 脱气系统
©2012 WBiblioteka ters Corporation注意:标配脱气包不能使用在正相流动相中, GPC脱气包:PN 700005508

高效液相色谱仪常见故障的判定及解决方法

高效液相色谱仪常见故障的判定及解决方法
调整
4、进样针头尺寸不合适
使用恰当的进样针
5、废液管中产生虹吸
保持废液管高于废液液面
6、废液管阻塞
更换或疏通废液管
D、色谱柱漏液
1、尾端接头松动
拧紧接头
2、卡套内有填料
拆下、清洗卡套、重新安装
3、筛板厚度不合适
使用合适的筛板(参考下表)
物质粒径
筛板孔径
3-4μl
0.5μ
5-20μ

E、检测器漏液
1、流通池垫片损坏
A、峰拖尾
1、筛板柱塞
A、反冲色谱柱B、更换进口筛板C、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷
填充色谱柱
3、干扰峰
A、使用更长的色谱柱B、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误
调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应图
A、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂B、更改色谱柱
控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器图
2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)
使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氮气。
3、流通池被污染或有气体
用甲醇或其他强级性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)
8、保护柱阻塞
清洗或更换保护柱
9、在线过滤器阻塞
清洗或更换在线过滤器
D、压力持续偏低
1、流速设定过低
调整流速
2、系统漏液
确定漏液位置并维修
3、色谱柱选择不当
选择恰当的色谱柱
4、柱温过高
降低温度
5、控制器失常
维修或更换控制器

waters故障排除及解决方法

waters故障排除及解决方法

Wei HaoWaters China Limited.HPLC常见故障分析及排除方法确定故障现象用排除法寻找问题原因分析可能引起问题的因素用基准的方法验证系统从简单问题入手色谱故障排除步骤寻求帮助一次只变化一个因素,以使你能够确认所变因素与问题之间的关联。

养成良好的记录习惯。

将来利用记录可以帮助发现问题,强化预防保养工作。

尝试预测将来可能发生的问题。

利用成功的故障排除经验。

恢复原状。

如果使用更换组件的方法来查找问题之所在,完毕后应将原有完好组件安装回原处。

否则,换下来的组件将来很难再利用,造成浪费。

确认问题至少发生两次以上。

如果问题不重复出现,很难证实其确实存在。

色谱故障排除经验规则引起HPLC发生问题的潜在因素: HPLC 常见故障因素环境电源接地线温度湿度清洁程度化学品色谱柱保护柱溶剂样品仪器泵进样器检测器数据处理单元HPLC 常见故障因素(工作环境)工作环境的影响•电源容量、稳定性•地线系统统一电源,统一接地•湿度对光学部件的影响尤为严重•温度空调机的影响•清洁不要轻视灰尘的影响HPLC 常见故障因素(化学品)化学品的影响•已损坏的保护柱、色谱柱•所用溶剂、试剂的品质•化学品使用不当带来的影响•样品前处理方法不当带来的影响•实验前的准备和实验结束后的收尾工作515 5101515/15252690/2695 600正确使用您的色谱泵:•使用高品质的溶剂•溶剂过滤(注意滤膜的选择)•脱气溶剂•柱塞杆清洗•注意调节流量时的变化速度密封圈柱塞杆HPLC 常见故障因素(510泵头)出口单向阀泵头进口单向阀出口阀进口阀参比阀抽液阀右泵头左泵头压力传感器废液溶剂过滤头HPLC 常见故障因素(600泵头)密封圈柱塞杆HPLC 常见故障因素(泵515/1500单向阀)PerformancePLUS Check Valves•易于使用•提高效率•长寿命•溶剂赖受性更好•兼容600, 515, 501 泵进、处口阀•兼容510 、M6000A 泵进口阀PN:700000253Primary HeadAccum.Head PrimaryX -ducerSystemX -ducer Prime/V entValve In-Line F ilter T o Sam pleManagementSystemFromDegasserGPV •注意流动相组分的互溶性!•使用正确的Seal Wash 溶剂!注意箭头方向!HPLC 常见故障因素(2690在线过滤器)2690初始化错误:Plunger homing over pressure在线过滤器HPLC 常见故障因素(进样器)7725i7172690PN:201000119请使用型号正确并且完好的注射器进样!请正确安装手动进样器!√X X请选择正确的转子类型!详情请参考Rheodyne公司网站:www. 正确使用步骤:•选择适当的洗针溶剂(绿管溶剂)和Seal Wash溶剂•清洗进样针(Needle Wash)•清洗柱塞杆密封(Seal Wash)•平衡系统•Purge 进样器•实验操作•清洗系统•Purge 进样器•清洗进样针(Needle Wash)•清洗柱塞杆密封(Seal Wash)其它注意事项:•打开样品仓盖后,等待样品盘停止转动后再取出•关机前取出所有样品瓶,或将样品盘全部取出•注意保持样品仓内和样品盘清洁•请使用Waters 公司认可的样品瓶•使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值(Depth of Needle〕•进样瓶垫损环后,请勿使用其它替代品HPLC 常见故障因素(检测器)2487双波长紫外检测器996二极管阵列检测器474荧光检测器2410示差折光检测器Peak not found: 656 nm DeuteriumLamp lighting failure 氘灯启动失败解决:检查电源检查氘灯使用时间Peak not found: Erbium n nm 波长校验失败解决:清洗检测池错误信息Lamp data not foundSystem not calibrated.Method not found错误信息机内电池的位置原因:机内电池耗尽解决:更换机内电池(CR2032)重新校正仪器注意:关闭并断开电源防止静电损伤2487检测器更换氘灯注意:关闭并断开电源防止静电损伤正常状态:Lamp及Status灯长亮Lamp灯闪烁:检查电源检查氘灯使用时间Status灯闪烁:清洗检测池996 检测器更换氘灯注意:关闭并断开电源防止静电损伤HPLC 常见故障因素(检测器)检测器使用和维护的其它注意事项•不要挡住检测器散热风扇和通风孔•不要随意更改检测器进、出口管路•示差折光检测器使用前、后均应充分清洗参比池(Purge )•长时间停用检测器时,应在检测池中充满甲醇或乙腈,必要时密封检测器进、出口管路HPLC 常见故障因素(色谱柱连接)WatersOtherPEEK 接头PN: PSL 613315√X XWaters PM Kit 介绍Performance Maintenance Kit 性能维护套件515 泵PM Kit600 泵PM KitPerformance Maintenance Kit 性能维护套件717 自动进样器PM Kit2690 系统PM KitPerformance Maintenance Kit 性能维护套件486 UV-Vis检测器PM Kit996 二极管阵列检测器PM KitWaters Quality PartsWaters正品密封圈非Waters密封圈Impropermachiningof sample portProperlychamferedsampleportThird Party Needle Waters QualityInjector NeedleThird Party Needle Waters QualityInjector NeedleImproper surface finish, irregular needle point Properlymachinedpoint andsurfacefinishWATERS 仪器维修/维护合同(TAP)介绍Total Assurance Plan(TAP)内容:★共同制定仪器维修/维护计划,每年定期更换仪器易损部件.如各密封件,光源灯等;★除定期更换的部件外,其他部件若出现故障,包括价格高的部件,维修或更换无需再付费。

waters液相色谱仪的维护与常见故障

waters液相色谱仪的维护与常见故障
磨损、漏液(正常损耗) 使用不当被折断(多为安装不合适导致) 柱塞杆被卡住,不能运动。
更换新柱塞杆
初次请维修工程师帮助解决。
©2007 Waters Corporation
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输液泵(2695)
©2007 Waters Corporation
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输液泵(2690/2695)
System X-ducer Primary X-ducer
注意: 输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。 多数垫圈和流动相是协调的,但有的垫圈 适用于甲醇、水、乙腈,在四氢呋喃中 溶解、变粘、变软。 需换垫圈时,应向Waters咨询垫圈的 规格型号。 色谱工作者一般应学会换密封垫圈。
©2007 Waters Corporation 26
2、输液泵
柱塞杆故障
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2、输液泵
单向阀
a.球和阀座粘在一起,堵死,打不 出溶剂,(缓冲盐流动相) 用高质量的溶剂冲洗,不同极性 溶剂冲洗,如水、甲醇、异丙醇、 二氯甲烷…,更换新单向阀。
©2007 Waters Corporation 22
2、输液泵
b. 球和阀座密封不严,压力不稳, 气泡进入阀中,紧贴在阀体内,使 球难以返回阀座,引起倒流,压力 和流速变化大,可能有小晶体颗粒。 清除气泡的办法:打开排液阀, 大流量冲洗,用脱过气的甲醇冲洗, 一般可解决问题。Wet Prime
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输液泵
2695
©2007 Waters Corporation
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输液泵
密封垫易损坏引起故障,每天实验结 束一定要认真冲洗泵,减少密封垫损耗, 并注意防止堵塞,使用缓冲盐流动相时,更 要小心。 使用HPLC级试剂,注意泵压力不要太高, 要适当调整压力,一般压力上限在35004000PSI,下限为50PSI,注意防止因泵堵 塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机 。

Waters2695型高效液相色谱仪的使用与维护及常见问题处理方法

Waters2695型高效液相色谱仪的使用与维护及常见问题处理方法

Waters2695型高效液相色谱仪的使用与维护及常见问题处理方法李 帅 程瑛琨(吉林大学生命科学学院 吉林长春 130012)摘 要 高效液相色谱仪是一种灵敏度高、分离效率高、分析速度快的快速分离分析检测仪器,是高校生命科学学科研究领域中必不可少的基础类分析仪器。

高效液相色谱仪的使用与维护直接影响其色谱分离的效果,良好的使用和维护更是延长仪器使用寿命的重要前提。

文中先介绍了实验室高效液相色谱仪的主要部件,其次介绍了仪器的简易操作说明,最后就高效液相色谱仪的使用及维护展开探讨,为高效液相色谱仪的初学者提供借鉴,提高了高校中液相色谱仪的使用率,为生命科学提供了技术支持。

关键词 高效液相色谱仪;操作流程;维护;常见问题 中图分类号 R361.2 文献标识码 AThe solution of using and maintenance problems for Waters2695 high performance liquidchromatographLi Shuai Cheng Yingkun(School of Life Sciences,Jilin University ,ChangChun 130012,China )Abstract High performance liquid chromatograph is a kind of fast analysis instrument with high sensitivity and high separation efficiency, which is an essential basic analytical instrument in the field of life science research in colleges and universities. The effect of its chromatographic separation was affected by using and maintenance for the equipment. To prerequisite for prolonging the service life of the instrument, good use and maintenance is important. At first, this paper introduces the main components of the laboratory high performance liquid chromatograph. Secondly, the paper introduces the simple operation instructions of the instrument. Finally, the paper discusses the using and maintenance of the high performance liquid chromatograph. The paper provides as a reference for the beginners for using the equipment and improves the rate of using the high performance liquid chromatograph in Colleges and universities. At the same time, the paper provides as a technical supporting for the life sciences field.Key words High performance liquid chromatography; the process of operation; maintenance; common problem高效液相色谱仪是一种灵敏度高、分离效率高、分析速度快的快速分离分析检测仪器,高效液相色谱仪不仅可以分析检测微量的样品成分,还可以用于大量的样品制备与分离。

Waters 2695 PPT

Waters 2695 PPT
– 样品环体积 – µL
o 100µL – 标配 o 可选至 2mL
– 系统体积 = <650µL – 样品瓶数量- 120个
柱切换阀
– 3 柱切换阀 – 6 柱切换阀
柱温箱(仅制热) – 室温至65度
柱温箱(制热制冷) – 4度(或低于室温15度)至65度
样品仓(制热制冷) – 4度(或低于室温15度)至40度
可通过面板直接控制 可选流动池----分析,半制备,制备
可通过软件控制台直接控制 可选流动池----分析,半制备,制备
©2012 Waters Corporation
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2489光路示意图
©2012 Waters Corporation
37
2998光路示意图
©2012 Waters Corporation
– 每周清洗各个溶剂瓶,要用刷子刷洗瓶壁和瓶底,再用甲醇:水=1:1超声 30min。可有效避免溶剂滤头和在线过滤器堵塞,以及某些基线问题。
©2012 Waters Corporation
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2695日常维护与保养
每周用纯有机相灌注四个管路10min。可有效避免管路长菌污染。
每当使用缓冲盐溶液后,必须用纯水0.5至1.0mL/min冲洗系统和柱子四 小时以上或过夜。
©2012 Waters Corporation
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2695常见问题与报错(4)
系统压力高
– 按流动相流路依次分段检查 – 在线过滤器堵塞,清洗; – 预柱堵塞,更换; – 柱子本身压力高,冲洗或更换; – 检测器流动池堵塞,冲洗或报修。
©2012 Waters Corporation
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2695常见问题与报错(5)
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WATERS HPLC常见故障分析

WATERS HPLC常见故障分析

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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
“Lamp data not found” “System not calibrated” “Method not found”
电池耗尽,更换电池 操作时注意断电,防止静电损坏仪器
©2013 Waters Corporation
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色谱柱问题
双峰
所有的峰都有变化 色谱柱
— 连接 — 更换筛板 — 再生或者更换色谱柱
色谱柱被破坏
— pH<2, 键合相水解 — pH>8, 硅胶基质溶解
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前沿峰
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色谱峰延展-系统死体积
注意: 较长的管路制造了更多的谱带展宽
RT 重现性好, 但峰面积重现性不好
*样品或自动进样器流路有气泡; *样品在流动相各组份中不能充分溶解(通常伴随有柱压逐渐升高且经反冲后,柱
压会恢复正常之现象); *自动进样器消耗品部件磨损 *基线噪声的影响; *积分处理的影响;
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RT重现性
重现性
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保护柱污染
大多数的色谱柱变差的原因都是污染 使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命 保护柱应当被认为是延长分析色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲 保护柱的填料应该与分析色谱柱一致 实际上,设计、装填良好的保护柱将改善分析色谱柱的分离效率
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“Lost prime”
--- 系统压力长时间低于25PSI出现错误
1)Wet Prime 系统 2)清洗单向阀 3)更换单向阀

WATERS HPLC常见故障分析

WATERS HPLC常见故障分析
— 温度 — pH控制 — 离子对 — 泵运行
漂移
— 平衡 — 固定相的稳定性 — 色谱柱污染 — 疏水塌陷 — 溶剂组成
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检测器自动重启
开机过程中反复重启
1)电源线老化,断电情况 下反复插拔几下
2)5V电压偏低,调整电压 R43到 5V左右,不能超 过5.2V
14
基线噪音大
流动相内含有空气 - 脱气处理 检测池内有气泡 -冲洗检测池或增强检测出口背压(一般只适用UV检测器) 检测池污染 - 冲洗检测池 色谱柱内有未洗脱尽的组份 - 洗脱色谱柱 检测器光源灯能量低 - 更换光源灯
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基线周期性噪声
绝大多数情况下是来源于泵的问题 泵头内有气泡 - 流动相脱气 ,泵头排气 泵进出口阀有问题 – 清洗或更换单向阀组件 柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈
HPLC常见故障分析
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故障逻辑判断及处理
问题
化学品
环境
仪器
*色谱柱/保护柱 *流动相 *样品
*电源 *地线 *温度 *湿度 *清洁程度
*泵 *进样器 *检测器 *数据处理单元
故障排除:确定故障至少重复2次出现,从最简单开始排查,且一次只 改变一个条件!如停止流速,拿掉或更换色谱柱,更换样品。。。
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色谱柱问题
双峰
所有的峰都有变化 色谱柱
— 连接 — 更换筛板 — 再生或者更换色谱柱
色谱柱被破坏
— pH<2, 键合相水解 — pH>8, 硅胶基质溶解
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仪器总共有6个进液管:一根绿色管是进液洗针,一根白色管是进液在线洗泵,另外四个进液管是流动相的四个通道。

一切准备工作就绪,仪器开始工作了,以前总是不知道新仪器里面是空的怎么弄,今天总算见识了。

拿水和甲醇灌吧,把所有管路灌满,多灌几分钟,压力稳定就可以了。

安装完毕,仪器验收,合同上的项目有:如泵有流量设定范围、流量准确度、流量精度;自动进样器有进样量重现性、交叉污染、进样量准确性、反复进样次数等;柱温箱有温度范围、温度控制精度、紫外检测器有波长范围、带宽、波长准确度、波长重现性、噪声、漂移等等。

介绍下如何验收指标:1.流量准确度:设置流量为1.0mL/min,用一个干燥的10mL容量瓶(称重好的)接留出液,一接开始记时,准确装满10mL停止。

再去称量,得到水的重量。

水的重量除时间即是流量准确度。

2.流量精度:照流量准确度连续测定几次,计算RSD3.检测器基线噪声:停留流动相一个小时,选择响应最大的峰为结果4.检测器基线漂移:停留流动相一个小时,从开始到结束看上下漂移最大的为结果5.重现性:做整台仪器的重现性,用甲醇做流动相,工程师带的色谱柱、标准品,反复进样几次测试峰面积的RSD6.进样量准确度:分别进20、40、60、80、100uL看线性7.交叉污染:进一个标准品后再进个空白看污染情况RSD值的学名是relative standard deviation(相对标准偏差),也称变异系数coefficient of variation,CV. Excel中公式如下:RSD=STDEV( )/AVERAGE( )*100假设是这五个数据0.100,0.0999,0.0996,0.1002,0.100。

用excel 算他们的平均值是0.09994 他们的STDEV算出来是0.000219,RSD=STDEV/平均值*100=0.2192。

现在不流行用RSD了,改用“不确定度”来表示分析结果的“可靠程度”。

液相报错“plunger homing over press”如何处理:今天开仪器,2695打开以后进入自检,突然听到报警声,过去一看,出现了一个报错提示,“plunger homing over press”。

按确认后又继续自检,然后还是出现一样的报错。

只好去查看仪器报错的说明了。

说明是这样写的:Plunger homing over pressure AlarmHomingRestriction:The solvent delivery system detected excessive pressure while moving the plunger 活塞forward to its home registration position. This condition may be caused by:@Failure to remove the pin栓plug塞子,栓restrictor;@Clog ged 堵塞in-line filter at the solvent delivery system;@Blockage in the waste line;@Excessive restriction between the solvent delivery system and the sample loop;@Failure of the sample loop to vent出口the solvent delivery system to atmosphere by opening valves V1, V2 and V3.我看了信息之后,回头想了想,也许是最近样品量大,仪器脏了。

既然是over press,肯定是哪里超过了自检压力,应该是@Excessive restriction between the solvent delivery system and the sample loop;可能性最大。

既然是超过了自检压力,泄压应该可以自检通过吧。

我根据流路,看到泵后的第一个保护柱。

如下图照片红色标记:于是我拿扳手拧开了左边进口泄压,再重新自检,自检通过。

原来就是这个在线过滤器inline filter脏了,拆下来洗吧。

拆了后打开在线过滤器,构造如图:把中间的柱芯用甲醇超声清洗干净,再安装上去就可以了(安装有方向)。

电脑控制出了问题:今天打开仪器,开电脑后出现了一个界面,提示如下:Runtime Error!Program: D:\Empoewer\Instrumnet\WDHCPServerSvc.exeThis application has requested the Runtime to terminate it in an unusual way.Please contact the application's support team for more information.从字面意思来看,是某程序终止了运行。

我也不知道是什么,提示是工作站Empower 下面的程序,应该跟工作站有关系,先不管吧。

然后点“确定”后运行工作站,进入后点运行样品测定界面再次出现这个错误提示,且出现了一次提示连不上Bucelace 板(该板是Waters 公司用来控制仪器,安装在电脑上的控制板),然后无法控制仪器。

打电话一问,原来是时区的原因(各国的时区不一样造成的系统安装问题)。

按照工程师的吩咐,点控制面板,在管理工具中打开服务程序,把一个名为“Waters DHCP”的文件设置为禁用就可以了。

一个问题,对我来说很棘手,对工程师来说,见怪不怪,几分钟就解决了问题。

自动进样器出了问题:今天早上,我还是跟往常一样,把检测完的色素样品从自动进样器中拿了出来准备清洗,发现样品盘上有几个样品瓶盖上有水珠,也没在意,认为是自己不小心弄到的吧。

下午,我再把处理好的样品放入样品盘中,准备检测,结果发现样品盘中有水珠的样品瓶数量比早上更多了。

我感觉到了仪器出了问题,哪里来的这么多水珠呢?我把样品盘拿了出来,全都看了一遍,甚至还检查了自动进样器的其他地方,结果只发现样品瓶盖上有水珠,其他地方没有。

电话后工程师又下了结论:自动进样器中Seal Wash(洗针)中的密封垫出了问题。

如图红色标记位置而后我回头想想,自动进样器密封垫出问题通常都是跟样品有关系,难道是我的样品没用0.45um的微膜过滤造成的?(因为色素含量低,我定容到2mL,采用了高速离心机离心后上仪器测定。

)还好在保修期内出现的这个问题,仪器公司给解决的这个问题,以后可不能马虎了,这次的教训也让我变的更加细心。

流动相走光情况一:由于样品量大,晚上仪器也在工作,下班之前就设置好了进样的序列且设置了自动停泵。

第二天早上来,听到仪器一直在鸣笛报警,过去一看,原来是没压力了,流速也停了。

我在仪器上检查了一下,原来是流动相走空了。

明明设置了程序停泵,怎么没停呢?检查了下程序,发现是程序设置错误。

我想流动相走空了,也没什么大不了,换上水,用仪器的程序灌泵吧。

我换上水灌泵后,结果问题来了:发现没有废液排出来,压力也显示没压力。

因为仪器急着用,只好打电话问工程师了,得到了答案:这个现象通常都是因为气泡或是杂质进入了单向阀造成,这样我们就要拆开泵单向阀,把单向阀取出来,拆出来后把单向阀摇晃几下(能听见宝石的声音)或是超声再安装上去即可(注意方向)。

照着工程师的方法,仪器问题很快就解决了。

情况二:我们也经常没注意就让流动相走没有,如果单用一种流动相还好,泵会自动停下来;若果是混合流动相,而其中一种用完了,泵不会停,直接带着气泡走下去。

等我们发现时,一般处理是:先关泵,再用注射器把管路中的气泡抽出来,在开泵,用流动相猛冲,直至把柱子里、检测器里的气泡冲出来为止(根据基线的状态来判断)。

这样做一般也没出过什么问题,仪器等平衡好还是很好用的。

至于单向阀,从来没想到那头上~~~如果有液体流出来,就不用拆单向阀,按照情况二处理即可。

吡啶甲酸铬的测定:今天,我用NY/T 916-2004 标准测定饲料添加剂吡啶甲酸铬,按下面这个方法(从标准上截下来的)配制了标准储备液,因为没做过,不知道吸光度高不高,就直接先进了标准储备液,结果却得到一个这样的色谱图(下图)。

开始只是以为仪器没平衡好,再进,可是连续3针都是这样。

到底哪出了问题呢?1.标准没问题。

2.检查了仪器正常。

3.色谱柱上次用都好的,应该没问题。

难道是储备液浓度过高,可是高了也不会出现这个形状啊。

我再仔细看了下标准,看到了用水定容。

再上仪器,结果出来了(见下图)。

一个物质在甲醇中溶解,后用水稀释测定,怎么会有这么大变化呢?我就继续用甲醇稀释做线性,结果还是跟第一个色谱图一样,乱!!!这是溶剂效应。

溶解样品的溶剂和流动相的强弱有差异,导致的有些样品分子溶解在强溶剂随着强溶剂流过柱子,而有些则溶解在流动相中,导致峰分叉。

溶剂效应解决之法:用流动相做溶剂或用比流动相极性稍强的溶剂(反相柱)。

样品萃取中的一个小技巧在检测食品中维生素A、维生素E的时,皂化后有一个萃取的样品处理过程。

用乙醚萃取样品3次,然后再用水洗乙醚至中性。

以前习惯了萃取振摇,怕萃取不充分。

我想这个也一样吧。

可哪知道轻轻摇了几下样品就乳化了(郁闷),那就等分层吧。

10分钟、20分钟、30分钟过去了,确也不见改善。

只好又重新实验,再皂化。

这次我学怪了,摇分液漏斗不振摇,而是转动摇,效果好多了。

经验总结:乙醚萃取皂化后样品易乳化,不可剧烈振摇,水洗乙醚至中性也易乳化,不可剧烈振摇,乳化后可加少量乙醇加速分层。

Waters 474 荧光检测器的一个小问题:今天用荧光检测器做样品,遇到个小问题。

以前也没遇到过,对新手也有一定的价值,也分享下吧。

我同时做了3个不同的样品,前面2个正常,峰也很漂亮。

可是到了第3个样品,开始正常,做到半路杀出了个程咬金:检测器报错,显示W ARNING,AUTO ZERO!开始还挺纳闷的,总不会是灯能量不够了吧???应该不会,才用了700小时。

一时找不到原因,再进一针看下吧。

再进样品又是这样,刚开始正常,半路有出错了。

到了这里,你会认为是什么原因呢?原来是样品响应值太高,检测器启动了自动保护功能。

所以才这样,我把样品稀释后再做就正常了。

预柱是指的在线过滤器,保护柱是和色谱柱连在一起那个,预柱在进样阀前,保护柱在进样阀后色谱柱前。

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