BL21大肠杆菌菌株使用说明
BL21(DE3)感受态细胞使用说明
BL21(DE3)感受态细胞BL21(DE3)感受态细胞简介：BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。
使用pUC19质粒检测，转化效率可达107，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。
该菌株是以T7 RNA 聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。
T7 噬菌体RNA 聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5 启动子调控，该区整合在BL21 染色体上。
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。
使用pU19持粒检测，转化效率可达107。
BL21(DE3)感受态细胞产品特点·转化效率可达107。
·可用于非毒性蛋白表达。
·长时间保存于-80 ℃，转化效率不发生改变。
保存条件：-80℃BL21(DE3)感受态细胞基因型F–ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ Tet r galλ(DE3) endA Hte [argU proL Cam r] [argU ileY leuW Strep/Spec r]BL21(DE3)感受态细胞说明BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株来源于Stratagene公司的BL21-Gold 菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子( AGA、AUA、CCC、CUA) 对应的tRNA （argU、ileY、proL、leuW），提高外源基因，尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。
该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素抗性。
大肠杆菌表达操作规程
大肠杆菌表达操作规程大肠杆菌表达操作规程一、实验材料和仪器准备1. 大肠杆菌菌株：选择适合表达目标蛋白的大肠杆菌菌株，如BL21(DE3)、Rosetta(DE3)等。
2. 表达载体：选择适合目标蛋白表达的载体，如pET 系列、pBAD系列等。
3. 目标蛋白基因：基因可以通过PCR扩增获得，或者从其他载体中克隆。
4. 培养基：溶液制备LB培养基，配制好含有适当抗生素的LB琼脂板，另外还需要制备适用于大肠杆菌表达的诱导培养基，如TB、SB等。
5. 抗生素：根据载体的需要，选用适当浓度的抗生素。
二、诱导表达实验操作流程1. 预先培养：取一株原始菌落接种到含有适当抗生素的LB液体培养基中，为了避免突变株的污染，建议每次都从冷冻保存的单一菌落开始。
培养条件为37℃，180rpm，过夜培养。
2. 选取合适菌液接种量：从过夜的预培养液中取2ml，用于接种适当量的诱导培养基。
3. 诱导表达：根据所用的表达载体，将接种量转移到含有适当抗生素的诱导培养基中，继续培养。
4. 培养条件：培养条件根据所选表达载体的要求进行设置，一般为37℃，180rpm。
5. 收集细胞：在适当的时间点，如在菌液浓度达到指定值或培养时间达到一定程度后，通过离心收集细胞。
6. 细胞破碎：采用适当的方法破碎细胞膜，如超声波破碎、冻融法等。
7. 蛋白质提取：以适当的缓冲液提取目标蛋白质。
8. 蛋白质纯化：采用各种纯化方法（如亲和层析法、凝胶过滤法等）对蛋白质进行纯化。
9. 检测和分析：对蛋白质进行SDS-PAGE、Western blot等分析方法进行检测。
三、注意事项1. 培养条件的控制：控制好培养温度、转速和时间等条件，以保证表达的效果。
2. 抗生素浓度的选择：根据所用载体对抗生素的要求，选择适当的浓度以抑制非目标菌株的生长。
3. 提取和纯化条件的选择：选择适当的缓冲液、酶和抑制剂，以保持目标蛋白的活性和稳定性。
4. 实验材料的无菌处理：所有实验材料（包括培养基、平板、显微镜片等）都要经过严格的无菌处理，以防止外源性污染。
大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞的DNA热击的具体步骤及方法
大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞的DNA热击的具体步骤及方法本产品是大肠杆菌BL21(DE3) pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。
该菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
使用pUC19质粒检测，转化效率可达10^7 。
操作方法：1．取感受态细胞置于冰浴中。
一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50 μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4．向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项:1）涂布用量可根据具体实验调整。
若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。
若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
bl21de3基因型 -回复
bl21de3基因型-回复BL21(DE3)基因型是一种被广泛应用于分子生物学研究中的大肠杆菌基因型。
BL21(DE3)是指一株大肠杆菌菌株，DE3则表示其内含有一个重组T7 RNA聚合酶基因。
在本文中，我将逐步解释BL21(DE3)基因型的含义、应用以及工作原理。
首先，我们来介绍一下BL21(DE3)基因型的含义。
BL21(DE3)基因型是指大肠杆菌一株具有特定基因组合的菌株。
其中BL21表示该菌株的基本型号，DE3则表示该菌株具有一个重组T7 RNA聚合酶基因。
T7 RNA聚合酶是一种能够特异性地识别T7启动子的聚合酶，因此在融合了该基因的大肠杆菌中，T7启动子能够高效地驱动外源基因的转录和表达。
BL21(DE3)基因型在分子生物学研究中得到了广泛应用。
这主要归功于其高效的外源基因表达能力。
BL21(DE3)菌株中的T7 RNA聚合酶能够识别T7启动子，在转录过程中高效地驱动外源基因的转录和表达。
这种高效的表达系统可以大大提高外源蛋白的产量，便于后续的纯化和功能研究。
在利用BL21(DE3)基因型进行外源基因表达时，通常需要构建一个含有目标基因的质粒，并利用化学方法或电穿孔法将质粒导入到大肠杆菌中。
接着，将转化后的菌株进行筛选，选择包含目标质粒的细菌克隆。
最后，通过T7 RNA聚合酶的识别和驱动，使转录和表达目标基因。
BL21(DE3)基因型还可以与其他辅助的工具和系统一起使用，以进一步提高外源基因的表达效率。
例如，可以利用大肠杆菌中的分泌系统来帮助将产生的蛋白在菌体内向外分泌，从而便于纯化和功能研究。
此外，还可以通过调控T7 RNA聚合酶基因的表达，实现目标基因的适时和高效表达。
总结起来，BL21(DE3)基因型是一种被广泛应用于分子生物学研究中的大肠杆菌基因型。
其具有高效的外源基因表达能力，能够提高外源蛋白的产量，并便于后续的纯化和功能研究。
通过将目标质粒转化到BL21(DE3)菌株中，并利用T7 RNA聚合酶的驱动，可以实现目标基因的高效转录和表达。
BL21感受态细胞使用说明
BL21感受态细胞使用说明BL21(DE3)感受态细胞是一种在实验室中常见的背景大肠杆菌菌株，其DE3代表了它含有T7RNA聚合酶基因。
BL21(DE3)细胞表达系统适用于表达外源蛋白质，并且能够通过识别和转录外源DNA的T7启动子来高效表达目的蛋白。
在使用BL21(DE3)细胞表达系统时，需要同时存在T7RNA 聚合酶和T7启动子，以使外源DNA得到高效转录和表达。
以下是BL21(DE3)感受态细胞的使用步骤：1.菌种培养：将BL21(DE3)感受态细胞转化到含有适当抗生素的琼脂平板上，如氨苄青霉素、卡那霉素等，并在37°C的培养箱中过夜孵育。
在转化后的菌落成熟后，挑取一到两个单独的菌落转移到含有相同抗生素的培养基中，进行孵育。
2. 制备预培养液：将一小部分BL21(DE3)感受态细胞预培养在含有抗生素的LB培养基中。
在37°C培养箱内静止摇床上，以200-220rpm的速度震荡培养约8-12小时，直到OD600达到0.6-1.0。
3. 大规模发酵：将预培养液转移至适当的培养基中，并继续在37°C培养箱内进行搅拌发酵，以200-220rpm的速度搅拌，并通过控制温度和氧气通气来促进菌落的生长和大量表达。
4.蛋白质表达诱导：当菌液的OD600达到0.6-1.0时，加入适量的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）来诱导蛋白质的表达。
通常的IPTG浓度为0.1-1mM。
5.培养细胞：继续在适当的温度和搅拌速度下培养细胞。
对于大多数蛋白质，24小时的表达时间通常是足够的。
然而，一些蛋白质可能需要更长的表达时间。
6.收获菌体：当蛋白质表达时间达到需要的程度后，通过离心将细胞沉淀下来。
收集细胞沉淀，并在低温条件下保存。
7.蛋白质纯化：收获的细胞沉淀可用于后续的蛋白质纯化步骤。
通常，这涉及到细胞破碎、固定和鉴定表达的蛋白质。
总结起来，BL21(DE3)感受态细胞的使用包括菌种培养、预培养液制备、大规模发酵、蛋白质表达诱导、培养细胞、收获菌体和蛋白质纯化等步骤。
大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α、DH10B
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1。
E.coli BL21 使用说明书
包装量 100 μl×10支
10 μl×1支
Chaperone Competent Cell pGro7/BL21（D9122）
组份名称 Chaperone Competent Cell pGro7/BL21 pUC19 DNA（0.1 ng/μl）
包装量 100 μl×10支
10 μl×1支
Chaperone Competent Cell pKJE7/BL21（D9123）
用。如想继续使用，请在干冰/乙醇中冻结，-80℃保存，此时转 化效率可能会降低 1 个数量级以上。 3. 使用 100 μl 感受态细胞转化时，待转化 DNA 的纯度非常高时， 使用量一定控制在 10 ng 以下，否则效率会降低。 4. 转化规模改变（如感受态细胞使用量发生改变）,或换用了其它 tube 等，需研讨转化条件（使用一般的 1.5 ml tube 时，请于 42℃ 保温 60 秒）。 5. 除 SOC 培养基外，L-broth 及φb-broth 也可使用，但转化效率 会有所下降。 6. 本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC的复制起点和 氯霉素抗性基因（Cmr基因），E.coli表达系统中可以使用常用的 ColE1 型、具氨苄抗性（Ampr）筛选标记的表达载体，但不可 与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。
组份名称 TaKaRa Competent Cell BL21 pUC19 DNA（0.1 ng/μl）
包装量 100 μl×10支
10 μl×1支
表 1 : 各质粒编码的伴侣蛋白种类及诱导物
No Plasmid
Chaperone
Promoter
Resistant Marker
Inducer (终浓度)
保存 1. -80℃。如果未保存在-80℃条件下，转化效率会降低。当担心转
BL21大肠杆菌菌株使用说明
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆
菌落进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻
管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
培 养 基 LB
培养温度 37℃
保存方式 20%甘油，-‐80℃
ห้องสมุดไป่ตู้
基 因 型 F-‐, ompT, hsdSB (rB-‐mB-‐), gal, dcm
菌 株 简 介 :
E.coli BL21 来源于 B 株, 是最早开发的用于原核表达的菌株，为 Lon
蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表达的外源蛋白在该体
系 中 具 有 更 高 的 稳 定 性 。 本 制 品 有 利 于 外 源 蛋 白 的 稳 定 表 达 。
本菌株可用于 pCold I-‐IV DNA 和 pCold TF DNA 的蛋白质表达，但不适
合于启动子为 T7 的蛋白质表达体系，如 pET 系列，因为 BL21 宿主不表
达 T7 RNA 聚合酶。另外，不建议使用此菌株构建或制备质粒，因为它不
是 recA 基因缺失型菌株。
该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含 T7 RNA 聚合酶，所以不能用
于由 T7 启动子驱动的蛋白表达(如：pET 系列)；但含有大肠杆菌 RNA 聚
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养 24-‐72h
BL21 Gold pLysS(DE3)化学感受态使用说明
BL21 Gold pLysS(DE3)化学感受态BL21 Gold pLysS(DE3) Chemically Competent CellBL21 Gold pLysS(DE3)化学感受态细胞基本信息：BL21 Gold pLysS(DE3)基因型:E. coli B F- dcm+ Hte ompT hsdS(r B- m B-) gal λ (DE3) [pLysS Cam r]a endA Tet rBL21 Gold pLysS(DE3)菌株介绍：BL21 and BL21-Gold-derived competent cells are designed for high-level protein expression using T7 RNA polymerase-based expression systems.‡‡ The BL21(DE3)pLysS and BL21-Gold(DE3)pLysS competent cells provide tighter control for expression of toxic proteins. When used with the CE6 bacteriophage, the BL21 and BL21-Gold cells provide the tightest control of protein expression, important for extremely toxic proteins. In addition, the BL21 and BL21-Gold cells can be used for non-T7 RNA polymerase protein expression systems. All BL21 strains are deficient in the OmpT and Lon proteases, which may interfere with isolation of intact recombinant proteins. Use the BL21 or the BL21-Gold competent cells and its derivatives with T7 promoter-driven vectors, such as the Affinity® pCAL vectors and pET vectors.BL21 Gold pLysS(DE3)使用说明:1.本产品采用干冰运输，收到后请直接冻存于-80℃冰箱。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞使用说明
BL21(DE3)pLysS感受态细胞使用说明BL21(DE3)pLysS感受态细胞使用说明感受态细胞在生物技术领域中扮演着重要的角色，能够有效地表达外源蛋白，并被广泛应用于蛋白质表达、抗体产生、酶工程等方面。
BL21(DE3)pLysS是一种常用的感受态细胞系，本文将对其使用说明进行详细介绍。
一、BL21(DE3)pLysS细胞的特点BL21(DE3)pLysS细胞是一种缺失棘突病毒抗性基因（lysozyme）的感受态大肠杆菌细胞系。
该细胞系具有以下特点：1. 能够高效表达外源蛋白，产量较高，适用于大规模蛋白质表达。
2. 具备感受态特性，能有效产生T7 RNA聚合酶，并且对T7启动子响应较高。
3. 细胞表面表达了T7 RNA聚合酶抑制蛋白（LysS），能够抑制内源性T7 RNA聚合酶的活性，避免了胞内T7 RNA聚合酶的自主大量表达。
二、感受态细胞的培养条件BL21(DE3)pLysS感受态细胞的培养条件与常规大肠杆菌细胞类似，但需要特别留意以下几点：1. 培养基的选择：常用的培养基有LB、TB等。
推荐使用TB培养基，因其含有较高浓度的氨基酸和糖源，可促进蛋白表达。
2. 抗生素选择：推荐添加适量的抗生素（如氨苄青霉素、克林霉素等）以维持感受态细胞的稳定性。
3. 培养温度和转入T7 RNA聚合酶的方式：通常将感受态细胞在37℃下培养至对数期后，加入适量IPTG等诱导剂，激活细胞中的T7 RNA聚合酶基因表达。
也可以在低温（如18℃）下诱导，有助于获得可溶性的重组蛋白。
4. 培养时程：培养时程根据不同的蛋白表达情况而定，通常是在对数期至滚筒培养的4-6小时内进行表达。
三、蛋白表达与纯化BL21(DE3)pLysS细胞的主要应用之一是进行外源蛋白的表达和纯化。
下面是一般的表达和纯化步骤：1. 定义目标蛋白：确定所需表达的外源蛋白序列，并构建相应的重组质粒。
2. 转化重组质粒：将构建好的重组质粒转化到感受态细胞中，通过进行抗生素筛选，获得含重组质粒的菌落。
大肠杆菌BL21和DH5α的区别
DH5a是一种常常使用于质粒克隆的菌株.E.coli DH5a 在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补.可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株.之青柳念文创作
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因.T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上.该菌适合表达非毒性蛋白.
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性.PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，可以降低目标基因的布景表达水平，但不干扰目标蛋白的表达.该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白.
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr
最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别
大肠杆菌DH5α做克隆或保管质粒用，BL21用来做原核表达
用.
当然也有人用DH5α做表达也能表达出来.也有人用BL21保管质粒的，但时间久了，质粒容易丢失.
你要是做原核表达的话，应该会现用前者克隆得到重组质粒，转化入后者停止表达。
BL21(DE3) 感受态细胞使用说明
BL21(DE3)感受态细胞操作步骤及注意事项货号：C1400规格：10×100ul/20×100ul保存：-70℃保存，运输为干冰包装。
自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
产品简介：BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。
使用pUC19质粒检测，转化效率可达107，-70℃保存6个月转化效率不改变。
基因型：F_ompT hsdSB（rB_mB_）dcm gal（DE3）特点：该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃180rpm振荡培养1小时。
目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。
涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA 总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。
过多菌液可以抑制细菌生长。
如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项：1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别-用途-特征解析
常用大肠杆菌感受态 JM109, DH5a , BL21等的区别1:DH5a 菌株DH5a 是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用 pU C 系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F -, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF U 169, deoR , recA 1, endA 1,hsdR17(rk-, mk+, phoA , supE44, λ-, thi-1, gy rA 96, relA 12:BL21(DE3 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7启动子的表达载体(如 pET 系列的基因。
T7噬菌体 RNA 聚合酶位于λ 噬菌体 DE3区,该区整合于 BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F -, ompT , hsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE33:BL21(DE3 pLysS 菌株该菌株含有质粒 pLy sS ,因此具有氯霉素抗性。
PLy sS 含有表达 T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F -, ompT hsdS(rBB-mB -, gal , dcm (DE3, pLy sS , C amr4:JM109菌株该菌株在使用 pU C 系列质粒载体进行 DNA 转化或用 M13 phage载体进行转染时,由于载体 DNA 产生的 LacZa 多肽和 JM09编码的La cZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA 1, endA 1, gy r A 96, thi -1, hsdR17, supE44, re lA 1, Δ(lac -proA B /F’[traD36, proAB+, lacIq , lacZΔM15] 5:TO P10菌株该菌株适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
bl21菌株基因型
bl21菌株基因型BL21菌株基因型BL21菌株是一种常用的大肠杆菌（Escherichia coli）菌株，具有许多重要的基因型特征。
本文将对BL21菌株的基因型进行详细介绍，并探讨其在科研和工业应用中的重要性。
BL21菌株的基因型特征主要包括：F-、ompT、hsdS、rB-、mB-、dcm、TetR。
其中，F-表示BL21菌株缺乏F因子，不具有浓度依赖性转化能力；ompT指的是该菌株缺乏OmpT蛋白酶，使得BL21菌株对外界的抵抗能力较差；hsdS代表BL21菌株具有一种特殊的限制修饰系统，能够识别并限制感染外源DNA；rB-和mB-分别表示BL21菌株的重组和改变基因型特征；dcm则代表该菌株中的DNA甲基化酶缺陷，使得BL21菌株在体外培养时能更容易进行DNA修饰；最后，TetR表示该菌株对四环素具有耐受性。
BL21菌株的基因型特征决定了其在科研和工业应用中的重要性。
首先，由于BL21菌株缺乏F因子，因此在进行重组DNA的克隆实验时能够有效地避免外源DNA的传播。
其次，BL21菌株缺乏OmpT蛋白酶，使得其对外界的抵抗力较弱，能够更容易地进行蛋白表达，从而方便进行蛋白的纯化和研究。
此外，BL21菌株具有限制修饰系统，避免了外源DNA的限制修饰，使其在进行重组DNA的表达时更加高效。
此外，BL21菌株中的DNA甲基化酶缺陷使得其在体外培养时更容易进行DNA修饰，进一步提高了蛋白表达的效率。
最后，BL21菌株对四环素具有耐受性，可用于进行耐药基因的筛选和研究。
除了上述基因型特征外，BL21菌株还具有一些其他的特点。
例如，BL21菌株是一种非常常见的大肠杆菌菌株，易于培养和扩增。
此外，BL21菌株具有较高的生长速度和较高的蛋白表达能力，可以用于大规模蛋白表达和产业生产。
此外，BL21菌株还具有较高的遗传稳定性，适合进行长期保存和传代。
BL21菌株的基因型特征使其在科研和工业应用中具有重要的地位。
大肠杆菌BL21和DH5α的区别
DH5a是一种经常使用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a 在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
之勘阻及广创作
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）
BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的布景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr
最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别
大肠杆菌DH5α做克隆或保管质粒用，BL21用来做原核表达用。
当然也有人用DH5α做表达也能表达出来。
也有人用BL21保管质粒的，但时间久了，质粒容易丢失。
你要是做原核表达的话，应该会现用前者克隆得到重组质粒，转化入后者进行表达。
BL21 Star(DE3)感受态细胞使用说明
菌株类型: E.coli 培养基: LB 培养基 生长条件: 37 ℃, 有氧 抗性: 无 应用: 蛋白表达 质粒转化条件：
--
诱导方法: -菌株特点: 1. 来源于 BL21(DE3)菌株。 2. 含有 rne131 基因突变体，rne131 突变基因能够增强菌株细胞内 mRNA 的稳定性，从而 有效提高蛋白表达能力。 3. 主要适用于 T7 启动子载体的高水平蛋白表达。 华越洋其他感受态细胞：
AD494 AD494(DE3) AD494(DE3)pLysS AGL1 AH109 B834 B834(DE3) B834(DE3)pLysS B834，B834(DE3) ，B834(DE3)pLysS BJ5183 BL21 BL21 Star(DE3) BL21 Star(DE3)pLySs BL21 trxB(DE3) BL21 trxB(DE3)pLysS BL21(DE3) BL21(DE3)pLacI BL21(DE3)pLySs BL21-AI BL21-Gold(DE3) BL21-SI BLR BLR(DE3) BLR(DE3)pLysS C41(DE3) C41(DE3), C41(DE3)PlysS C41(DE3)pLysS C43(DE3) OverExpress Competent Cells C43, C43(DE3) DB3.1 DH10B DH10B UltraCompetent cells DH10Bac DH10MultiBac DH5α DH5α- T1 UltraCompetent Cells DH5α UltraCompetent cells DMT EGY48 EHA101 EHA101,EHA101 EHA103 EHacompetent cells Origami Origami 2 Origami 2(DE3) Origami 2(DE3)pLacI Origami 2(DE3)pLysS Origami B Origami(DE3) Origami(DE3)pLacI Origami(DE3)pLysS OrigamiB(DE3) OrigamiB(DE3)pLacI OrigamiB(DE3)pLysS RN4220 Rosetta Rosetta 2 Rosetta 2(DE3)pLySs Rosetta(DE3) Rosetta(DE3)pLacI Rosetta(DE3)pLySs Rosetta2(DE3) Rosetta2(DE3)pLacI RosettaBlue RosettaBlue(DE3) RosettaBlue(DE3)pLacI RosettaBlue(DE3)pLysS Rosetta-gami Rosetta-gami 2 Rosetta-gami 2(DE3) Rosetta-gami 2(DE3)pLysS Rosetta-gami B Rosetta-gami B(DE3) Rosetta-gami B(DE3)pLacI Rosetta-gami B(DE3)pLysS Rosetta-gami(DE3) Rosetta-gami(DE3)pLacI Rosetta-gami(DE3)pLysS Rosetta-gami2(DE3)pLacI Rosseta(DE3) Stbl2 Stbl3 Stbl3 Ultracompetent Cells Sure
大肠杆菌BL21和DH5α的区别
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）
BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr
最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别
大肠杆菌DH5α做克隆或保存质粒用，BL21用来做原核表达用。
当然也有人用DH5α做表达也能表达出来。
也有人用BL21保存质粒的，但时间久了，质粒容易丢失。
你要是做原核表达的话，应该会现用前者克隆得到重组质粒，转化入后者进行表达
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编辑版word。
E.coli BL21 使用说明书
化效率降低时，请使用本试剂盒中提供的pUC19做转化实验， 确认转化效率。 2. 不要将该制品保存在液氮中。
实验操作 1. 感受态细胞使用前在冰中融化。 2. 融化后，轻柔混合均匀，取100 μl移入Falcon tube中（不可以
本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pacyc的复制起点和氯霉素抗性基因cmr基因ecoli表达系统中可以使用常用的cole1型具氨苄抗性ampr筛选标记的表达载体但不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用
Chaperone Competent Cells BL21 系列
使用说明书
Takara Code : D9120-9125
组份名称 Chaperone Competent Cell pKJE7/BL21 pUC19 DNA（0.1 ng/μl）
包装量 100 μl×10支
10 μl×1支
Chaperone Competent Cell pG-Tf2/BL21（D9124）
组份名称 Chaperone Competent Cell pG-Tf2/BL21 pUC19 DNA（0.1 ng/μl）
霉素（20 μg/ml）及表达质粒选择性生长所需的抗生素（氨 苄青霉素50-100 μg/ml等）。当使用TaKaRa Competent Cell BL21时，LB平板中只含表达质粒选择性生长所需的抗生素就 可以了。 注2）使用直径9 cm的平板时，请取100 μl以下的培养液涂布平板。
使用注意 1. 感受态细胞一定要用干冰运输。 2. 只取出需要量的感受态细胞，融化过的感受态细胞建议不要再使
araB
Cm
L-Arabinose (0.5-4 mg/ml)
BL21(DE3)pLysS感受态细胞使用说明
BL21(DE3)pLysS感受态细胞BL21(DE3)pLysS Chemically Competent CellBL21(DE3)pLysS感受态细胞基因型：F-omp T hsd S(r B-m B-) gal dcm(DE3)pLysS Cam rBL21(DE3)pLysS感受态细胞说明：BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。
pLysS含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。
BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/µg DNA。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞操作方法：1.BL21(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞注意事项：1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
大肠杆菌BL21和DH5α的区别
DH5a是一种经常使用于质粒克隆的菌株.E.coli DH5a 在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补.可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株.之杨若古兰创作
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因.T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上.该菌适合表达非毒性蛋白.
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS，是以具有氯霉素抗性.PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的布景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达.该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白.
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr
最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别
大肠杆菌DH5α做克隆或保管质粒用，BL21用来做原核表达
用.
当然也有人用DH5α做表达也能表达出来.也有人用BL21保管质粒的，但时间久了，质粒容易丢失.
你如果做原核表达的话，应当会现用前者克隆得到重组质粒，转化入后者进行表达。
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编号
名称
北京华越洋生物 NRR01290
BL21 大肠杆菌菌株
基 本 信 息 ：
名称 BL21 大肠杆菌菌株
规格 300ul 甘油菌
类别 大肠杆菌表达菌株
抗性 无
合于启动子为 T7 的蛋白质表达体系，如 pET 系列，因为 BL21 宿主不表
达 T7 RNA 聚合酶。另外，不建议使用此菌株构建或制备质粒，因为它不
是 recA 基因缺失型菌株。
该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含 T7 RNA 聚合酶，所以不能用
于由 T7 启动子驱动的蛋白表达(如：pET 系列)；但含有大肠杆菌 RNA 聚
蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表达的外源蛋白在该体
系 中 具 有 更 高 的 稳 定 性 。 本 制 品 有 利 于 外 源 蛋 白 的 稳 定 表 达 。
本菌株可用于 pCold I-‐IV DNA 和 pCold TF DNA 的蛋白质表达，但不适
合酶，可以用于 tac 或 trc 等使用大肠杆菌 RNA 聚合酶的原核系统的表达
（如：pGEX，pMAL 质粒）。
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表
面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数
的增加，细菌的活力会逐渐下降。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养 24-‐72h
（必要时，可适当延长培养时间）。 菌 株 传 代 ：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量 增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓 慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。 注 意 事 项 ： 1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放 置会导致菌种衰退； 2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行； 3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能 正常生长； 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来 电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧 状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-‐10%CO2 促 进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保 藏 条 件 ： -‐20℃保存（复溶液于 2-‐8℃保存） 保 藏 时 间 ： 2-‐10 年，应根据菌种状况及时转接
培 养 基 LB
培养温度 37℃
保存方式 20%甘油，-‐80℃
基 因 型 F-‐, ompT, hsdSB (rB-‐mB-‐), gal, dcm
菌 株 简 介 :
E.coli BL21 来源于 B 株, 是最早开发的用于ห้องสมุดไป่ตู้核表达的菌株，为 Lon
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆
菌落进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻
管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。