邻二氮菲分光光度计法测铁含量文献综述和实验设计要点
实验3邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
实验三邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一、实验目的 1. 2. 3.学会722S型分光光度计的正确使用了解其工作原理。
4.学会数据处理的基本方法。
5. 二、实验原理根据朗伯—比耳定律Aεbc当入射光波长λ及光程b一定时在一定浓度范围内有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标浓度c为横坐标的标准曲线测出试液的吸光度就可以由标准曲线查得对应的浓度值即未知样的含用分光光度法测定试样中的微量铁可选用的显色剂有邻二氮菲又称邻菲罗啉及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。
而目前一般采用邻二氮菲法该法具有高灵敏度、高选择在pH29的溶液中Fe2与邻二氮菲phen生成稳定的桔红色配合物Fephen32 此配合物的lgK稳21.3摩尔吸光系数ε510 1.1×104 L·mol-1·cm-1而Fe3能与邻二氮菲生成3∶1配合物呈淡蓝色lgK稳14.1。
所以在加入显色剂之前应用盐酸羟胺NH2OH·HCl 将Fe3还原为Fe2 2Fe3 2NH2OH·HCl → 2Fe2 N2 H2O 4H 2Cl- 测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。
三、仪器与试剂722S型或721型分光光度计、容量瓶100mL50mL 、铁标准溶液含铁0.1mg/ml。
准确称取0.8634g的NH4FeSO42·12H2O 置于烧杯中加入20ml1:1HCl和少量水溶解后定量地转移至升容量瓶中以水稀释之刻度摇匀。
、邻二氮菲0.1510-3mol/L新配制的水溶液。
、盐酸羟胺10水溶液临用时配制、醋酸钠溶液1mol/L 2NN3Fe2NNNNNNFe 四、实验步骤 1. 1 10μg·mL-1铁标准溶液配制准确称取0.8634g硫酸铁铵NH4FeSO42·12H2O于100mL烧杯中加60mL 3mol·L-1 H2SO4溶液溶解后定容至1L摇匀得100μg·mL-1储备液可由实验室提供。
实验五邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
实验五 邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一、实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法; 2．了解分光光度计的构造、性能及使用方法。
二、实验原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。
配合物的稳K lg ＝21.3，摩尔吸光系数510 ＝11000 L·mol -1·cm -1。
在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。
4Fe 3+＋2NH 2OH →4Fe 2+ ＋ N 2O ＋ 4H ＋＋ H 2O测定时，控制溶液pH ＝3较为适宜，酸度高时，反应进行较慢，酸度太低，则二价铁离子水解，影响显色。
用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH 范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。
三、仪器与试剂 1．醋酸钠：l mol·L -1； 2．氢氧化钠：0.4 mol·L -1； 3．盐 酸：6 mol·L -1；、4．盐酸羟胺：100g·L -1（临时配制）；5．邻二氮菲（1.5g·L -1）：0.l5g 邻二氮菲溶解在100mL1:1乙醇溶液中。
6．铁标准溶液(1)100μg ·mL -1铁标准溶液：准确称取0.8634gNH 4Fe （SO 4）2·12H 20于200ml 烧杯中，用6 mol·L -1盐酸20 mL 溶解，移至1 L 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
(2)10 μg·mL -1（即0.01 mg·mL -1）铁标准溶液：用移液管吸取10ml100μg ·mL -1铁标准溶液于100ml 容量瓶中，加入2ml 6 mol·L -1盐酸，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
实验一邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的、掌握邻二氮菲分光
实验一邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1、掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法；2、熟悉吸收曲线绘制及最大吸收波长选择；3、学会标准曲线绘制及应用。
4、了解721型分光光度计的主要构造，并掌握其使用方法。
二、实验原理邻二氮菲(phen)和Fe2+在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 32+，其lgK=21.3，κ508=1.1 × 104L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1～6μg·mL-1范围内遵守比尔定律。
其吸收曲线如下图所示。
显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HC1＝2Fe2+ + N2↑+ 2H2O + 4H+ + 2C1－图1-1 邻二氮菲一铁(Ⅱ)的吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
三、仪器和试剂1、仪器：721型分光光度计，50mL容量瓶，10mL吸量管，滴定管，洗瓶。
2、试剂：(1) 100ug·mL-1铁标准溶液；(2) 1.0×10-3mol·L-1铁标准溶液；(3) 100g·L-盐酸羟胺水溶液（新配）；(4) 1.5g·L-1邻二氮菲水溶液；(5) 1.0mol·L-1乙酸钠溶液；(6) 0.1mol·L-1氢氧化钠溶液。
四、实验步骤1、显色标准溶液的配制取6只 50 mL 容量瓶，并且对其编号(1-6号)。
用吸量管依次加入0,0.20,0.40,0.60,0.80,1.0 mL 100ug·mL-1铁标准溶液，分别加入1 mL 100g· L-盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min，再各加入5 mL 1.0mol·L-1乙酸钠溶液和2mL1.5g·L-1邻二氮菲水溶液，以水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1.学习确定实验条件的方法和测定微量铁的分光光度法；2.掌握TU—1901型双光束紫外可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理1.在可见光分光光度法测定无机物时，通过显色反应生成吸光系数较大的有色物质进行测。
2.确定适宜实验条件：改变其中一个影响因素，暂时固定其它影响因素，测吸光度，通过吸光度一该因素的曲线确定最适宜的显色条件。
其他因素的确定也照此方法。
3.本实验以邻二氮菲(phen)为显色剂，是光度法测定微量铁的优良试剂，PH 在2~9时(PH=5~6),Fe2++3phen，[Fe(phen)3]2+(稳定的红色配合物)IgK稳二21.3,λmax=510nm,ε5ιo=1.1×1041∙cm-1∙moΓ1用盐酸羟胺将Fe(III)还原为Fe(II),以邻二氮菲做显色剂可测定试样中铁含量。
本方法选择性高，杂离子难以干扰。
三、仪器与试剂TU-1901型双光束紫外可见分光光度计，Icm比色皿，1Om1吸量管，50m1比色管。
1.0x10-3mo1∙1-ι铁标准溶液，100μg∙m1-ι铁标准溶液，0.15%Phen水溶液，10%盐酸羟胺溶液，1mo1∙1∕醋酸钠溶液，工业盐酸(试样)。
四、实验操作1.吸收曲线的绘制和测量波长的选择用吸量管吸取2.0Om11OX1O-3mo1∙1”铁标准溶液注入50m1比色管中，再加入 1.0Om110%盐酸羟胺溶液，摇匀后，加入 2.00m10.15%phen水溶液和5.00m11mo1∙1"醋酸钠溶液，稀释至刻度线，摇匀。
以蒸储水为参比液,将上述试液装入ICm比色皿(2/3左右),在440nm~560nm 之间，每隔5nm测一次吸光度，以吸光度A为纵坐标，波长λ为横坐标绘制吸收曲线，选择最适宜波长。
2.确定显色条件⑴显色剂的用量在6支50m1比色管中各加入2.0Om11.Ox1OCmo11"铁标准溶液和1.00m110%盐酸羟胺溶液，摇匀后，分别加入0.10、0.50、1O0、2.00、3.00、4.00m10.15%phen水溶液，再加入5.0Om1Imo1∙1“醋酸钠溶液，，稀释至刻度线，摇匀。
实验_邻二氮菲分光光度法测定铁
实验邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1 掌握研究显色反应的一般方法；2 测定未知试样中的铁含量．二、实验原理由于某些无机离子本身没有颜色或者浓度低颜色过浅，其吸光值与浓度的关系不在线形范围内，则需要显色剂与被测物形成有色配合物。
该配合物的浓度与吸光度能够符合朗伯比尔定律。
因而可以间接测定出被测物的浓度。
(1) 显色剂与被测物的λmax应相距60 nm以上(2) 显色剂的用量：a保证显色完全，b用量过多会产生副反应(3) 显色时间：有些反应瞬时完成，溶液颜色很快达到平衡状态，并长时间保持不变．有些能迅速完成，但褪色较快，有些反应则较慢。
(4) pH值的影响：影响显色剂的溶解和金属的离子状态，进而影响有色配合物的生成和稳定性。
HR＝H- + R+酸浓度改变，平衡移动三、实验步骤(一) 绘制吸收曲线取两个25mL容量瓶，其中一个加入0.3mL铁标准溶液，然后在两国容量瓶中各加入0.5mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置2min。
各加入1.0mL邻二氮菲溶液和2.5mL 醋酸钠溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
用水作参比溶液，分别绘制上述两种溶液的吸收曲线。
再用不含铁的试剂溶液作参比溶液，绘制有色配合物的吸收光谱。
比较上述3种吸收光谱，选取合适的测定波长。
（二）显色剂用量实验：在8个50 mL比色管中，加入0.30 mL铁标准溶液，0.5 mL盐酸羟氨溶液，然后分别加入邻二氨菲溶液0，0.1，0.3，0.5，0.7，1.0，1.5和2.0 mL。
最后在个瓶中加入2.5 mL醋酸钠溶液，用水稀释至25 mL刻度，摇均，用1 mL比色皿，从不含显色剂的溶液作参比溶液，在508 nm下测定吸光度，记下各个吸光度值。
(三) pH值的影响：在7个50 mL比色管中，加入0.3 mL铁标准溶液，0.5 mL盐酸羟氨溶液．静置2 min后，个加入1.0 mL邻二氨菲溶液，然后用滴定管依次加入0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 mL氢氧化钠溶液，用水稀释至25 mL刻度摇均（用pH计测定上列溶液的pH值，记下其数值）．用1 cm比色皿，以水作参比溶液，在508 nm测定吸光度，记下吸光度值。
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一. 实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。
2．学习标准曲线的制作方法。
3．了解721型分光光度计的构造及使用方法。
二．实验原理在测定微量铁时，通常以盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，在PH为2—9的范围内，Fe2+与邻二氮菲反应生成稳定的橙红色配合物，其lgK fθ=21.3。
该配合物的最大吸收波长为510nm。
本方法不仅灵敏度高（摩尔吸光系数ε=1.1×104），而且选择性好。
相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO2-3，20倍的Cr3+、Mn2+、V(V)、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定。
Fe2+与邻二氮菲在PH=2—9范围内均能显色，但酸度高时，反应较慢，酸度太低时Fe2+易水解，所以一般在PH=5—6的微酸性溶液中显色较为适宜。
邻二氮菲与Fe3+能生成3:1的淡蓝色配合物（lgK fθ=14.1），因此在显色前应先用还原剂盐酸羟胺将Fe3+全部还原为Fe2+（2Fe3++2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl-）。
三．仪器与试剂1. 仪器：(1) 721型分光光度计。
(2) 50mL容量瓶7只/组。
(3) 10mL、5mL、2mL、1mL移液管。
2. 试剂：(1)100µg·mL-1的铁标准溶液：准确称取0.8634gNH4Fe(SO4)2·12H2O于烧杯中，加入20mL1:1的HCl和少量水溶解后，定量转移至1升容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
所得溶液含Fe3+100µg·mL-1。
(2) 10µg·ml-1的铁标准溶液：准确移取25.0mL 100µg·mL-1的铁标准溶液于250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
07实验7 邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
722S型或721型分光光度计、容量瓶(100mL,50mL)、吸量管 １、铁标准溶液：含铁0.1mg/ml。 准确称取0.8634g的NH4Fe(SO4)2·12H2O，置于烧杯中，加入 20ml1:1HCl和少量水,溶解后,定量地转移至１升容量瓶中，以水稀释之 刻度，摇匀。 ２、邻二氮菲：0.15％(10-3mol/L)新配制的水溶液。 ３、盐酸羟胺： 10％水溶液（临用时配制） ４、醋酸钠溶液 1mol/L
实验七 邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
一、实验目的
1.学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2.掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。 3.学会722S型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。 4.学会数据处理的基本方法。 5.掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理
根据朗伯—比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时， 在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要 绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光 度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。同时，还 可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结 果。
选用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液(为什么?)，取4号容量瓶 试液，选择440～560nm波长，每隔10nm测一次吸光度，其中500～520nm 之间，每隔5nm测定一次吸光度。以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长 λ为横坐标，在坐标纸上绘制A与λ的吸收曲线。从吸收曲线上选择测 定Fe的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax为测定波长。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用的显色剂有邻二氮菲 (又称邻菲罗啉)及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。而目前一般采 用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消 除等优点。
邻二氮菲分光光度计法测铁含量文献综述和实验设计
可见分光光度法测定铁的条件实验可见分光光度法测定铁的条件实验文献综述和实验设计院系：检验学院班级：12 级生物技术班指导老师：**小组成员：沈艳林、田赋、邓纯纯、郑祥、谭诗航、苏曼、邱丽莎、殷良俊、易柳摘要 (1)引言 (2)正文 (3)1 分光光度技术 (3)2 分光光度法测定元素铁含量的研究概况 (3)3 分光光度法测定铁的6种方法 (3)3.1 邻二氮菲分光光度法 (3)3.1.1 方法原理 (3)3.1.2 化学反应式 (3)3.2 BPT-OP分光光度法 (3)3.3 硫氰酸盐分光光度法测铁含量 (3)3.3.1 方法提要 (3)3.3.2 主要反应 (3)3.4 磺基水杨酸分光光度法测铁含量 (3)3.4.1 方法原理 (3)3.5 固相萃取分光光度法测铁含量 (3)3.5.1 方法原理 (4)3.6 用火焰原子吸收分光光度法测铁含量 (4)3.6.1 方法原理 (4)4 邻二氮菲分光光度法测铁含量 (4)4.1 邻二氮菲法简介 (4)4.2 邻二氮菲法的优点 (4)5 邻二氮菲分光光度法测铁含量最适条件的选择 (4)5.1 如何确定适宜的条件 (4)5.2 最适波长的选择 (4)5.3 显色剂用量的选择 (4)5.4 显色时间的选择 (4)5.5 溶液pH的选择 (4)5.6 显色温度的选择 (5)6 对邻二氮菲分光光度法测铁含量实验改进 (5)参考文献 (6)实验设计部分 (7)本文主要研究用邻二氮菲分光光度法测定新血宝胶囊中总铁含量的分析方法。
采用了邻二氮菲作显色剂、盐酸羟胺作还原剂，以工作曲线法测定总铁含量，对邻二氮菲分光光度法测定铁主要测量条件如测量波长、显色剂用量及显色时间等进行研究确定，提高分析检测的灵敏度，且讨论了测定的最佳条件，找出处理方法的良好条件和良好效果。
本法灵敏、可靠，便于推广。
【关键词】邻二氮菲；分光光度法；新血宝胶囊；铁含量引言铁元素为人体重要元素之一，人体缺血容易导致一些贫血症状甚至疾病，人体缺血会影响血红蛋白，肌红蛋白的合成，是某些酶的活性降低，引起人体某些生理上的变化，从而导致免疫力降低，智力降低，机体抵抗力降低而引起一系列疾病产生。
邻二氮菲测铁实验报告
邻二氮菲测铁实验报告篇一：邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告实验一、邻二氮菲分光光度法测定微量铁XX级医学检验 3组吴茳铃 XX221885实验目的和要求1、掌握紫外可见分光光度计的基本操作；2、掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法；3、掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择；4、掌握标准曲线绘制及应用。
实验原理邻二氮菲（1,10—邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe形成红色配位离子2+Fe2+2++3NNFe3在pH=3~9范围内，该反应能够迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1×104，反应十分灵敏，Fe2+ 浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。
实验中，采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。
实验仪器与试剂1. 752S型分光光度计2. 标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）3. 邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）4. 盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）5. NaAC缓冲溶液6. 50ml 容量瓶7个 8.1cm玻璃比色皿2个 9. 铁样品溶液实验步骤1、标准系列溶液及样品溶液配制，按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液。
用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在各个波长处的吸光度，绘制吸收曲线，并找出最大吸收波长。
绘图如下：选择的最大吸收波长为：λmax = 510nm3、标准曲线制作在选定最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2至7号溶液的吸光度，平行测定3次，计算吸光度平均值，绘制标准曲线。
绘制标准曲线：实验数据处理1、样品中铁的计算Cx=C读取值×50.00/2.50=0.05×20=1×10(mol/L)2、摩尔吸光系数计算在标准曲线的直线部分选择量两点，读取对应的坐标值，计算邻二氮菲配位物在最大吸收波长出的摩尔吸光系数：ε=(A2－A1)/(c2－c1)=(0.461—0.233)/(0.04×10-3—0.02×10-3)=1.14×104L/(mol·cm)-3实验讨论1、查资料红色配位物的摩尔吸光系数与实验计算一致，影响成败的关键可能有：标准液和样品液的配置不准、分光光度计使用不当。
实验一--邻二氮菲分光光度法测定铁
实验一邻二氮菲分光光度法测定铁[实验目的]1、了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方法。
2、掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法。
3、了解721型（或722型）分光光度计的构造和使用方法。
[实验原理]Fe2+与邻二氮菲反应生成红色配合物，在波长510nm（最大吸收波长）处，其吸光度的高低与浓度的关系符合朗伯—比尔定律。
Fe2+与邻二氮菲在PH为2—9范围都能形成稳定的红色配合物，但在5—6时最佳。
铁必须是以Fe2+形式反应，因此显色前要加入还原剂，通常用盐酸羟胺作为还原剂，反应式如下：4Fe3+＋2NH2OH = 4Fe2+＋N2O↑＋4H+＋H2OFe2+与邻二氮菲的反应式如下：[试剂和仪器]1、试剂：0.1mg/mL标准铁溶液：准确称取0.8634g分析纯铁铵矾［NH4Fe（SO4）2·12H2O］置于烧杯中加入20mL6mol·L-1的HCl溶液，溶解后转入1000mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
(或0.702 0 g NH4Fe(S04)2·6H20)1.5 g·L-1邻二氮菲水溶液避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。
100 g·L-1盐酸羟胺水溶液用时现配。
1mol·L-1NaAc溶液0.1mol·L-1NaOH溶液2、仪器 721（或722）型分光光度计一台（包括比色皿一套）、50mL容量瓶10只、5mL吸量管2支其它辅助器皿[实验步骤]（一）、工作条件试验1、吸收曲线的绘制用吸量管吸取1mL标准铁溶液，注入50mL容量瓶中，依次加入1mL盐酸羟铵溶液（摇匀）、2mL邻二氮菲溶液、5mL1mol/LNaAc溶液，定容至刻度，摇匀。
在721（或722）型分光光度计上，用1cm比色皿，一试剂空白为参比溶液在波长为440～560nm间，间隔10nm测定一次吸光度（在最大吸收波长附近，每隔2nm测定一次）。
以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择吸收峰最高点所对应的波长为工作波长。
邻二氮菲分光光度法测铁 实验报告
邻二氮菲分光光度法测铁实验报告一、实验目的1、掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法。
2、学会使用分光光度计测量物质的吸光度。
3、了解标准曲线的绘制和应用，通过标准曲线计算样品中铁的含量。
二、实验原理在 pH 为 2～9 的溶液中，邻二氮菲（phen）与 Fe2+能生成稳定的橙红色配合物Fe(phen)32+，其 lgK 稳＝ 213，摩尔吸光系数ε510 ＝11×104 L·mol-1·cm-1。
在显色前，先用盐酸羟胺将 Fe3+还原为 Fe2+：2Fe3+ ＋2NH2OH·HCl → 2Fe2+ ＋N2↑ ＋ 4H+ ＋ 2Cl ＋ 2H2O显色时，控制溶液的酸度在 pH 为 5 左右较为适宜。
根据朗伯比尔定律：A ＝εbc，其中 A 为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b 为液层厚度（通常为比色皿的光程长度），c 为溶液的浓度。
通过测量不同浓度的标准溶液的吸光度，绘制标准曲线，可由样品溶液的吸光度在标准曲线上查出对应的浓度。
三、实验仪器与试剂1、仪器722 型分光光度计容量瓶（50 mL、100 mL）移液管（1 mL、2 mL、5 mL、10 mL）刻度吸管（5 mL、10 mL）烧杯（50 mL、100 mL）玻璃棒洗瓶2、试剂铁标准储备液（100 μg·mL-1）：准确称取 07020 g 硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O，溶于 50 mL 1:1 硫酸中，转移至 1000 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
铁标准使用液（10 μg·mL-1）：准确吸取 1000 mL 铁标准储备液于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲溶液（15 g·L-1）：称取 075 g 邻二氮菲，溶于 50 mL 无水乙醇中，加水稀释至 500 mL，摇匀，储于棕色瓶中。
盐酸羟胺溶液（100 g·L-1）：称取 10 g 盐酸羟胺，溶于水并稀释至 100 mL，摇匀。
邻二氮菲分光光度测定铁的含量
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量实验报告班级姓名学号成绩：一、实验预习（一）实验目的1、熟悉可见分光光度计的工作原理及操作规程；2、能够运用邻二氮菲分光光度法测定铁的含量。
（二）实验原理从光源钨灯发出的光，经单色器分出一组平行单色光。
当单色光通过待测溶液时，被溶液中具有一定特征吸收的化合物吸收，吸收大小与溶液中待测物浓度的关系符合朗伯—比尔定律：A= logI0/I=KCL式中：A—吸光度I0—入射光强度I—透射光强度K—吸收系数L—光路长度C—溶液中待测物浓度邻二氮菲和Fe2+在pH=3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合，为其吸收曲线如图a所示。
显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应式如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl = 2Fe2+ + N2 ↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl-图a 最大吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度（A），以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
（三）实验用仪器和试剂仪器：可见分光光度计、电子天平、5mL量筒、50mL 量筒、50mL容量瓶、100ml烧杯、250mL烧杯试剂：铁标准溶液、10%盐酸羟胺溶液、0.15%邻二氮菲、CH3COONa·3H2O （四）实验步骤1、1 mol·L-1 CH3COONa溶液将100mL烧杯置于电子天平上，归零，取13.6g CH3COONa·3H2O放入100mL 烧杯中，取下烧杯。
用筒量量取50mL蒸馏水倒入装有CH3COONa·3H2O的烧杯中，搅拌至固体完全溶解备用。
实验9邻二氮菲分光光度法测定水样中的铁含量(精)
一、实验目的
1．学会吸收曲线的绘制，了解分光光度法 2．掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁实 3．学会722型分光光度计的正确使用，了 解其工作原理。 4.掌握通过工作曲线法求出未知水样中铁的 含量。
二、实验原理
在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲 (phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+：
2mL1.5g.L-1邻二氮菲溶液、5mL1.0mol.L-1乙酸钠
溶液，以水稀释至刻度，摇匀。
2．
选用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液(1号 )， 取 2 号容量瓶试液，选择 440 ～ 560nm 波长，每隔 10nm测定一次吸光度。以所得吸光度 A 为纵坐标， 以相应波长 λ 为横坐标，在坐标纸上绘制 A-λ 的吸 收曲线。从吸收曲线上选择测定 Fe的适宜波长， 一般选用最大吸收波长λmax为测定波长。
3．标准曲线的测绘 以步骤1中试剂空白溶液（1号）为参比，用
1cm吸收池，在选定波长下测定2~6号各显色标准
溶液的吸光度。在坐标纸上，以铁的浓度为横坐 标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标吸取25.00mL水样，加入50mL的容量瓶中，
分别加入1mL100g.L-1盐酸羟胺溶液，摇匀后放置
2min，再各加入2mL1.5g.L-1邻二氮菲溶液、 5mL1.0mol.L-1乙酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇 匀，在相同条件下测量吸光度，由标准曲线查出 并计算出试样中微量铁的质量浓度。
四、处理数据与结果计算
吸收曲线的绘制
标准曲线绘制
水样中铁含量计算
2+
N
邻二氮杂菲分光光度法测定铁实验报告
分析化学实验报告实验题目：邻二氮杂菲分光光度法测定铁学院：专业：食品科学与工程班级：姓名：学号：同组者：一．实验目的1.了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方法2.掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法3.了解722型分光光度计的构造和使用方法二．实验原理1.光度法测定的条件：分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反响的条件和测量吸光度的条件。
显色反响的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时溶液温度、显色时间及干扰物质的消除方法等;测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度围和参比溶液等。
2.在PH=2-9的条件下，Fe 2+与邻二氮杂菲〔o-ph 〕生成极稳定的橘红色配合物，反响式如下：此配合物的lgK 稳 =21.3 摩尔吸收系数ε510 =1.1×104在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe 2+ 复原成Fe 3+.其反响式如下： 2Fe 3+ +2NH 2 OH · HC1 ＝2Fe 2+ +N 2↑+2H 2 O+4H + +2C1-测定时，控制溶液酸度在PH=5左右较为适宜。
酸度过高时，反响进展较慢;酸度太低，那么Fe 2+水解，影响显色。
三、实验仪器NN分光光度计、容量瓶、移液管、洗瓶四、实验步骤1.条件实验（1）吸收曲线的测绘准确吸取20 μg·mL-1铁标准溶液5 mL于50 mL容量瓶中，参加5%盐酸羟胺溶液1 mL，摇匀，参加1 mol·L-1NaOAc溶液5 mL和0.1%邻二氮杂菲溶液3 mL。
以水稀释至刻度，摇匀。
放置10 min，在722型分光光度计上，用1 cm比色皿，以水为参比溶液，波长从570 nm到430 nm为止，每隔10 nm测定一次吸光度。
如图1所示，其最大吸收波长为510 nm，故该实验选择测定波长为510 nm。
（2）邻二氮杂菲-亚铁配合物的稳定性用上面溶液继续进展测定，其方法是在最大吸收波长510 nm处，每隔一定时间测定其吸光度，及再参加显色剂后立即测定一次吸光度，经10、20、30、120 min 后，再各测一次吸光度。
试验21邻二氮菲光度法测定微量铁含量
试验21邻二氮菲光度法测定微量铁含量实验21 邻二氮菲光度法测定微量铁含量一、实验目的1. 掌握吸光光度法测定微量铁的原理和方法。
2. 了解分光光度计的性能、结构并掌握其使用方法。
3. 学会刻度吸管的使用方法。
二、实验原理铁的吸光光度法测定所用的显色剂较多，有邻二氮菲及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐、5-Br-PADAP等。
其中邻二氮菲吸光光度法的灵敏度高，稳定性好，干扰容易消除，是一种测定铁的良好而灵敏的方法，因而是目前普遍采用的一种方法。
在pH为2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲（Phen）生成稳定的橘红色络合物Fe(Phen)32+，其lgK=21.3，摩尔吸光系数ε508 = 1.1×104L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1～6μg·mL-1范围内遵守朗伯－比尔定律。
Fe3+也和邻二氮菲生成配合物，因此在显色之前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的酸度范围。
有关反应如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl =2 Fe2+ + N2↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl- 用吸光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法（又称工作曲线法）：（1）配制一系列浓度由小到大的的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度A。
（2）以溶液的浓度C 为横坐标，相应的吸光度A 为纵坐标，绘制标准曲线。
（3）在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度A x，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度C x。
即可计算试样中被测物质的质量浓度。
三、仪器试剂1、仪器：722N型分光光度计；100 mL容量瓶；25 mL刻度吸管。
2、试剂：铁标准溶液10 mg·L-1；待测铁试液；100 g·L-1NaAc 溶液；100 g·L-1盐酸羟胺溶液；1.0 g·L-1邻二氮菲溶液。
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁【最新】
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、目的要求1．学习723型分光光度计的使用方法。
2．学习测绘吸收曲线的方法。
3．掌握利用标准曲线进行微量成分测定的基本方法和有关计算。
二、实验原理微量铁的测定有邻二氮菲法、硫代甘醇酸法、磺基水杨酸法、硫氰酸盐法等。
由于邻二氮菲法的选择性高、重现性好，因此在我国的国家标准（GB）中，许多冶金产品和化工产品中铁含量的测定都采用邻二氮菲法。
邻二氮菲又称邻菲罗啉（简写Phen），在pH值为2—9的溶液中，Fe2+离子与邻二氮菲发生下列显色反应：Fe2+ + 3Phen = [Fe（Phen）3]2+生成的橙红色配合物非常稳定，lgK稳=21.3（20℃），其最大吸收波长为510nm，摩尔吸光系数ε510=1.1×104 L•cm-1•mol-1。
显色反应的适宜pH值范围很宽，且其色泽与pH值无关，但为了避免Fe2+离子水解和其它离子的影响，通常在pH值为5的HAc-NaAc缓冲介质中测定。
邻二氮菲与Fe3+离子也能生成淡篮色配合物，但其稳定性较低，因此在使用邻二氮菲法测铁时，显色前应用还原剂将Fe3+离子全部还原为Fe2+离子。
本实验采用盐酸羟胺为还原剂：4Fe3+ +2NH2OH = 4Fe2+ + 4H++ N2O+ H2O邻二氮菲与Fe2+离子反应的选择性很高，相当于含铁量5倍的Co2+、Cu2+离子，20倍量的Cr3+、Mn2+、V（Ⅴ）、PO43-离子，40倍量的Al3+、Ca2+、Mg2+、Sn2+、Zn2+、SiO32-离子都不干扰测定。
利用分光光度法进行定量测定时，通常选择吸光物质（即经显色反应后产生的新物质）的最大吸收波长作为入射光波长，这样测得的摩尔吸光系数ε值最大，既测定的灵敏度最高。
为了找出吸光物质的最大吸收波长需绘制吸收曲线。
测定吸光物质在不同波长下的吸光度A值，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，描点绘图即得吸收曲线，曲线最高点所对应的波长为该吸光物质的最大吸收波长。
分析化学实验邻二氮菲吸光光度法测定铁的含量报告
分析化学实验邻二氮菲吸光光度法测定铁的含量报告实验目的邻二氮菲吸光光度法测定铁的含量熟悉722N型分光光度计的原理和操作实验仪器和试剂722N分光光度计，7个50ml的容量瓶，5只移液管，洗瓶0.0100g/L铁标准溶液，含铁待测溶液，0.15%邻二氮菲（邻菲罗林）溶液，10%盐酸羟胺溶液，HAc-NaAc缓冲溶液，0.1mol/L NaOH溶液，1:1HCl溶液，蒸馏水实验原理邻二氮菲吸光光度法是测定铁含量的常用方法。
在PH为2~9的溶液中，Fe2+的显色剂邻二氮菲形成稳定的橘红色络合物，该络合物在508nm波长处有最大吸收。
为了消除Fe2+的副反应及其他因素的影响，在微酸溶液进行，且用盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+。
吸光光度法定量分析的依据是朗伯比尔定律A=Ɛbc，当液层厚度b一定时A=Kc，吸光光度法定量分析的方法有直接比较法和标准曲线法，这个实验用标准曲线法。
在标准曲线上查出试液中铁的含量，按下式求出原始待测溶液中铁的含量（ρ表示溶液中铁的含量，mg/L）ρFe,原始待测溶液=ρFe,标准曲线查得×50/10实验步骤1、取出容量瓶和移液管，用蒸馏水清洗容量瓶并用相应的溶液润洗移液管2、在6个容量瓶中用刻度移液管分别加入0.00,、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL0.0100g/L 铁标准溶液，5mLHAc-NaAc缓冲溶液，1mL10%盐酸羟胺溶液及2mL0.15%邻二氮菲溶液，用水定容。
将其分别对应编号为1、2、3、4、5、6号，在上述6个容量瓶中对应的溶液中铁的含量分别为0.00、0.40、0.080、1.20、1.60、2.00mg/L。
其中铁含量为0.00mg/L的溶液为空白溶液，其余溶液构成标准系列溶液。
并用移液管吸取10.00mL原始待测溶液按与标准系列溶液的配制方法配制溶液，并编号为7。
将溶液放置15min左右。
3、接通722N分光光度计电源，调节分光光度计的透光度T示数为100.0（即T%=100%）发现此时吸光度A的示数位0.000，波长调节至510nm条件下。
邻二氮菲分光光度法测定铁
邻二氮菲分光光度法测定铁一．[实验目的]1、了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方法。
2、掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法。
3、了解721型（或722型）分光光度计的构造和使用方法。
二、[实验原理]Fe2+与邻二氮菲反应生成红色配合物，在波长510nm （最大吸收波长）处，其吸光度的高低与浓度的关系符合朗伯—比尔定律Fe2+与邻二氮菲在PH 为2—9范围都能形成稳定的红色配合物，但在5—6时最佳。
铁必须是以Fe2+形式反应，因此显色前要加入还原剂，通常用盐酸羟胺作为还原剂，反应式如下：4Fe3+＋2NH2OH = 4Fe2+＋N2O↑＋4H+＋H2O Fe2+与邻二氮菲的反应式如下：三、[试剂和仪器]试剂：0.1mg/mL 标准铁溶液：准确称取0.8634g 分析纯铁铵矾［NH4Fe （SO4）2·12H2O］置于烧杯中加入20mL6mol·L -1的HCl 溶液，溶解后转入1000mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
0.1%邻二氮菲溶液（新配） 10%盐酸羟铵溶液（新配） 1mol·L -1NaAc 溶液0.1mol·L -1NaOH 溶液2、仪器 721（或722）型分光光度计一台（包括比色皿一套）、50mL 容量瓶8只、5mL 吸量管2支其它辅助器皿 [实验步骤] 工作条件试验1、吸收曲线的绘制 用吸量管吸取2mL 标准铁溶液，注入50mL 容量瓶中，依次加入1mL 盐酸羟铵溶液（摇匀）、3mL 邻二氮菲溶液、5mL1mol/LNaAc 溶液，定容至刻度，摇匀。
在721（或722）型分光光度计上，用1cm 比色皿，一试剂空白为参比溶液在波长为440～860nm 间，间隔10nm 测定一次吸光度（在最大吸收波长附近，每隔2nm 测定一次）。
以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择吸收峰最高点所对应的波长为工作波长。
用8个50mL 容量瓶中，分别按下表的用量加入各种试剂，再用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
可见分光光度法测定铁的条件实验可见分光光度法测定铁的条件实验文献综述和实验设计院系：检验学院班级：12 级生物技术班指导老师：杨琴小组成员：沈艳林、田赋、邓纯纯、郑祥、谭诗航、苏曼、邱丽莎、殷良俊、易柳摘要 (1)引言 (2)正文 (3)1 分光光度技术 (3)2 分光光度法测定元素铁含量的研究概况 (3)3 分光光度法测定铁的6种方法 (3)3.1 邻二氮菲分光光度法 (3)3.1.1 方法原理 (3)3.1.2 化学反应式 (3)3.2 BPT-OP分光光度法 (3)3.3 硫氰酸盐分光光度法测铁含量 (3)3.3.1 方法提要 (3)3.3.2 主要反应 (3)3.4 磺基水杨酸分光光度法测铁含量 (3)3.4.1 方法原理 (3)3.5 固相萃取分光光度法测铁含量 (3)3.5.1 方法原理 (4)3.6 用火焰原子吸收分光光度法测铁含量 (4)3.6.1 方法原理 (4)4 邻二氮菲分光光度法测铁含量 (4)4.1 邻二氮菲法简介 (4)4.2 邻二氮菲法的优点 (4)5 邻二氮菲分光光度法测铁含量最适条件的选择 (4)5.1 如何确定适宜的条件 (4)5.2 最适波长的选择 (4)5.3 显色剂用量的选择 (4)5.4 显色时间的选择 (4)5.5 溶液pH的选择 (4)5.6 显色温度的选择 (5)6 对邻二氮菲分光光度法测铁含量实验改进 (5)参考文献 (6)实验设计部分 (7)本文主要研究用邻二氮菲分光光度法测定新血宝胶囊中总铁含量的分析方法。
采用了邻二氮菲作显色剂、盐酸羟胺作还原剂，以工作曲线法测定总铁含量，对邻二氮菲分光光度法测定铁主要测量条件如测量波长、显色剂用量及显色时间等进行研究确定，提高分析检测的灵敏度，且讨论了测定的最佳条件，找出处理方法的良好条件和良好效果。
本法灵敏、可靠，便于推广。
【关键词】邻二氮菲；分光光度法；新血宝胶囊；铁含量引言铁元素为人体重要元素之一，人体缺血容易导致一些贫血症状甚至疾病，人体缺血会影响血红蛋白，肌红蛋白的合成，是某些酶的活性降低，引起人体某些生理上的变化，从而导致免疫力降低，智力降低，机体抵抗力降低而引起一系列疾病产生。
新血宝胶囊为一种胶囊剂，内容物为一种棕黄色的粉末，每粒装0.25克；气香，味微苦、甘，有铁腥味。
为内科虚证类非处方药药品。
功能主治：补血益气，健脾和胃；用于痔疮出血、月经过多、偏食等原因所致的缺铁性贫血。
成分为鸡血藤，黄芪，大枣，当归，白术，陈皮，硫酸亚铁。
测定新血宝胶囊的铁含量对人体健康有重要的意义。
本实验采用邻二氮菲分光光度法测定新血宝胶囊的铁含量，该法操作简单，灵敏度较高。
但是采用此种方法将受到很多因素的影响，根据查找的文献可知，目前有硫氰酸盐分光光度法测铁含量、磺基水杨酸分光光度法测铁含量、固相萃取分光光度法测铁含量、用火焰原子吸收分光光度法测铁含量、邻二氮菲分光光度法测铁含量这几种方法，我们选取邻二氮菲分光光度法进行研究。
影响的因素有吸收波长，显色剂的用量，显色的反应时间，溶液的pH，盐酸羟胺的用量，显色温度，溶剂种类的选择等。
本实验主要讨论其中5个条件：①最适波长的选择、②显色剂用量的选择、③显色时间的选择、④溶液pH的选择、⑤显色温度的选择。
并在此基础上加以改进，加入表面活性剂曲拉通X-100，对Fe2+与邻二氮菲的显色反应具有增敏作用。
正文1 分光光度技术有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长线的吸收能力也不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。
有些无色溶液，光虽对可见光无吸收作光光度技术吸收用，但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。
分光谱来鉴定物质性质及含量的技术，其理论依据是（分光光度法）主要是指利用物质特有的Lambert和Beer定律。
2 分光光度法测定元素铁含量的研究概况微量元素是维持人体新陈代谢的重要元素，人体对微量元素摄人量过低或过高都不利于健康，严重者甚至会危及生命【1】。
因此，在食品、医药(尤其是中药)、卫生等方面对微量金属元素的含量测定均有严格要求，对微量金属元素的测定方法进一步深入研究具有重大意义。
目前，测定微量金属元素的方法有原子吸收分光光度法、ICP—AES法、容量法、分光光度法等，其中分光光度测定方法简便、快速、准确，具有推广和普及的价值。
根据近年国内外有关文献的报道，就铁金属元素的分光光度测定方法的研究现状进行概述。
3 分光光度法测定铁的6种方法3.1 邻二氮菲分光光度法3.1.1方法原理：在pH＜5．0，以邻二氮菲(phen)作显色剂，与二价铁形成红色二元络合物，最大吸收波长为510 nm。
测定时，在pH=2．0—9．0的条件下，用盐酸羟胺将三价铁还原为二价铁，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。
此后用分光光度法测定可得到总铁量。
3.1.2 化学反应式：2 Fe3+ + 2 NH2OH·HCl == 2 Fe2+ + N2↑ + 2 H2O + 4 H+ + 2 Cl-盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+3.2 BPT-OP分光光度法BPT(4，7—二苯基—1，10—邻二氮菲)是一种与联吡啶、邻二氮菲(又名邻二氮菲)性质相似，但显色作用更灵敏的显色剂。
在HAc—NaAc(最佳pH=4．O—5.0)缓冲溶液中加入乳化液OP，Fe3+—BPT迅速转变为Fe2+—BPT，最大吸收波长位于530 nm处，线性范围是0．00--0．35 mg/L。
其灵敏度很高，常用于粮食、蔬菜等食品中微量铁的测定【2】。
3.3 硫氰酸盐分光光度法测铁含量（铝及铝合金化学分析方法--铁的测定）3.3.1方法原理：在酸性溶液中，铁与硫氰酸盐形成橙红色硫氰酸铁。
3.3.2主要反应：Fe(NO3)3+3NaSCN=Fe(SCN)3+3NaNO3【3】3.4 磺基水杨酸分光光度法测铁含量3.4.1方法原理：磺基水杨酸是一种光度分析中的常用试剂,在PH=1.8—2.5时与铁生成紫红色络合物,在PH=4—8时与铁生成红色络合物,在PH=8—11.5时与铁生成黄色络合物本方法采用黄色络合物进行检测,该络合物的最大吸收波长为420nm。
3.5 固相萃取分光光度法测铁含量3.5.1方法原理：用Sep-pak C18柱在采样现场萃取Fe2+与显色剂形成的有色络合物,在实验室洗脱吸附在Sep-pak C18柱上的有色络合物,用分光光度法测定Fe2+质量浓度【5】。
3.6 用火焰原子吸收分光光度法测铁含量3.6.1 方法原理：原子吸收光谱是利用铁元素的基态原子对特征辐射线的吸收程度进行定量分析的方法。
试样中铁元素的化合物在高温中被解离成基态原子，光源发射出的特征辐射线经过原子蒸汽时，被基态原子吸收。
在一定条件下，被吸收的程度与基态原子的数目成正比。
通过检测器检测特征辐射线被吸收的程度，就可以测得试样中被测铁元素的含量【6】。
4 邻二氮菲分光光度法测铁含量4.1 邻二氮菲法简介：邻二氮菲为显色剂，选择测定微量铁的适宜条件和测量条件，并用于工业盐酸中铁的测定。
4.2 邻二氮菲法的优点：用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
5 邻二氮菲分光光度法测铁含量最适条件的选择5.1 如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件。
5.2 最适波长的选择：准确移取1.5ml 50ug/ml标准铁Fe2+溶液，置于 50ml容量瓶中，加入1.0ml 10%盐酸羟胺溶液、10ml乙酸铵缓冲液、加2.0ml 0.1%啉菲啰啉溶液，以水稀释至刻度，摇匀，用分光光度计，在400至600nm之间，每10nm记录一次吸光度，如图1所示，其最大吸收波长为510nm.5.3 显色剂用量的选择：准确移取1.5ml 50ug/ml标准铁Fe2+溶液，分别加入8个50ml具塞比色管中，加入1.0ml 10%盐酸羟胺溶液、10ml乙酸铵缓冲液、加0.3，0.5，1.0，1.25，1.5，2.0，3.0，4.0ml 0.1%啉菲啰啉溶液，以水稀释至刻度，在波长为510nm 处分别测其吸光度A，以啉菲啰啉的体积为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-试剂用量曲线，从而确定出最佳显色剂用量为2ml最佳【7】。
5.4显色时间的选择：取50ml容量瓶加入2ml铁标准液，1ml盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2min，加入2ml邻二氮菲溶液，5ml醋酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀，在分光光度计上，以510nm处，用1cm吸收池，以去离子水为空白溶液做参比溶液，测定吸光度，以后每隔半小时测定一次。
5.5溶液pH的选择：取6个50ml容量瓶，每个加入2ml铁标准液，1ml盐酸羟胺溶液，摇匀，放置2min，再加入2ml邻二氮菲溶液，摇匀。
分别从滴定管中加入10ml，12ml，16ml，18ml，20ml的0.1mol／l的NaOH溶液。
以去离子水稀释至刻度线，摇匀，在510nm处，以去离子水为空白，测定各溶液的吸光度。
5.6显色温度的选择：取6个50ml容量瓶，各加铁标准液2ml，1ml盐酸羟胺溶液，摇匀，分别放入恒温箱（5,10,15,20,25,30,35度），放置2min，同时将2ml邻二氮菲溶液分别放入相应的恒温箱2min，同温度的亚铁离子与邻二氮菲混合，用水稀释至刻度后，摇匀，放入恒温箱2min，用1cm吸收池，在510nm处，测定吸光度。
6 对邻二氮菲分光光度法测铁含量实验改进在缓冲溶液(pH=5．0)存在下，以邻二氮菲(phen)作显色剂，加入表面活性剂曲拉通X-100，对Fe2+与邻二氮菲的显色反应具有增敏作用，形成的Fe2+一phen—Triton三元络合物呈红色，络合物的最大吸收波长为510nm，表观摩尔吸光系数为1．2×105mol/(L/cm)，可使灵敏度、选择性大为提高【8】。
参考文献【1】陈杰，张欣荣，等．微量元素与人体健康关系研究的回顾与展望[J]．生命科学仪器，2003，1(1)：41—44．【2】吴方琼.BPT-OP分光光度法测定食品中的微量铁[期刊论文]-西南民族学院学报(自然科学版) 2003(01).【3】工厂化学检验手册P198页.（国标GB/T 6789.4--2001 邻二氮菲分光光度法）【4】GB/T11911-1989.水质,铁、锰的测定,火焰原子吸收分光光度法.【5】《环境监测管理与技术》 2007年06期【6】张国文.原子吸收分光光度法测定食品中微量元素[J].粮油食品科技，2002,10（6）:34．【7】分析技术与操作（Ⅴ）-电化学与光谱分析及操作，化学工业出版社；曾祥燕、丁佐宏主编.【8】梁国柱．表面活性剂增敏光度法测定水样中的微量铁[J]．南通职业大学学报，2005，19(2)：29—31．设计性实验分光光度法测铁含量条件实验实验设计一、实验目的1、了解分光光度法测铁的方法2、熟悉显色反应条件与测量条件的选择方法3、熟悉实验设计的基本内容与方法4、掌握分光光度法测定新血宝胶囊中铁的含量二、实验原理亚铁离子在pH=3—9之间的溶液中，与邻二氮菲生成稳定的橙色络合物，其反应式为：Fe2++3C12H8N2==[Fe(C12H8N2)]2+若用还原剂将Fe3+还原为Fe2+，则本法测得为总铁。