临床基因扩增实验室建设方案讲课稿
PCR实验室设计讲课稿
P C R实验室设计1 PCR实验室平面布局PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。
为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR实验室平面布置示意图如图1所示图12实验室空调通风系统设计及压力控制PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。
同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
2.1试剂贮存和准备区该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。
试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
2.2标本制备区该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。
2.3扩增反应混合物配制和扩增区该区域主要进行的操作为DNA扩增。
此外，已制备的DNA模板 (来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。
个别操作如加样等应在超净台内进行。
2.4扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
临床基因扩增实验室建设方案
临床基因扩增实验室建设方案1、概述临床基因扩增实验又称PCR实验,是专门用来检验新型冠状病毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病的一种检测手段。
它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
由于该检测方法可以测出普通检验难以检测岀的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的疾病诊断。
新型冠状病毒（2019-nCoV）是人类分离的第七类冠状病毒。
该病毒属于β属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。
其基因特征与SARS-CoV 和MERS-CoV 有明显区别。
目前研究显示与蝙蝠SARS 样冠状病毒（bat-SL-CoVZC45）同源性达85%以上。
病毒对紫外线和热敏感，56 度30分钟、乙醚、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。
基于目前的流行病学调查和研究结果，新型冠状病毒潜伏期为1-14 天，多为3-7 天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者，无症状感染者也可能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能，其他传播途径待明确；人群普遍易感。
2020 年01 月20 日国家卫健委公告：将新型冠状病毒感染的肺炎纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并采取甲类传染病的预防、控制措施。
并纳入《中华人民共和国国境卫生检疫法》规定的检疫传染病管理。
实验活动暂按第二类病原微生物进行管理。
因此，开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生物安全与防护以及质量控制等方面满足并符合国家相关技术规范要求。
因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。
近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。
课件分享II临床基因扩增检验实验室建设及技术审核解析
课件分享II临床基因扩增检验实验室建设及技术审核解析
上四期我们分别梳理了基层实验室开展新冠病毒核酸检测技术的要点，实时荧光PCR技术原理及在新冠病毒检测中的应用、室内质控的要点细节和实验室生物安全管理要求。
本期，讲解的是——临床基因扩增检验实验室的建设及技术审核要点解析。
课前序
本期内容的依据是现行关于医学二级生物安全实验室建筑技术标准和临床基因扩增检验实验室的管理办法及导则等一系列法规和行标。
临床基因扩增检验实验室顾名思义，它是适用于进行临床基因扩增检验的实验室。
临床基因扩增检验是指通过扩增检测特定的DNA或RNA，进行疾病诊断、治疗监测、预后判定和用药指导等。
通过基因扩增检测技术的分类看，我们常规的PCR技术只是检测技术中靶基因扩增方法中的一类技术方法，因此，临床基因扩增不等于 PCR ，临床基因扩增的技术范围更广。
临床基因扩增检验实验室的技术审核单位：是国家授权指定由省级临检中心或省级卫生执政部门指定的机构负责技术审核工作，包括制定评审办法，组建专家组和现场评审。
课件/分享
验小六的晚课时间
烹茗清谈之检，煮酒浅析于验。
不敢阔谈，只做传递。
爱好整理归纳，喜好总结思考。
29篇原创内容
公众号。
临床基因扩增检验实验设置与质量管理PPT课件( 19页)
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16、人生在世：可以缺钱，但不能缺德;可以失言，但不能失信;可以倒下，但不能跪下;可以求名，但不能盗名;可以低落，但不能堕落;可以放松，但不能放纵;可以虚荣，
但不能虚伪;可以平凡，但不能平庸;可以浪漫，但不能浪荡;可以生气，但不能生事。
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17、人生没有笔直路，当你感到迷茫、失落时，找几部这种充满正能量的电影，坐下来静静欣赏，去发现生命中真正重要的东西。
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4、心中没有过分的贪求，自然苦就少。口里不说多余的话，自然祸就少。腹内的食物能减少，自然病就少。思绪中没有过分欲，自然忧就少。大悲是无泪的，同样大悟
无言。缘来尽量要惜，缘尽就放。人生本来就空，对人家笑笑，对自己笑笑，笑着看天下，看日出日落，花谢花开，岂不自在，哪里来的尘埃!
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5、心情就像衣服，脏了就拿去洗洗，晒晒，阳光自然就会蔓延开来。阳光那么好，何必自寻烦恼，过好每一个当下，一万个美丽的未来抵不过一个温暖的现在。
临床基因扩增检验实验室的设置 及质量管理体系的建立
卫生部临床检验中心 李金明
临床基因扩增检验实验室的设置
依据：卫生部颁发的《临床基因扩 增检验实验室管理暂行办法》（卫 医发[2002]10号）
临床标本的接收
通常的工作流程：标本采集 血清分离
编号
保存或检测
应在四个测定区域之外的地方或区域内 接收
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18、在人生的舞台上，当有人愿意在台下陪你度过无数个没有未来的夜时，你就更想展现精彩绝伦的自己。但愿每个被努力支撑的灵魂能吸引更多的人同行。
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8、有些事，不可避免地发生，阴晴圆缺皆有规律，我们只能坦然地接受;有些事，只要你愿意努力，矢志不渝地付出，就能慢慢改变它的轨迹。
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9、与其埋怨世界，不如改变自己。管好自己的心，做好自己的事，比什么都强。人生无完美，曲折亦风景。别把失去看得过重，放弃是另一种拥有;不要经常艳羡他人，
临床基因扩增实验室建设方案
临床基因扩增实验室建设方案1、概述临床基因扩增实验又称PCR实验,是专门用来检验新型冠状病毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病的一种检测手段。
它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
由于该检测方法可以测出普通检验难以检测岀的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的疾病诊断。
新型冠状病毒（2019-nCoV）是人类分离的第七类冠状病毒。
该病毒属于β属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。
其基因特征与SARS-CoV 和MERS-CoV 有明显区别。
目前研究显示与蝙蝠SARS 样冠状病毒（bat-SL-CoVZC45）同源性达85%以上。
病毒对紫外线和热敏感，56 度30分钟、乙醚、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。
基于目前的流行病学调查和研究结果，新型冠状病毒潜伏期为1-14 天，多为3-7 天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者，无症状感染者也可能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能，其他传播途径待明确；人群普遍易感。
2020 年01 月20 日国家卫健委公告：将新型冠状病毒感染的肺炎纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并采取甲类传染病的预防、控制措施。
并纳入《中华人民共和国国境卫生检疫法》规定的检疫传染病管理。
实验活动暂按第二类病原微生物进行管理。
因此，开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生物安全与防护以及质量控制等方面满足并符合国家相关技术规范要求。
因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。
近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。
临床基因扩增实验室的设计
分子生物室 关 雪
临床基因扩增实验室的设计
依据：卫生部颁发的《临床基因扩增实验室管 理暂行办法》（卫医发[2002]10号） 《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》 （卫办医政发[2010]194号）
目 的
保护操作人员
保护环境
保护样本
临床PCR实验室工作流程
试剂储存和准备
标本制备区
扩增区 产物分析区
试剂准备区
标本制备区
扩增及产物分析区
标本接收区
理想的临床PCR实验室设计
Байду номын сангаас
第二课：内容
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第二课：总结
要点总结 回答问题时间
临床PCR实验室设计的一般原则
各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作
1.在物理空间上，必须完全相互独立，各区无论 是在空间还是使用中，应始终处于完全分隔状态； 2.不能有空气直接相通。
由清洁区域向污染区域流动
“十六字”口诀
防污染！！！
临床基因扩增检验操作规范培训课件
1. 血清/血浆等— -70℃ 2. 用于DNA测定的已纯化核酸样本— 4℃ 3. 用于RNA测定的已纯化核酸样本— -80℃ 4. 用乙醇沉淀的核酸样本— -20℃ 5. GITC处理的RNA标本在室温可保存7天
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
在巢式PCR测定中，第二次加样必 须在本区内进行。
可降低本区的气压以避免气溶胶从 本区漏出。
如有加样则应在超净台内进行。 打开反应管前快速离心数秒。
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（四）扩增产物分析区
功能： 扩增片段的测定。
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二、各阶段操作要求
测定分析前的标本采集处理、测 定中的核酸提取、扩增和产物分析以 及测定后的结果报告等。
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（一）标本的采集
临床标本包括EDTA或枸橼酸钠抗凝全血或骨髓、 血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。
EDTA和枸橼酸盐是首选的抗凝剂。不能使用肝素 抗凝，因肝素是Taq酶的强抑制剂。
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一、临床基因扩增检验实验室的 规范化设置及其各室的功能
二、各阶段操作要求 三、PCR污染与对策 四、因操作欠规范导致的问题分析
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一、临床基因扩增检验实验室的 规范化设置及其各室的功能
玻璃器皿在使用前应高压处理，250°烘烤4小时 以上可使RNA酶永久性失活。
临床基因扩增实验室建设方案
临床基因扩增实验室建设方案临床基因扩增实验室是一种专门用于进行基因扩增实验的实验室，其主要目的是为临床诊断、遗传性疾病检测和个性化治疗提供支持。
在建设临床基因扩增实验室时，需要考虑实验室的空间布局、设备和仪器选择、安全措施以及实验流程的优化等方面。
下面将介绍一种基本的临床基因扩增实验室建设方案。
一、实验室空间布局设计1.实验室布局：实验室应分为样品处理区、试剂制备区、反应区、设备区、储存区和办公区等功能区域。
各区域之间应有明确的分隔，并便于流程的连接和样品的顺利传递。
2.通风系统：实验室的通风系统应保证空气流通良好，排除有害气体和异味。
应设置排气扇和通风窗，同时注意实验室内的气压均衡，确保实验过程中的安全。
3.照明和净化：实验室的照明应充足明亮，以利于操作人员进行实验操作。
同时需要安装净化设备，如空气净化器和超净工作台等，保证实验环境的洁净度。
4.消毒区：设置专门的消毒区，用于原料、试剂和实验器具的消毒处理，预防交叉污染和实验结果的失真。
二、设备和仪器选择1.样品处理设备：选择适合实验需求的离心机、移液器、研钵、研钉等样品处理设备，保证实验操作的准确性和高效性。
2.扩增仪器：选择高质量的PCR扩增仪器，如热循环仪、扩增仪和实时PCR仪等，确保扩增反应的准确性和灵敏度。
3.净化设备：选用超净工作台、空气净化器和消毒柜等净化设备，保证实验过程的无菌无尘。
4.数据分析系统：配置数据分析软件和电脑，用于对扩增结果进行分析和解读，提高实验的准确性和可靠性。
三、安全措施1.实验操作规范：进行实验前，必须了解实验操作规范，严格按照操作流程进行实验，避免操作失误和交叉污染。
2.个人防护：操作人员应佩戴实验服、手套、口罩等个人防护用品，避免接触有害物质和致病微生物。
3.废物处理：实验结束后，应将废弃物品、试剂和生物材料按规定进行分流处理，确保废物不会对环境和他人造成危害。
四、实验流程优化1.实验标准化：建立实验操作标准和记录表，保证实验过程的追溯性和稳定性，确保实验结果的可靠性。
临床基因扩增实验
泰兴市第二人民医院检验科 赵建平
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1
实验室管理
• 管理应该目标明确，减少不确定性和不必要的损失，通过
预先设立的标准对工作进行及时的修改或者纠正。以求最 快最好地达到预期的目的
• 各实验室的管理包括各种规章制度、各种分析仪器的校准、
维护、保养，检验项目的标准操作程序（SOP）、工作流 程、生物安全、标本的采集、标识、保存、运送、验收、 检测结果的记录、检验人员的准入和培训以及临床和患者 等方面的抱怨、紧急防范措施等等。
• 易燃易爆试剂应分开存放，远离火源和电源。
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标本采集、验收、保存制度
• 采集的容器 • 采集的量 • 如果是抗凝血抗凝剂的种类（不可使用肝素抗凝） • 送检的时间（一般两小时内） • 如果容器破裂或者抗凝血的抗凝剂成分不对，标本的病人
姓名性别等于检验单不符等其他原因，可拒收表格。在拒 收标本上登记，同时填写不合格标本处置单，并随同申请 单返送相应的科室，必要时电话告知相关科室医生或护士。
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2
第一节 临床基因扩增实验室的设置
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3
实验室设置原则
• 目的：确保基因扩增实验室的质量和检验结果的
准确性
• 原则：各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作 • 功能区的设置：
1.试剂准备区 2.模板制备区 3.扩增区 （产物分析区）
注：各区必须要有明确的标识。
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4
工作流向
•
试剂准备区
•
•
模板制备区
•
•
扩增区（产物分析区）
•
。 注：各区之间应有传递窗，用于传递实验过程中的物品
a
5
• 各功能区内设置相应的仪器和设备 • 模板制备区设生物安全柜 • 各功能区内的任何物品不可移至其他功能区 • 原则：
临床基因扩增检验实验室管理PPT课件
• 由县级卫生行政部门责令其限期改正.并可 处以5000元以下罚款.情节严重的,吊销其<医疗 机构执业许可证>.并予以公告.
•
• 十八. 违反下列条款也要处理
• 超范围开展项目 试剂不合格
• 无室内质控
无室间质评
• 弄虚作假
科研项目收费
• 无证上岗
仪器无校准
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•
第四章
附则
• 十九. 采供血机构参照本办法执行
必须经国家药品监督管理局批准的临床检 验试剂
• 五.质量监督管理 • 部,省.自治区.直辖市临床检验中心负责
对所辖行政区域内临床基因扩增检验实验 室的质量监督管理工作
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6
•
第二章 实验室设置和验收
• 六. 设置标准和验收程序 • • 设置标准
• <临床基因扩增检验实验室基本设置 标准>(见附件)
•
.
2
•
第一章
总则
• 一,目的
• 规范临床基因扩增检验实验室管理
• 保证临床基因扩增检验实验室质量
• 保证临床诊断,治疗的科学性,合理性
• 二.临床基因扩增检验的种类
• 基本原理是扩增检测DNA,RNA（cDNA）为 方法的检测技术
• 放大靶核酸
• 聚合酶链反应(PCR)
• 连接酶链反应(LCR)
.
•
临床基因扩增检验实验室必须做室
• 内质控
•
临床基因扩增检验实验室必须参加
• 部中心组织的室间质评
.
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• 十四. 部中心按照<管理办法>和<工作规
• 范>协调,组织省检验中心监测临床基因 扩增检验实验室的检验质量.结果报省卫 生厅,并抄送被检单位.
临床基因扩增检验实验室的设置质量管理 ppt课件
理想的设置
产物分析区 扩增区 样本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
磁性连锁装置
现实的问题是：
建筑结构
通道、门 水电供应 采光、通风
基本的要求:
四个区域必须是相互独立的 各区的仪器设备及各种物品必须是专用的 各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作 服及鞋子用 产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。
实验室的设置
管理要求：设置标准和工作规范 具体落实：实事求是、因地制宜
设置标准和工作规范
“原则上分为四个分隔的工作区；…… 各区必 须有明确的标记……” “每一区域都须有专用的仪器……；不同的工作 区应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服……； 离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出……” “……，可在开展临床标本检测前对提取方法进 行评价” “……，本区如采用副压条件或减压情况下可减 少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。
管理要求：
3 人员 3.1 实验室应配备足够数量的人员； 这些人 员必须经过培训，并取得上岗证； 3.2 实验室应有培训计划和措施，保证其技术 人员得到及时培训。 3.3 实验室应保存其技术人员有关资格证书 （如上岗证）、培训、技能和经历等技术档案。
管理要求：
4 设备管理 4.1 主要设备应有维护程序文件及维护记录； 4.2 (a)有问题的设备应立即停止使用，并加上明显标识，如可 能应将其贮存在规定的地方直至修复；(b)修复的设备必须 经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使 用；(c)实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工 作的影响。 4.3 加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等应有校准程序并进行 校准，扩增仪和酶标仪应有明显的标识表明其校准状态。 4.4 应保存扩增仪、酶标仪、生物安全柜、加样器等设备的档 案
☆临床基因扩增检验实验室的设置及质量管理体系的建立105页PPT
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从未能从岸边走远。-戴尔．卡耐基。
梦 境
3、人生就像一杯没有加糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
☆临床基因扩增检验实验室的设置及质量 4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管美景，我只要生生世世的轮 回里有你。 管理体系的建立
Thank you
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
临床基因扩增检验质量保证2015新版讲课
举例说明。
根据在不同时间10次（批）测定HBV DNA （含量为 3.0×104IU/ml）质控血清所得的均值及标准差为： X =2.5×104 ku =3.0×104 kl =2.0×104 S =0.5 × 104 （ ku=x + 1.0s ） （ Kl=x - 1.0s ） ）
三个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。
四个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。 七个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。 八个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 九个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 十个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。
5
61.Leabharlann ×1042.6×1044.23
4.41
19
20
1.5×104
3.6×104
4.18
4.56
7
8 9 10 11 12 13
3.2×104
1.9×104 2.6×104 1.6×104 2.9×104 2.2×104 1.9×104
4.51
4.28 4.41 4.20 4.46 4.34 4.28
（三）统计质控方法 1、基线测定： 最佳条件下的变异（OCV）：均值（x）、s和变异系 数（OCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于 上述统计计算。 常规条件下的变异（RCV）：均值（x）、s和变异系 数（RCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于 上述统计计算。
当OCV＜ RCV＜ 2OCV时，RCV可接受，否则，就需要 对常规条件下的操作水平采取措施予以改进。 在进行基线测定时，既可使用质控样本扩增后的IU/ml 来进行统计计算，也可用其对数值进行。
临床基因扩增实验专家讲座
临床基因扩增实验专家讲座
第3页
工作流向
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试剂准备区
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模板制备区
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扩增区（产物分析区）
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。 注：各区之间应有传递窗，用于传递试验过程中物品
临床基因扩增实验专家讲座
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• 各功效区内设置对应仪器和设备 • 模板制备区设生物安全柜 • 各功效区内任何物品不可移至其它功效区 • 标准：
各功效区相互独立
临床基因扩增实验专家讲座
第23页
空白管对照种类
• 反应液空白管对照 • 试剂空白管（在整个试验过程中开口放置
于核酸提取操作台面区域内30—60分钟， 然后进行扩增在反应液空白管为阴性情况 下假如出现阳性提醒可能出现试验室污 染。）
临床基因扩增实验专家讲座
第24页
扩增产物分析
• 经过标准曲线对未知模板进行定量分析 • 1。依据试剂盒要求先确定基本基线和域值。 • 2.初步分析未知模板定量结果，依据当初曲线情
临床基因扩增实验专家讲座
第15页
第三节：临床基因扩增试验室 操作指导书（SOP）
临床基因扩增实验专家讲座
第16页
• 各种仪器设备标准操作维护程序
（PCR扩增仪、离心机、干式恒温器、生物安全柜、移液器、 冰箱、可移动紫外线消毒车等。）
• 各种仪器设备标准校准程序 • （温度计、移液器、PCR扩增仪等） • PCR标本唯一标识编号规则（120525B05） • 临床标本采集及处理标准操作程序 • 各种病原体扩增荧光检测标准操作程序 • 室内质量控制、室间质评标准操作程序
临床基因扩增实验专家讲座
第17页
第四节：临床基因扩增试验室质量 确保
临床基因扩增实验专家讲座
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临床基因扩增实验室
建设方案
临床基因扩增实验室建设方案
1、概述
临床基因扩增实验又称PCR实验,是专门用来检验新型冠状病毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病的一种检测手段。
它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
由于该检测方法可以测出普通检验难以检测岀的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的疾病诊断。
新型冠状病毒（2019-nCoV）是人类分离的第七类冠状病毒。
该病毒属于β属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。
其基因特征与SARS-CoV 和MERS-CoV 有明显区别。
目前研究显示与蝙蝠SARS 样冠状病毒（bat-SL-CoVZC45）同源性达85%以上。
病毒对紫外线和热敏感，56 度30分钟、乙醚、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。
基于目前的流行病学调查和研究结果，新型冠状病毒潜伏期为1-14 天，多为3-7 天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者，无症状感染者也可能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能，其他传播途径待明确；人群普遍易感。
2020 年01 月20 日国家卫健委公告：将新型冠状病毒感染的肺炎纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并
采取甲类传染病的预防、控制措施。
并纳入《中华人民共和国国境卫生检疫法》规定的检疫传染病管理。
实验活动暂按第二类病原微生物进行管理。
因此，开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生物安全与防护以及质量控制等方面满足并符合国家相关技术规范要求。
因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。
近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。
本方案主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局,空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对实验室设计中的主要特点进行了阐述。
临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。
因此,实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。
下面就对这几个方面分别进说明。
2、PCR实验室平面布局
临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区，同时为了符合新冠实验检测需要增加独立衣帽间方便更换防护装备。
为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能在衣帽间更换防护服后从试剂准备区→标本制备区→基因扩增区→扩增产物分析区。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
3、实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。
同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
4、实验室建设及设备
4.1实验室分区功能
4.2、实验室设计要求（仅供参考）
4.3实验室设备要求
5、实验室人员资质及配置
经省（市）临检中心基因检测技术培训合格（持岗位合格证）；经过省（市）疾控或其他相关部门的生物安全培训（培训合格）和具备相应的实验技能；经PCR实验室内部的生物安全与操作规范培训与考核合格。
（要求具备PCR上岗证）：高级职称1人以上、中级职称2人以上、初级职称要求4人以上，标本接收员1人以上。
6、实验室防护物质要求
新冠状病毒核酸检测必须按照三级个人防护标准进行。
即要求：医用防护口罩或N95口罩、双层乳胶手套、面屏、护目镜、工作服外防护服、双层医用防护帽，加手卫生。
必要时双层口罩（外医用防护口罩，内N95）。
如果接触了患者血液、体液、分泌物或排泄物，应及时更换防护装备。