临床基因扩增检验实验室工作规范
临床基因扩增检验实验室规章制度
临床基因扩增检验实验室规章制度
第一篇：临床基因扩增检验实验室规章制度
临床基因扩增检验实验室规章制度
一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区域都必须有明确的标记，以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区，避免发生交叉污染。在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，以便于鉴别。此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
(一)试剂贮存和准备区
下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
(二)标本制备区
在该区进行下述操作：临床标本的保存，核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
(三)扩增区
下述工作在本区内进行：DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。
不能从本区再进入任何“上游”区域，可降低本区的气压以避免气溶胶从本区漏出。
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
一、临床基因扩增检验实验室的设计
（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。原则上临床基因扩增检验实验室应当设置
以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域在物理
空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的
分隔状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时
荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区的功能是：
1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样
本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
3.扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向。临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照
试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流
进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方
向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。（三）工作区域仪器设备配置标准。
1.试剂储存和准备区。
（1）2～8℃和-20℃以下冰箱。
3医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法及医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
3医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法及医疗机构临床基因扩增检验实验室⼯作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法
发布部门: 卫⽣部
发布⽂号: 卫办医政发[2010]194号
第⼀章总则
第⼀条为规范医疗机构临床基因扩增检验实验室管理，保障临床基因扩增检验质量和实验室⽣物安全，保证临床诊断和治疗科学性、合理性，根据《医疗机构管理条例》、《医疗机构临床实验室管理办法》和《医疗技术临床应⽤管理办法》，制定本办法。
第⼆条临床基因扩增检验实验室是指通过扩增检测特定的dna或rna，进⾏疾病诊断、治疗监测和预后判定等的实验室，医疗机构应当集中设置，统⼀管理。
第三条本办法适⽤于开展临床基因扩增检验技术的医疗机构。
第四条卫⽣部负责全国医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理⼯作。各省级卫⽣⾏政部门负责所辖⾏政区域内医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理⼯作。
第五条以科研为⽬的的基因扩增检验项⽬不得向临床出具检验报告，不得向患者收取任何费⽤。
第⼆章实验室审核和设置
第六条医疗机构向省级卫⽣⾏政部门提出临床基因扩增检验实验室设置申请，并提交以下材料：
《责验收⾏政部门执业许可证》
（⼀）《医疗机构执业许可证》复印件；
（⼆）医疗机构基本情况，拟设置的临床基因扩增检验实验室平⾯图以及拟开展的检验项⽬、实验设备、设施条件和有关技术⼈员资料；
（三）对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增检验实验室运⾏的预测分析。
第七条省级临床检验中⼼或省级卫⽣⾏政部门指定的其他机构（以下简称省级卫⽣⾏政部门指定机构）负责组织医疗机构临床基因扩增检验实验室的技术审核⼯作。
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
一、实验室安全
1.实验室必须符合相关的安全规范和操作规程，例如防火、防爆、防
尘和环境污染控制。
2.所有实验室人员必须进行安全培训，并熟悉实验室的安全操作规程。
3.实验室设备和试剂必须定期检查和维护，确保其正常运行且不存在
安全隐患。
二、样本接收与标本处理
1.所有样本必须按照相关规定的方法和时间接收，并尽快进行处理。
2.接收样本时必须进行必要的标识和记录，并确保样本的完整性和唯
一性。
3.样本处理必须按照相关的规范进行，包括离心、分装、保存和运输。
三、实验室质量控制
1.实验室必须建立质量控制体系，确保实验的准确性和可靠性。
2.每次实验必须进行内部质控和外部质控样品的检测，并记录结果。
3.实验室必须参加相关质控活动，比如参加外部质量评估和互认活动。
4.实验室必须建立相关的质控指标和标准，确保实验的准确性和可靠性。
5.实验室必须建立完整的质量文件和记录，方便质量评审和内外审计。
四、实验操作规范
1.实验室必须建立标准的实验操作规范，确保实验的准确性和可重复性。
2.每个实验人员必须按照规定的实验操作流程进行实验，并记录实验
结果。
3.实验室必须建立实验数据的记录和存档机制，确保数据的完整性和
可追溯性。
4.实验室必须定期对实验操作进行评估和培训，提高实验人员的技术
水平和操作规程的遵守性。
五、实验室设备和试剂管理
1.实验室设备必须定期检查和维护，确保其正常运行且符合质量要求。
2.实验室试剂必须按照相关规范和标准进行采购和存储。
3.实验室必须定期对试剂进行检查和过期处理，确保试剂的有效性和
临床基因扩增PCR实验室SOP标准操作程序文件(32项)
临床基因扩增实验室标准操作程序
编写人：
审核人：
批准人：
启用日期：年月日
XXX医院
前言
为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务，保证检验质量，严格按照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》要求，制定本实验室管理文件，本实验室任何实验均需遵循本管理文件中规定执行。
临床基因扩增检验技术指以临床诊断治疗为目的，以扩增检测DNA或RNA 为方法的检测技术，快速、可靠、准确、安全、收费合理方式下，以规范的操作对临床标本进行分析。本室采用经国家药品监督管理局批准的试剂盒。开展的检测项目：
1、乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测
2、人巨细胞病毒（HCMV）核酸定量检测
标准操作程序文件
1.目的：为了分子实验室的规范管理，特制订本程序。
2.范围：分子实验室。
3.职责：
3.1临床PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互督促。
3.2因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、样本准备区、PCR扩增区）的非本室人员需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行。
4.实验室设置：
4.1实验室设计为：专用走廊、试剂准备区、样本制备区、PCR扩增区组成。三个区域各有一个缓冲间。（见设置图）
4.2三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。试剂准备区—白色、样品处理区—兰色、基因扩增区—红色。
4.3工作区的配置、功能、内务管理制度见各工作区文件。
4.4 实验室须严格遵守试剂区→样本区→扩增区的流向制度，严禁误入和逆进入各工作区。
医院检验科PCR 室工作制度
医院检验科PCR 室工作制度
一、进入基因诊断实验室的任何工作人员都必须严格遵守PCR 实验室规则;非工作人员未经允许不得入内，尤其不得为找人而逆向误人PCR实验室，以免造成不应有的污染。
二、临床基因诊断实验室分试剂准备、样品处理、基因扩增三个区，各区拥有专用的仪器设备及实验物品（含加样器、试管架、吸头、记录纸、笔、甚至清洁用品等），须贴上不同颜色标签予以区别，不得混用;试剂准备区为白色标识，样品准备区为蓝色标识，扩增区为红色标识。
三、临床基因诊断实验室工作人员应具备医学检验、微生物学检验基本理论、基础知识和基本操作，具有大专以上学历并受过PCR实验室专业培训。
四、进入实验室的工作人员必须遵守实验室的唯一流向的规定，严禁反向流动。
五、进入实验室，必须更换本室有颜色标识的工作服（含帽和鞋）。勤换洗工作服。
六、接收样品时应检查样品是否符合要求，贴上标签并做好登记。
七、实验室技术人员必须严格按照PCR 实验标准操作程序进行，包括实验室擦洗、台面消毒，离心管、吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物处理等。
八、进入PCR实验室后区的物品不许带进PCR实验室前区。
九、任何实验操作包括仪器使用等情况均须做好记录。
十、检测结果报告应完整（包括检验项目、靶核酸类型及结果等），经专业负责人审核签字后方可发出。
十一、每天实验开始前，结束后均应按要求清洁、消毒地面和实验台面。
十二、保持临床基因诊断实验室内空气唯一流向和空气流通。
十三、定期校准和维修PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器设备。
十四、实验室内绝不允许从事与实验无关的事宜（如聊天、饮食、吸烟等）;室内禁用电风扇。
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法 及医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法
发布部门: 卫生部
发布文号: 卫办医政发[2010]194号
第一章总则
第一条为规范医疗机构临床基因扩增检验实验室管理，保障临床基因扩增检验质量和实验室生物安全，保证临床诊断和治疗科学性、合理性，根据《医疗机构管理条例》、《医疗机构临床实验室管理办法》和《医疗技术临床应用管理办法》，制定本办法。
第二条临床基因扩增检验实验室是指通过扩增检测特定的dna或rna，进行疾病诊断、治疗监测和预后判定等的实验室，医疗机构应当集中设置，统一管理。
第三条本办法适用于开展临床基因扩增检验技术的医疗机构。
第四条卫生部负责全国医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理工作。各省级卫生行政部门负责所辖行政区域内医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理工作。
第五条以科研为目的的基因扩增检验项目不得向临床出具检验报告，不得向患者收取任何费用。
第二章实验室审核和设置
第六条医疗机构向省级卫生行政部门提出临床基因扩增检验实验室设置申请，并提交以下材料：
《责验收行政部门执业许可证》
（一）《医疗机构执业许可证》复印件；
（二）医疗机构基本情况，拟设置的临床基因扩增检验实验室平面图以及拟开展的检验项目、实验设备、设施条件和有关技术人员资料；
（三）对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增检验实验室运行的预测分析。
第七条省级临床检验中心或省级卫生行政部门指定的其他机构（以下简称省级卫生行政部门指定机构）负责组织医疗机构临床基因扩增检验实验室的技术审核工作。
第八条省级临床检验中心或省级卫生行政部门指定机构应当制订医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核办法，组建各相关专业专家库，按照《医疗机构临床基因扩增检验工作导则》对医疗机构进行技术审核。技术审核办法报请省级卫生行政部门同意后实施。
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导
则
附件
医疗机构临床基因扩增检验
实验室工作导则
一、临床基因扩增检验实验室的设计
（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。原则上临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区的功能是：
1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
3.扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向。临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。
（三）工作地区仪器设备配置标准。
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法 及医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法
发布部门: 卫生部
发布文号: 卫办医政发[2010]194号
第一章总则
第一条为规范医疗机构临床基因扩增检验实验室管理，保障临床基因扩增检验质量和实验室生物安全，保证临床诊断和治疗科学性、合理性，根据《医疗机构管理条例》、《医疗机构临床实验室管理办法》和《医疗技术临床应用管理办法》，制定本办法。
第二条临床基因扩增检验实验室是指通过扩增检测特定的dna或rna，进行疾病诊断、治疗监测和预后判定等的实验室，医疗机构应当集中设置，统一管理。
第三条本办法适用于开展临床基因扩增检验技术的医疗机构。
第四条卫生部负责全国医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理工作。各省级卫生行政部门负责所辖行政区域内医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理工作。
第五条以科研为目的的基因扩增检验项目不得向临床出具检验报告，不得向患者收取任何费用。
第二章实验室审核和设置
第六条医疗机构向省级卫生行政部门提出临床基因扩增检验实验室设置申请，并提交以下材料：
《责验收行政部门执业许可证》
（一）《医疗机构执业许可证》复印件；
（二）医疗机构基本情况，拟设置的临床基因扩增检验实验室平面图以及拟开展的检验项目、实验设备、设施条件和有关技术人员资料；
（三）对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增检验实验室运行的预测分析。
第七条省级临床检验中心或省级卫生行政部门指定的其他机构（以下简称省级卫生行政部门指定机构）负责组织医疗机构临床基因扩增检验实验室的技术审核工作。
第八条省级临床检验中心或省级卫生行政部门指定机构应当制订医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核办法，组建各相关专业专家库，按照《医疗机构临床基因扩增检验工作导则》对医疗机构进行技术审核。技术审核办法报请省级卫生行政部门同意后实施。
临床基因扩增检验实验室工作规范
为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治
疗服务，保证检验质量，特制定本规范。
临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理
暂行办法》(卫医发[2002]10 号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》 .为避免污染，必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临
床基因扩增检验实验室.
临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪
器设备.各区域都必须有明确的标记,以避免设备物品如加样器或者试剂等从其
各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工
作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区，避免发生交叉污染。在不同的工作区域应使用不同颜色或者有明显区别标志的工作服,以便于鉴别。
此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮
存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用
具以防止交叉污染。
下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备. 贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物
分析区。在打开含有反应混合液的离心管或者试管前,应将其快速离心数秒。试
剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂
溶液经检查可用后，应将其分装贮存备用，避免由于时常打开反应管吸液而造成
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
一、临床基因扩增检验实验室的设计
（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。原则上临床基因扩增检验实验室应当设置
以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域在物理
空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的
分隔状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时
荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区的功能是：
1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样
本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
3.扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向。临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照
试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流
进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方
向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。（三）工作区域仪器设备配置标准。
1.试剂储存和准备区。
（1）2～8℃和-20℃以下冰箱。
临床基因扩增检验实验室基本设置标准
临床基因扩增检验实验室基本设置标准
根据《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》，制定本标准
一、临床基因扩增检验实验室区域设置原则
（一）临床基因扩增检验实验室区域设置原则
1、试剂储存和准备区
2、标本制备区
3、扩增反应混合物配制和扩增区
4、扩增产物分析区
如使用全自动分析仪,区域可适当合并。
(二) 各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。
(三) 进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区—>标本制备区-〉扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区。
（四) 不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）.工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
二、工作区域仪器设备配置标准
（一）试剂储存和准备区
1、2—8C和—15C冰箱
2、混匀器
3、微量加样器（覆盖1—1000ul)
4、移动紫外灯（近工作台面）
5、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心）
6、专用工作服和工作鞋
7、专用办公用品
（二）标本制备区
1、2-8C冰箱、—20C或—80C冰箱
2、高速台式冷冻离心机
3、混允器
4、水浴箱或加热模块
5、微量加样器(覆盖1—1000ul）
6、可移动紫外灯（近工作台面）
7、超净工作台
8、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）
9、专用工作服和工作鞋
10、专用办公用品
如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪。
(三）扩增反应混合物配制和扩增区
1、核酸扩增仪
2、微量加样器（覆盖1—1000ul)
医疗机构临床基因扩增检验试验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验试验室工作导则
一、导言
临床基因扩增检验是一种常见的分子生物学技术，通过扩增特定基因
的DNA片段，以检测或确认一些疾病或遗传变异的存在。为保证临床基因
扩增检验的质量和准确性，制定本工作导则，规范试验室工作流程和操作
规范。
二、试验室管理
1.试验室应具备适当的面积和设施，保证样本处理和试验过程的分隔。
2.试验室应具备稳定的温度和湿度，确保试剂和样本的正常保存。
3.试验室应设有适当的通风和消毒设施，保持环境清洁和无菌。
4.试验室应配备必要的仪器和设备，确保试验的进行。
三、试剂和材料
1.所使用的试剂和材料应符合相关标准和规定，保证其纯度和质量。
2.所使用的试剂和材料应存放于适当的温度和湿度下，防止变质和污染。
3.经过开封的试剂和材料应在指定时限内使用，过期试剂和材料严禁
使用。
四、操作流程
1.样本接收和登记：接收样本后，应按规定标识和登记，确保样本信
息的准确性。
2.样本处理：根据实验要求和操作规程，对样本进行必要的预处理和处理。
3.DNA提取：按照标准的DNA提取方法，提取样本中的DNA。
4.扩增反应：根据实验设计，配置扩增反应体系，进行PCR反应。
5.凝胶电泳：将扩增产物经过凝胶电泳，分析扩增结果。
6.数据分析和解读：根据扩增结果，进行数据分析和解读，并写出相应的报告。
7.数据保存和管理：将样本信息、实验数据和报告记录在案，并按照相关规定进行保存和管理。
五、质控要求
1.建立完善的质控体系，包括内部质控和外部质控。
2.内部质控：每天进行实质性试验前，应进行质控试验，对设备、试剂和试验操作进行验证和检查。
医疗机构临床基因扩增检验工作导则
医疗机构临床基因扩增检验工作导则
一、概述
临床基因扩增检验是一种常见的分子生物学技术，用于检测个体的基
因型和基因表达水平，为临床诊断和治疗提供重要依据。医疗机构开展临
床基因扩增检验工作，需要建立科学规范的操作流程和质量控制体系，以
确保结果的准确性和可靠性。
二、工作流程
1.采样：根据具体疾病特点和检测要求，选择合适的采样方法和标本
类型，并确保采样过程符合标准操作规程，避免污染和损伤。
2.样本处理：对于血液等液体样本，需进行细胞分离、DNA提取等步骤。对于组织、细胞等固体样本，需进行组织切片、DNA提取等步骤。在
样本处理过程中，严格控制污染风险，避免外源性DNA污染。
3.扩增反应：根据实验要求和检测目的，选择合适的扩增方法：PCR、RT-PCR等。在反应体系中加入模板DNA、引物、酶和缓冲液等物质，进行
适当的温度循环，使目标序列得到扩增。
4.产品检测：对扩增产物进行凝胶电泳、定量PCR、测序等技术，判
断扩增反应的成功与否，避免假阳性和假阴性结果的发生。
5.结果分析：依据扩增产物的检测结果，结合病例信息和数据库查询，进行基因型分析、突变检测、表达水平分析等，提供临床诊断和治疗建议。
三、质量控制
1.标本质量控制：确保采样过程中样本的完整性和稳定性，避免血液凝块、组织坏死等问题。采用标准操作规程进行样本处理，保证样本的一致性和可靠性。
2.试剂质量控制：使用符合质量要求的试剂，检验其有效期和保存条件，并建立试剂库存管理制度，确保试剂的稳定性和可靠性。
3.实验操作质量控制：建立标准操作规程，对实验人员进行培训，确保操作的规范性和一致性。进行实验过程中的质量控制，包括负对照的引物、样本的扩增效果等。
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
一、临床基因扩增检验实验室的设计
（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。原则上临床基因扩增检验实验室应当设置
以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域在物理
空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的
分隔状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时
荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区的功能是：
1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样
本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
3.扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向。临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照
试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流
进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方
向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。（三）工作区域仪器设备配置标准。
1.试剂储存和准备区。
（1）2～8℃和-20℃以下冰箱。
临床基因扩增检验实验室临床标本安全管理制度
临床基因扩增检验实验室临床标本安全管理制度
一、目的：
规范实验室对标本的验收、保存和安全的全过程，以保证样品的完整性和唯一性。
二、适用范围：
临床实验室收检的临床标本。
三、职责：
由临床基因扩增检验实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。
四、要求：
1、总则
标本的管理要确立标本的唯一标识制度，保证标本在分析前、分析中和分析后不同阶段的唯一标识，以确保标本在任何时候都不会发生混淆。在标本验收、保存、安全处置等方面应有措施，以保证标本在储存、处置、准备、检测过程中不会导致非正常变质、损坏，确保样品的完整性。
2、标本的受理
医生（委托方）应填写申请单及其他规定的材料，按规定对标本进行状态检查，如怀疑达不到要求，询问医生（委托方）予以说明和解释，确认不符合要求，以书面通知对方退回，并记录存档。受理的标本应编制唯一标本编码，并牢固贴在标本上，在以后的整个过程中，标本上必须有
此唯一标记，与标本检测相关的所有有关文件也都应标有此唯一标识。
3、标本保存
标本保存应按标本保存要求保存（如：冷藏温度4-10℃；
冷冻温度-15至-20℃），并放置在适当场所（冰箱、冷库等），定期记录有关参数，一旦保存条件达不到要求，应及时处理，以保证标本的不变质或损坏。标本的保存场所，应有安全措施（如：加锁等）。
4、标本出现问题的处理
标本保存过程中出现问题时，应及时报告科室技术负责人，必要时通知被检单位，重新送检。
5、受理标本需留有备用标本，供复检时使用。
6、当标本在室之间或组间移交时应有移交记录和签字。
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为使基因扩增检验技术有效地应用于临床,更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务,保证检验质量,特制
定本规范。
一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002】10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》。为避免污染,必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临床基因扩增检验实验室。
临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区域都必须有明确的标记,以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序,即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区,避免发生交叉污染。在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服,以便于鉴别。此外,当工作者离开工作区时,不得将各区特定的工作服带出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因,因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
(一)试剂贮存和准备区
下述操作在该区进行:贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区,不能经过产物分析区。在打开含有反应混合液的离心管或试管前,应将其快速离心数秒。试剂
原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后,应将其分装贮存备用,避免由于经常打开反应管吸液而造成污染。
含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。大多数用于扩增
的试剂都应冰冻贮存。为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂,应分装冰冻贮存试剂溶液。贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定。
主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查,评价结果必须有书面报告。对于“热启动”技术(在第一个高温变性步骤后加入酶),聚合酶也可不包含在主反应混合液中。
在整个本区的实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。
严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本工作区的实验台表面应可耐受诸
如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键,因此可使用可移动紫外灯(254nm 波长),在工作完成后调至实验台上60~90em 内照射。由于扩增产物仅几
百bp,对紫外线损伤不敏感,因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间,最好
是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有日常记录。
(二)标本制备区
下述操作在该区进行:临床标本的保存,核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入
至扩增反应管和测定RNA时eDNA的合成。
要正确使用加样器。由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。可通过在本区内设立正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料,必须有明确的样本处理和灭活程序。
用过的加样器吸头必须放人专门的消毒(例如含次氯酸钠溶液)容器内。实验室桌椅表面每次工作后都要清洁,实验材料(原始血标本、血清标本、提取中的标本与试剂的混合液等)如出现外溅,则必须分别处理并作出记录。
对实验台适当的紫外照射(254nm波长,与工作台面近距离)适合于灭活去污染。可移动紫外线管灯可用来确保工作后对实验台面的充分照射。
样本处理对核酸扩增有很大影响,必须使用有效的核酸提取方法,可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价。
用于RNA扩增检测的样本制备好以后,应立即进行cDNA合成,因为cDNA链较RNA稳定,保存相对容易。为保证逆转录反应的需要,应在标本制备区设置一个以上的温育装置。
cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定,倾向于使用一步法:即使用在扩增反应缓冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的DNA聚合酶进行逆转录,其较cDNA合成后再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩增发生污染的可能性降低。
待测RNA的cDNA拷贝须保存在标本制备区,不得在本区对样本进行PCR扩增。
(三)扩增区
下述工作在本区内进行:DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cr)Na(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在
本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
不能从本区再进人任何“上游”区域,可降低本区的气压以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的走动。如有加样则应在超净台内进行。打开预处理过的反应混合液时必须防止液体溅出,尤其是在巢式扩增步骤之间。一个简单的方法是在打开反应管前快速离心数秒。可使用体积较小的离心机,因其所占实验台面小,易于用一只手操作,适合于大多数超净台。防潮屏障如石蜡油或轻矿物油也具有防污染作用,但必须注意的是,矿物油本身也可能成为一种持续性的污染源。用过的加样器必须注意清洁消毒。