临床基因扩增实验室验收要求和要点
天津市临床基因扩增检验实验室验收规程
附件１天津市临床基因扩增检验实验室验收规程一、目的加强全市临床基因扩增检验实验室的管理，确保检验工作质量和医疗安全。
二、适用范围全市拟开展临床基因扩增检验项目的实验室。
三、准备工作（一）人员要求1.具有检验或检验相关专业资质的本单位在职人员及多点执业人员，其中，本单位在职人员不得少于该实验室工作人员总数的一半。
2.具有一定的分子生物学知识及实验操作经历，了解防污染和生物安全要点并熟练掌握相关仪器设备的使用操作。
3.必须经天津市临床检验中心或其它具有培训资质的机构培训并考核合格，获得《临床基因扩增检验实验室技术人员上岗证》。
4.实验室人员配备应能满足日常工作需要，至少配备有2名以上的实验技术人员。
15.实验室专业主管应为本科以上学历、中级以上职称，具有检验或检验相关专业资质的，并从事本专业工作2年以上者。
（二）环境要求1.按照临床基因扩增检验实验室区域设计原则筹建实验室。
设置基本原则为有4个独立且完全隔离的工作区域，包括试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区以及产物分析区，如使用全自动分析仪，后二个区域可适当合并；各区有明确标识及专有仪器设备和清洁用具等，人流和物流单向流动。
2.所需的电源、水源和温湿度符合实验工作要求。
3.不得与其他实验室混用，无尘、无磁场干扰及无同位素污染。
4.必须有明示生物危害的标志及禁止无关人员入内的标志。
5.有独立的通风设施、生物安全措施，保障实验人员身体健康。
（三）医疗机构要求1.申请临床基因扩增检验实验室的医疗机构应当具备相应功能和临床需求。
2.经行政审批部门核准登记医学检验诊疗科目的二级以上医疗机构或能够出具临床检验报告的医学检验所（独立实验室），有涉及生物安全的样本采集和处理的相应安全等级的实验室。
23.医疗机构对临床基因扩增检验实验室应当集中设置，统一管理。
4.从事遗传病临床基因扩增检验的医疗机构，应具备相应的医学实验室诊断技术平台。
（四）医疗机构需提交的材料1.天津市临床基因扩增检验实验室验收申请表。
临床基因扩增实验室验收要求和要点
临床基因扩增实验室验收要求和要点1.实验室设施验收要求：-实验室建筑面积符合要求，具备充足的操作空间，可以满足日常实验工作的需要。
-实验室具备独立的进出通道，避免与其他非相关实验室的交叉污染。
-实验室通风系统符合要求，保证室内空气流通。
-实验室具备紫外线杀菌灯和安全柜等必要的安全设备。
-实验室仪器设备正常工作，并且定期维护和校验，保证准确性和可靠性。
-实验室具备足够的电源和冷却设备，确保实验室设备的正常运行。
2.实验室安全管理要求：-实验室应具备安全管理制度和操作规程，明确实验人员的职责和权限。
-实验室应配备足够的紧急救援设备和药品，如急救箱、灭火器等，以应对突发情况。
-实验室应设有紧急暴露处置计划和应急预案，保障实验人员和环境的安全。
-实验室应有充足的安全标识和警示牌，提示实验人员注意安全事项。
-实验人员应定期参加相关安全培训和知识更新，增强安全意识。
3.实验室操作规范要求：-实验室应具备严格的实验操作规程和操作手册，确保每个步骤的准确性和可重复性。
-实验室应定期检查和校准关键仪器，如PCR仪、电泳仪等，确保其准确性和可靠性。
-实验室应妥善保存实验记录和数据，确保实验结果的可追溯性。
-实验室实验人员应定期参加技术培训和质控练习，提高操作技能和实验质量。
-实验室应建立适当的检测和质控体系，包括内部质控和参加外部质控活动，确保实验结果的准确性和可比性。
4.实验室废弃物处理要求：-实验室应具备妥善处理废弃物的设备和操作规程，包括化学品废弃物和生物废弃物等。
-废弃物应分类储存并定期清理，确保实验室环境的整洁和卫生。
-废弃物的处置应符合相关法规和规定，以减少对环境的污染和危害。
综上所述，临床基因扩增实验室验收要求和要点主要包括实验室设施验收、实验室安全管理、实验室操作规范和实验室废弃物处理等方面。
通过严格的验收，可以确保实验室的正常运行和实验结果的准确性，保障临床基因扩增实验的可靠性和可行性。
09-临床基因扩增检验实验室标准化建设与技术验收-张炳昌
并进行紫外照射30分钟以上。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：
标本制备区（2区） 实验前： 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） ℃； 冷冻室（18℃2℃） 扩增位置： 扩增位置： 25 26 27 28 29 30 31 32 ℃ （允许范围：30%~70%） 冰箱（柜）温度：冷藏室（2~8℃） 实验室温度： 阳性室内质控物来源： 阴性室内质控物来源：
v
9.实验室消耗品购买、审核和贮存程序有□ 无□ v 10.实验室废弃物的处理程序有□ 无□ v 11.实验室安全及生物安全程序有□ 无□ v 12.实验室的清洁程序有□ 无□ v 13.室内质量控制程序有□ 无□ v 14.抱怨处理程序有□ 无□ v 注：请将实验室相关程序文件和标准操作规程 （sop）附后。
v 人流单向性 v 物流单向性
目的：保证无基因污染
三、临床基因扩增检验实验室各区域 工作注意事项
v (一)试剂储存和准备区。贮存试剂和用于标本
制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮 存和准备区，不能经过扩增检测区，试剂盒 中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区， 应当保存在标本处理区。
v (二)标本制备区。由于在样本混合、核酸纯化
℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度： 浓度及批号： 批号：
所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置： 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 23 8 16 24 核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。 仪器设备使用： 生物安全柜： 离心机： 实验后： 正常 不正常 正常 振荡器： 不正常 正常
需要准备的一般资料
v v v v v v v v v v
临床基因扩增实验室验收要求和要点共92页
临床标本的接收
应在四个测定区域之外的地方或适合的地方。 接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从
其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本 在核酸提取时，由基因扩增检验实验室人员将
标本带入至标本制备区。
21
1.4 1.5
试剂贮存和准备区 a.冰箱； a.混匀器； a.微量加样器； a.可移动紫外灯； a.专用工作服和工作鞋； a.消耗品（带滤心吸头、一次性手 套等）； a.专用实验记录本、记号笔等。 标本制备区 (a) 冰箱 (2~8℃和-20℃或-80℃)； (a)高速台式冷冻离心机 (c) 水浴箱和/或加热模块 (d) 生物安全柜 (a)混匀器； (a)微量加样器； (a)可移动紫外灯； (a)专用工作服和工作鞋； (a)消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）； (a)专用实验记录本、记号笔等。
功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其 加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的 操作，应符合生物安全二级实验室防护设 备、个人防护和操作规范的要求。
24
标本制备区
标本制备区内的仪器设备主要有生物安全柜 、加样器、 高速台式冷冻离心机、水浴箱和/或加热模块、混匀器、 冰箱、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤 芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔。加样 器应定期校准。如需处理大分子DNA，应当具有超声波 水浴仪。
2
验收依据
《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》
卫办医政发〔2019〕194号
临床基因扩增检验实验室（血站核酸检测）工作导则 《临床基因扩增检测实验室技术验收报告》
3
为什么要进行验收？
方法敏感 技术要求高 存在问题多
假阴性、假阳性 不规范 人员素质
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则一、前言随着科技的不断发展，基因扩增检验技术在医学领域的应用越来越广泛。
为了确保基因扩增检验实验室的工作质量和准确性，提高检测结果的可靠性，我们制定了本《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》。
本文将从实验室的基本要求、实验操作流程、质量控制和安全管理等方面进行详细阐述，以期为我国医疗机构临床基因扩增检验实验室的工作提供参考。
二、实验室基本要求1.1 实验室布局实验室应设立专门的实验区域，包括试剂准备区、标本处理区、仪器操作区和废弃物处理区等。
各区域之间应保持一定的距离，以确保实验操作的安全性。
实验室应设置合理的通风设备，确保实验室内空气的流通。
1.2 仪器设备实验室应配备先进的基因扩增检验仪器设备，如PCR仪、实时荧光定量PCR仪等。
仪器设备应定期进行校准和维护，确保其性能稳定可靠。
实验室还应配备相应的试剂和耗材，以满足实验需求。
1.3 人员配备实验室应有专业的技术人员负责实验操作和数据分析工作。
技术人员应具备扎实的专业知识和丰富的实践经验，能够熟练操作各类仪器设备和处理实验数据。
实验室还应设有管理人员，负责实验室的日常管理和质量控制工作。
三、实验操作流程2.1 标本采集与处理患者需按照医生的要求进行标本采集，如血液、唾液、尿液等。
采集后的标本应及时送至实验室进行处理。
标本处理过程中应注意避免污染，确保标本的完整性和准确性。
2.2 试剂准备根据实验需求，选择合适的试剂和耗材进行准备。
试剂准备过程中应严格按照说明书进行操作，确保试剂的质量和纯度。
应对试剂的使用量和保存条件进行记录，以便后续分析。
2.3 实验操作根据实验方案，使用相应的仪器设备进行实验操作。
实验操作过程中应严格遵守操作规程，确保实验的准确性和可靠性。
应对实验数据进行实时监测和记录，以便后续分析。
2.4 结果分析与报告实验完成后，应对实验数据进行分析，得出相应的检测结果。
分析过程中应遵循相关标准和规范，确保结果的准确性。
临床基因扩增检验实验室的设置及技术验收(下)
临床基因扩增检验实验室的设置及技术验收(下) 李金明 卫生部临床检验中心 100730二． 设施和环境本章包括五条。
要求实验室具备良好的工作环境，即在照明、工作空间、能 源、温控、通风等方面必须能满足检测要求，配备温湿度计和稳压电源等。
要求实验室建立实验室管理制度和措施，对实验室的进入、使用、清洁、管理、废弃血清处理和生物防护等方面作出明确规定。
本章的重点是实验室的设施和环境条件能否满足临床基因扩增检验的要求。
2.1主要是检查实验室的空间、照明、空调系统以及通风系统，各区都应有足够的空间，良好的照明，有符合要求的空调设备以及良好的通风。
2.2较为简单，就是看实验室各区是否配备有温湿度计及是否有温湿度记录本，在扩增区，扩增仪是否配备有稳压电源。
2.3是检查实验室是否有明确的标识对人员进入进行限制和控制，如人员进入控制标识、生物传染危险性标识等。
2.4则看实验室是否有实验室管理制度、实验室清洁程序以及相应的设施，即是否每一个实验区内都有其专用的清洁用具如拖把、抹布等，以及是否规定实验室的清洁亦应遵循试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区的单一流向。
2.5检查是否有生物污染物处理的程序及设施和生物防护的程序及设施等，对于设施即看是否有用于生物污染物处理的垃圾袋、消毒桶或高压锅（如果程序规定需要高压的话）；生物防护设施即为口罩、防护衣、手套、眼罩、消毒液、75%乙醇、自来水或生物安全柜等。
曾有同道问，临床基因扩增检验实验室到底需要多大面积？具体多少面积不太好界定，因为实验室可大可小，原则只有一个，就是要能满足自己的工作要求，应为实验操作人员提供一个良好舒适的工作环境，试想如果一个工作环境给你的感觉是一塌糊涂，能做好临床标本的检验吗？三．人员本章包括三条。
要求在临床基因扩增检验实验室工作的实验操作人员必须经过培训并取得上岗证，此外，实验室还应有自己的年度培训计划，保证实验室人员能不断得到培训。
实验室应保存其全部工作人员的技术业绩档案。
临床基因扩增检验实验的设置、管理和技术验收(新)
卫生部临床检验中心 李金明
临床基因扩增检验实验室的设置
依据：卫生部颁发的《临床基因扩
增检验实验室管理暂行办法》（卫 医发[2002]10号）
临床标本的接收
通常的工作流程：标本采集
编号 保存或检测
血清分离
应在四个测定区域之外的地方或区域内 接收 接收的标本应收集在原始容器中 在核酸提取时带入至标本制备区
记
录
本章包括三条。 有记录管理制度：适合自身实际情况，符 合现行规章制度；（由谁管、在何处管、 保存多长时间） 原始记录、计算和导出数据应归档并保存； 记录应有有关人员的签字； 所有记录和报告都要妥善保管并保密。
报
告
检测结果的报告应准确、清晰和客观； 定性测定报告“阴性”或“阳性”；定量测定则 以拷贝数/ml或IU/ ml报告；避免二者之间的混 淆； 每份报告应包括以下信息：标题、唯一标识、检 测标本说明、标本特性和状态、标本接收日期和 检测日期、检测方法、检测和校核人员签字及发 出日期、参考结果或范围； 如对报告有效性有疑问，实验室应立即通知临床 相关科室予以改正的程序； 有报告的发放程序：用电话、传真、电子邮件报
实验室的日常工作管理
工作项目
水浴箱、微量恒温器（加热模块） 次氯酸钠溶液 生物安全柜 室内质控 弱阳性质控（定性） 低、中、高浓度质控（定量） 阴性质控：原样本 经历提取过程的空管 仅含扩增反应混合液管 实验台面
核查点
□校准及记录温度 □新鲜配制 □先起动运行30分钟后再开始工作 □有 □有 □有 □有 □有 □使用后用次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁 □紫外照射 □使用后用次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁 □遵循单一工作流向 □紫外照射
临床基因扩增实验室技术验收报告_工作报告.doc
临床基因扩增实验室技术验收报告_工作报告(a)附属于实验室:的法律实体的名称地址:邮政编码:法定代表人:实验室主任:联系人:电子邮件:电话:传真:(2)接受现场技术验收的实验室代表的姓名和职务:二.验收依据:卫生部发布文件《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》三.验收时间:四.验收审查地点:V.技术验收结论:合格的，建议授予验收证书；基本合格，仍有一些缺陷，缺陷为项，限期改进，改进后授予验收证书；不合格、停止验收、实验室改进需要重新应用。
(一)验收中发现的问题及意见:附件1:临床基因扩增实验室技术验收表；附件2:临床基因扩增实验室技术验收意见总结；附件3:整改要求。
(2)其他需要说明的问题:□如有，见附件4；□无。
(3)验收评估员的姓名和签名:首席评审员姓名:签名:审核人姓名:签名:签名:签名:协调员姓名:签名:签名时间:(4)签字地点:验收审查小组:的意见附件1临床基因扩增实验室技术验收表序列号验收内容接受意见符合基登有缺少字符关节凹陷缺乏这件物品不见了。
目前不需要评估。
评论和注释1实验室设置和设备1.1实验室的标准化分区:原则上应分为四个区域，但如果使用全自动扩增检测器，这些区域可以适当合并。
1.2每个工作区域的清晰标记1.3实验室应配备临床基因扩增检测所需的所有仪器和设备(包括质量控制材料)，以确保满足《临床基因扩增检验实验室管理办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》的相关要求。
1.4试剂储存和制备区冰箱；混合器；微量进样器；移动式紫外线灯；特殊工作服和工作鞋；耗材(带滤芯的吸头、一次性手套等。
)；特殊的实验室笔记本、记号笔等。
1.5样品制备区(a)冰箱(2~8℃和-20℃或-80℃)；高速台式冷冻离心机(c)水浴箱和/或加热模块(d)干净的工作台或防污染盖混合器；注:“请根据接受的选择键入”临床基因扩增实验室技术验收表序列号验收内容接受意见符合基登有缺少字符关节凹陷缺乏这件物品不见了。
临床基因扩增实验室的创建及现场验收
临床基因扩增实验室的创建及现场验收孙颖基因扩增技术是一种克隆技术，指将基因中的DNA在特定的条件下，通过变性、退火、延伸的步骤循环，加入引物、工具酶等物质，使靶基因特异性的复制上百万倍。
它具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，现广泛应用于微生物学、遗传学、分子生物学等领域。
1现状分析和问题确立根据临床基因扩增检验技术管理规范[1，2]要求医疗机构进行基因扩增试验，需经省级临检中心审核验收。
我科于2015年计划申报临床基因扩增实验室，购买了ABI7500定量扩增仪1台，因一些原因计划搁浅，一直未申报，仪器未能正常投入使用中，基本处于荒废状态，不能有效的运转对仪器本身也是不利的。
相关标本只能外送检测，就最常见的乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B，HBV）-DNA一个项目，一年就有2000多例，对于科室而言，是一笔经济损失。
同时，我院现为二级医院，三级医院正在积极创建中，根据三级医院要求，检验部门必须能进行分子诊断基因扩增实验项目并且获得实验室准入合格证，因此，我科基因扩增实验室的创建势在必行。
本院现在面临的问题是，不通过临床基因扩增实验室的审核，就不能开展项目，不能应用于临床，通过实验室的验收成了迫在眉睫的问题。
2解决办法本院从2017年1月进行筹划，从实验室的硬件条件、各种仪器的检定校准、人员的培训学习、检测系统的性能验证实验、质量手册和操作手册的文件编写、实验室的质量控制等方面着手准备，递交书面申请，并于2017年9月31进行实验室的现场验收。
3执行过程整个创建过程分为6个部分。
3.1实验室的硬件条件：由于是老旧实验楼，建造时没有按要求执行，必须改造，选取连续的3间房屋作为基因扩增实验室的试剂区、标本处理区、扩增区。
将选好的房间内用移门隔断，增设缓冲间，利用吊顶的方法加装负压装置通风设备，在硬件上做到力所能及。
3.2检测系统的性能验证：我科计划开展乙肝病毒核酸的检测，于是进行了HBV-DNA的性能验证：根据《医院检验科建设管理规范》[3]基因扩增实验的性能要求，制定了精密度、线性范围、生物参考区间验证、最低检测限、准确度的检测计划，并按照计划逐步实施检测。
医疗机构临床基因扩增检验试验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验试验室工作导则一、导言临床基因扩增检验是一种常见的分子生物学技术，通过扩增特定基因的DNA片段，以检测或确认一些疾病或遗传变异的存在。
为保证临床基因扩增检验的质量和准确性，制定本工作导则，规范试验室工作流程和操作规范。
二、试验室管理1.试验室应具备适当的面积和设施，保证样本处理和试验过程的分隔。
2.试验室应具备稳定的温度和湿度，确保试剂和样本的正常保存。
3.试验室应设有适当的通风和消毒设施，保持环境清洁和无菌。
4.试验室应配备必要的仪器和设备，确保试验的进行。
三、试剂和材料1.所使用的试剂和材料应符合相关标准和规定，保证其纯度和质量。
2.所使用的试剂和材料应存放于适当的温度和湿度下，防止变质和污染。
3.经过开封的试剂和材料应在指定时限内使用，过期试剂和材料严禁使用。
四、操作流程1.样本接收和登记：接收样本后，应按规定标识和登记，确保样本信息的准确性。
2.样本处理：根据实验要求和操作规程，对样本进行必要的预处理和处理。
3.DNA提取：按照标准的DNA提取方法，提取样本中的DNA。
4.扩增反应：根据实验设计，配置扩增反应体系，进行PCR反应。
5.凝胶电泳：将扩增产物经过凝胶电泳，分析扩增结果。
6.数据分析和解读：根据扩增结果，进行数据分析和解读，并写出相应的报告。
7.数据保存和管理：将样本信息、实验数据和报告记录在案，并按照相关规定进行保存和管理。
五、质控要求1.建立完善的质控体系，包括内部质控和外部质控。
2.内部质控：每天进行实质性试验前，应进行质控试验，对设备、试剂和试验操作进行验证和检查。
3.外部质控：定期参加外部质控活动，与其他实验室进行比对，检验实验室的准确性和一致性。
4.定期检查和维护设备，确保设备的正常运行和准确性。
5.建立合理的记录和文档管理系统，保证实验数据的真实和完整。
六、安全和环境保护1.全体工作人员应接受必要的安全和环境保护知识培训，掌握正确的操作方法和应急措施。
临床基因扩增检验操作规范
〔2〕操作不当带来的后果
主要指不能严格按照说明进行操作 造成PCR检测失败。
如HCV RNA PCR样品处理试剂A、 B、C和75%乙醇的操作过程。
50μl血清标本
( 标本可用血清或血浆，尽量 防止使用肝素做抗凝剂，
〔一〕标本的采集
临床标本包括EDTA或枸橼酸钠抗凝全血或骨髓、 血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。
EDTA和枸橼酸盐是首选的抗凝剂。不能使用肝素 抗凝，因肝素是Taq酶的强抑制剂。
玻璃器皿在使用前应高压处理，250°烘烤4小时 以上可使RNA酶永久性失活。
临床用于RNA〔如HCV RNA〕扩增检测的血标本 应尽快〔3小时以内〕别离血浆，以防止RNA的降解。
〔二〕标本的稳定化处理
DNA：不需特殊稳定化处理。 RNA：异硫氰酸胍盐〔GITC〕可使
DNA酶和RNA酶失活。
〔三〕标本的运送
可在常温下通过邮寄运送，如用于 DNA扩增检测的EDTA抗凝全血及用于 RNA扩增检测的GITC稳定化处理的标本。
未经稳定化处理，那么必须速冻后， 放在干冰中运送。
〔四〕标本的贮存
1.阳性变阴性
(1) 有些阳性病人，经过PCR检测后为阴 性，可能有两种情况： 一是采集标本方法或部位不正确， 二是如果病人取样部位病原体消失， 需根据病人的病理情况采样。
(2) 标本保存不当，可引起PCR失败。 收集的标本乱放〔未放冰箱〕，病原体的破 裂，检测的核酸降解，失去了PCR检测的模 板或造成标本污染。
〔如酚、氯仿等〕。 痰须液化处理。
操作时〔加裂解液后充分混匀，沸水浴〕 注意： ①离心管不能插得过低，以防进水； ②水浴时不能加盖，防管盖爆开； ③水浴时间须准确，10±1 min； ④水浴时不能走开；
医学-临床基因扩增实验室验收要求和要点
8
PCR实验室的空气流向
临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂 储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析 区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。 可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通 过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。
保证检测质量 防止实验室污染 建立LAB内部质量管理模式 尝试强制性实验室认可
5
6
质量管理的内涵
写你所做的 做你所写的 记录你已做的 分析你已做的
7
PCR 实验室区域设计原则
原则上应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标 本制备区、扩增区、扩增产物分析区。
这4个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各 区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全 的分隔状态，不能有空气的直接相通。
2
验收依据
《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》
卫办医政发〔2019〕194号
临床基因扩增检验实验室（血站核酸检测）工作导则 《临床基因扩增检测实验室技术验收报告》
3
为什么要进行验收？
方法敏感 技术要求高 存在问题多
假阴性、假阳性 不规范 人员素质
4
验收要达到的目的
临床基因扩增实验室设置的一般原则 各区独立
注意风向
“十六字口诀”
因地制宜
方便工作
本片来自李金明教授
理想的PCR实验室设置A
临床基因扩增实验室验收要求和要点
2.5 实验室应有关化学试剂管理、废 弃血清处理、生物防护等的措施
通风问题较多：排 风压力设置不合理 表面上做到物理隔 离，实际暗藏缝隙
湿度容易忽略
实验室清洁SOP要点
目的:为了使实验室台面、地面和仪器设备在使用后，处于洁净和无感染性 状态，以防止出现因仪器设备不洁影响检测或仪器使用寿命；防止因实验 室台面、地面和仪器设备的生物传染危险性造成实验室人员感染，以及防 止实验室交叉污染而出现假阳性结果等。
性能验证：按检测系统
（包括试剂）说明书进
行各指标的复现 38
5
检测方法
5.1
实验室应制定以下标准操作程
序:
有关仪器设备操作、维护和
校准程序；
有关扩增检测的工作程序。
所有上述标准操作程序都应现 行有效并便于工作人员使用。
5.2
实验室应有仪器、试剂、消耗
品的选购、验收、贮存和质检
程序;
*5.3 对计算和数据换算应进行适当 的校核。
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
16
本图来自李金明教授
标本制备区
空气流向 +
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产物
分析区
空气流向++
门
门
17
本图来自李金明教授
扩增和产 物分析区
空气流向
其他实验室
试剂准备区
空气流向
其他实验室
其他实验室
走廊
走廊
其他实验室
空气流向
标本制备区
其他实验室
其他实验室
10
临床基因扩增实验室验收要求和要点资料共93页
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
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❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
血站核酸扩增检验试验室技术验收要求及流程
血站核酸扩增检验实验室技术验收要求及流程湖南省临床检验中心吕岳峰一、核酸扩增检验技术及其验收目的⏹核酸扩增检验技术指以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术，以聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction、PCR）应用最广。
⏹实行验收的目的规范核酸扩增检验项目技术的应用，保证临床用血安全。
二、国家关于开展核酸扩增实验的法规1、卫生部《临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫医发[2010]194号）。
⏹2、卫生部临床检验中心2010年《临床基因扩增检验实验室工作规范》。
⏹3、国家卫生和计划生育委员会印发《全面推进血站核酸检测工作实施方案（2013-2015年）》（卫计生发[2013]22号）。
⏹目前国家对采供血机构核酸扩增检验技术的应用尚没有出台专门的管理办法，故对血站核酸扩增检验实验室的管理包括验收依照上述文件要求进行。
三、验收的主要内容⏹1、对人员的要求⏹从事核酸扩增检验实验室技术人员必须进行上岗培训，经培训合格者方可从事基因扩增检验工作。
培训及合格证发放单位目前为卫生行政管理部门授权的卫生部临床检验中心。
2、对实验室分区的要求⏹实验室原则上应分为四个区，但如使用核酸自动提取和（或）全自动扩增检测仪，区域可相应减少。
要注意的是：⏹1）每一区域都须有专用的仪器设备，各区域都必须有明确的标记，以避免设备物品如加样器等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品混淆。
⏹2）进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区向标本制备区、扩增区、产物分析区流动，以避免发生交叉污染。
⏹3）在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，以便于鉴别。
⏹4）此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。
理想的核酸扩增检验实验室分区布局示意图3、对仪器设备的要求实验室应按分区配备开展核酸扩增检测所需的所有仪器设备。
保证核酸扩增检验的有关要求得到满足。
临床基因扩增检验实验室工作要求规范
临床基因扩增检验实验室工作规为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务，保证检验质量，特制定本规。
一、临床基因扩增检验实验室的规化设置及其管理临床基因扩增检验实验室的规化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》。
为避免污染，必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临床基因扩增检验实验室。
临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。
各区域都必须有明确的标记，以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区，避免发生交叉污染。
在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，以便于鉴别。
此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。
不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
(一)试剂贮存和准备区下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分析区。
在打开含有反应混合液的离心管或试管前，应将其快速离心数秒。
试剂原材料必须贮存在本区，并在本区制备成所需的贮存试剂。
当贮存试剂溶液经检查可用后，应将其分装贮存备用，避免由于经常打开反应管吸液而造成污染。
含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。
大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存。
为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂，应分装冰冻贮存试剂溶液。
贮存试剂的分装体积根据通常在实验室一次测定所需的扩增反应数来决定。
主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查，评价结果必须有书面报告。
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1.6 扩增区 (a) 核酸扩增仪;
(b)微量加样器；
(c)可移动紫外灯；
(d)专用工作服和工作鞋；
(e)消耗品（带滤心吸头、 一次性手套等）； (f)专用实验记录本、记 号笔等。
扩增区
功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。 扩增区的主要仪器就是核酸扩增热循环
仪，该仪器需进行校准。
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产物分析区
序号
验收内容
1
实验室设置和设备
验收意见
符 基但 不 缺 暂
合 本有 符 此 不
符缺 合 项 需
合陷
考
核
评论与说明
1.1 实验室的规范化分区:原则上 应分为四个区,但如使用全自 动扩增检测仪,区域可适当合 并
1.2 各工作区的明确标记
1.3 实验室应配备开展临床基因 扩增检测所需的所有仪器设 备（包括质控物）。保证 《临床基因扩增检验实验室 管理办法》和《临床基因扩 增检验实验室工作导则》的 有关要求得到满足。
34
检测技术人员要求---人员应有培培训训和能及力能评估力的记评录 估
培训：符合资质的人员还要接受实验室生物安全以及厂家 的上岗前仪器设备操作、维护及校准等的培训。技术培训 内容应覆盖工作人员所涉及的所有工作范畴，培训的评估 结果是确定人员是否适合其岗位的依据。
能力评估：实验室应建立操作人员能力评估机制。每年至 少实施一次人员的能力评估，以评估其临床基因扩增检测 工作的胜任程度。参照评估结果制定人员持续培训计划。 操作人员的操作误差分析、检测过程变更可作为培训需求
根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用 实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采 用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析 仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。
8
PCR实验室的空气流向
临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂 储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析 区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。 可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通 过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。
走廊
走廊
其他实验室
空气流向
标本制备区
其他实验室
其他实验室
其他实验室
本图来自李金明教授 18
标本制备区
空气流向+
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产
物分析区
空气流向++
门
门
本图来自李金明教授
A
扩增区
门 产物分析区
标本制备区 门
门 试剂准备区
门
外走廊
门
B
本图来自李金明教授
扩增及产物 分析区
标本制备区 门
试剂准备区 门
24
标本制备区
标本制备区内的仪器设备主要有生物安全柜 、加样器、 高速台式冷冻离心机、水浴箱和/或加热模块、混匀器、 冰箱、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤 芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔。加样 器应定期校准。如需处理大分子DNA，应当具有超声波 水浴仪。
加热模块和水浴应使用已经校准的温度计定期对所设置 的温度进行校准。
纳入培训活动，需记录人员的能力评估过程。
35
4． 设备管理和质控物
4.1 所有设备应有维护程序文件；
*
如果任一设备有问题应立即停
止使用，并加上明显标识，如
可能应将其贮存在规定的地方
直至修复；
*
修复的设备必须经校准、检定
（验证）或检测满足要求后方
能再次投入使用；
*
实验室应检查由于上述缺陷对
以前所进行的检测工作的影响。
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核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板 或芯片上探针杂交方法（放射性核素标记或非放射性核素标 记）、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、 Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。本区是最主 要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品 及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩 增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至1 mol/L HCl中，并且不能在实验室内倾倒，而应当至远离PCR实验 室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至1 mol/L HCl中浸泡 后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。
试剂储存和准备区
功能：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混 合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和 准备。
试剂准备区的仪器设备主要有冰箱、微量加样器、 混匀器、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品 （带滤芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记 录笔。加样器应定期校准。
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标本制备区
功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其 加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的 操作，应符合生物安全二级实验室防护设 备、个人防护和操作规范的要求。
2.4 应有实验室“内务管理”（如 人员流动、清洁等）制度；
2.5 实验室应有关化学试剂管理、 废弃血清处理、生物防护等的 措施
通风问题较多： 排风压力设置不 合理
表面实验室清洁SOP要点
目的:为了使实验室台面、地面和仪器设备在使用后，处于洁净和无 感染性状态，以防止出现因仪器设备不洁影响检测或仪器使用寿命； 防止因实验室台面、地面和仪器设备的生物传染危险性造成实验室人 员感染，以及防止实验室交叉污染而出现假阳性结果等。
材料的具体内容作详细规定。
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检测系统的确认、运行与维护
检测系统的确认 实验室必须实施检测系统的确认活
动。确认活动包括检测系统购置前的设计确认，使用前
的安装确认、运行确认和性能确认，检测系统使用后的
性能监控及再确认。除应提供厂商的安装确认报告之外
，实验室还应对每个检测系统进行分析灵敏度、重复性
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
本图来自李金明教授 16
标本制备区
空气流向 +
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产
物分析区
空气流向++
门
门
本图来自李金明教授 17
扩增和产 物分析区
空气流向
其他实验室
试剂准备区
空气流向
其他实验室
其他实验室
规定应具有的SOP
仪器设备的维护保养程序、 仪器设备的校准程序、 仪器设备的操作程序、 临床标本的收集程序、 临床标本的处理（核酸纯 化）程序、 临床标本的保存程序、 核酸扩增及产物分析检测 的操作程序、
试剂的质检操作程序、 消耗品购置验收质检程序、 废弃物的处理程序、 内务管理程序、 室内质量控制程序、 抱怨处理程序。
适用范围应包括实验室地面、台面和仪器设备等的清洁。 按实验室台面、地面和仪器设备分开来写各自的具体清洁方法，要具
体而又有可操作性。 应规定工作人员在清洁时，必须按试剂准备区标本制备区扩增
(及产物分析)区方向进行，不得逆行 规定每一工作区域的清洁必须使用专用的清洁用具，不得混用 规定有潜在生物传染危险性材料溅出时的消毒清洁方法
9
PCR实验室工作基本原则
进入各工作区域应当严格按照单一方向进行 各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的
设备、物品不得混用。 不同工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。 实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区
→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验 区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
临床基因扩增检验实验室 验收要求和要点
宁夏回族自治区人民医院
临床医学检验诊断中心 杜宗孝 2016.08
临床基因扩增检验实验室 申报及验收程序
二级以上医院
填写《临床基因扩增检验实验室设置申请书》
（省级医疗机构）
（地、市(县)级医疗机构）
省卫计委医政处
相应的卫生行政部门
省临床检验中心初步技术审核
合格者开始试运行（三个月），同时报省卫计委备案 验收合格后，授予验收合格证书（证书有效期五年）
门
外走廊
门
错 误 的 设 置
临床标本的接收
应在四个测定区域之外的地方或适合的地方。 接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从
其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本 在核酸提取时，由基因扩增检验实验室人员将
标本带入至标本制备区。
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1.4 1.5
试剂贮存和准备区 a.冰箱； a.混匀器； a.微量加样器； a.可移动紫外灯； a.专用工作服和工作鞋； a.消耗品（带滤心吸头、一次性手 套等）； a.专用实验记录本、记号笔等。 标本制备区 (a) 冰箱 (2~8℃和-20℃或-80℃)； (a)高速台式冷冻离心机 (c) 水浴箱和/或加热模块 (d) 生物安全柜 (a)混匀器； (a)微量加样器； (a)可移动紫外灯； (a)专用工作服和工作鞋； (a)消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）； (a)专用实验记录本、记号笔等。
临床基因扩增实验室设置的一般原则 各区独立
注意风向
“十六字口诀”
因地制宜
方便工作
本片来自李金明教授
理想的PCR实验室设置A
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
本图来自李金明教授
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理想的PCR实验室设置B
产物分析区
10
PCR实验室工作基本原则
工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。实验台表面 应可耐受次氯酸钠等化学物质的消毒清洁作用。实验台 表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和 能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外 灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上60～ 90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对 （bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段 必须延长照射时间，最好是照射过夜。