病理生理学实验指导

病理生理学实验指导汪思应郑红邓松华安徽医科大学基础医学院病理生理教研室目录一，概论┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈1二，病理生理实验基本操作方法┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈2三，实验性肺水肿┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈3四，兔小肠灌溉的水肿模型复制┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈3五，缺氧┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈4六，再吸入式缺氧┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈5七，钾代谢障碍┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈5八，失血性休克┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈5九，喜树碱诱导细胞凋亡┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈6十，急性左心衰竭┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈7十一，急性右心衰┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈8 十二，病例讨论—肝性脑病┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈8 十三，病例讨论—急性肾功能不全┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈9 十四，病例讨论—MODS┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈10 十五，病理生理学实验教学大纲┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈11十六，病理生理学教学大纲┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈12概论病理生理学（Pathophysiology）是一门联系基础医学和临床医学的重要桥梁学科之一。

它在理论课程中主要介绍了在致病因素作用下机体的机能代谢：①发生何种改变（即临床症状及体征）；②为何发生改变（即临床症状及体征出现的机制）；③这些改变的规律性及与疾病的关系；④预防和处理这些改变的机理（即疾病防治措施的原理）。

因此，病理生理学是一门理论性科学。

同时它又是一门实验性科学。

病理生理学的实验方法有两种，即临床研究和动物实验研究。

临床研究的结果虽能直接应用于患者，但有很大的局限性。

所以，病理生理学主要采取动物实验研究方法。

在动物身上复制各种疾病或病理过程，作为人类相应疾病的模型。

实验者可控制或改变实验条件，以研究疾病的病因、发病环节、发病机制等。

还可用于疾病的实验性预防、治疗及新型药物和治疗手段的开发研究等。

人类疾病动物模型的复制有很多方法。

大致归纳为以下几种：①从自然界中选择发病动物（如选择生长有肿瘤的鼠、狗等）作为疾病动物模型。

但该动物模型个体间差异很大，且发病条件及病程等不易控制，已很少被直接采用。

现主要用经人工选择培育的不同品系的发病动物如由Okamoto和Aoki选育成功的SHR 大鼠，其成年后100%发生高血压，常用作自发性高血压的动物模型。

我国天津医学院培育成功的津白-Ⅱ小鼠，成年后易发生乳腺癌等;②根据疾病发生原因来复制疾病的动物模型。

如用二乙基亚硝胺、二甲基偶氮苯来复制大鼠肝癌动物模型；我室张载福教授用盲肠结扎穿孔法造成小鼠腹腔感染来复制全身性炎症反应综合症（SIRS）的动物模型；③根据疾病发生机制复制动物模型。

如本指导中用大剂量快速输液提高家兔肺毛细血管流体静压以复制的实验性肺水肿模型，动脉控制性放血造成的失血性休克模型。

④根据疾病的发生环节复制疾病的动物模型。

本室将Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma, LLC)接种小鼠足掌复制的肿瘤自发肺转移模型，将LLC及B16黑色素瘤（B16 Melanoma,B16M）细胞直接注入小鼠眼球后静脉所复制的肿瘤血道转移模型。

⑤转基因动物(Transgenic Animal)或基因敲除( Gene Knock-out)复制疾病动物模型。

主要用于遗传性疾病、重要基因功能的研究。

一，病理生理的实验目的病理生理学实验课的主要目的是：①通过教学实验指导学生初步掌握人类疾病动物模型复制的基本方法；②通过典型临床病例的课堂讨论，培养学生分析病例的能力，为临床思维和临床决策打下基础；③帮助学习者锻炼操作技能、验证和复习理论知识；④通过实验与课堂讨论的具体环节，使学生初步具有进行医学研究与临床思维所必备的“严肃的科学态度、严密的科学方法和严谨的科学作风”等。

二，病理生理学实验课的要求实验前①认真复习实验有关理论及预习实验指导，了解实验的大致情况;②专心听取指导教师对实验内容的讲解，熟悉实验的具体方法及操作规程;③领取并检查实验器材和药品是否齐全;④小组成员应有分工，但同时应注意合作，使每人都能得到应有的技能训练。

实验时①每人应确立严谨、实事求是的科学态度，正规和准确的技能操作耐心、细致地观察实验中出现的每个现象；而且要准确、及时、客观地记录。

整个实验过程都不得敷衍、马虎和主观臆测; ②必须伴随整个实验过程进行科学思维，力求了解每个步骤和每个现象的意义;③要注意尽量减少对实验动物的不必要损伤; ④爱护实验器材，使用药品应注意节约。

实验后①认真整理和分析实验结果;②仪器和药品用完后要清点，并放回原处。

应清洗者必须及时清洗干净。

每个实验组，应保持自己桌面的清洁，每次下课后，打扫、整理好实验室;③按时完成实验报告，交老师评阅。

三，病理生理实验报告应书写的项目和内容1，姓名、班次、组别、日期。

2，实验名称。

3，实验目的及原理。

4,实验动物及材料：包括种类、数量、性别、体重。

5,实验的具体步骤：简要写出主要实验方法。

6,实验结果。

根据实验目的将原始记录系统化、条理化。

其表达方式有：①叙述式：用文字将观察到的、与实验目的有关的现象客观地加以描述，描述时需要有时间概念与顺序。

②表格式：能够较为清楚地反映观察内容，有利于相互对比。

每一图表应说明一定的中心问题。

图表应由学生自己设计。

表内的项目及计量单位应填明。

③曲线式：实验中描记的血压、呼吸等曲线应写于实验报告中。

书写时，须根据原始的描记图，取其明显变化的有关各段连接而成。

7,实验结果分析或讨论。

由于实验指导中的每一个实验，都经过编写单位反复试做，结果可靠。

同学所做实验，次数虽少，若与这结果基本一致，即可作为分析的依据。

讨论要包括：①运用所学理论，讨论和解释实验结果，论证实验目的。

②实验结果提示了哪些新问题。

如果出现“异常现象”，应加以分析。

8,结论：根据实验结果简要地写明。

(汪思应)实验一基本实验操作训练[实验目的]1.了解病理生理学动物实验的基本用途、技术；2.掌握气管、颈动脉、静脉及股动脉插管，输液及血压测量技术。

[药品和器材]生理盐水（0.9%NaCl），10.0%NaCl、0.1%肝素、普鲁卡因。

小动物手术器械一套（每套大号止血钳各两把，中号采止血钳两把，弯直小号止血钳各两把，有齿镊各一把，眼科剪和镊各一把，组织剪和粗剪各一把，手术刀片的刀柄一副）、粗细缝线各一卷，2ml和5 ml和30 ml注射器（第6号针头），标本架（弹簧夹）一个，搪瓷搪瓷碗（25 ml）和方盘各一个。

[实验动物]家兔，体重2.5 kg。

[主要内容]病理生理学教学常用实验动物简介病理生理学实验研究采用何种动物，是决定研究成功与否的一个重要问题。

一般应针对实验目的，根据各种实验动物疾病模型的经验，逐一考虑下述一系列问题：所要求的基本模型能否复制成功，成功率大小，采用的方法和所观察指标是否简单易行，实验结果稳定一致的程度如何，动物是否便于管理，所获得的实验结果和人的临床情况相比相似性的大小，需耗费的人力、物力、财力等。

只有对这些因素进行综合考虑，比较以后，才能确定采用何种动物较为合适。

在教学上，不但要考虑以上这些问题，还应考虑教学效果，才能满足实验的目的和要求。

病理生理学实验常用的动物有：兔、大白鼠、小白鼠、狗等。

它们和人一样，都属于哺乳类动物。

它们的生理特性与人接近。

现将病理生理学实验常用的动物用途简介如下：（一）家兔家兔能用于复制许多病理过程和疾病，如：水肿、炎症、电解质紊乱、酸碱平衡紊乱、出血性休克、DIC、肺癌、动脉粥样硬化、高脂血症、心律失常、慢性肺心病、慢性肺动脉高压、肺水肿、肝炎、胆管炎、阻塞性黄疸、肾性高血压、肾小球肾炎、急性肾功能衰竭等。

特点：①价格较低，性温顺，易饲养，繁殖率高，容易选到调节类似的对照组兔。

因此，当实验中必须用较大动物时，常用家兔；②在血液循环方面，家兔血管虽较狗略细，但很容易做到直接描记颈动脉压、股动脉压、肺小动脉契压、中心静脉压等。

兔的心血管系统机能较猫、狗为差，用来观察血压反应不如狗。

手术时，兔易发生反射性衰竭，血压反应不稳定，故给兔做手术时，动作要轻。

兔的减压神经是独立走向的，便于观察减压神经对心、血管系统的作用。

家兔心脏在离体情况下，搏动很久，是观察有害因子对哺乳类动物心脏直接作用较合适的一个模型。

离体兔耳，又可作为观察有害因子对血管直接作用的一个模型；③家兔适用于研究发热、解热药和检查致热源；④消化系统方面：家兔系草食动物，消化系统与人类相差较远，缺乏呕吐反射，所以不能用家兔作消化系统方面的研究；⑤其他：家兔对组织胺不敏感，对注射组织胺并不产生血压下降，甚至出现升压反应；因此，对家兔注射大量组织胺，并不能造成过敏性休克模型。

实验用家兔体重必须2.5公斤以上。

（二）小鼠小鼠能用于复制许多病理过程和疾病，如：水肿、炎症、缺氧、多种癌、肉瘤、白血病、多种传染病、慢性气管炎等。

特点：①小鼠是实验室最常用的一种动物，价格低廉，便于大量繁殖，对动物实验同种、纯种、性别和年龄的要求，比较容易满足，生活条件也容易控制。

因而只要符合实验要求，应尽量采用。

它适合于需要大量动物的实验，容易满足统计学的要求。

例如：胰岛素、促肾上腺皮质激素的生物效价测定，毒物半致死量的测定；②小鼠对许多疾病有易感性，因而适用于研究这类疾病，例如：血吸虫病、疟疾、流感、脑炎等病。

小鼠的纯种品系甚多，每系有其独特的生物特性，对某些疾病易感，例如：C3HA系对癌瘤敏感，C58系则抗癌；因此，纯系小鼠广泛应用于各种肿瘤的研究；③当研究指标主要为组织学特别是电镜观察时，应用小鼠因器官较小，可节约人力、物力。

例如：用于研究慢性气管炎时肺的变化；④小鼠具有发达的神经系统，能应用于复制神经官能症模型；⑤小鼠对外界环境适应性差，不耐冷热，经不起饥饱，比较娇嫩；因此，做实验时要耐心细致，动作要轻，不然会干扰实验结果。

实验用小鼠常用品系有昆明种小鼠、BALB/C、C57BL/6等,必须6-8周龄，18-20克。

可根据实验要求选择性别。

（三）大白鼠大白鼠能用于复制许多病理过程和疾病，如：水肿、炎症、缺氧、休克、DIC、心肌梗塞、肝炎、肾性高血压、各种肿瘤等。

特点：①大白鼠和小白鼠相似，便于大量繁殖、对动物实验同种、纯种、性别和年龄的要求，比较容易满足，生活条件也容易控制，适合于需要大量动物而小白鼠不能满足实验要求时，如：间断亚硝胺口服或胃肠道外给药能诱发大白鼠食道癌，而在小白鼠则很少引起食道癌；因而，在这种情况下，采用大白鼠较为合适；②大白鼠较小白鼠体大，对需要作大体型的实验，用大白鼠较为合适，例如：可用于直接记录血压，其血压反映较家兔为好，大白鼠可用于研究休克，DIC时血液循环变化，大白鼠后肢可用作肢体血管灌流实验，其心脏可用作离体心脏实验，从大白鼠胸导管采取淋巴能研究疾病时淋巴的变化；③大白鼠无胆囊，因此，常用大白鼠胆管收集胆汁，进行疾病时胆汁功能研究；④大白鼠的垂体-肾上腺系统功能很发达，常用作应急反应和肾上腺、垂体等内分泌功能实验，大白鼠的高级神经活动发达，因此，也广泛用于神经官能症的研究。