枯草芽孢杆菌习性及其培养

8.刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴
细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免
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应用范围：
枯草芽孢杆菌不仅在饲料中应用比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发 酵床制作中应用也相当广泛,是一种多功能的微生物. 1． 市政和工业污水处理，工业循环水处理，腐化槽、化粪池等处理，畜 牧养殖动物废料、臭味处理，粪便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等处理； 2．畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖，水产养殖； 3．可以与多种菌种混配，在农业生产中具有重要作用。
三角瓶的量以不超过一半为宜。
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加塞 培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞， 以阻止外界微生物进入培养基内而造成污 染，并保证有良好的通气性能。
包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉 塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水 润湿棉塞，外边再用一道麻绳扎好。用记 号笔注明培养基名称，组别，配a 制日期。 16
枯草芽孢杆菌生长习性 及其培养
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主要内容
1.枯草芽孢杆菌的特性 2适应生殖条件 3.作用机理 4.应用范围 5. 斜面培养 6.无菌操作
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枯草芽孢杆菌特性
芽孢杆菌（Bacillaceae），细菌的一科，能形成芽孢（内生孢子）的 杆菌或球菌。
包括芽孢杆菌属、芽孢乳杆菌属、梭菌属、脱硫肠状菌属和芽孢八叠 球菌属等。
注意事项：
1．可与低浓度抗生素同时使用，不得与杀菌剂、消毒剂、化学药品、农 药等同时存放使用。 2．若使用过量不会对动物造成任何伤害。初次使用时，环境突变时，动 物患病时加倍使用。 3．包装开启后最好一次性用完，未用完密封保存。
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菌种培养
斜面培养法 菌种 枯草芽孢杆菌
培养基 营养琼脂 33g/L，自然pH值
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6.枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、 多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这 些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌 有明显的抑制作用。
7.枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成 肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等 有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病 菌生长。
仪器设备
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制备培养基
称取33g营养琼脂，蒸馏水1000ml， 121℃灭菌30min。
分装
按照实验要求，可将配置的培养基分 装入试管内或三角瓶中。
液体分装：分装的高度以试管高度的 1/4左右为宜；分装三角瓶的量则根 据需要而定，一般以不超过三角瓶的 一半为宜。
固体分装：分装于试管中的应不超过
试管的1/5，灭菌后制成斜面；分装
在质量浓度为0.3 %的猪胆盐溶液a 中处理4 h 7
将枯草芽 孢杆菌在90 ℃ 水浴中处理10 min后其存活 率接近80 %， 说明枯草芽孢 杆菌具有较好
的耐高温性能。
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当培养基初 始pH为2和3时， 枯草芽孢杆菌培 养液OD600值始 终约为0.3，当初 始pH为4、5、6 和7时，在培养12 h后OD600值接 近。这说明，枯 草芽孢杆菌在强 酸性条件下生长 性能较差，在弱 酸性和中性环境 中生长旺盛。
3．刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免 疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体 免疫力
4．枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤 维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用
5．能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动 物体内干扰素和巨噬细胞的活性。
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作用机理： 1．枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、
制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源 性感染的条件致病菌有明显的抑制作用
2．枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促 进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间 接抑制其它致病菌生长
灭菌
将配置好且包扎完毕的固体、液 体培养基及本实验涉及的试管、 三角瓶等及400ml纯水于高压灭菌 器中以0.14Mpa，121℃条件下高 压蒸汽灭菌20分钟。
它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及 动物肠道等处。
芽孢杆菌bacillus 杆菌科的一属细菌。 为好氧或兼性厌氧的杆菌，一般为革兰氏染色阳性。
在某种环境下，菌体内的结构发生变化，经过前孢子阶段，形成一个 完整的芽孢。
芽孢对热、放射线和化学物质等有很强的抵抗力。
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OD600 测量细菌培养液在600nm处的吸光值，得到的OD600的数值如果在0.6-0.8之间， 表明细菌处于旺盛生长的对数生长期，OD600>3表明细菌已经饱和等。细菌的生长情况,可 以通过测OD600来监测。细菌的生长比较好的时期是在OD600为1时
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枯草芽孢杆菌在0.03 %~0.3 %猪胆盐溶液中存 活率均超过90 %，这说明， 枯草芽孢杆菌对胆盐具有 良好的耐受性。 在不同质量浓度猪胆盐液 体培养基中，枯草芽孢杆 菌均得到了增殖，但增殖 幅度不大，说明猪胆盐对 枯草芽孢杆菌的增殖具有 抑制作用，当猪胆盐质量 浓度为0.3 %时，其抑制作 用明显增加。
枯草芽孢杆菌：
枯草芽孢杆菌，是芽 孢杆菌属的一种。单 个细胞 0.7～ 0.8×2～3微米，着 色均匀。无荚膜，周 生鞭毛，能运动。革 兰氏阳性菌，芽孢 0.6～0.9×1.0～1.5 微米，椭圆到柱状， 位于菌体中央或稍偏， 芽孢形成后菌体不膨 大。
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菌落
菌落表面粗糙不透明， 污白色或微黄色，在液体培 养基中生长时，常形成皱醭。 需氧菌。可利用蛋白质、多 种糖及淀粉，分解色氨酸形 成吲哚。在遗传学研究中应 用广泛，对此菌的嘌呤核苷 酸的合成途径与其调节机制 研究较清楚。广泛分布在土 壤及腐败的有机物中，易在 枯草浸汁中繁殖，故名。
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成份含量：
枯草芽孢杆菌及 生物酶、维生素、 微量元素等辅助 剂，活菌数≥250 亿/克。
形状：浅黄色粉 末
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适应生长条件
相关试验结果表明：该株枯草芽孢杆菌具 有良好 的耐高温、耐酸性和耐胆盐能力， 在90 ℃水浴中处理10 min后其存活率接近 80 %
在pH等于2的人工胃液中处理6 h后存活率 仍超过76 %