糖尿病基因诊断

三、胰岛素受体基因突变
Moller等对INSR基因的全部外显子筛查后发现，外 显子2，3，8，9，13，17中有无义突变，外显子20 中存在一个异质性点突变。
(CGG→CAG、Argl174→Gln) 该突变位于酪氨酸激 酶区内，影响受体细胞内亚基的结构，是引起遗传 性胰岛素抵抗（insulin resistance ，IR）的主要原因。
病诊断标准者应行此试验。成人采用75g葡萄糖负 荷，儿童1．75g/kg，正常人血糖高峰出现于服糖 后1/2～1h，峰值不超过8．9～10mmol/L(160～ 180mg/dl)。
采用放射免疫法测定的胰岛素包括胰岛素原及与 抗体结合的胰岛素。C肽测定不受胰岛素抗体影响，
不与胰岛素产生交叉免疫反应，也不受外源性胰 岛素干扰。1型糖尿病空腹血浆胰岛素和C肽水平 很低，2型糖尿病则多为正常或增高。
糖基化血红蛋白(GHb)含量与血糖浓度呈正比，可 反映2～3个月前体内血糖的平均水平。糖基化血 红蛋白的主要成分为HbAlc，因此常以HbAlc代表 GHb。GHb(或HbAlc)的测值因测定方法不同而略 有差异，约在3．6%～6．3%的范围之内。未控制 的糖尿病患者GHb可为正常人的2至3倍。
1999年WHO修改糖尿病标准如下： 空腹血糖(FPG)的分类：
＜6．0mmol／L为正常； ≥6．0～＜7．0mmol／L为空腹血糖过高(未达糖尿
病，简称IFG)； ≥7．0mmol／L为糖尿病(需另一天再次证实)。 空腹血糖的定义是至少8小时没有热量的摄入。
可疑糖尿病，空腹及餐后血糖增高但未达到糖尿
组成PCR 总反应体系50 μl, 置热循环仪内, 94℃变性30 s, 60℃退火45 s, 72℃延伸1 m in, 共30 个循环, 最后再 72℃延伸10 m in。
用限制性内切酶Apa I 酶切PCR 反应产物。取30 μl PCR 反应产物, 再加3. 4 μl L 2Buffer 及1 μlApaÉ 酶(20 u∕μl) 混匀, 37℃水浴3 h, 使之充分酶解。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
自身抗体包括胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素抗体 (IAA)及谷氨酸脱羟酶(GAD)抗体测定。1型糖尿病
患者血清中该三种抗体可同时存在，亦可仅测到 1～2种。三种抗体中GAD存在的时间较长，于发 病10余年后仍可测到该抗体。
三.糖尿病的基因诊断
基因突变 分型
一、线粒体基因突变 二、胰岛素基因突变 三、胰岛素受体基因突变 四、葡糖糖激酶基因突变 五、其他基因突变
本试验的方法与OGTT相同，只是于空腹，服糖后 30，60，120，180min时采血同时测胰岛素或C肽， 以直接了解胰岛β细胞的功能状态。正常人血胰岛 素和C肽的高峰与血糖高峰一致，于服糖后30～60 分钟胰岛素测值为空腹的5～10倍，C肽测值为空 腹的5～6倍。1型糖尿病患者糖负荷后无胰岛素和 C肽释放反应峰，其释放曲线呈低平状态；2型糖 尿病肥胖患者，糖负荷后胰岛素和C肽释放反应峰 值正常或增高，但高峰却在2h后延迟出现；病程 已久消瘦2型糖尿病患者胰岛素和C肽的释放反应 峰值低于正常。
不愈者 ⑥ 有一过性高血糖史或尿糖阳性史者 ⑦ 有反应性低血糖发作史者 ⑧ 视力下降者 ⑨ 有巨大儿（出生体重>=4kg）分娩史的女性
或男性阳痿
二.辅助检查
血糖的测定 口服葡萄糖耐量试验 （OGTT） 空腹血浆或血清胰岛素及C肽测定 胰岛素或C肽释放试验 糖基化血红蛋白测定 糖化血清蛋白测定 自身抗体测定 其他检查
四、葡萄糖激酶基因突变
对GCK的12个外显子作单链构象多态性(SSCP)／测 序分析进行分子筛查，发现多种GCK突变，到目前 为止已知致NIDDM的GCK突变近30种，以错义突 变多见，亦有无义突变、剪接点突变及碱基缺失。
五、其他基因突变
1．己糖激酶Ⅱ(hexokinaseⅡ，HK2)基因突变 2．磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因突变 3．糖原合成酶(glycogen synthetase，GSY)基因突变 4．载脂蛋白基因群及低密度脂蛋白受体基因突变
3、线粒体DNA重复突变：
Poulton等报道2例，分别为8kb（nt6000-15000）及8kb （nt7000-16000）
二、胰岛素基因突变
应用聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR— SSCP)及等位基因特异性寡核苷酸斑点杂交 技术对INS基因进行分析，发现有 Arg65→His、Arg65→leu以及Hisl00→Asp等 点突变。此3种突变均可导致血中胰岛素原 不能转换为胰岛素，从而引起高胰岛素原 血症。
一.糖尿病的临床表现 二.辅助检查 三.糖尿病的基因诊断
一.糖尿病的临床表现:
典型者有“三多一少”症状，即多饮、多尿、多 食、消瘦，不少患者缺乏典型临床症状，表现为 反应性低血糖，或某些急慢性并发症的症状。
可疑指征
① 有多尿，多食症状者 ② 有原因不明的体重下降，特别是原来超重或
肥胖者 ③ 肥胖或者超重者 ④ 有糖尿病家族史，年龄大于40岁者 ⑤ 皮肤瘙痒，反复出现疖肿或者皮肤溃疡经久
一、线粒体基因突变
1、线粒体DNA点突变：
线粒体DNA (m tDNA ) 3243 位点tRNAL eu (UUR)基因 A →G 突变是DM 的致病基因。
2、线粒体DNA缺失突变: 10.4kb缺失(nt4398-14882);7.5kb(nt6080-
13800);7.6kb(nt6465-14135)
糖尿病相关基因诊断技术
＊等位基因特异性寡核苷酸斑点杂交技术 ＊测序分析进行分子筛查 ＊PCR ＊ PCR-SSCP ＊ PCR-DGGE ＊ 基因芯片
线粒体基因突变糖尿病—PCR技 术
常规方法提取基因组DNA (包括核DNA 和线粒体 DNA )。
PCR 法扩增含3243 位点的线粒体DNA 片段, 引物R: 5’2 GTTTTA GGGGCTCTTTGGT 2GAA GA GTT 23’; 引物F: 5’2 TTGGA TCA 2 GGACA TCC2CGA TGGTGCA G23’。