长白山林蛙蛙卵Onconase基因的克隆表达及其抗人乳腺癌作用研究
东北林蛙卵活性成分及药理活性研究进展
东北林蛙卵活性成分及药理活性研究进展∗李梁;范宁;刘少华;李慧萍;卫功庆【摘要】林蛙卵是蛤蟆油生产后的主要副产物之一，因其年产量大且未能被充分利用逐渐得到关注。
林蛙卵含有多种有利于人体健康的生物活性物质。
近年来多位学者、专家对林蛙卵活性成分及药理活性进行研究，重点阐述林蛙卵中不饱和脂肪酸、蛋白质以及氨基酸等生物活性成分，揭示其药用及保健价值，为林蛙卵产品加工和开发提供参考。
【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2016(035)004【总页数】4页(P363-366)【关键词】林蛙卵,东北;活性成分;多不饱和脂肪酸;药理活性【作者】李梁;范宁;刘少华;李慧萍;卫功庆【作者单位】吉林农业大学中药材学院，长春130118;吉林农业大学中药材学院，长春130118;吉林农业大学中药材学院，长春130118;吉林农业大学中药材学院，长春 130118;吉林农业大学中药材学院，长春 130118【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R284·药学进展·DOI 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.04.010东北林蛙(Rana Dybowskii)是两栖纲(Amphibia)、无尾目(Anura)、蛙科(Ranidae)、林蛙属(Rana)动物，又称为蛤士蟆、雪蛤等，是我国珍稀的药用动物之一，主产于我国东北长白山地区。
其雌蛙输卵管干燥品，别名为林蛙油、蛤蟆油、蛤士蟆油等，保健价值很高，始载于《本草纲目》，有滋阴润肺、补肾益精等功效，是我国名贵的滋补品，多年来一直享誉海内外[1]。
雌蛙取油后残留大量的林蛙卵，是蛤蟆油生产的主要副产物之一。
研究证明，卵的药用、保健价值很高[2]。
活性成分及药理活性的研究是一种药物开发利用的前提，故笔者将对近几年海内外专家、学者对林蛙卵化学成分及药理活性的研究进行归纳总结，为林蛙卵进一步研究及深加工提供科学参考。
1.1 一般化学成分早在1994年，李成义等[2]通过高效液相色谱法和放射免疫法首次分析了林蛙油和林蛙卵油的主要成分，结果显示，林蛙卵中含有多种化学成分，有多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)和微量元素等；雌二醇(estradiol，E2)、孕酮(progesterone，P)、睾酮(testosterone，T)等激素成分也能被检出；此外，卵油中还检出了卵泡激素(follicular stimulating hormone，FSH)、垂体泌乳素、蛋白质、维生素以及磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，PC)、鞘磷脂(sphingomyelin，SM)和磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine，PE)等(表1)。
林蛙皮、卵活性成分提取方法及药理作用的研究进展
林蛙皮、卵活性成分提取方法及药理作用的研究进展刘洋;赵鹤鹏;张扬【摘要】林蛙皮、卵中含有多种对人体有益的活性成分,对其深入研究有利于林蛙资源的综合利用.本文对林蛙皮、卵的主要活性成分提取方法及药理作用进行综述,为其在药品、保健品、化妆品等大健康领域的开发利用提供参考.【期刊名称】《吉林化工学院学报》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】6页(P15-20)【关键词】林蛙皮;林蛙卵;活性成分;提取方法;药理作用【作者】刘洋;赵鹤鹏;张扬【作者单位】吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院党政办公室,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022【正文语种】中文【中图分类】R931.6中国林蛙(Rana chensinensis)又称哈士蟆，主要生长在我国吉林、辽宁和黑龙江三省，现已形成规模化养殖，是一种集食药用于一身的经济蛙种[1,2].林蛙油是雌性林蛙的干燥输卵管，具有补肾益精、养阴润肺等功效，是一种补益类传统中药材，1985年收录中国药典至今[3].由于林蛙油市场价格昂贵，多数养殖户是为了获取林蛙油，在取油同时，多数林蛙皮和卵作为废物白白丢弃.近年来，研究人员发现林蛙皮、卵同样富含多种活性成分，具有广泛的药理作用，这引起了广泛关注，对其研究也逐渐深入.本文综述了林蛙皮和卵的主要成分和药理作用，为进一步开发提供参考.1 活性成分提取方法1.1 蛋白郑淼等[4]利用羟脯氨酸法提取林蛙皮中胶原蛋白，在温度37 ℃，胃蛋白酶30 mg条件下浸提72 h后，经盐析、透析和真空冷冻干燥，得林蛙皮胶原蛋白，收率15%，蛋白含量54.1%.吕玲玲等[5]利用木瓜蛋白酶提取林蛙皮中胶原蛋白，在pH 5.5，料液比120，加酶量1%，室温条件下浸提36 h，林蛙皮胶原蛋白提取率为 24.71%，纯度72.03%.相比于羟脯氨酸法，木瓜蛋白酶辅助提取法的得率和纯度都有所提高，可作为林蛙皮胶原蛋白的制备方法.李永政等[6]对东北林蛙卵蛋白的酶解工艺和抗疲劳活性进行了研究.结果表明，在pH 8.0，温度55 ℃，料液比 15.5(m/V)，加酶量3 000 U/g条件下提取5 h，所得粗产品中蛋白质的含量为80.07%.在抗疲劳试验中，林蛙卵酶解物可显著延长小鼠负重游泳时间、降低血乳酸含量，显示良好的抗疲劳作用.季晓枫等[7]应用响应面法优化酶法制备林蛙卵蛋白.研究表明，在pH 8.8，温度58 ℃，料液比15，加酶量1.9%的条件下浸提4 h，林蛙卵蛋白提取率为9.63%.陶凤云等[8]对林蛙卵蛋白进行分离纯化，得到一种具有选择性细胞毒性的小分子核糖核酸酶，为肿瘤的治疗提供了新的候选蛋白分子.1.2 多糖Wang等[9]采用响应面法优化提取林蛙皮多糖，在温度100 ℃，料液比160，提取时间4.96 h，多糖得率2.03 0.14%，经分离纯化得到RCSP Ⅱ，该组分具有较强的体外抗氧化活性.酶辅助提取是是制备天然多糖的重要手段之一，赵玉红等[10]应用超声波-双酶法提取林蛙皮多糖，在料液比140(g/mL)，功率600 W条件下提取25 min，多糖得率1.18%.在此基础上，在pH 9.0，温度45 ℃，碱性蛋白酶添加量2.3%，胰蛋白酶添加量2.8%条件下酶解4 h，多糖得率升至2.286%.陈大勇等[11]应用木瓜蛋白酶从林蛙卵中提取多糖，并对其抗氧化活性进行研究.在pH 6.0，料液比120(g/mL)，酶添加量70 mg/g的条件下浸提2.5 h，林蛙卵多糖提取率2.67%，该条件下得出的林蛙卵多糖对DPPH自由基的半数清除率为1.81 mg/mL，说明其具有明显的抗氧化作用.1.3 生物活性肽生物活性肽是一类分子量小于6 000 Da，且具有特殊生理和生化功能的肽类化合物[12].许多来自两栖动物皮肤的抗菌肽已被分离、纯化并进行了结构表征，为新型药物的研究提供了思路.林蛙皮肤分泌物中含有大量的生物活性肽，Zhang等[13]从林蛙皮中分别得到了酸法提取物(ARPs)和酶法提取物(ERPs)，通过UV、FT-IR、HGLC、MS、MTS和流式细胞技术等方法对两者的理化性质进行了鉴定，并对其促增殖和抗凋亡作用进行了研究.结果表明，ARPs和ERPs的提取率分别为0.65%和0.52%；ARPs(1.6 g/L)和ERPs(0.8 g/L)抗HACAT细胞的增殖率分别为1.6倍(P<0.001)和2.1倍(P<0.001)；在UVB刺激下，细胞凋亡率分别下降2.6倍(P<0.001)和3.4倍 (P<0.001).杨闯等[14]比较了甲醇提取法、超声波辅助酶解法和超声波提取法制备林蛙皮生物活性肽，并对其抗菌活性进行研究.结果表明，超声波辅助酶解法提取效果较好，在加酶量为1.5 mg/g，温度40 ℃，提取时间4 h，提取率7.51%，且抗菌活性较高.Shang等[15]对来自林蛙皮肤分泌物的一种富含精氨酸/组氨酸的抗菌肽-香豆素缀合物进行了制备和的抗菌活性研究.结果表明，该缀合物具有选择性的抗菌作用，对革兰氏阳性菌有抑制作用，对阴性菌活性较差，安全性较高，对人红细胞无溶血作用.在此基础上，Shang等[16]研探索了林蛙蛋白肽的抗菌构效关系，发现：用5～6个赖氨酸取代α-螺旋亲水表面的中性和非极性氨基酸残基，提高其抗菌活性；用D-赖氨酸代替L-赖氨酸时，在保持净电荷和平均疏水性值的同时，对其抗菌活性影响较小，但能显著降低溶血活性. 1.4 透明质酸透明质酸是一种酸性粘多糖，对维持机体水分、保持皮肤水分有良好的效果.袁海恋等[17]利用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法优化双酶水解法制备林蛙皮透明质酸的方法，在温度为50 ℃，加酶量55 000 U/g的条件下酶解14 h，透明质酸平均提取得率达27.683 9 mg/g.1.5 林蛙卵油林蛙卵油能抑制自由基的产生，降低高脂血症血清胆固醇的含量和过氧化脂质含量，能够有效预防心血管疾病[18].金莉莉等[19]将林蛙卵经石油醚和超临界CO2流体萃取制备林蛙卵油，并分析其中脂肪酸成分，研究表明，林蛙卵油中主要富含十六碳烯酸、亚油酸、油酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸等.赵超等[20]应用微波辅助法提取林蛙卵油.将林蛙卵浸泡3.33 h后，在料液比19.82(g/mL)，微波功率600 W条件下微波30 min，提取率为20±0.67%.1.6 氨基酸李妍妍等[1]采用高效液相色谱法测定了林蛙皮、卵中氨基酸的种类与含量见表1.结果表明，林蛙皮中氨基酸总量高于林蛙卵，但林蛙卵中必需氨基酸含量高于林蛙皮.表1 林蛙皮、卵氨基酸含量(单位:g/100 g，色氨酸单位:mg/100 g)氨基酸AspThr∗SerGluProGlyAlaCysVal∗Met∗ Ile∗林蛙皮6.473.024.2810.395.9210.946.301.622.691.38 2.31林蛙卵 5.563.724.687.92 1.732.042.381.122.441.393.47氨基酸Leu∗TyrPhe∗His Lys∗ArgTrp∗氨基酸总量必需氨基酸量林蛙皮4.942.222.61 1.404.035.0430.4 75.5921.01林蛙卵5.093.432.16 2.153.563.5287.2 56.4521.922 药理作用2.1 蛋白林蛙卵蛋白具有抗疲劳和调节免疫的作用.张肃[21]等对东北林蛙卵蛋白的抗疲劳活性进行了研究.结果表明，东北林蛙卵蛋白对小鼠体重增长无显著影响，可降低运动后小鼠血乳酸含量，增加小鼠负重游泳时间及肝糖原含量.这表明，东北林蛙卵蛋白具有增加小鼠抗疲劳的活性作用.李永政[22]等分别口服给予小鼠林蛙卵蛋白和其酶解物，测定小鼠的负重游泳时间、肝糖原及血乳酸含量.结果表明，两者均能显著延长小鼠负重游泳时间，增加肝糖原含量，且酶解物在延缓疲劳和加速消除疲劳方面作用效果更明显，这说明，林蛙卵蛋白及其酶解物均有明显的抗疲劳功效，且酶解物作用更强.Shen等[23]研究了中国林蛙在冬眠前输卵管中c-kit受体的免疫反应，从林蛙卵中提取总蛋白进行Westernblotting分析.结果表明，在冬眠前期林蛙卵组织中检测到c-kit受体和PCNA的阳性信号，这说明c-kit受体可能在林蛙卵中起到免疫调节作用.2.2 多糖多糖提取物具有不同程度的清除超氧阴离子、羟基自由基和DPPH自由基的能力，由此判断林蛙皮具有一定的抗氧化功效[24].Wang等[25]对从中国林蛙皮中分离得到的多糖组分RCSPⅡ进行了表征及体内外抗氧化活性研究.结果表明，RCSPⅡ由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成，摩尔比为87.822.771.54，分子量为12.8 kDa.体外抗氧化活性测定表明，在2.5 g/L的浓度下，RCSPⅡ对DPPH自由基的清除率为75.2%；在4.0 g/L时，对亚铁离子的鳌和率为85.1%.体内抗氧化结果进一步表明，RCSPⅡ能提高抗氧化酶的活性，降低丙二醛的含量，提高D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠肝脏和血清的抗氧化能力.2.3 生物活性肽生物活性肽具有一定程度的抗肿瘤，调节免疫和促进细胞增值作用.Temporin-1CEa是从林蛙皮分泌物中分离得到的一种抗菌肽，Wang等[26]采用MTT法、电镜观察、荧光染色和流式细胞术分析研究了Timein-1CEa对人乳腺癌细胞株Bcap-37的细胞毒性.MTT分析表明，Timein-1CEa暴露1 h可导致细胞迅速死亡，但对其是否存在浓度依赖有待进一步研究.电镜观察提示，Timein-1CEa暴露可导致Bcap-37细胞发生显著的形态学改变.荧光成像和流式细胞仪分析表明，Timein-1CEa具有以诱导细胞表面磷脂酰丝氨酸暴露为特征的膜破坏特性、质膜透性和快速跨膜电位去极化.这表明，Timein-1CEa通过膜破坏和线粒体参与的胞内机制，在Bcap-37细胞中触发了快速的细胞毒性.该发现有利于进一步研究抗菌肽在哺乳动物癌细胞中的作用机制.Wang等[27]进一步探讨了Timein-1CEa对两种人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的快速细胞毒作用机制.结果表明，Timein-1CEa暴露1 h，可导致细胞毒性，并与剂量成依赖性.电镜形态学观察表明，Timein-1CEa暴露1 h后，MDA-MB-231和MCF-7细胞均发生了明显的形态学改变.Timein-1CEa的膜破坏特性进一步表现为磷脂酰丝氨酸在细胞表面的暴露，提高质膜透性和快速去极化跨膜电位.此外，Timein-1CEa还可诱发细胞内钙离子和活性氧升高以及线粒体膜电位的紊乱.这说明，Timein-1CEa可快速引发乳腺癌细胞死亡，这种快速的细胞毒作用可能是由膜破坏和细胞内钙机制共同介导的. 巢警殳[28]等研究了林蛙皮活性肽对小鼠免疫功能的影响，将小鼠随机分为阳性对照组、空白对照组和低、中、高剂量组.结果表明，林蛙皮生物活性肽可明显促进Con A 诱导的淋巴细胞增值，增加抗体生成细胞数量，增强血清溶血素抗体效价水平，这说明林蛙蛙皮生物活性肽对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能均具有增强作用.李俊峰[29]等研究发现，林蛙卵中含有的孕酮和雌二醇也具有调节人体内分泌，促进身体的生长发育的功能.张鑫等[30]研究了林蛙皮多肽对HaCaT 细胞增殖及其凋亡的影响.结果显示，在50 mg/mL～800 mg/mL浓度范围内，随着浓度升高，林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖作用效果增强；当浓度为800 mg/mL时，细胞凋亡率比正常对照细胞降低了(2.7±0.3)%(P<0.01)，说明林蛙皮活性多肽对HaCaT细胞的增殖有显著的促进作用，并对其凋亡有显著的抑制作用.Zhang等[31]制备了含有林蛙皮肽(RCSPs)的聚L-丙交酯(PLLA)/醇溶蛋白(Zein)纳米纤维垫.在电纺纳米纤维中加入RCSPs能显著改善材料的力学性能.人包皮成纤维细胞的细胞通透性实验结果表明，PLLA/Zein-RCSPs纳米纤维垫的细胞生长明显高于PLLA/Zein纳米纤维垫.结果表明，含RCSPs的纳米纤维垫有望成为创面敷料的候选材料.2.4 林蛙卵油彭飞[32]等采用离子对反相液相色谱-电化学检测法，以士的宁为致惊厥剂，评价林蛙卵油抗惊厥活性的时效和量效关系.结果显示，在灌胃给药30 min时其抗惊厥作用效果最好，且效果与剂量成良好的线性关系.佟岩[33]等对林蛙卵油的抗焦虑活性进行了研究.结果表明，林蛙卵油能显著延长大鼠在十字迷路开放通路中的连续停留时间，增加大鼠进入开放通路次数，而对封闭通路连续停留时间和进入封闭通路次数无明显影响，小鼠站立数明显减少而爬梯数无显著差异.苑春莉等[34]探究林蛙卵油对成年大鼠妇科内分泌激素水平的影响.结果显示，模型组子宫及卵巢重量明显低于正常组(P<0.001)，而林蛙卵油各剂量均可明显增加子宫及卵巢的重量(P<0.001)，高剂量组增加的最为明显；模型组卵巢体重比明显低于正常组(P<0.001)，而林蛙卵油各剂量均可明显增加卵巢体重比(P<0.001)，高剂量组增加的最为明显.这说明林蛙卵油可以发挥保护卵巢的作用，进而调节妇科内分泌功能.尹云厚等[35]探究了东北林蛙卵油脂肪酸的体外抗氧化作用和保湿作用.抗氧化试验结果表明林蛙卵油脂肪酸对DPPH自由基清除作用的IC50为5.08 mg/m L，最大清除率为95.91%，对ABTS+自由基清除作用的IC50为9.84 mg/mL，最大清除率为98.58，;对羟自由基清除作用的IC50为7.87 mg/mL.其还原力也随着林蛙卵油脂肪酸的溶液浓度的增加而增加.保湿性试验结果为0～12 h，林蛙卵油脂肪酸保湿性极显著低于透明质酸、甘油和1，2-丙二醇,而24 h时,其保湿性与甘油和1，2-丙二醇差异不显著，说明东北林蛙卵油脂肪酸具有持久的保湿效果.根据这两个性能，可以进一步将其应用到抗氧化和保湿型化妆品当中.沈雪等[36]研究表明林蛙油口服液在D-半乳糖诱导的氧化损伤模型小鼠体内具有良好的抗氧化的作用.2.5 核糖核酸酶林蛙卵核糖核酸酶具有抗肿瘤功效.赵丹玉等[37]从林蛙卵中提取RNase,并用酶谱分析进行鉴定，结果表明，林蛙蛙卵RNase对鼠S180肿瘤细胞株生长和淋巴细胞转化具有较强的抑制作用，并随着林蛙卵RNase浓度的增加，对S180肿瘤细胞生长率和淋巴细胞转化率的抑制作用随之增加，呈现剂量依赖性.说明林蛙卵RNase对S180肿瘤细胞的生长率和淋巴细胞转化率具有明显的抑制作用.2.6 黑色素吴世玉等[38]对林蛙卵黑色素的抗氧化活性实验表示.林蛙卵黑色素在紫外区域都有强烈的吸收，并且伴随波长的逐渐增加，吸光度呈现下降的趋势；元素分析表明林蛙卵黑色素的S∶N为0.05；红外光谱表明林蛙卵黑色素含有OH、NH2、C=C、C=N、C=O、C-N和苯环.体外抗氧化试验表明林蛙卵黑色素对DPPH自由基的IC50为0.404 mg/mL，对超氧阴离子的IC50为1.250 mg/mL，对羟自由基的IC50为0.662 mg/mL，这说明林蛙卵黑色素是真黑色素,并且具有较强的抗氧化活性.3 结论林蛙作为集食用药用为一身的经济动物，在我国已经显现出越来越大的价值.东北地区林蛙产量逐年递增，除了林蛙油外，林蛙皮、卵等同样具有很高的营养价值，然而由于深入开发不够，大多被白白浪费掉，不能发挥其最大价值.相信在不久的将来，随着对林蛙全身活性成分的深入探究，林蛙皮、卵的价值会被充分的利用，相信二者的同样具有巨大的开发前景.【相关文献】[1] 李妍妍,郑卫星,王昕,等.林蛙营养成分的多元分析[J].食品科学,2007,28(12):472-475.[2] 沈雪,崔浩,杨秀东,等.林蛙油水溶性蛋白质的制备与相对分子量测定[J].吉林化工学院学报,2016,33(9):11-14.[3] Zhang Y,Liu Y,Zhu K,et al.Acute Toxicity,Antioxidant,and Antifatigue Activities of Protein-Rich Extract from Oviductus ranae [J].Oxidative Medicine and Cellular Longevity,2018(21):1-14.[4] 郑淼,周亚丹,赵敏.东北林蛙皮中胶原蛋白含量的测定及提取工艺[J].东北林业大学学报,2008,36(7):81-83.[5] 吕玲玲,金香淑,施溯筠.林蛙皮胶原蛋白的提取及抗氧化性[J].食品研究与开发,2013(10):20-22.[6] 李永政,胡春晓,王铮,等.东北林蛙卵蛋白酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性[J].食品科学,2012,33(9):235-239.[7] 季晓枫,林凤,邱芳萍.响应面法优化水酶法提取林蛙卵蛋白[J].长春工业大学学报(自然科学版),2013,34(2):137-144.[8] 陶凤云,赵伟,林强,等.中国林蛙卵核糖核酸酶的分离纯化及其抗肿瘤作用[J].中国生物工程杂志,2010,30(5):103-109.[9] Wang Z,Zhao Y,Su T.Extraction and antioxidant activity of polysaccharides fromRana chensinensis skin[J].Carbohydr Polym,2015,115(115):25-31.[10] 赵玉红,赵小旭,姜晓青.超声波-双酶法协同提取林蛙皮多糖的工艺优化[J].食品工业科技,2012,33(11):230-234.[11] 陈大勇,杨靖,李硕,等.林蛙卵多糖的提取工艺及其抗氧化作用研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版),2013(12):149-154.[12] 侯召华,金春爱,孙晓东,等.蛙类皮肤生物活性肽的研究进展[J].食品科技,2013(5):260-264.[13] Zhang X,Cheng Y,Yang Y,et al.Polypeptides from the Skin ofRana Chensinensis Exert the Antioxidant and Antiapoptotic Activities on HaCaT cells[J].Animal Biotechnology,2017,28(1):1-10.[14] 杨闯,王俊玲,张传军,等.林蛙皮生物活性肽3种提取方法的比较研究[J].黑龙江畜牧兽医,2015(5):174-235.[15] Shang D,Wang C,Wei S,et al.Membrane interaction and antibacterial properties of chensinin-1,an antimicrobial peptide with atypical structural features from the skin ofRana chensinensis[J].Appl.Microbiol.Biotechnol,2012,96(6):1551-1560.[16] Shang D,Li X,Sun Y,et al.Design of Potent,Non-Toxic Antimicrobial Agents Based upon the Structure of the Frog Skin Peptide,Temporin-1CEb from Chinese Brown Frog,Rana chensinensis[J].Chemical Biology & Drug Design,2012,79(5):653-662.[17] 袁海恋,施溯筠.响应面法优化林蛙皮中透明质酸的提取工艺[J].食品工业科技,2016,37(8):196-200.[18] 张晶,胡春霞,王战勇,等.林蛙卵油的提取研究[J].氨基酸和生物资源,2008,30(1):10-12.[19] 金莉莉,王秋雨,娄虹,等.林蛙卵油脂肪酸组分的分析研究[J].食品科学,2004,25(10):232-234.[20] 赵超,叶海青,侯萍萍,等.微波辅助提取林蛙卵油的工艺优化及脂肪酸组成分析[J].食品科学,2017,38(22):263-268.[21] 张肃,胡春晓,金莉莉,等.东北林蛙卵蛋白抗疲劳活性研究[J].特产研究,2010,32(1):7-9.[22] 李永政,胡春晓,王铮,等.东北林蛙卵蛋白酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性[J].食品科学,2012(9):235-239.[23] Shen Y,Liu Y,Ma J,et al.Immunoreactivity of c-kit receptor protein during the prehibernation period in the oviduct of the Chinese brown frog,Ranachensinensis[J].Journal of Veterinary Medical Science,2012,74(2):209.[24] 薛冰,金在久,施溯筠.林蛙皮的抗氧化性研究[J].华西药学杂志,2010,25(4):431-433.[25] 苏玉春,陈光,郭会楠,等.林蛙卵黑色素的提取工艺及其抗氧化活性[J].西北农林科技大学学报(自然科学版),2017,45(2):196-202.[26] Wang Z,Zhao Y,Su T,et al.Characterization and antioxidant activity in vitro and in vivo of polysaccharide purified fromRana chensinensis,skin[J].Carbohydr Polym,2015(126):17-22.[27] Che W,Yang Z,Song L,et al.Anticancer mechanisms of temporin-1CEa,an amphipathic helical antimicrobial peptide,in Bcap-37 human breast cancer cells[J].LifeSciences,2013,92(20-21):1004-1014.[28] Wang C,Tian L L,Li S,et al.Rapid Cytotoxicity of Antimicrobial Peptide Tempoprin-1CEa in Breast Cancer Cells through Membrane Destruction and Intracellular Calcium Mechanism[J].Plos One,2013,8(4):e60462.[29] 巢警殳,杜鹃,刘雅娟.林蛙皮活性肽对小鼠免疫功能影响的试验研究[J].安徽农业科学,2012,40(21):10894-10895.[30] 李俊峰.中国林蛙资源的综合利用和开发[J].安徽农学通报,2009,15(3):159-160.[31] 张鑫, 李思明,邓晨,等.林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖及凋亡的影响[J].中国兽医学报,2014,34(6):946-950.[32] Mei Z,Li X,Li S,et al.Electrospun poly(l-lactide)/zein nanofiber mats loaded with Rana chensinensis,skin peptides for wound dressing[J].Journal of Materials Science Materials inMedicine,2016,27(9):136.[33] 彭飞,徐峰,赵倩,等.中国林蛙卵油的抗惊厥作用及其与单胺神经递质的关系[J].中国药学杂志,2005,39(12):912-915.[34] 苑春莉,孙连坤,康劲松.林蛙卵油灌胃对于雄激素预处理大鼠妇科内分泌的影响[J].中国实验诊断学,2010,14(2):196-198.[35] 尹云厚,陈宁宁,常雷,等.东北林蛙(Ranadybowskii)卵油脂肪酸体外抗氧化性和保湿性研究[J].经济动物学报,2018(1):30-36+35.[36] 沈雪,杨秀东,张艳,等.林蛙油口服液在D-半乳糖诱导氧化损伤模型小鼠体内的抗氧化作用[J].吉林化工学院学报,2016,33(7):17-20.[37] 赵丹玉,侯长余,王艳杰,等.林蛙卵核糖核酸酶的抗肿瘤作用及对淋巴细胞转化的影响[J].中国生化药物杂志,2010,31(4):228-230.[38] 吴世玉,孟祥敏,刘俊梅,等.林蛙卵黑色素的理化性质及其抗氧化活性研究[J].食品研究与开发,2018(14):25-29.。
林蛙卵核糖核酸酶的抗肿瘤作用及对淋巴细胞转化的影响
林蛙卵核糖核酸酶的抗肿瘤作用及对淋巴细胞转化的影响赵丹玉;侯长余;王艳杰;曹阳
【期刊名称】《中国生化药物杂志》
【年(卷),期】2010(31)4
【摘要】目的研究林蛙卵核糖核酸酶(RNase)的抗肿瘤活性以及对淋巴细胞转化的影响.方法从林蛙卵中提取RNase,并用酶谱分析进行鉴定;采用MTT比色法检测林蛙卵RNase对鼠S180肿瘤细胞株生长以及对淋巴细胞转化的影响.结果从林蛙卵中提取的RNase由大约100个氨基酸残基组成,相对分子质量10 000.林蛙蛙卵RNase对鼠S180肿瘤细胞株生长和淋巴细胞转化具有较强的抑制作用,并随着林蛙卵RNase浓度的增加,对S180肿瘤细胞生长率和淋巴细胞转化率的抑制作用随之增加,呈现剂量依赖性.结论林蛙卵RNase对S180肿瘤细胞的生长率和淋巴细胞转化率具有明显的抑制作用.
【总页数】4页(P228-230,234)
【作者】赵丹玉;侯长余;王艳杰;曹阳
【作者单位】辽宁中医药大学,辽宁,沈阳,110032;辽宁省教育厅,辽宁,沈阳,110032;辽宁中医药大学,辽宁,沈阳,110032;辽宁中医药大学,辽宁,沈阳,110032
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.中国林蛙(哈士蟆)卵与有关蛙种卵的鉴别 [J], 张金福
2.中国林蛙蛙卵营养成分分析 [J], 王宇;尚德静;冯伯森
3.采集野生蛙卵繁殖林蛙技术 [J], 马常夫;;
4.中国林蛙卵油中的激素成分及卵油对血小板聚集和血脂的影响 [J], 李成义;陈光荣;孙文伟
5.中国林蛙卵、卵油及输卵管对红细胞SOD活性的影响 [J], 金莉莉;刘德文;范文今;王秋雨
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
长白山林区中国林蛙体内寄生虫感染情况调查
长白山林区中国林蛙体内寄生虫感染情况调查刘凤霞;蔡凤坤;李卓;牛丽君;朴正吉【摘要】In order to study the infection of Chinese wood frog（Rana chensinensis） parasite in Changbai Mountain district,Chinese wood frog in different locations,age groups,sexes,and life period were collected,cut and inspected.The results showed：Chinese wood frogs in Changbai Mountain were infected by parasites including three kinds of nematodes （Rhabdia bufonis,Cosmocercella sp,Oswaldocru sp）and three kinds of trematodas（Rowsbiella tineri,Pelystoma integerimrn,Pelystoma ocellatrm）,which belonged to 5 families and 5 genera.Chinese wood frogs were mainly infected by Rhabdia bufonis and Oswaldocru sp which the infection rate and strength were 56.66%,4.87 and 67.33%,9.25.Different kinds of parasites in Changbai Mountain wood frog body distributed in a certain pattern and were in a suitable ecological environment.The infection rates and strength of parasites in Changbai Mountain wood frog body increased with age and had nothing to do with sexes.%通过解剖镜检分析了长白山地区中国林蛙寄生虫的感染情况.结果表明：长白山林区中国林蛙寄生虫为线虫3种（Rhabdia bufonis、Cosmocercella sp、Oswaldocru sp）、吸虫3种（Rowsbiella tineri、Pelystoma integerimrn、Pelystoma ocellatrm）,分别隶属5科5属;其主要感染肺线虫Rhabdia bufonis和肠道寄生虫Oswaldocru sp,感染率和感染强度分别为56.66%、4.87和67.33%、9.25;不同种类寄生虫在长白山林区林蛙体内分布有一定规律,不同种类寄生在适宜自身的生态环境中,表现出寄生部位及感染寄生虫的专一性;长白山林区林蛙寄生虫的感染率和强度随年龄增加而增大,不同地点中国林蛙的寄生虫感染率及感染强度普遍较高,不同地点不同种类寄生虫的感染率及强度存在差异;雌、雄林蛙体内寄生虫感染情况差异不显著（P〉0.05）.【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(012)006【总页数】4页(P704-707)【关键词】中国林蛙;寄生虫;长白山【作者】刘凤霞;蔡凤坤;李卓;牛丽君;朴正吉【作者单位】长白山科学研究院,吉林安图133613;长白山科学研究院,吉林安图133613;长白山科学研究院,吉林安图133613;长白山科学研究院,吉林安图133613;长白山科学研究院,吉林安图133613【正文语种】中文【中图分类】S759.82中国林蛙隶属两栖纲(Ammphibia)、无尾目(Anura)、蛙科(Ranidae)，又称田鸡、哈什蚂，是我国重要的两栖类经济动物，广泛分布于东北林区，其雌性输卵管也叫林蛙油、蛤蟆油［1-5］，现代医学称其为“绿色软黄金”，被定为国家二级保护中药材.长白山是中国林蛙的主要产地，数量多、分布广，亦是主要的养殖对象之一.随着林蛙养殖业的迅速发展，了解其寄生虫感染情况，是林蛙养殖业向科学化、规模化及标准化发展的基础之一.国内刘忠［6］、马常夫［7］等曾有中国林蛙体内吸虫及线虫的报道，而有关长白山地区中国林蛙寄生虫感染情况鲜有报道.本研究针对长白山林区中国林蛙感染寄生虫的种类、感染率、感染强度及感染部位进行了详细调查.1 材料和方法1.1 研究地自然概况研究地位于吉林省东南部的长白山林区，地理坐标为N 42°10'～42°30'、E 126°55'～128°50'，海拔700～1 600 m，主要包括岳桦林、针叶林和阔叶红松林3个植被类型.该区受温带大陆性季风气候影响，冬季寒冷漫长，夏季温暖多雨短暂.年平均气温3.6℃，最冷月(1月)平均气温－15.6℃，最热月(7月)平均气温19.7 ℃;年均降水量 700 mm，多集中在夏季(480 ～500 mm)［8］.1.2 试验动物及来源中国林蛙在长白山林区分布很广，数量相对较多.本研究试验动物采自吉林省长白山林区：白河、漫江、湾沟、小天池等地不同生活周期的中国林蛙(以下简称林蛙)150只，解剖，在解剖镜下进行分检，记录各器官内寄生虫的数量、寄生部位、症状等，共收集到2 561条寄生虫标本，均保存在70%酒精溶液中.1.3 主要仪器设备及试剂直尺、解剖器具、双目解剖镜及70%酒精溶液等.1.4 测定指标感染率(P)为线虫感染样本数量占总解剖数量的比例;感染强度(N)为取样样本中林蛙个体平均感染线虫的数量.2 结果与分析2.1 长白山林区林蛙感染寄生虫情况共解剖林蛙150只，阳性110只，感染率为73.33%.经原延边医学院寄生虫教研室鉴定为吸虫和线虫，分属5科5属6种：吸虫 3种(Rowsbiella tineri、Pelystoma integerimrn、Pelystoma ocellatrm)、线虫3种(Rhabdia bufonis、Cosmocercella sp、Oswaldocru sp)，见表1.表1 长白山林区林蛙感染寄生虫情况Tab.1 The infection of Chinese woodfrog parasites in Changbai Mountain寄生虫种类阳性数量/检查数量 P/%N/(条·只－1)59 Pelystoma integerimrn 5/150 3.33 8 1 ～2 0.05 Pelystoma ocellatrm 4/150 2.67 4 1 0.03 Rhabdia bufonis 85/150 56.67 731 1 ～474.87 Cosmocercella sp 68/150 45.33 341 1 ～17 2.27 Oswaldocru总虫范围平均Rowsbiella tineri 16/150 10.67 89 1 ～26 0.sp 101/150 67.33 1 388 1 ～58 9.25从表1可以看出：长白山林区林蛙线虫的感染率和强度均大于吸虫，林蛙感染的寄生虫种类主要为Oswaldocru sp 和 Rhabdia brfous，感染率和感染强度分别为 67.33%、9.25 和 56.66%、4.87;其次为Cosmocercella sp和 Rowsbiella tineri，感染率和感染强度分别为 45.33%、2.27 和 10.67%、0.59;再次为Pelystoma integerimrn 和 Pelystoma ocellatrm，感染率和感染强度分别为3.33%、0.05 和 2.66%、0.03.2.2 不同种类寄生虫在长白山林区林蛙体内的分布与感染情况不同种类寄生虫在长白山林区林蛙体内的分布与感染情况见表2.表2 不同种类寄生虫在长白山林区林蛙体内的分布与感染情况Tab.2 The distribution and infection of different kinds of parasites in Changbai Mountain wood frog body胃十二指肠小肠直肠膀胱P/% N/肺寄生虫种类(条·只－1)P/% N/(条·只－1)P/% N/(条·只－1)P/% N/(条·只－1)P/% N/(条·只－1)P/% N/(条·只－1)08 0 0 Pelystoma integerimrn 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3.330.05 Pelystoma ocellatrm 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2.66 0.03 Rhabdia bufonis56.66 4.87 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Cosmocercella sp 0 0 0 0 0 0 25.33 0.83 30.001.44 0 0 Oswaldocru Rowsbiella tineri 0 0 0 0 6 0.50 1.33 0.04 3.33 0.sp 0 0 25.33 1.59 63.30 7.66 0 0 0 0 0 0由表2可以看出：不同种类寄生虫在长白山林区林蛙体内分布有一定规律，寄生在适宜自身的生态环境中，表现出寄生部位及感染寄生虫的专一性.Rowsbiella tineri在长白山林区林蛙十二指肠、小肠、直肠均有感染，感染率和感染强度分别为 6%、0.50，1.33%、0.04，3.33%、0.08;Pelystoma integerimrn 和Pelystoma ocellatrm 仅在膀胱有感染，感染率和感染强度分别为3.33%、0.05，2.66%、0.03，这说明了寄生虫寄生部位的专一性;肺仅感染Rhabdia bufonis，这说明了感染寄生虫的专一性及寄生虫寄生部位的专一性，感染率和感染强度分别为56.66%、4.87;Cosmocercella sp在小肠、直肠均有感染，感染率和感染强度分别为25.33%、0.83，30.00%、1.44;Oswaldocru sp在胃、十二指肠均有感染，感染率和感染强度分别为25.33%、1.59，63.30%、7.66.2.3 不同年龄、性别长白山林区林蛙感染寄生虫情况不同年龄、性别长白山林区林蛙感染寄生虫情况见表3.表3 不同年龄、性别长白山林区林蛙感染寄生虫情况Tab.3 The infection of Chinese wood frog parasites in different ages and sexes部位组别体长/mm 十二指肠小肠直肠膀胱合计P/%N/(条·肺胃只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/%N/(条·只－1)当年幼体18.3 ±0.6 0 0 3.2 0.03 0 0 0 0 0 0 0 0 3.2 0.03 2a 幼体30.4 ±0.9 55.00 2.60 19.1 0.40 52.4 2.33 58.4 1.52 28.6 0.52 0 0 85.7 7.40亚成体49.2 ±0.5 64.30 4.20 21.4 1.40 82.1 4.86 39.3 1.21 42.8 1.67 3.6 0.04 89.3 13.80成体62.3 ±0.6 85.70 8.60 41.3 2.90 92.1 14.68 23.8 0.81 46.02.6 15.9 0.17 100.0 29.60雌性个体56.9 ±2.2 72.70 7.20 33.3 2.60 87.8 14.60 33.3 0.96 39.4 1.75 12.2 0.15 96.9 28.00雄性个体54.1 ±1.3 82.60 7.10 37.72.20 86.9 9.85 30.4 1.04 42.0 2.15 10.1 0.10 95.7 21.70表3表明：长白山林区林蛙各部位(小肠除外)寄生虫的感染率和感染强度均随年龄增长而增大.随宿主年龄的增长其寄生虫感染广度增加的原因，主要是由于宿主含量增大，所食中间宿主的体形增大，感染机会增大，随时间延续使寄生虫在体内积累.寄生虫与宿主年龄关系可分为：1)随宿主年龄递减的寄生虫，如小肠内寄生虫线虫;2)随宿主年龄递增的寄生虫，如肺线虫，具积累性;3)与宿主年龄无关的寄生虫，如吸虫.经t检验，雌、雄林蛙体内寄生虫感染情况差异不显著(P＞0.05).2.4 不同地点长白山林区林蛙寄生虫感染情况不同地点长白山林区林蛙寄生虫感染情况见表4、5.表4 不同地点长白山林区林蛙不同部位寄生虫感染情况Tab.4 The infection of different Chinese wood frog organs parasites in different locations?表5 不同地点长白山林区林蛙感染寄生虫情况Tab.5 The infection of Chinese Wood frog parasites in different locationsRawsbiella tineri Pelystona integerimun Pelyst omaocellatum Rhabdia bufonis Cosmocercell sp Oswaldocru sp P/% N/地点(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1) P/% N/(条·只－1)二道白河 16.17 0.985 8.820.12 1.47 0.04 67.64 5 58.88 3.34 83.82 8.14小天池 0 0 0 0 0 0 64.28 3.64 35.70 0.64 71.42 4.64东方红 7.14 0.210 21.42 0.21 0 0 85.71 7.07 50.00 2.86 100 22.64漫江 8.33 0.916 0 0 0 0 91.66 16.33 50.00 2.16 100 22.92湾沟16.60 0.166 0 0 16.60 0.166 100 9.66 83.33 6.66 83.33 13.33由表4可见：长白山区不同地点中国林蛙的寄生虫感染率及强度普遍较高，感染情况与其地域关系不大，这说明该地区病源散布广泛.由表5可见：长白山林区不同地点线虫感染率及强度均大于吸虫.在不同地域其感染率及强度存在差异，这些差异可能与各地生境条件及传播媒介情况有关，确切原因有待进一步研究.3 小结和讨论1)长白山林区中国林蛙寄生虫为线虫3种(Rhabdia bufonis、Cosmocercella sp、Oswaldocru sp)、吸虫3种(Rowsbiella tineri、Pelystoma integerimrn、Pelystoma ocellatrm)，分别隶属5科5属;其主要感染肺线虫Rhabdia bufonis和肠道寄生虫 Oswaldocru sp，感染率和感染强度分别为56.66%、4.87 和67.33%、9.25.我国有关中国林蛙寄生虫的调查较少.马常夫［7］报道林蛙体内寄生虫4科4属4种，刘忠等［6］报道吸虫4科4种，Koo，swei-yen［9］报道广州黑眶蟾蜍的肺寄生蟾蜍棒线虫，棒线虫属自由生活，世代营腐生生活，寄生世代寄生在两栖和爬行类的肺内［10］.本研究初步查明中国林蛙体内寄生虫6种，其中吸虫3种、线种3种，主要是呼吸系统和消化系统中的寄生虫.本次调查中肝脏器官内未见有寄生虫.2)不同种类寄生虫在长白山林区林蛙体内分布有一定规律，不同种类寄生在适宜自身的生态环境中表现出寄生部位及感染寄生虫的专一性.3)长白山林区林蛙寄生虫的感染率和强度随年龄增加而增大，不同地点中国林蛙的寄生虫感染率及感染强度普遍较高，不同地点不同种类寄生虫的感染率及强度存在差异.4)长白山林区林蛙体内寄生虫感染情况与性别无关.5)通过调查发现，长白山地区林蛙的寄生虫病源广泛分布，仅吸虫类在小天池中未出现，这可能与该生境物理条件、生物因素和病源媒介有关，或与统计样本数量有关.长白山山区林蛙线虫感染率最高，其中主要是肺线虫和十二指肠肠道寄生线虫比率最高，至于寄生虫感染强度与宿主之间相互关系及对机体的影响尚需进一步研究.【相关文献】［1］孟庆杰，崔岩，蒋超，等.中国林蛙价值及养殖前景分析［J］.林业实用技术，2006(2)：30-31.［2］肖晓琳，刘维超，崔学哲，等.吉林省不同地区中国林蛙种质资源评定［J］.北华大学学报：自然科学版，2010，11(3)：255-258.［3］张颖才.哈什蟆油［J］.中药通报，1956，2(5)：205-206.［4］中国医学科学院药物研究所.中药志Ⅵ［M］.北京：人民卫生出版社，1961.［5］李东风，陈伟庭.中国林蛙研究进展［J］.辽宁师范大学学报：自然科学版，2005，28(1)：92-94.［6］刘忠，陈敏生，李林.吉林省林蛙吸虫新种及新记录［J］.白求恩医科大学学报，1978(4)：16-22，161.［7］马常夫.林蛙养殖［M］.北京：中国林业出版社，1990.［8］陈霞，王绍先，王振国.长白山保护开发区生物多样性保护与可持续发展［M］.长春：吉林科学技术出版社，2010.［9］Koo Swei-yen.Nematode Parasites of Bufo Melanostictus，the Common Toad from Danton［J］.Lingnan Sci，1939，18(2)：143-154.［10］徐乃南.动物寄生线虫学［M］.北京：科学出版社，1975：91.。
林蛙卵核糖核酸酶的抗肿瘤作用及对淋巴细胞转化的影响
林蛙卵核糖核酸酶的抗肿瘤作用及对淋巴细胞转化的影响赵丹玉1,侯长余2,王艳杰1,曹 阳1(1.辽宁中医药大学,2.辽宁省教育厅,辽宁沈阳110032)摘 要:目的研究林蛙卵核糖核酸酶(RN ase)的抗肿瘤活性以及对淋巴细胞转化的影响。
方法从林蛙卵中提取RN ase ,并用酶谱分析进行鉴定;采用M TT 比色法检测林蛙卵RN ase 对鼠S180肿瘤细胞株生长以及对淋巴细胞转化的影响。
结果从林蛙卵中提取的RN ase 由大约100个氨基酸残基组成,相对分子质量10000。
林蛙蛙卵RN ase 对鼠S180肿瘤细胞株生长和淋巴细胞转化具有较强的抑制作用,并随着林蛙卵RN ase 浓度的增加,对S180肿瘤细胞生长率和淋巴细胞转化率的抑制作用随之增加,呈现剂量依赖性。
结论林蛙卵RN ase 对S180肿瘤细胞的生长率和淋巴细胞转化率具有明显的抑制作用。
关键词:林蛙;核糖核酸酶;S180细胞株;淋巴细胞转化中图分类号:R 285 文献标识码:A 文章编号:1005 1678(2010)04 0228 03Antitu mor activity and ly mphocyte translation effects of R ibonucleases(RNase)fro mRana sylvatica Le conte spawnsZ HAO Dan yu 1,HOU Chang yu 2,WANG Yan ji e 1,CAO Y ang1(1.L i a oning University of T rad itional ChineseM edicine,2.The Education D e p art m ent ofL iaoning P rovince ,Shenyang 110032,China )Abstract :Purpose To study t h e antitum or activ ity and ly m phocy te translation effects o f the R ibonu cleases(RNase)fro m R ana s y lvatica L e conte spa wns .M et hods RN ase fro m R ana s y lvatica L e conte spa wns have been detected by zy m ogra m m et h od ,and then the effects have been testified to the S180cellsand ly m phocy te translation by MTT m ethod .R esults R ana s y lvatica Le conte spa w ns have a k i n d of cer tain RN ase w h ic h has abou t 10kD m o lecu lar w e i g ht and 100a m i n o ac i d s .W ith the concentrati o n o f RN ase increaing ,the surv i v a l of the S180cells decreases ,t h e sa m e as ly m phocy te cells .C onclusion The RN ase fro m R ana sy lvatica L e conte spa wns has disti n ct antitum or acti v ity and i n h i b its the gro w th and m ultiplicati o n of ly mphocyte cells .K ey w ords :R ana s y lva tica L e conte ;ri b onucleases ;S180ce ll stra i n ;antitu m or ;ly m phocy te trans lation收稿日期:2009 09 07作者简介:赵丹玉,女,辽宁沈阳人,讲师,在读博士,主要从事生化药物和中药药物研究,Te:l 138********,E m ai:l danyu1978@163.co m 。
两种牛蛙活性肽结构及体外抗肿瘤细胞增殖作用的研究
两种牛蛙活性肽结构及体外抗肿瘤细胞增殖作用的研究王选;马吉飞;赵瑞利;胡烨;申杰;林东东【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)005【摘要】试验旨在研究新发现的两种牛蛙活性肽对人肺癌细胞NCI-H446、人乳腺癌细胞MCF-7及小鼠白血病细胞K562 3种肿瘤细胞体外增殖的影响,为新的多肽抗肿瘤药筛选提供依据.本试验利用圆二色谱(CD)法检测两种新牛蛙活性肽的二级结构,通过MTS细胞毒试验测定不同浓度的两种新牛蛙活性肽对人肺癌细胞NCI-H446、人乳腺癌细胞MCF-7及小鼠白血病细胞K562 3种瘤细胞体外增殖的影响.圆二色谱法结果显示,Temporin-Lb的二级空间结构为聚脯氨酸Ⅱ型螺旋(PPⅡ)结构,Cates beianin-1a的二级空间结构为无规则卷曲.MTS细胞毒试验结果显示,给予Catesbeianin-1a的3种瘤细胞培养24 h后,瘤细胞形态无明显变化,正常增殖,而给予Temporin-Lb的3种瘤细胞培养24 h后,瘤细胞发生皱缩、细胞变圆、脱落甚至死亡,增殖受到抑制,其中对TemporinLb在4～40μmol/L浓度范围内对小鼠白血病细胞K562的抑制效果最为明显.结果表明,新牛蛙活性肽Temporin-Lb具有一定的抑瘤作用,Catesbeianin-1a对瘤细胞的体外增殖没有明显影响.【总页数】7页(P1211-1217)【作者】王选;马吉飞;赵瑞利;胡烨;申杰;林东东【作者单位】天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;中国科学院天津工业生物技术研究所,天津300308;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.多糖类药物在体外对LAK细胞增殖功能的影响和抗肿瘤作用的实验研究 [J], 谢遵江;张云芳;李益民;贺业春;刘颖2.二苯并呫吨类化合物CY-B12体外抗肿瘤细胞增殖的作用及其机制的初步研究[J], 蒲兴祥;江高峰;陈泳;许遵乐;冼励坚3.两种海藻多糖的提取分析及其体外抗肿瘤作用 [J], 刘秋英;孟庆勇;刘志辉4.木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究 [J], 王洪燕;全康;蒋燕灵;吴加国;唐修文5.当归多糖APS-3c的结构特征及体外抗肿瘤作用的研究 [J], 曹蔚;李小强;侯颖;樊慧婷;梅其炳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国林蛙抗菌肽对胃癌细胞生长抑制作用
中国林蛙抗菌肽对胃癌细胞生长抑制作用刘红玉;崔洪斌【期刊名称】《中国公共卫生》【年(卷),期】2007(23)8【摘要】目的研究中国林蛙抗菌肽对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用。
方法以人胃癌细胞SGC-7901为体外实验模型,通过细胞形态学观察、四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)实验、分裂指数法和集落形成实验,研究抗菌肽对胃癌细胞生长的抑制作用。
结果细胞形态学观察,中国林蛙抗菌肽组中,细胞数量减少,细胞膜出现孔洞,浮起的死细胞增加。
MTT实验中随着抗菌肽浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢,呈剂量-效应关系和时间-效应关系。
分裂指数和集落形成实验中,中国林蛙抗菌肽对胃癌细胞SGC-7901有丝分裂和集落形成均有明显抑制作用(P<0.01)。
结论中国林蛙抗菌肽对人胃癌细胞SGC-7901的生长有显著的抑制作用。
【总页数】2页(P913-914)【关键词】抗菌肽;胃癌细胞;抑癌;中国林蛙【作者】刘红玉;崔洪斌【作者单位】哈尔滨医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室【正文语种】中文【中图分类】R730.1;R735.2【相关文献】1.家蝇胚胎细胞抗菌肽对人髓样白血病细胞K562生长抑制作用的研究 [J], 张金花;贺莉芳;杨霞霞;万启惠2.生长抑素受体亚型2、5在胃癌细胞株中的表达及奥曲肽对胃癌细胞分泌VEGF 的抑制作用 [J], 郭雯珲;王川;洪天姿;傅芳萌;张捷;郑美春3.直链烷基苯磺酸钠对中国林蛙抗菌肽基因表达的影响 [J], 谢晖;孙燕;李治;宋婧4.中国林蛙抗菌肽Temporin-1CEa基因的真核表达载体构建。
[J], 张志崇;王春生;张秋婷;朴善花;苗向阳;安铁洙5.中国林蛙(Rana chensinensis)蛙皮抗菌肽的制备及抗菌作用研究 [J], 刘红玉;崔洪斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国林蛙抗菌肽Temporin-1CEa基因的真核表达载体构建。
中国林蛙抗菌肽Temporin-1CEa基因的真核表达载体构建。
张志崇;王春生;张秋婷;朴善花;苗向阳;安铁洙【期刊名称】《经济动物学报》【年(卷),期】2012(016)001【摘要】In order to establish a method to get a large number of antimicrobial peptides from Rana chensinensis,a series of experimentswere conducted as follows.According to Chinese frog skin antimicrobial peptides Temporin-1CEa gene mRNA sequence（EU624139） in GenBank,a pair of specific primers were designed and cDNA was obtained from Chinese forest frog skin RNA by reverse transcription.Temporin-1CEa gene coding sequence was amplified using the cDNA,and linked with pEASY-T3 cloning vector.The GFP gene was inserted into the recombinant plasmid Tem-T3 by molecular methods.The Tem-GFP fragment was linked with eukaryotic expression vector pcDNA3.1,and Tem-GFP-pcDNA3.1 recombinant plasmid was achieved ing of lipid infection method,the plasmids were transfected into sheep fibroblast cells,the green fluorescence was observed under a fluorescence microscope after 48h.qPCR data showed that Tem-GFP fusion protein expression level of transfected Tem-GFP-pcDNA3.1 sheep fibroblasts increased about 300 folds than that of the control group.This study supplied the technical basis for developing mammary gland bioreactor of expressing Temporin-1CEa gene.%为了建立大量获取中国林蛙抗菌肽的方法,根据GenBank中的中国林蛙皮肤抗菌肽Temporin-1CEa基因的mRNA序列（EU624139）设计一对特异性引物,以提取的中国林蛙皮肤总RNA反转录出的cDNA为模板,将扩增的编码序列与pEASY-T3克隆载体连接获得Tem-T3;利用酶切、连接等分子生物学手段,将GFP 基因连入Tem-T3克隆载体,再经酶切获得Tem-GFP片段,并插入真核表达载体pcDNA3.1,最终得到Tem-GFP-pcD-NA3.1重组质粒;利用脂质体转染法将该质粒转入绵羊成纤维细胞,48 h后可在荧光倒置显微镜下观察到GFP的绿色荧光表达;qPCR数据分析显示,与对照组相比,转染Tem-GFP-pcDNA3.1的绵羊成纤维细胞中融合蛋白Tem-GFP的表达量可提高约300倍。
林蛙卵营养成分和保健功能的研究进展
食品研究与开发F ood Research And Development圆园18年6月第39卷第11期DOI ：10.3969/j.issn.1005-6521.2018.11.041林蛙卵营养成分和保健功能的研究进展刘俊梅，吴世玉，王丹洋，周琪，罗泽江，于寒松*（吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林长春130118）摘要：林蛙卵是林蛙油生产过程中的副产物之一，因其年产量大且未能得到充分开发逐渐得到关注。
林蛙卵含有多种营养成分，具有极高的药用和保健价值。
近些年，多位专家和学者对林蛙卵的营养成分及保健功能进行了研究，重点阐述林蛙卵中多糖、不饱和脂肪酸、黑色素、蛋白质及氨基酸等营养成分，揭示其药用及保健价值，为林蛙卵的深加工提供科学依据。
关键词：林蛙卵；多糖；不饱和脂肪酸；蛋白质；黑色素；保健功能Advances in Research of the Nutritional Value and Health Function of Ovum of Rana Chensinensis LIU Jun-mei ，WU Shi-yu ，WANG Dan-yang ，ZHOU Qi ，LUO Ze-jiang ，YU Han-song *（College of Food Science and Engineering ，Jilin Agricultural University ，Changchun 130118，Jilin ，China ）Abstract ：The ovum of Rana chensinensis is one of the byproduct in the production of ovidutus ranae ，which has been more attention because of its large annual output and insufficient utilization.The ovum of Rana chensinensis is rich in polysaccharide ，polyunsaturated fatty acids ，melanin and protein in the body ，has important health function.In recent years ，the nutritional value and health function of ovum of Rana chensinensis were studied by many scholars ，and the nutritive components such as polysaccharide ，unsaturated fatty acid ，melanin ，protein and amino acid in the ovum of Rana chensinensis were described ，and its medicinal and health value were revealed ，which provided a scientific basis for the deep processing of ovum ofRana chensinensis .Key words ：ovum of Rana chensinensis ；polysaccharide ；polyunsaturated fatty acids ；protein ；melanin ；healthfunction引文格式：刘俊梅，吴世玉，王丹洋，等.林蛙卵营养成分和保健功能的研究进展[J].食品研究与开发，2018，39（11）：220-224LIU Junmei ，WU Shiyu ，WANG Danyang ，et al.Advances in Research of the Nutritional Value and Health Function of Ovum of Rana Chensinensis [J].Food Research and Development ，2018，39（11）：220-224中国林蛙（Rana temporaria chensinensis David ）俗称田鸡、哈士蟆，属两栖纲、无尾目、蛙科、林蛙属，主产于我国东北地区。
东北林蛙皮肤中一类新抗菌肽cDNA的克隆及成熟肽的预测
东北林蛙皮肤中一类新抗菌肽cDNA的克隆及成熟肽的预测朱倩;徐艳春;肖向红【期刊名称】《现代生物医学进展》【年(卷),期】2007(007)007【摘要】为进一步研究和开发高效广谱天然抗生素的抗菌肽,本文克隆东北林蛙(Rana dybowskii)的抗菌肽基因,并预测其成熟肽的有关性质.根据蛙属抗茵肽信号肽末端序列设计简并引物,以RT-PCR技术扩增皮肤中抗菌肽的cDNA,并进行克隆测序.用生物信息学软件分析cDNA序列特点,预测成熟肽的理化性质.研究发现一种长度为28个氨基酸残基的新抗茵肽dybowsin-1,该肽具有Rana box结构;与已发现的抗茵肽仅有35%的同源性;理论等电点在9.70-10.01之间;均呈阳离子性;从第3或4个氨基酸开始到第16个氨基酸形成α-螺旋结构,极性氨基酸位于螺旋轮的一侧,非极性氨基酸位于螺旋轮的另一侧;具有N-端疏水、C-端亲水的两亲性.一个个体表达5条cDNA序列编码3种不同的dybowsin-1分子,显示出该抗菌肽表达的多样性.序列分析显示,该抗茵肽可能由多基因座位编码.【总页数】4页(P1016-1019)【作者】朱倩;徐艳春;肖向红【作者单位】东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江,哈尔滨,150040;国家林业局野生动植物检测中心,黑龙江,哈尔滨,150040;东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江,哈尔滨,150040;国家林业局野生动植物检测中心,黑龙江,哈尔滨,150040;东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.阔褶水蛙皮肤组织cDNA文库的构建及抗菌肽brevinin-2LTs的cDNA克隆和序列分析 [J], 王辉;张秀清;胡玉红;刘敬兰;孙君社2.东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的表达、纯化及抑菌活性分析 [J], 郭娜;肖向红;徐义刚;柴龙会;张晶钰3.东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的抗病毒活性分析 [J], 周旋;肖向红;李玉4.黑斑侧褶蛙5类抗菌肽基因的克隆及其成熟肽理化性质的预测 [J], 季菁菁;夏睿;李晓平;兰天明;徐艳春5.中国对虾抗菌肽成熟肽的cDNA克隆 [J], 康翠洁;王金星;赵小凡;相建海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
林蛙嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆及原核表达
林蛙嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆及原核表达
廖鏖;金俐伶;王宏博;李艳茹;李太元
【期刊名称】《延边大学农学学报》
【年(卷),期】2012(034)002
【摘要】以长白山林蛙中分离的嗜水气单胞菌为材料，对嗜水气单胞菌气溶素基因进行克隆、序列分析及基因表达等研究，为嗜水气单胞菌的分子生物学研究提供依据。
通过实验成功克隆了气溶索基因，大小为1163bp，对其进行同源性检测，与基因库中DQ186611基因序列的同源性高达99％；构建原核表达重组质粒pGEX-Aer，在大肠杆菌BL21中获得表达，蛋白分子量约为69ku，以包涵体形式存在。
【总页数】4页(P103-106)
【作者】廖鏖;金俐伶;王宏博;李艳茹;李太元
【作者单位】延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002
【正文语种】中文
【中图分类】S966.35
【相关文献】
1.嗜水气单胞菌气溶素和溶血素基因的克隆与结构预测 [J], 刘明智;叶星;田园园;邓国成;马冬梅;白俊杰
2.嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆与序列分析 [J], 李寿崧;郭立新;江树勋;陈文炳;邵碧英
3.罗非鱼嗜水气单胞菌气溶素毒素基因的克隆及功能分析 [J], 唐小飞;谢芝勋;邓显文;余晓丽;刘加波;庞耀珊;谢志勤;谢丽基
4.致病性嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆与高效表达 [J], 卢强;李连瑞;付宝权;吴秀萍;石建平;刘明远
5.嗜水气单胞菌气溶素的原核表达及其多克隆抗血清的制备 [J], 杜娜;顾泽茂;袁军法;林蠡;翟艳花;刘学芹;罗宇良
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
东北林蛙卵蛋白抗疲劳活性研究
东北林蛙卵蛋白抗疲劳活性研究张肃;胡春晓;金莉莉;王秋雨;牟藤【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2010(032)001【摘要】东北林蛙卵蛋白含量丰富,是林蛙产业中尚待开发利用的副产品.本试验研究了东北林蛙卵蛋白的抗疲劳活性.取雄性昆明小鼠,体重18～22g,随机分为审白对照组、林蛙卵蛋白(低、中、高)剂量3组,连续灌胃35d,分别测馈小鼠的体重变化情况、负重游泳力竭时间、肝糖原和血乳酸的含量.结果表明.东北林蛙卵蛋白对小鼠体重增长无显著影响,可降低运动后小鼠血乳酸含量,增加小鼠负重游泳时间及肝糖原含量.研究显示,东北林蛙卵蛋白具有增加小鼠抗疲劳的活性作用.【总页数】3页(P7-9)【作者】张肃;胡春晓;金莉莉;王秋雨;牟藤【作者单位】沈阳体育学院冰雪项目重点实验室,辽宁,沈阳,110102;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036【正文语种】中文【中图分类】S966.3+5【相关文献】1.东北林蛙卵蛋白酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性 [J], 李永政;胡春晓;王铮;金莉莉;王秋雨2.弱氦-氖激光对东北林蛙卵孵化和蝌蚪生长速度的影响 [J], 何晓燕;张庆增;乔淑芬;赵玉敏;杨丽娟3.东北林蛙卵活性成分及药理活性研究进展∗ [J], 李梁;范宁;刘少华;李慧萍;卫功庆4.东北林蛙(Rana dybowskii)卵油脂肪酸体外抗氧化性和保湿性研究 [J], 尹云厚;陈宁宁;常雷;岑欣桉;卫功庆5.东北林蛙卵油脂肪酸化妆品的研制 [J], 陈宁宁;卫功庆;常雷;岑欣桉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
长白山林蛙蛙卵Onconase基因的克隆表达及其抗人乳腺癌作用
研究
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。
乳腺癌的发生与细胞增殖和凋亡的失衡有关,是细胞经过致瘤因素的刺激,在基因水平上失去对其正常调控,使细胞凋亡受到抑制而造成的异常增生,肿瘤细胞能够和正常细胞争夺营养并造成正常组织与器官受损,而且其能够远处转移,最终造成患者死亡。
随着科学技术的不断发展,在癌症的治疗手段中,抗癌药物的作用日渐重要,因此,需要寻找新的治疗乳腺癌的药物。
Onconase是在北美豹蛙卵中被首次发现,其对多种肿瘤细胞,包括宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌和前列腺癌细胞都具有细胞毒性,它可以通过调控细胞周期以及诱导细胞程序性死亡而发挥其抗增殖和细胞毒性作用。
其抗癌机制还需要进一步研究。
在本研究中,我们应用PCR技术,从长白山林蛙亚种基因组中克隆得到一个Rdchonc基因,并利用原核系统表达得到重组蛋白。
经序列分析,得到的重组蛋白属于RNase A超家族,它具有RNase A家族的保守序列。
通过核酸酶的活性实验测定,证明该蛋白具有较高的活性。
为了研究得到的重组蛋白Rdchonc是否具有抗肿瘤活性,我们以人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231为研究对象,通过MTT实验以及细胞侵袭实验,实验结果证明Rdchonc具有抗肿瘤细胞活性,可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖及侵袭作用。
为了进一步探讨其抗肿瘤的分子生物学机制,通过细胞周期实验,发现Rdchonc可以使细胞停滞在G0/G1期而发挥其抗癌作用。
此外,Western blot结果表明Rdchonc通过下调Bcl-2、上调Bad蛋白的表达而促进人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的凋亡。
由于MAPK/ERK信号通路在
细胞的致癌性转化中起着重要的作用。
它可以通过细胞表面生长因子受体而激活,从而调节细胞的增殖、分化和存活,同时,ERK在人乳腺癌中过度激活,MEK1/2-ERK1/2信号通路可能作为潜在的治疗途径。
目前,已开始寻找针对ERK途径中各个环节的抑制物,用以切断信号转导的途径,从而达到治疗疾病的目的。
因此,我们进一步探讨Rdchonc是否对MAPK/ERK信号通路起着调节作用,研究表明:Rdchonc通过下调P-MEK1/2和P-ERK1/2的表达而抑制人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖。
总之,本研究为林蛙的综合利用和精深开发,为长白山林蛙Onconase的进一步的开发及临床应用奠定了基础。