水质_粪大肠菌群测定
关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复
关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复
【实用版】
目录
一、引言
二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与标准
三、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的测定方法
四、结果报出问题的解决办法
五、结论
正文
一、引言
近期，关于地表水和地下水中粪大肠菌群及总大肠菌群检出限及结果报出的问题引起了广泛关注。
针对这一问题，本文将提供一些解答，以期为相关工作者提供参考。
二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与标准
粪大肠菌群和总大肠菌群是评价水质卫生安全的重要指标。
在我国，粪大肠菌群及总大肠菌群的检出限标准如下：
1.地表水：粪大肠菌群检出限为 200 MPN/L，总大肠菌群检出限为100 MPN/L；
2.地下水：粪大肠菌群检出限为 100 MPN/L，总大肠菌群检出限为
50 MPN/L。
三、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的测定方法
目前，常用的粪大肠菌群及总大肠菌群检出限测定方法有多管发酵法和滤膜法。
其中，多管发酵法的检出限是根据统计学方法计算出来的MPN(最可能数) 值，而非试验方法直接得出的结果。
四、结果报出问题的解决办法
在实际监测过程中，可能会出现检出限附近的结果。
针对此类情况，建议采取以下措施：
1.重复试验：对疑似检出限附近的结果进行重复试验，以确认是否为误差导致的误报；
2.采用多种方法：同时使用多管发酵法和滤膜法等不同方法进行检测，以提高结果的可靠性；
3.参考国家标准：按照国家标准进行检测，确保结果的准确性。
五、结论
粪大肠菌群及总大肠菌群检出限和结果报出问题是水质监测中常见
的问题。
酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证
酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证摘要：本文对《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》HJ1001 -2018、《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750-2006进行了方法验证，以评价该两种检测方法是否适用于水中粪大肠菌群的检测工作，以确保该方法能够满足水中粪大肠菌群的测定。
关键词：粪大肠菌群；质控样品。
引言：试样与固定底物酶底物法（DST）采用大肠菌群能产生β—半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄色的原理，来判断水样中是否含耐热大肠菌群，大肠菌群的培养温度是44.5℃。
1.测定方法与参数（注：方法为酶底物法法，参数为质控样品）2.仪器与设备2.1恒温培养箱2.2冰箱2.3高压蒸汽灭菌锅2.4烘箱2.5量筒2.6吸管2.7程控定量封口机2.8 51孔或97孔定量盘2.9无菌水样瓶（100mL）2.10阳性比色盘2.11干热灭菌器3培养基和试剂3.1无菌水3.2科立德（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基。
4.样品的采集和保存4.1采样前准备：4.1.1采样瓶：高压灭菌瓶。
4.2样品采样及注意事项4.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样时，均要小心开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染。
4.2.2在采集江，河湖，库，地表水时，可握住瓶子底部直接将采样瓶插入水中，约距水面10-15厘米时，瓶口朝来水方向，使水样灌入瓶内。
如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直至充满水样为止。
采样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。
采样后，采样瓶内上不应留有一些空隙，一边检验前充分混匀水样。
4.2.3从自来水龙头采集样品时，不要选用漏水的水龙头，采水前可先将水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌或用75﹪酒精溶液消毒水龙头，然后将水龙头打开，放水数分钟后除去水管中的滞流杂质。
采水时控制水流速度小心接入瓶内。
4.2.4在同一采样点进行分层采样时，应自上向下进行，以免不同层次的干扰；同一采样点与理化检测项目同时采样时，应先采集细菌等检验样品，否则样品可能被污染，采样前，不得用水样刷洗采样瓶。
多管发酵法测定水质中粪大肠菌群 方法验证11
检测分析方法验证报告报告编号:xxxxxxxx方法名称：xxxxxxxxx验证人员：xxx xxx审核人员：xxx验证日期：xxxx年xx月xx日xxxxxx有限公司水质粪大肠菌群的测定多管发酵法一、方法依据本方法依据《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》（HJ 347.2-2018）用多管发酵法测定水中粪大肠菌群，适用于地表水、地下水、生活污水以及工业废水的粪大肠菌群测定。
本方法的检出限为，12管法为3CFU/L；15管法为20MPN/L。
二、方法原理将待测样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产酸能够使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产气则由倒管指示。
将初发酵中产酸产气的试管进行复发酵接种，44.5℃复发酵培养，复发酵培养基中的胆盐三号能够抑制革兰氏阳性菌生长，最后产气的细菌确定为粪大肠菌群。
通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。
样品采集时可加入硫代硫酸钠溶液消除活性氯对样品的干扰，或加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除重金属离子对样品的干扰。
参加验证的人员情况登记表使用仪器情况登记表使用试剂及溶剂登记表三、分析步骤3.1样品稀释及接种3.1.1 15管法3.1.1.1本次15管法选用的待检样品为xx水源水，其接种量分别为10mL、1mL、0.1mL、,在5支装有已灭菌的5mL三倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入样品10mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入样品1mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入1：10稀释样品1mL。
在做10倍梯度稀释时，按无菌操作吸取10mL充分混匀的待稀释样品，加入到盛有90mL 无菌水的三角瓶中。
3.1.1.2阳性试验：挑取一粒大肠埃希氏菌（ATCC 25922）磁珠置于BHI液体培养液中，24h培养，使之菌悬液浓度在109CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10-7至10-8。
水质总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数监测技术规范
水质总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数监测技术规范1 范围本文件规定了水中总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数的术语和定义、采样技术要求、分析技术要求、质量控制要求、监测记录、注意事项等技术内容。
本文件适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数的监测。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 14848 地下水质量标准GB 3838 地表水环境质量标准HJ 1000 水质细菌总数的测定平皿计数法HJ 1001 水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法HJ 164 地下水环境监测技术规范HJ 347.1 水质粪大肠菌群的测定滤膜法HJ 347.2 水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 630 环境监测质量管理技术导则HJ 755 水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范HJ 91.1 污水监测技术规范3 术语和定义3.1 总大肠菌群 total coliforms参照HJ 755定义为：37℃培养，24 h内能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌。
3.2 粪大肠菌群 fecal coliforms又称耐热大肠菌群（thermmotolerant coliforms ），参照HJ 755定义为：44.5℃培养24 h，能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽抱杆菌。
3.3 细菌总数 total bacteria参照HJ 1000定义为：36℃培养48 h，样品在营养琼脂上所生长的需氧菌和兼性厌氧菌菌落总数。
4 采样技术要求14.1 样品采集4.1.1 地表水附近有桥梁的河流断面宜在桥上采样，湖库点位和水体较深的河流断面宜采用船只采样，水深较浅的河流断面宜涉水采样，按照HJ/T 91的相关规定执行。
方法验证水质的粪大肠菌群
方法验证报告测试方法：HJ 347.2-2018测试项目：水质粪大肠菌群编写：日期：审核：日期：批准：日期：水质粪大肠菌群的方法验证1.目的确认所采用的方法适合于在本实验室进行对水质的粪大肠菌群的测定，照此方法检测和检验条件进行水样的粪大肠菌群检测，能保证检验结果的准确、可靠。
2.原理和范围2.1原理将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。
44℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。
通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。
2.2范围本法适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
3.主要仪器3.1 净化工作台。
3.2 立式高压蒸汽灭菌器。
3.3恒温恒湿培养箱。
3.4电热恒温鼓风干燥箱。
3.5电子天平。
3.6酒精灯、试管架、试管（带塞子）、平皿、小倒管、三角烧瓶（带塞子）、刻度吸管、采样瓶、接种环。
4.主要试剂乳糖蛋白胨培养液、EC培养液。
5.检验步骤5.1样品稀释与接种5.1.1 15管法将样品充分混匀后，在5支装有已灭菌5ml三倍乳糖蛋白胨培养液的大试管中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品1ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品0.1ml。
对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀释104倍，然后按照上述操作步骤分别接种10ml 、1ml 、0.1ml 。
当样品接种量小于1ml 时，应将样品制成稀释样品后使用。
按无菌操作要求方式吸取10ml 充分混匀的样品，注入盛有90ml 无菌水的三角烧瓶中，混匀成1：10稀释样品。
多管发酵法测定水质 粪大肠菌群应注意的问题
LOW CARBON WORLD2020/12节能环保多管发酵法测定水质粪大肠菌群应注意的问题庄小玲（漳州市漳浦环境监测站，福建漳州363200）【摘要】《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法渊HJ347.2—2018）》是检测粪大肠菌群的常用标准方法。
本文从恒温培养箱校准确认、培养基制备、样品采集、样品保存和样品分析等实验全过程中应注意的问题提出个人的几点体会,供大家探讨。
【关键词】粪大肠菌群；多管发酵法；实验分析【中图分类号】X832【文献标识码】A【文章编号］2095-2066（2020）12-0019-02粪大肠菌群是指在44.5益下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群，主要来源于人畜的粪便。
通过对粪大肠菌群的测定，可以了解水体受粪便污染的程度。
粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法、滤膜法、酶底物法、纸片快速法。
目前环境监测机构一般主要采用行业标准《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法（HJ347.2—2018）》多管发酵法测定粪大肠菌群，该标准方法于2018年12月26日通过生态环境部批准，自2019年6月1日起实施叫本文从恒温培养箱校准确认、培养基制备、样品采集、样品保存和样品分析等实验全过程中应注意的问题提出个人的几点体会,供大家探讨。
1恒温培养箱校准确认多管发酵法测定粪大肠菌群标准方法中仪器设备规定恒温培养箱的允许温度偏差37±0.5益、44±0.5益。
笔者实验室委托市计量所对恒温培养箱37.0益、44.5益两个温度进行校准（依据国家质量监督检验检疫总局发布的JJF1101—2003 环境试验设备温度、湿度校准规范）,校准结果如表1所示，计量所对恒温培养箱9个校准点进行校准，校准证书给出温度偏差和温度均匀度两个参数。
温度偏差反映的是恒温培养箱设备显示温度与中心点n次测量的平均值的差值，可以通过改变设定值温度,使之被修正;均匀度反映的是各校准点测得的最高温度和最低温度之差的算术平均值，可以对恒温培养箱局部限制使用。
水质检测用粪大肠菌群定量标准菌株介绍
水质检测用粪大肠菌群定量标准菌株
根据2019年6月1日正式实施的HJ/T 347.2-2018《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》标准要求，实验室在样品检测和培养基验证过程中，均需使用阳性对照菌和阴性对照菌，即浓度为300～3000MPN/L的粪大肠菌群阳性菌株(如大肠埃希氏菌Escherichia coli)和阴性菌株(如产气肠杆菌Enterobacter aerogenes)。
以上提到的对照菌，可直接使用国家级菌种中心生产加工的定量标准菌株产品。
《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》标准菌株和质控样品大肠埃希氏菌定量标准菌株CICC 10389-HQA和产气肠杆菌定量标准菌株CICC 10293-HQA产品，浓度范围300～3000MPN/L，附带证书，实验室水化溶解后即可使用。
定量标准菌株产品和产品证书封面。
水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 多管发酵法
水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定多管发酵法1. 原理总大肠菌群和粪大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。
试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
2. 仪器(1)高压蒸气灭菌器。
(2)恒温培养箱、冰箱。
(3)生物显微镜、载玻片。
(4)酒精灯、3mm接种环。
(5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶、移液枪。
3. 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。
除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。
3.3伊红美蓝培养基：①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解。
再加2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，贮于冷暗处备用。
②平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL 水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。
水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料
水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料BD105Ⅰ水质（粪）大肠菌群快速检验纸片1份/包适用于湖水、水源水中大肠菌群的快速检测。
BD105Ⅱ水质（粪）大肠菌群快速检验纸片1份/包适用于河水、生活用水、医疗机构处理后排污水、禽畜养殖业等排放废水中大肠菌群的快速检测。
分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ两个型号，请注意选择型号。
1、适用范围水质（粪）大肠菌群的测定纸片快速法本标准适用于地表水、生活污水、医疗机构及禽畜养殖业等其他行业排放的废水中（粪）大肠菌群的快速筛查。
本方法的检出限为20MPN/L。
2、规范性引用文件本标准内容引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
HJ/T91地表水和污水监测技术规范3、术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1总大肠菌群（total coliforms）在37℃培养，24h内能发酵乳糖酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
3.2 粪大肠菌群（fecal coliforms）44.5℃培养，24h内能发酵乳糖产酸气的总大肠菌群，属粪行来源，称为粪大肠菌群。
4、方法原理将一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及营养成分等吸附于一定面积的无菌滤纸上，当细菌生长繁殖时，产酸使PH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色。
同时，产气过程相应的脱氢酶在适宜的PH范围内，催化底物脱氢还原TTC 形成红色的不溶性三苯甲臜（TTF），即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。
通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有（粪）大肠菌群存在，再通过查MPN表就可得出相应（粪）大肠菌群的浓度值。
5、试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。
5.1市售水质总大肠菌群、粪大肠菌群测试片：10ml水样量纸片按附录A的方法进行质量鉴定，达到要求后方可使用。
5.2无菌水用新制备的去离子水或蒸馏水，按无菌操作要求，121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。
水的大肠菌群检测方法
水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。
然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。
其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。
高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。
因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。
以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。
该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。
这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。
2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。
该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。
这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。
3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。
该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。
最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。
PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。
同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。
4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。
粪大肠菌群检测的结果偏差及影响因素
粪大肠菌群检测的结果偏差及影响因素摘要：介绍了目前城镇污水处理消毒后的出水中粪大肠菌群指标的检测方法原理，对检测结果偏差产生的原因进行了分析和阐述，提出了检测过程中的质量保证措施，对基层实验室提高粪大肠菌群检测结果的精确性具有实际指导意义。
关键词：粪大肠菌群；质控；影响因素；偏差目前，粪大肠菌群的检测作为城镇污水处理厂排放标准的重要指标之一，经常被环保督查部门抽检。
而各厂在进行日常出水检测时，也存在着实验室内及实验室间实验结果差异性较大的问题。
由于微生物检测技术、方法、水样等的特殊性，导致影响其检测数值偏差大的因素较多，本文结合实际检测工作，从实验方法、培养基的质量控制、检测环境条件及现场采样等多方面进行分析，阐述这些因素的影响及质控措施。
目前，污水类的粪大肠菌群的检测，常采用多管发酵法、滤膜法和酶底物法。
三种方法的生物学培养机理是相同的，由于使用的培养基成分、培养介质和菌落形成的特征和方式的不同，最终导致了粪大肠菌群检测结果的差异，这是由于检测方法导致的偏差。
下面简单介绍一下这三种常用方法：1 常用粪大肠菌群的检测方法1.1 多管发酵法多管发酵法是以最可能数来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阴性又显示阳性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
多管发酵法是先在37度下培养，产酸产气则为阳性，也就是总大肠菌群。
然后再进行复发酵，从37℃培养出来的总大肠菌群，再接种到EC培养基中，45℃下产酸产气的则为粪大肠菌群。
1.2 滤膜法滤膜是一种微孔性薄膜。
将水样注入已被灭菌的放有滤膜（孔径0.45μm）的抽滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜片上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，在44.5℃温度下恒温培养，对微生物细胞染色后，对滤膜上生长的此特性菌落进行计数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群的个数。
水质粪大肠菌群(一般水样)测定作业指导书
水质粪大肠菌群（一般水样）测定作业指导书1含义及执行标准1.1含义粪大肠菌群基本性状与总大肠菌群相似,属于总大肠菌群的一部分.在培养温度为37℃时可检出总大肠菌群的存在,为区别存在于自然环境和温血动物肠道内的粪源性大肠菌群细菌,将培养温度提高倒44。
5℃,仍能使乳糖发酵产酸产气的总大肠菌群为粪大肠菌群.一般水样特指除医院污水外的各种水样。
本实验通过定性区别实验产酸产气，检索MPN表，导出定量的粪大肠菌群结果。
1.2方法原理多管发酵技术是以最可能数(most probable number，简称MPN)来表示试验结果的。
它是根据统计学理论，通过水样不同稀释浓度多组重复生物培养阳性结果估计水体中被测生物密度的一种方法，具体是通过查MPN表获得结果的。
1.3水环境质量标准表1—1 粪大肠菌群地表水环境质量标准（GB 3838-2002)a 加工、烹调及去皮蔬菜b 生食类蔬菜、瓜类及草本水果表1—3 粪大肠菌群畜禽养殖污染物排放标准（GB 18596-2001)2分析方法2.1方法名称、方法来源及适用范围方法名称：多管发酵法方法来源：水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行)（HJ/T 347─ 2007）方法适用范围：此法适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定.2.2仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿(直径9cm）、刻度吸管等器皿121℃（20min)高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干.2.3 标准菌株制备将标准菌株的母种或稳定工作种接种到单倍乳糖蛋白胨培养液中培养对照控制.必须包括大肠埃希氏菌、产气场杆菌和山夫登堡沙门氏菌三种对照.接种完后需记录:母种的来源，母种和工作种的保存方法、保存温度、传代间隔时间、生长培养基及孵育条件，确认试验（存活度、纯度、关键诊断指标等），母种到工作种的传代代数。
2.4培养基2.4.1 单倍乳糖蛋白胨培养液:市售乳糖蛋白胨培养基，按铭牌配制，用定量加液器分装每个试管10ml，加塞，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。
酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较
酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较背景介绍随着人口的不断加添和城市化的进程，水诘责题也越来越受到关注。
其中水中粪大肠菌群是判定水质是否达标的指标之一、因此，快速、精准地测定水中粪大肠菌群已成为保障公共卫生和水环境安全的紧要工作。
在测定水中粪大肠菌群时，目前紧要有三种方法：酶底物法、多管发酵法和纸片法。
本文将对这三种方法进行比较，以便选择适合的方法进行水质检测。
酶底物法酶底物法是利用粪大肠菌群分泌的β—D—半乳糖苷酶对其底物苯基—β—D—半乳苷（X—Gal）水解，产生可见的蓝色色素。
实在试验步骤如下：1.接受分光光度计，读取X—Gal水解产生的蓝色产物的吸取值。
吸取值越高，表明样品中粪大肠菌群的数量越多。
该方法具有快速、精准等优点，但存在确定的局限性，比如无法区分大肠杆菌和其他肠道菌，仅仅只能检测粪生源的水体样品。
多管发酵法多管发酵法是利用粪大肠菌群在固体培育基中进行培育，利用二氧化碳生成的压力变化判定粪大肠菌群的数量。
实在试验步骤如下：1.将含有气管的玻璃管一端紧贴于固体培育基上。
2.向不同的玻璃管中分别加入不同的水样，并进行固体培育。
3.通过察看玻璃管顶端气泡的产生和数量，判定样品中粪大肠菌群的数量。
该方法不仅可以检测含有粪便的水产品中的粪大肠菌群，而且适用范围广，可以检测非点源污染和净化污水等水产品中的粪大肠菌群，但操作多而杂、时间较长。
纸片法纸片法是将覆盖了0.5～1.0 ml水体样品的纤维素纸分别带入含有荧光素β—D—葡萄糖苷（MUG）的细菌培育基中，然后在黑暗中孵育后，通过紫外线灯照射MUG荧光显带样品，察看荧光显带情况，得出粪大肠菌群数量。
实在试验步骤如下：1.制备含有MUG的培育基。
2.将确定数量的水样加入到带有MUG的培育基中并进行培育。
3.在黑暗中察看培育基上产生的荧光显带情况，得出样品中粪大肠菌群的数量。
该方法具有灵敏度高、操作简便等优点，但也有局限性，例如无法检测混合大肠杆菌和其他的大肠杆菌感染和污染的水样。
水质粪大肠菌群的测定
14 测定步骤
• 1. 水样接种量的选择
• 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度 确定水样接种量。每个样品至少用三个不 同的水样量接种。同一接种水样量要有五 管。
• 相对未受污染的水样接种量为10ml、1 ml、 0.1 ml。受污染水样接种量根据污染程度接 种1 ml、0.1 ml、0.01 ml、或0.1 ml、 0.01 ml、0.001 ml等。
• 制法：将上述成分加热溶解，然后分装于 含有 玻璃倒管的试管中。置高压蒸气灭菌 器中，115℃高压灭菌器中灭菌20min，灭 菌后pH应为。
13 培养基的存放
• 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放 在大气湿度低，温度低于30摄氏度的 暗处，存放时应避免阳光直接照射， 并且要避免杂菌倾入和液体蒸发。当 培养液颜色变化，或体积变化明显时 应废弃不用。
10
单倍乳糖蛋白胨培养液：
• 将10g 蛋白胨、3g 牛肉寖膏、5g 乳糖和5g 氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调节 溶液pH 为，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，充分混匀，分装于试管中，于115℃ 高压灭菌器中灭菌20min，贮存于冷暗处备 用。
11
三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：
将10g 蛋白胨、3g 牛肉寖膏、5g 乳糖和5g 氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调节溶液pH 为，再加入1.
而定。 轻微震荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌棒将培养物转移到EC培养液中。
9 培养基及试剂
• 本标准所用试剂除另有说明，均为符合国 家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新 制备的去离子水。
接种环要求用酒精灯灼烧消毒，复发酵接种时每一管都要在酒精灯上灼烧消毒。
示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验 接种1：10 的水样1mL 的5 管均为阴性。
水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法HJ 347.1-2018
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 347.1-2018部分代替HJ/T 347-2007水质粪大肠菌群的测定滤膜法Water quality—Determination of fecal coliform—Membrane filtration（发布稿）本电子版为发布稿。
请以中国环境出版集团出版的正式标准文本为准。
2018-12-26 发布2019-06-01 实施生态环境部发布目次前言 (ii)1适用范围 (1)2规范性引用文件 (1)3术语和定义 (1)4方法原理 (1)5干扰和消除 (1)6试剂和材料 (2)7仪器和设备 (2)8样品 (3)9分析步骤 (3)10结果计算与表示 (5)11精密度和准确度 (6)12质量保证和质量控制 (6)13废物处理 (7)14注意事项 (7)附录A（资料性附录）粪大肠菌群检验记录及报告格式 (8)i前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水中粪大肠菌群的测定方法，制定本标准。
本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的滤膜法。
本标准是对《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T 347-2007）滤膜法部分的修订。
本标准首次发布于2007年，原起草单位为中国环境监测总站。
本次为第一次修订。
本次修订的主要内容如下：——完善了方法原理的表述；——增加了检出限；——增加了规范性引用文件、术语和定义、干扰和消除、仪器和设备、样品采集、样品保存、精密度和准确度、质量保证和质量控制、废物处理等章节；自本标准实施之日起，《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T347-2007）废止。
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。
本标准起草单位：辽宁省环境监测实验中心。
本标准验证单位：大连市环境监测中心、丹东市环境监测中心站、锦州市环境监测中心站、辽阳市环境监测站、铁岭市环境保护监测站和沈阳市疾病预防控制中心。
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析湖南衡阳421200摘要:多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法是目前国内测定水中粪大肠菌群的常用标准方法。
分别从方法的检出限、方法操作、准确度和方法间的一致性四个方面对水中粪大肠菌群的测定进行了对比研究，总结出各方法的适用范围和优缺点，为分析人员根据实际条件和水样类型选择最佳方法提供参考。
关键词:粪大肠菌群;酶底物法;多管发酵法;滤膜法;纸片快速法粪大肠菌群是在 44．5℃ 温度下能生长并发酵乳糖产酸，产气，需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要来自粪便。
粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，可以指示水体是否遭受粪便污染，直接指示生活污水的污染，间接反映肠道致病菌的污染风险，是水质检验中非常重要的卫生指标。
目前，国内测定水中粪大肠菌群的标准分析方法有多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法。
多管发酵法早在 1985 年就列入了《生活饮用水标准检验方法》( GB 5750 －85) ，至今已经沿用了三十多年，是行业内公认的粪大肠菌群测定的经典方法，卫生、水利、环保等行业均有多管发酵法的方法标准。
美国公共卫生协会( APHA) 出版的《水和废水标准检验方法》( 20 版) 中方法 9221E 也采用的是多管发酵法; 滤膜法采用直接计数特征菌落的方式，不同于其它三种方法采用 MPN 法计数，其应用广泛性仅次于多管发酵法，美国 APHA 方法9222D和ISO9308 － 1: 2014采用的是滤膜法; 纸片快速法在西方发达国家采用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在 2015 年发布了测定水中粪大肠菌群的纸片快速法; 酶底物法利用粪大肠菌群在邻硝基苯－β － D －吡喃半乳糖苷培养基上培养产生β － D －半乳糖苷酶，该酶可以分解色源底物释放出黄色的邻硝基苯酚，通过颜色变化定性，MPN 法定量。
我国没有酶底物法测定粪大肠菌群的现行国家和行业标准，美国APHA 方法 9221 E、ISO 9380 － 2: 2012 和 GB5750． 12 －2006均将酶底物法列入标准，但仅限测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌。
347.2粪大肠菌群数分析原始记录
粪大肠菌落分析原始记录（续表）
样品编号
稀释
倍数
D
初发酵阳性管数
复发酵阳性管数
MPN/100mL
空白测定MPN/L
报告值
（MPN/L）
平均值
（MPN/L）
水样接种量（mL）/接种管数
Hale Waihona Puke mL× 5管mL× 5管mL× 5管
mL×5管
mL×5管
mL×5管
（4）备注：方法检出限为：20 MPN/L，当检测结果低于方法检出限时，用“ND”表示 。
样品编号
稀释倍数D
初发酵阳性管数
复发酵阳性管数
MPN/100ml
空白测定
(MPN/L)
报告值
(MPN/L)
平均值
(MPN/L)
水样接种量（mL）/接种管数
mL× 5管
mL× 5管
mL× 5管
mL×5管
mL× 5管
mL× 5管
（1）备注：方法检出限为：20 MPN/L，当检测结果低于方法检出限时，用“ND”表示 。
报告编号
粪大肠菌群数分析原始记录
检测项目
粪大肠菌群
检测依据
水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 347.2-2018
环境条件
温度：℃；相对湿度：%
检测起止时间
初发酵：年月日时到日时温度℃
复发酵：年月日时到日时温度℃
试剂和培养基及生产批号
仪器设备
样品预处理
样品充分混匀后，选取3个适宜的稀释度，按无菌操作要求加入相应的样品量。
（2）接种15份样品时，查HJ347.2-2018附录A中表A.2得到MPN值，再按公式（1）换算样品中粪大肠菌群数（MPN/L）：
水质粪大肠菌群的测定
将10g蛋白胨、3g牛肉寖膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水 中，调节溶液pH为7.2—7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混 匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于115℃高压灭菌器中灭菌 20min，贮存于冷暗处备用。 (此溶液用于检验大肠菌群)
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液：1.6g溴甲酚紫用无水乙醇定容到100mL。
3.从龙头装置采集样品时,不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至最大, 放水3~5min,然后将龙头关闭，用火焰灼烧约3min灭菌或用70%~ 75%的酒精 对龙头进行消毒，开足龙头，再放水1min，以充分除去水管中的滯留杂质 。 采样时控制水流速度，小心接入瓶内。
4. 采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用 采样装置采样。在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以 免不同层次的搅扰。
无论是哪一种方法，都是利用其可在高温生长并发酵乳糖 产酸、产气的特点，所以实验过程最终要的环节是严格地 控制好温度。
(1) 初发酵
将样品加入
培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠
菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸、产气，产生的酸使溴甲酚紫指
示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。 (
③耐热，在44-44.5℃的高温条件下仍可生长繁殖。 (耐热大肠菌群)
粪大肠菌群是大肠菌群的一种，是生长于人和温血动物肠道中的一组 肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1/3以上，故称为粪大 肠菌群。
受粪便污染的水、食品、化妆品和土壤等物质均含有大量的这类菌群。 若检出粪大肠菌群即表明已被粪便污染。
1.
将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。
每个样品至少用
水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法
水质粪大肠菌群的测定滤膜法1. 适用范围本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。
2. 原理滤膜是一种微孔性薄膜。
将水样注入已灭菌的放油滤膜的率其中，经过抽虑，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。
3. 培养基与试剂3.1 MF-C培养基成份：A 胰胨10gB 多胨5gC 酵母浸膏3gD 氯化钠5gE 乳糖12.5gF 胆盐3号(Bile salt No.3)G 琼脂15gH 苯胺蓝0.2gI 蒸馏水1000mL制法：在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[C(NaOH)＝0.2mol/L] 10mL，混合后，取500mL加入琼脂煮沸溶解，于另外500mL 蒸馏水中，加入除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀后调pH为7.4，加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板，不可高压灭菌。
制好的培养基应存放于2～10℃，不超过96h。
本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养。
3.2 EC培养基成份：A 胰蛋白胨20gB 乳糖5gC 3号胆盐或混合胆盐1.5gD 磷酸氢二钾4gE 磷酸二氢钾1.5gF 氯化钠5gG 蒸馏水1000mL制法：将上述成份溶解于蒸馏水中，分装到带有倒管的试管中，115℃高压灭菌20min，最终pH为6.9±0.2。
4. 仪器隔水式恒温培养箱或恒温水浴。
塑料培养皿：60mm×15mm或50mm×12mm。
其他仪器同总大肠菌群滤膜法。
5. 步骤准备工作：5.1 滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。
前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。