重组人生长激素-药典

重组人生长激素

拼音名：Chongzu Ren Shengzhangjisu

英文名：Recombinant Human Somatropin

书页号：2000年版二部-494

本品是由191个氨基酸残基或N端有一甲硫氨酸的192个氨基酸残基组成的蛋白，可加适量赋形剂或

稳定剂。含重组人生长激素量应为标示量的90.0％～110.0％。

本品由DNA重组技术生产，必须在生产过程中，用体内生物测定方法测定其生物效价，每1mg蛋白效

价不得少于2.5单位。

重组人生长激素中残余宿主DNA和宿主细胞蛋白为与生产过程相关的、潜在的特异性杂质，必须在生

产过程中严格控制，其限度应符合有关规定。

【性状】本品为白色冻干粉末。

【鉴别】(1)取本品，加水制成每1ml中含2mg的溶液后，加入等体积的样品缓冲液(取浓缩胶缓冲液

2.5ml、20％十二烷基硫酸钠2.5ml、0.1％溴酚蓝溶液1.0ml、87％甘油

3.5ml，加水至10ml)，再加β-巯基乙

醇至终浓度为5％，置水浴中3分钟，放冷，作为供试品溶液；另取重组人生长激素对照品或甲酰化重组人生

长激素对照品，同法制备，作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各5μl，加至样品孔，照电泳法(附录

Ⅴ F 第五法，银染色)试验，供试品主成分迁移率应与相应的对照品迁移率一致。

(2)在相关蛋白质检查项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与相应的对照品(重组人生长激

素或甲酰化重组人生长激素对照品)的保留时间一致。

(3)取本品适量，用水制成每1ml中含2mg的溶液，取150μl，加三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲液(取氯

化钙0.294g、三羟甲基氨基甲烷12.11g，加水400ml使溶解，再用5 mol/L醋酸溶液调节pH值至8.5，加

水至500ml)150μl、胰蛋白酶溶液[取经TPCK处理的胰蛋白酶适量，用1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液

(pH5.0)制成每1ml中含1mg的溶液]10μl，混匀，置37℃水浴中4小时，加冰醋酸60μl终止反应，作为供试

品溶液；另取重组人生长激素或甲酰化重组人生长激素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照高效液相

色谱法(附录Ⅴ D)试验，以辛基硅烷键合硅胶为填充剂(5～10μm)；以0.1％三氟醋酸溶液为流动相A，

0.1％三氟醋酸的乙腈溶液为流动相B，进行梯度洗脱。流速为每分钟

1.0ml；柱温为35℃；检测波长

为214nm。

时间流动相A 流动相B

0分 100％ 0％

20分 80％ 20％

45分 75％ 25％

70分 50％ 50％

75分 20％ 80％

取对照品溶液和供试品溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品的肽图谱应与对照品

的肽图谱一致。

【检查】相关蛋白质取本品适量，用0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.5)制成每1ml

中含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取重组人生长激素或甲酰化重组人生长激素对照品适量，同法制备，

作为对照品溶液。照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定，以丁基硅烷键合硅胶为填充剂(5～10μm)；0.05mol/L

三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.5)-正丙醇(约为71:29)为流动相，调节流动相中正丙醇比例使人生

长激素主峰保留时间为30～36分钟；流速为每分钟0.5ml；柱温为4 5℃；检测波长为220nm。取系统适用性

试验用溶液[取重组人生长激素对照品或甲酰化重组人生长激素对照品，用上述三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓

冲液制成每1ml中含2mg的溶液，加过氧化氢溶液使终浓度为0.01％(m l/ml)，在4℃放置5小时后，每

1ml加4.5mg的L-甲硫氨酸]20μl注入液相色谱仪，重组人生长激素主峰与氧化的重组人生长激素峰之间

的分离度应符合规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，总相关蛋白

质含量不得过10.0％。

高分子蛋白质取本品适量，照含量测定项下方法检查，按面积归一化法计算，高分子蛋白质含量不得

过4.0％。

无菌取本品，依法检查(附录Ⅺ H 薄膜过滤法)，应符合规定。

水分取本品，照水分测定法(附录Ⅷ M 第一法 A)测定，含水分不得过10.0％。

细菌内毒素取本品，依法检查(附录Ⅺ E)，每1mg重组人生长激素中含内毒素的量应小于5EU。

【含量测定】照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定。

色谱条件与系统适用性试验以适合分离分子量为5000～60000球状蛋白的色谱用亲水硅胶为填充

剂；以0.395％碳酸氢铵溶液为流动相；流速为每分钟0.6ml；检测波长为214nm。取系统适用性试验用溶液

(取人生长激素单体-二聚体对照品，用流动相制成每1ml中含1.5mg 的溶液)20μl注入液相色谱仪，以人生

长激素单体和二聚体之间的峰谷高与二聚体的峰高之比作为分离度，分离度应不大于0.6。

测定法取本品，加流动相制成每1ml中含1.0mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取

重组人生长激素对照品适量，同法则定。按外标法以峰面积计算。

【类别】生长激素类药。

【贮藏】密闭，2～8℃保存。

【制剂】注射用重组人生长激素