枯草芽孢杆菌母药标准
枯草芽孢杆菌 国标
枯草芽孢杆菌国标枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种普遍存在于土壤中的革兰氏阳性细菌，是一种极为重要的微生物资源。
它具有广泛的应用价值，在食品工业、医药、农业生产等多个领域都得到了广泛应用。
本文将介绍枯草芽孢杆菌的国标以及相关内容。
1. 国家标准枯草芽孢杆菌的国家标准为GB 4789.44-2016《食品中微生物学检验植物蛋白酶产生菌检验》。
该标准适用于食品中植物蛋白酶产生菌的检验，包括枯草芽孢杆菌。
该标准将枯草芽孢杆菌归为植物蛋白酶产生菌中的一类，要求对食品中的植物蛋白酶产生菌进行检测，并对检测结果进行评价。
2. 特征枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性芽孢杆菌，能够产生多种细胞外酶，如蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶等，在分解有机废物、促进土壤肥力、生物防治等方面具有重要作用。
此外，枯草芽孢杆菌也能够产生类胡萝卜素、粘多糖、脂多糖等多种生物活性物质，具有一定的药用和保健功能。
3. 应用3.1 食品工业枯草芽孢杆菌在食品工业中的应用非常广泛。
植物蛋白酶是一种蛋白水解酶，能够分解大分子的蛋白质为小分子多肽、氨基酸等，使蛋白质变得更易消化吸收，增加食品的营养价值。
枯草芽孢杆菌能够产生大量的植物蛋白酶，因此被广泛应用于豆腐、面筋、大豆酱等豆制品的加工过程中，使其更易消化吸收，提高其口感和营养价值。
此外，枯草芽孢杆菌也被用于肉制品和干制品等食品的生产中。
它能够产生乳酸和醋酸等有益的风味物质，在肉制品和干制品的发酵和储存过程中发挥着重要作用。
3.2 医药枯草芽孢杆菌在医药领域中的应用也十分广泛。
它能够产生多种抗生素，如链霉素、喹诺酮类等，在医药制品的生产中被广泛应用。
此外，枯草芽孢杆菌也被用于生产乳酸菌制剂和酶制剂等生物制品。
3.3 农业生产枯草芽孢杆菌在农业生产中的应用也十分广泛。
它能够分解农田中的植物秸秆和稻草等有机废物，促进土壤中的有机质的分解和释放，增加土壤的肥力。
此外，枯草芽孢杆菌也能够分解叶面喷施的肥料和农药，减轻污染，保护环境。
枯草芽孢杆菌母药标准
枯草芽孢杆菌母药标准————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期：ﻩG2５Q 江苏苏滨生物农化有限公司企业标准Ｑ/3209２2 BN 032-２0１410０0亿cfu／g枯草芽孢杆菌母药２０14-08–18发布２014-０８–30实施江苏苏滨生物农化有限公司发布ﻩ前言本标准按照GB／T1.1—20０9《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写》和GH/Ｔ２46７.8—2０03《农药母药产品标准编写规范》进行编制而成。
本标准附录A为规范性附录。
本标准附录B为资料性附录。
本标准由江苏苏滨生物农化有限公司提出并起草。
本标准主要起草人：赵福兵、许军、沈文权。
Ⅰﻩ引言10０0亿ｃfu/g枯草芽孢杆菌母药是我公司自行研制开发的微生物发酵产品。
100０亿ｃｆｕ/g枯草芽孢杆菌母药经过加工可以主要用于防治水稻纹枯病、稻曲病。
经测定１０00亿cfｕ/g枯草芽孢杆菌母药对大白鼠的经口毒性LD50雌、雄性均>464０ｍg/kg，经皮毒性为LD50雌、雄性均>２１50mg/kg。
Ⅱ100０亿cfｕ/ｇ枯草芽孢杆菌母药本品有效成分的其他名称、结构式和基本物化参数如下:a)枯草芽孢杆菌中文通用名称:枯草芽孢杆菌—+菌株编号。
拉丁学名：Bacillｕs sｕbｔilis。
分类地位:细菌（Bacｔｅｒｉa)；厚壁菌门（Fｉrｍicｕtes）;芽孢杆菌纲（Baciｌｌi)；芽孢杆菌目（Bａｃｉllａles）；芽孢杆菌科（Bacｉllacｅae）；牙孢杆菌属(Ｂａcillus)。
形态学特征:菌体呈杆状，单个、成对或短链排列,大小为0.7µm～0.8µm×2．0µm～3.0µｍ，无荚膜,周生鞭毛，能运动;芽孢0．6µm～0.9µｍ×１．0µｍ~１.５µｍ，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大;革兰氏染色阳性；菌落圆或不规则形，表面粗糙不透明,可以起皱，呈奶油色或污白色。
枯草芽孢杆菌的使用方法
枯草芽孢杆菌的使用方法枯草芽孢杆菌是一种常见的生物农药，广泛应用于农业生产中，具有良好的防治效果。
本文将介绍枯草芽孢杆菌的使用方法，帮助大家更好地掌握这一生物农药的正确使用技巧。
首先，选择合适的施药时间是非常重要的。
枯草芽孢杆菌在植物生长季节中的病害防治上有较好的效果，因此在病害发生初期或疫病高发期进行喷施效果最佳。
同时，要根据作物的生长周期和病害的发展规律，科学确定施药时间，提高防治效果。
其次，正确的施药浓度也是确保防治效果的关键。
一般来说，枯草芽孢杆菌的施用浓度为每公顷使用1.5-3千克，可根据具体作物和病害情况进行适当调整。
在施用时，应根据作物的生长状况和病害的严重程度，科学合理地确定施药浓度，避免过量或不足，影响防治效果。
另外，选择合适的施药方法也是非常重要的。
一般来说，枯草芽孢杆菌可通过喷施、灌溉、撒播等方式进行施用。
在具体操作时，应根据作物的生长状况和病害的传播规律，选择合适的施药方法，确保药剂均匀覆盖到植物表面，提高防治效果。
此外，施药后的管理也是不可忽视的。
施药后，应及时观察作物的生长情况和病害的发展趋势，根据需要进行二次施药或调整施药浓度，确保防治效果。
同时，要做好药剂残留的清洗和处理工作，避免对环境和人体造成危害。
最后，正确的储存和使用枯草芽孢杆菌也是确保防治效果的关键。
在储存过程中，应将药剂存放在阴凉、干燥、通风的地方，避免阳光直射和高温。
在使用时，应按照产品说明书上的使用方法和注意事项进行操作，确保安全使用。
总之，正确的使用方法是确保枯草芽孢杆菌防治效果的关键。
只有科学合理地确定施药时间、施药浓度、施药方法，做好施药后的管理和正确的储存使用，才能充分发挥其防治作用，保障农作物的生长和产量。
希望本文的介绍能够帮助大家更好地掌握枯草芽孢杆菌的使用方法，提高农业生产的效益。
枯草芽孢杆菌母药标准
- -G25Q 滨生物农化企业标准Q/320922 BN 032-20141000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药2014-08–18发布2014-08–30实施滨生物农化发布前言本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》和GH/T2467.8—2003《农药母药产品标准编写规》进行编制而成。
本标准附录A为规性附录。
本标准附录B为资料性附录。
本标准由滨生物农化提出并起草。
本标准主要起草人：福兵、许军、文权。
Ⅰ引言1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药是我公司自行研制开发的微生物发酵产品。
1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药经过加工可以主要用于防治水稻纹枯病、稻曲病。
经测定1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药对大白鼠的经口毒性LD50雌、雄性均＞4640mg/kg，经皮毒性为LD50雌、雄性均＞2150mg/kg。
Ⅱ1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药本品有效成分的其他名称、结构式和基本物化参数如下：a)枯草芽孢杆菌中文通用名称：枯草芽孢杆菌—+菌株编号。
拉丁学名：Bacillus subtilis。
分类地位：细菌（Bacteria）；厚壁菌门（Firmicutes）;芽孢杆菌纲（Bacilli）；芽孢杆菌目（Bacillales）；芽孢杆菌科（Bacillaceae）；牙孢杆菌属（Bacillus）。
形态学特征：菌体呈杆状，单个、成对或短链排列，大小为0.7µm～0.8µm×2.0µm～3.0µm，无荚膜，周生鞭毛，能运动；芽孢0.6µm～0.9µm×1.0µm～1.5µm，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大；革兰氏染色阳性；菌落圆或不规则形，表面粗糙不透明，可以起皱，呈奶油色或污白色。
有效成分主要存在形式：芽孢。
主要生物活性：抑菌（防病）。
培养保存条件：最适生长温度为30℃—37℃；适合培养基为营养琼脂（NA）或营养肉汤（NB）培养基；适宜贮存温度为0℃—4℃。
枯草芽孢杆菌(粉剂)企业标准2022版
Q/HN HEP0001-2022公司名称企业标准枯草芽孢杆菌2022-03-16发布2022-03-26实施公司名称发布前言本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》进行编制本公司生产的产品目前尚无适用的国家标准和行业标准，依据《中华人民共和国标准化法》的规定，特制此企业标准，作为组织生产的依据。
本标准有效期内如发布国家标准和行业标准，本标准自行作废本标准由公司名称提出本标准由公司名称负责起草本标准主要起草人：法人名称枯草芽孢杆菌1范围本标准规定了枯草芽孢杆菌的要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存。
本标准适用于中华人民共和国境内生产和销售的，以有效芽孢杆菌及微生物菌数，微量元素为主要成分制成的枯草芽孢杆菌微生物菌剂。
2.规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB190-2009危险货物包装标志GB191-2008包装储运图示标志GB/T6678-2003化工产品采样总则GB/T6679-2003固体化工产品采样通则GB/T8569-2009固体化学肥料包装GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T8170-2010复混肥料中游离水含量的测定真空烘箱法GB/T9969-2008工业产品使用说明书总则GB18382-2001肥料标识内容和要求GB20287-2006有效芽孢杆菌数及杂菌率的测定GB/T19524.1-2004肥料中粪大肠菌群的测定GB/T19524.2-2004肥料中蛔虫卵死亡率的测定GB/T24891-2010复混肥料粒度的测定NY1110肥料汞、砷、镉、铅、铬的限量NY1979-2010肥料登记标签技术要求NY/T1973-2010肥料水不溶物含量和PH值的测定《产品质量仲裁检验和产品质量鉴定管理办法》《定量包装商品计量监督管理办法》（国家质量监督检验疫总局令第75号）3术语和定义3.1枯草芽孢杆菌（以有效芽孢杆菌数，微量元素为主要成分制成的枯草芽孢杆菌微生物菌剂）4要求4.1外观：本产品为固体形态的松散粉剂及颗粒，无可见机械杂质。
枯草芽孢杆菌使用技术
枯草芽孢杆菌使用技术制剂：1000亿活芽孢/克可湿性粉剂毒性：低毒级枯草芽孢杆菌特点：1、绿色环保――对人畜微毒、对环境无污染、对作物安全（本剂虽属细菌活体杀菌剂，但不会侵染作物引起病害，亦不会对作物产生药害）2、高效广谱――对水稻稻瘟病，西瓜、黄瓜、草莓、番茄等多种作物白粉病、灰霉病，马铃薯晚疫病，大豆、油菜菌核病，瓜类、谷物、三七等作物根腐病等多种真菌性病害具有优良防效。
3、增产提质――枯草芽孢杆菌还能够分泌促进作物生长的活性物质，使植株叶片浓绿肥厚，提高作物免疫力，增产提质效果显著，发酵过程中产生多种氨基酸，对作物有生长调节的作用。
枯草芽孢杆菌防治机理１、竞争作用：通过生物间争夺氧气、营养物质及竞争排它性，形成局部生物优势种群，防止其它菌侵入；同时争夺周围菌的营养，抑制病原菌生长―起到疫苗的作用。
２、溶菌作用：枯草芽孢杆菌吸附于病原菌的菌丝上，随着菌丝生长而生长，从而消耗病原菌的营养，使病原菌菌丝发生断裂、解体、细胞质消解，使病原菌失去进一步侵染能力―起到寄生作用。
3、生物拮抗作用：枯草芽孢杆菌生长过程中能产生细菌素（枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌素）、有机酸、天然脂肽类化合物等，对病原菌抑制其生长或溶解其细胞壁、使细胞穿孔、畸形，最终杀死病原菌，。
４、杀灭作用诱导作物产生抗病性、促进作物生长，增产提质。
据统计，使用枯草芽孢杆菌可有效增产5.6-20.2%。
枯草芽孢杆菌使用方法1、稻瘟病、纹枯病、稻曲病。
施药方法：水稻孕穗破口期和齐穗期各施药一次。
每亩用枯草芽孢杆菌10克均匀喷雾，喷药药间隔7-12天，2、枯草芽孢杆菌与咪鲜胺、三环唑、井冈霉素等混用，有明显的相互增效作用。
在病害集中、急性暴发时，更能显示出混用的效果。
枯草芽孢杆菌使用注意事项1、本品用量少，为减少浪费，兑药时应用小容器将所需用量药剂充分溶解后再倒入喷雾器中，加水至喷雾器最佳水平线进行喷雾；2、早上10点前或下午4点后施药，避免阳光直射，杀死芽孢。
枯草芽孢杆菌企业技术标准范例2022版
饲料添加剂枯草芽孢杆菌1范围本标准规定了饲料添加剂枯草芽孢杆菌的要求、试验方法、检验规则及标签、包装、运输、贮存和保质期。
本标准适用于以枯草芽孢杆菌为菌种，经液体发酵制得的饲料添加剂枯草芽孢杆菌，产品根据活菌数不同分为三个型号，Ⅰ型产品商品名：培地好菌维、Ⅱ型产品商品名：活菌硬壳宝、Ⅲ型产品商品名：合生素。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
食品安全国家标GB 4789.3准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.5食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验GB 4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T 5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T 6435 饲料中水分的测定GB 10648 饲料标签GB/T 13079饲料中总砷的测定GB/T 13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T 13081饲料中汞的测定GB/T 13082饲料中镉的测定GB/T13091饲料中沙门氏菌的测定GB/T 13092饲料中霉菌总数的测定GB/T 14699.1饲料采样GB/T 17480饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法GB/T 34224生物产品中功能性微生物检测NY/T2131饲料添加剂枯草芽孢杆菌JJF 1070定量包装商品净含量计量检验规则国家质量监督检验检疫总局令[2005]第75号《定量包装商品计量监督管理办法》3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1饲料添加剂饲料添加剂是指在饲料加工、制作、使用过程中添加的少量或者微量物质，包括营养性饲料添加剂和一般饲料添加剂。
4 要求4.1菌种应有国家或省部级微生物菌种保藏机构出具的微生物菌种种属证明。
4.2形态生化特征符合GB/T 34224规定。
Q_SBT 03-2018枯草芽孢杆菌
6.5 判定规则
出厂检验和型式检验规定的指标为判断合格指标，检验中如有任何一项指标不合格，应在原批次产
品中加倍抽样复检：复检结果仍有任何一项指标不合格，则判该批产品为不合格。若卫生指标有一项不
合格，则判定该批产品部合格，不得复检。判定时考虑允许误差，允许误差按 GB/T 18823 执行。
7 标签、包装、运输、储存和保质期
写。 本标准由邢台思倍特生物科技有限公司提出、起草并归口。 本标准的主要起草人：张利华、张建坤、刘金朝。 本标准首次发布。
饲料添加剂 枯草芽孢杆菌
Q/SBT 03-2019
1 范围 本标准规定了饲料添加剂 枯草芽孢杆菌的要求、试验方法、检验规则以及标签、包装、运输、
贮存和保质期。 本标准适用于本公司以枯草芽孢杆菌为菌种，以**、**、**等为原料，经液体发酵后喷雾干燥所得
Q/SBT 03—2019
表 1 产品成分分析保证值
项目 枯草芽孢杆菌芽孢数，CFU/g
*型 ≥5×1010
指标
**型 ≥1.0×1011
水分，%
≤10.0
≤10.0
杂菌率，%
≤1.0
≤1.0
4.4 卫生要求 总砷≤5mg/kg、铅≤10mg/kg。其他卫生指标符合 NY/T 1444 的有关卫生指标的规定。
7.1 标签
产品包装上应有鲜明、牢固、清晰的标签，并符合 GB 10648 的规定。
7.2 包装
包装采用无菌塑料桶或纸塑复合袋包装（内层为塑料袋)，净含量应符合《定量包装商品计量监督
管理办法》。
7.3 运输
运输过程应避免日晒雨淋，受热及碰撞，搬运装卸应小心轻放，不得与有毒有害或其他有污染物品
混装、混运。
Q_0282JTS025-2019混合型饲料添加剂 枯草芽孢杆菌
Q/JTS 江苏天石生物科技有限公司企业标准Q/0282JTS025-2019 混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌2019-08-16发布 2019-08-16实施江苏天石生物科技有限公司发布前言本标准按GB/T1.1-2009 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编制。
本标准由江苏天石生物科技有限公司提出。
本标准起草单位：江苏天石生物科技有限公司。
本标准起草人：邢华、邹苏燕、刘凤琴、黄金乐、赵亮、凌德霞、陈洁。
本标准自发布之日起，有效期限三年，到期复审。
混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌1 范围本标准规定了混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌的要求、试验方法、检验规则、标志、标签、包装、运输、贮存及保质期。
本品适用于枯草芽孢杆菌为原料，以沸石粉为载体经均匀混合而成的混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 26428 饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测GB/T 6435 饲料中水分的测定GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T 17480 饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法GB/T 13079 饲料中总砷的测定GB/T 13080 饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T 13081 饲料中汞的测定GB/T 13082 饲料中镉的测定方法GB/T 13092 饲料中霉菌总数的测定GB/T 18869 饲料中大肠菌群的测定GB/T 4789.10 食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T 8381.2 饲料中志贺氏菌的检测方法GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检测方法GB/T 18823 饲料检测结果判定的允许误差GB/T 191 包装储运图示标志GB/T 10648 饲料标签JJF 1070-2005 定量包装商品净含量计量检验规则国家质量监督检验检疫总局（2005）年第75号令定量包装商品计量监督管理办法3 要求3.1 外观类黄色或褐黄色流动性粉末。
农业部办公厅关于印发《第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议纪要》的通知
农业部办公厅关于印发《第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议纪要》的通知文章属性•【制定机关】农业部(已撤销)•【公布日期】2009.08.17•【文号】农办农[2009]90号•【施行日期】2009.08.17•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】农业管理综合规定正文农业部办公厅关于印发《第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议纪要》的通知（农办农〔2009〕90号）各省、自治区、直辖市农业（农林、农牧）厅（局、委），新疆生产建设兵团农业局，各评委会委员：第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议于2009年6月19-20日在内蒙古自治区召开。
现将《第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议纪要》印发给你们，请参照执行。
附件：第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议纪要二○○九年八月十七日附件：第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议纪要（二ΟΟ九年六月二十日于内蒙古自治区）第八届全国农药登记评审委员会第五次全体会议于2009年6月19-20日在内蒙古自治区召开。
会议应到委员36人，实到委员28人，符合《全国农药登记评审委员会章程》规定，评审结果有效。
会议期间，委员们对申请正式登记的新农药品种进行认真评审，讨论了加强特丁硫磷管理和减免部分特殊农药原药（母药）的登记及残留试验等问题，形成了一致意见。
现将有关会议情况纪要如下：一、评审了申请正式登记的新农药产品提交本次会议审议的农药品种有60个，其中杀菌剂20个、杀虫剂17个、除草剂9个、杀鼠剂3个、植物生长调节剂6个、昆虫引诱剂2个、植物诱抗剂1个、卫生杀虫剂1个、杀线虫剂1个，共涉及114个产品。
委员们经过认真评审，同意联苯肼酯等25个品种及其产品的正式登记；壬菌铜等 16个品种及其产品在补充有关资料，并经相关专家组审核符合要求后，同意正式登记；暂不同意磷化钙等19个品种及其产品的正式登记（具体评审意见见附件）。
枯草芽孢杆菌培养基配方
枯草芽孢杆菌培养基配方枯草芽孢杆菌培养基配方枯草芽孢杆菌培养基的组分是由葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙等5种原料构成,采用L16(45)正交表,将5种原料作为枯草芽孢杆菌培养有影响的因素,通过试验数理统计的直观和理论分析,对其配方进行优化。
试验结果表明,当培养基的配方为无水葡萄糖3.50 g/L、蛋白胨0.83 g/L、酵母膏0.50 g/L、磷酸二氢钾0.35 g/L 和碳酸钙0.25 g/L,温度(34±2)℃时,培养16 h即可达到生长峰值。
由于枯草芽孢杆菌光学密度(optical density,OD)与活菌数量的关系:y=0.5182x2+1.4462x+1.9714(r=0.996343),接种的枯草芽孢杆菌由1.9714×108cfu/mL提高到3.3124×108cfu/mL。
优化的枯草芽孢杆菌培养基条件能有效促进枯草芽孢杆菌生长。
培养基：1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g 牛肉膏+20g琼脂，或牛肉膏蛋白胨配方(1000ml)加10g的葡萄糖。
ph为7即可，温度30度到37度皆可——条件不是很苛刻，比较容易培养。
枯草芽孢杆菌常用培养基配方：1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂枯草芽孢杆菌原生质体的制备1 培养枯草芽孢杆菌取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。
2. 收集细胞各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。
如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。
我国生物农药登记要求及趋势
我国生物农药登记要求及趋势 农药是把双刃剑，在解决有害生物的同时，也对农产品和环境带来一些负面影响，因此世界各国对农药进行了非常严格的管控。
一、生物农药登记品种及概况1.生物农药的定义和范畴 我国农药登记管理体系没有对生物农药进行界定，而是对生物化学农药、微生物农药、植物源农药，单独制定了登记资料要求，农用抗生素登记要求与化学农药基本相同。
2.我国生物源农药登记情况表1 我国生物源农药登记情况（截至2020年10月中旬）序号生物农药类别有效成分种类（个）登记产品数（个）01微生物农药46 54202生物化学农药33 583 03植物源农药26 30004抗生素13 1,726 合计105/118（含抗生素）1,425/3,151（含抗生素） 由上表可知，我国生物源农药有效成分数占有效成分总数比例：14.9%/16.8%（含抗生素）；产品数占产品总数比例：3.6%/7.9%（含抗生素）。
而美国生物农药有效成分390个，占有效成分数总数比例约1/3；其中生物化学农药约200个，微生物农药约130个。
3.微生物农药 微生物农药指以细菌、真菌、病毒和原生动物或基因修饰的微生物等活体为有效成分的农药。
（1）细菌：苏云金杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌等； （2）真菌：木霉菌、白僵菌、绿僵菌、淡紫拟青霉等； （3）病毒：棉铃虫核型多角体病毒、松毛虫质型多角体病毒等； （4）原生动物：蝗虫微孢子虫； （5）其他。
表2 微生物农药登记品种类别品种有效成分种类细菌21苏云金杆菌、苏云金杆菌以色列亚种、甲基营养型芽孢杆菌9912、甲基营养型芽孢杆菌LW-6、海洋芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、荧光假单胞杆菌、多粘类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌KN-03、侧孢短芽孢杆菌A60、短稳杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌B7900、解淀粉芽孢杆菌B1619、解淀粉芽孢杆菌PQ21、解淀粉芽孢杆菌LX-11、沼泽红假单胞菌PSB-S、嗜硫小红卵菌HNI-1真菌10金龟子绿僵菌CQMa421、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌、哈茨木霉菌、木霉菌、淡紫拟青霉、厚孢轮枝菌、耳霉菌、盾壳霉ZS-1SB、小盾壳霉CGMCC8325卵菌1寡雄腐霉菌病毒12（1）核型多角体病毒：棉铃虫核型多角体病毒、茶尺蠖核型多角体病毒、甜菜夜蛾核型多角体病毒、苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒、斜纹夜蛾核型多角体病毒、甘蓝夜蛾核型多角体病毒；（2）质型多角体病毒：松毛虫质型多角体病毒；（3）颗粒体病毒：菜青虫颗粒体病毒、小菜蛾颗粒体病毒、粘虫颗粒体病毒、蟑螂病毒、稻纵卷叶螟颗粒体病毒。
Q_JHL.004-2019混合型饲料添加剂 枯草芽孢杆菌
混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌锦州华龙动物药品有限公司发布前言本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编写。
本标准由锦州华龙动物药品有限公司提出并归口。
本标准由锦州华龙动物药品有限公司起草。
本标准主要起草人:袁晓春本标准于2019年4月10日首次发布。
混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌1范围本标准规定了混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌的要求、试验方法、检验规则、饲料标签、包装、运输及贮存。
本标准适用于已购进的饲料添加剂枯草芽孢杆菌加饲料原料玉米胚芽粕、饲料原料玉米皮、饲料原料黄芪、饲料原料甘草、饲料原料益母草、饲料原料膨润土或饲料原料淀粉或饲料原料葡萄糖或饲料原料酵母细胞壁或饲料原料蒙脱石按一定比例混合制成的混合型饲料添加剂枯草芽孢杆菌。
2规范性引用文件下列文中对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4789.3 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.5 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验GB 4789.10 食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T 6435 饲料中水分的测定GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 10648 饲料标签GB/T 13079 饲料中总砷的测定方法GB/T 13080 饲料中铅的测定方法原子吸收光谱法GB/T 13081 饲料中汞的测定方法GB/T 13082 饲料中镉的测定方法GB/T 13083 饲料中氟的测定离子选择性电极法GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检验方法GB/T 13092 饲料中霉菌总数的测定GB/T 26428 饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测GB/T 14699.1 饲料采样GB/T 17480 饲料中黄曲霉毒素 B l的测定酶联免疫吸附法JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则2005年国家质量监督检验检疫总局第75号令《定量包装商品计量监督管理办法》3技术要求3.1 感官为灰色、白色、淡黄色或者棕黄色，无变质、无结块，无异嗅味。
北海群林生物枯草芽孢杆菌产品详细说明
北海群林枯草芽孢杆菌详细介绍商品介绍产品介绍：一、形态特征枯草芽孢杆菌细胞杆状，直径0.6µm～1.0µm，长1.5µm～2.0µm，芽孢中生，椭圆，孢囊不膨大，革兰氏反应阳性。
在锰营养琼脂平板上37℃培养36h形成的菌落为圆形，直径3.0mm～10.0mm，淡黄色，中间色深，表面平整不光滑，无光泽，边缘不整齐。
生理生化特征：见表A显微照片：产品照片：枯草芽孢杆菌工艺流程图生产许可证：专利证书：二、作用机理1、生物夺氧芽孢杆菌为需氧菌，在生长过程中需要大量的氧气，进入动物肠道内，消耗大量的游离氧，降低肠道内氧浓度和氧化还原电势，改善了乳酸杆菌、双歧杆菌等厌氧菌的生长环境，保持肠道微生态系统的稳衡，提高动物机体抗病能力，减少胃肠道疾病发生几率。
2、拮抗致病微生物，改善体内外生态环境动物饲喂芽孢杆菌后，能显著降低肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的数量，使机体内的有益菌增加而潜在的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的有益菌数量增多，致病性微生物减少，从而净化体内外环境，减少疾病的发生。
3、增强动物体的免疫功能芽孢杆菌能促进动物肠道相关淋巴组织处于高度的“免疫准备状态”，同时使免疫器官发育加快，免疫系统成熟快而早，T、B淋巴细胞数量增多，动物体液和细胞免疫水平提高。
4、产生营养物质芽孢杆菌在动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、有机酸、促生长因子等，参与动物机体新陈代谢。
5、产生多种消化酶芽孢杆菌能提高动物生产性能是其产生多种消化酶的一个重要体现。
研究表明，芽孢杆菌能产生多种消化酶，帮助动物对营养物质的消化吸收。
芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，这些酶能够破坏植物饲料细胞的细胞壁，促使细胞的营养物质释放出来,并能消除饲料中的抗营养因子，减少抗营养因子对动物消化利用的障碍。
全方位分析枯草芽孢杆菌
全方位分析枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），是芽孢杆菌属的一种，CAS号68038-70-0。
由于其具有控制真菌和细菌的作用，广泛应用于农药杀菌剂，水产养殖以及动物饲料生产中。
目前市面销售的有机草莓，多采用枯草芽孢杆菌作为草莓灰霉病生物类杀菌剂。
01何为枯草芽孢杆菌？枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis) 是一类广泛分布于各种不同生活环境中的革兰氏阳性杆状好养型细菌，可以产生内生芽孢，耐热抗逆性强，在土壤和植物的表面普遍存在，同时还是植物体内常见的一种内生菌，对人畜无毒无害，不污染环境。
由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单，易于存活、定殖与繁殖，无致病性，并可以分泌多种酶和抗生素，常用作生物类型杀菌剂。
枯草芽孢杆菌大小为（0.7~0.8）×（2~3）μm（内生芽孢大小为（0.6~0.9）×（1.0~1.5）μm，具有单层细胞外膜，有鞭毛，能运动，无荚膜，广泛存在于腐败的有机物和土壤中，容易在枯草浸汁中繁殖，所以命名为枯草芽孢杆菌。
枯草芽孢杆菌可以分泌纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等多种酶类，能够利用淀粉、蛋白质及多种糖类；还能够产生多种抗生素类物质，抑制其他有害细菌的生长。
枯草芽孢杆菌能够抵抗80℃高温，在极端环境下，能够诱导产生可逆性较强、能耐受高温及高压等不良环境的内生芽孢，因此枯草芽孢杆菌（在配合饲料中主要利用其内生芽孢）在饲料加工的蒸汽调质和制粒过程中不易被破坏，可以用于加工为各种常见农药和饲料剂型，适合运输，不会失活。
在颗粒饲料和粉料中都比较稳定，储藏时间长。
02枯草芽孢杆菌与解淀粉芽孢杆菌枯草芽孢杆菌( Bacillus amyloliquefaciens )和解淀粉芽孢杆菌( Bacillus subtilis )同属于芽孢杆菌属的两个种，两种菌作用相似且难以鉴别。
市面上有许多销售的枯草芽孢杆菌实际为解淀粉芽孢杆菌。
在农业生产中：枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis)是芽孢杆菌属的一种，广泛分布在土壤及腐败的有机物中。
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G25Q 江苏苏滨生物农化有限公司企业标准Q/320922BN 032-20141000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药2014-08–18发布 2014-08–30实施江苏苏滨生物农化有限公司发布前言本标准按照 GB/—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》和GH/—2003《农药母药产品标准编写规范》进行编制而成。
本标准附录A为规范性附录。
本标准附录B为资料性附录。
本标准由江苏苏滨生物农化有限公司提出并起草。
本标准主要起草人：赵福兵、许军、沈文权。
Ⅰ引言1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药是我公司自行研制开发的微生物发酵产品。
1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药经过加工可以主要用于防治水稻纹枯病、稻曲病。
雌、雄性均＞经测定1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药对大白鼠的经口毒性LD50雌、雄性均＞2150mg/kg。
4640mg/kg，经皮毒性为LD50Ⅱ1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药本品有效成分的其他名称、结构式和基本物化参数如下：a)枯草芽孢杆菌中文通用名称：枯草芽孢杆菌—+菌株编号。
拉丁学名：Bacillus subtilis。
分类地位：细菌（Bacteria）；厚壁菌门（Firmicutes）;芽孢杆菌纲（Bacilli）；芽孢杆菌目（Bacillales）；芽孢杆菌科（Bacillaceae）；牙孢杆菌属（Bacillus）。
形态学特征：菌体呈杆状，单个、成对或短链排列，大小为μm～μm×μm～μm，无荚膜，周生鞭毛，能运动；芽孢μm～μm×μm～μm，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大；革兰氏染色阳性；菌落圆或不规则形，表面粗糙不透明，可以起皱，呈奶油色或污白色。
有效成分主要存在形式：芽孢。
主要生物活性：抑菌（防病）。
培养保存条件：最适生长温度为30℃—37℃；适合培养基为营养琼脂（NA）或营养肉汤（NB）培养基；适宜贮存温度为0℃—4℃。
1 范围本部分规定了细菌微生物农药枯草芽孢杆菌母药的要求、试验方法、检验与验收以及标志、标签、包装、贮运。
本部分适用于以芽孢为主要活性成分的粉状枯草芽孢杆菌母药。
2 规范性引用文件下列文件中对于本文件的应用是必不可少。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 1601-1993农药pH值的测定方法GB/T 1604-1995商品农药验收规则GB/T 1605-2001商品农药采样方法GB 3796-2006农药包装通则GB/T 8170-2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T16150-1995 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
枯草芽孢杆菌母药Bacillus subtilis technical concentrates(TK)由枯草芽杆菌纯菌种经发酵而获得的高含量芽孢菌粉，通常情况下还会包含伴随发酵过程的少量生物组分和化学杂质。
菌落形成单位 colony forming units（cfu）是将枯草芽孢杆菌母药用水稀释后得到的菌泫通过涂布的方法，让其单个芽孢分散在琼脂平板上，待培养后每活芽孢形成一个菌落，即一个菌落形成单位（cfu），通过肉眼观察菌落的数量来推算单位微生物农药样品中的活芽孢含量。
杂菌数 number of microbial contaminants枯草芽孢杆菌母药样品中，除枯草芽孢杆菌菌落以外的其他微生物菌落数之和。
杂菌率 rate of microbial contaminants枯草芽孢杆菌母药样品中除枯草芽孢杆菌外，其他菌（真菌和细菌等）量占总菌量的百分率。
贮存稳定性 storage stability枯草芽孢杆菌母药在室温和（或）低于室温下贮存一定时间后，产品的活菌数占其标明值的相对百分率。
4 要求外观：通常为灰白色或棕褐色粉状物，由于发酵基质的不同颜色偶有差异，但应为均匀疏松粉末，不可有团块。
4. 2 枯草芽孢杆菌母药质量控制项目指标应符合表1要求。
5 试验方法除另有说明，本方法所用试剂均为化学纯及以上，所用溶液均为水溶液。
抽样按照GB/T 1605规定进行样品的采集，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量不少于100g。
采样时必须特别注意样品的代表性和避免污染，采样容器和采样工具应经过消毒灭菌，样品采集后应立即进行检验，若不能立即检验，需贮存在4℃冰箱中。
菌种鉴别根据代表菌株的形态学和生理生化特征进行菌种鉴别，并可辅助脂肪酸分析、Biolog、16SrRNA序列分析等手段。
当对鉴别结果有争议或需要进行法律仲裁检验时，应到具有菌种鉴定资质的单位，将待检菌种与模式菌种进行比对，出具菌种鉴定报告，作为仲裁依据。
鉴别方法见附录A。
含孢量测定方法提示采用平板菌落计数法。
将母药润湿、稀释后，均匀涂布在培养基平板上，待各芽孢菌体形成菌落后，统计菌落总数，以单位样品（g）中的菌落形成单位数（cfu）表示活芽孢含量（cfu/g）。
试剂和溶液试剂：Tween-20或Triton X-100；溶液：%Tween-20或%Triton X-100。
主要仪器、设备天平：精度为移液器：20μL～200μL,200μL～1000μL；高压蒸汽灭菌器；超净工作台；恒温振荡器；恒温培养箱。
实验步骤样品的准备在无菌操作条件下，将样品搅拌均匀，准确称取样品，溶入的含% Tween-20或%Triton X-100的无菌水中浸泡30minb后，振荡30min，得到稀释10倍的样品溶液，标记为0号。
然后参照表2（以稀释7次为例）进行梯度稀释。
涂板计数将上述各梯度稀释液分别吸取100μL于NA平板上，并用L形玻棒均匀涂布在整个平板表面，每1稀释度做3次重复，然后置于37℃培养24-48h后，选择适宜的稀释度，取菌落数在30～300个之间的平板进行计数。
菌落总数的计算方法若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，则计算该稀释度3个重复平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数，作为每g试验中的菌落数。
如第7号稀释度3个平板的菌落数分别为98、100、102，则该试样的菌落数：N= [(98+100+102)÷3]×108×10=×1011cfu/g如有两个连续稀释度的平板菌落数均在适宜计数范围之类，则按式（1）计算：N=∑C / [(1×n1+×n2) ××d] (1)式中：N—单位样品(g) 中的菌落数（cfu/g）∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和—第1个适宜稀释度的调查平板数n1—第2个适宜稀释度的调查平板数n2d—第1稀释度的稀释因子示例：如果第1稀释度（10-7）的菌落数（cfu）为110、105、100，第2稀释度（10-8）的菌落数（cfu）为15、16、17，则根据式（1）计算。
N=（110+105+100+15+16+17）/[（1×3+×3）××10-8]=×1011cfu/g杂菌率的测定按方法进行测定，NA培养基检测样品中的细菌杂菌；选择PDA培养基检测样品中的真菌杂菌。
然后统计总的可见杂菌菌落数量，杂菌率按式（2）计算。
式中：X ——杂菌率，单位为百分率（%）；N 1——细菌杂菌菌落数的总和，单位为cfu ； N 2——真菌杂菌菌落数的总和，单位为cfu ；N 3——有效成分枯草芽孢杆菌菌落数总和，单位为cfu 。
pH 值的测定按GB/T 1601-1993的规定进行。
细度的测定按GB/T 16150-1995中的规定进行。
干燥减量的测定 仪器、设备扁形称量瓶：直径40mm ；电热干燥箱：控温范围（50℃～200℃），误差±2℃； 干燥器。
试验步骤称取试样10g （精确至1mg ），置于预先恒重的称量瓶中，将此瓶放入105℃±2℃的电热恒温干燥箱内干燥，1h 后取出，在干燥器中冷却至室温，称重。
测定结果干燥减量按式（3）计算。
W =m-m 1 ×100 (3)m式中：W ——干燥减量，单位为百分率（%）； m ——试样的质量，单位为克(g)；m 1——干燥后试样的质量，单位为克(g)。
贮存稳定性 方法提要将试样密闭放置于 5℃贮存24个月或20℃—25℃贮存12个月后，对含孢量进行测定，计算其占标明值的百分率，要求不低于80%。
仪器、设备冰箱；恒温箱：控温范围（0℃～50℃），控温误差±2℃； 玻璃瓶：带有密封盖或瓶塞，能充分保证其密封性。
X=N 1+N 2 ×100 (2)N 1+N 2+N 3试验步骤将20g试样放入玻璃瓶中，使其铺成平滑均匀层，密封后置于5℃冰箱中放置24个月或20℃～25℃恒温箱中放置12个月后按方法测定样品中的含孢量，并计算其占标明值的百分率。
6 产品检验与验收应符合GB/T 1604-1995的规定。
极限值的处理应按GB/T8170-2008中的要求进行。
7 标志、标签、包装、贮运1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药的标志、标签和包装，应符合GB3796-2006中的有关规定，并应有农药生产批准证书号、标准号、农药登记证号、商标和使用范围。
包装：1000亿cfu/g枯草芽孢杆菌母药内衬塑料袋硬纸桶（或牛皮纸袋、编织袋），每桶（袋）不超过25kg。
也可根据用户要求或订货协议，采用其它形式的包装，但要符合GB 3796-2006的规定。
贮运：贮运时严防日晒及35℃以上高温，置于阴凉干燥处。
运输时，注意轻放，防止破损。
不得与有毒有害物质混装、混运。
安全：在使用说明书或包装标签上应注明毒性、防护措施等。
保质期：在正常贮运条件下，质量保证期从生产日期算起，二年内产品含孢量不低于标明值的80%。
附录 A（规范性附录）菌种鉴别方法A1 主要仪器设备和材料除常规微生物试验操作所需要的设备和培养的条件外，其他还包括：天平（感量）；生物显微镜（10×100倍）；高压灭菌锅；恒温培养箱；移液器；移液管，试管（15mL）及试管架；菌落计数仪（可选）；匀质器；L—玻璃棒；培养皿（Ф9cm）；载玻片；盖玻片等。
A2 主要培养基和试剂试剂结晶紫、乙醇、草酸氨、碘、碘化钾、丙铜、番红、过氧化氢、氢氧化钠、肌酸、D—葡萄糖、L—阿拉伯糖、D—木糖、D—甘露醇、溴甲酚紫、可溶性淀粉、对、氯化钠、硝酸钾、a-萘二甲基氨基苯甲醛、浓硫酸、浓盐酸、L—酪氨酸、FeCl3酸、二苯胺、乙醚、马尿酸钠、柠檬酸钠、丙二酸钠等。
培养基蛋白胨水培养液（）、营养琼脂培养基（NA）（～）、营养肉汤培养基（NB）（～）、厌养培养基、明胶培养基（～）、丙酸盐培养基（～）、柠檬酸盐培养基（～）、苯丙氨酸培养基（），制备方法参见附录B。