普通生物化学教学大纲-河北师范大学生物学教学中心

普通生物化学实验教学大纲

一、课程说明

生物化学实验是生命科学中探索生命奥秘的重要实验方法之一，主要是通过实验方法了解组成生物体的大分子物质氨基酸、蛋白质、酶、核酸、维生素、脂类等的组成、结构、性质、功能。

二、教学目的及要求

1、掌握生物化学中的基本原理在实验中的应用及验证。

3、熟悉并掌握基本生化技术色谱、电泳、离心等的基本原理及操作技术。

4、能够运用所学知识综合解决现实生活中的基本问题。

5、培养学生解决问题的严谨的思维能力。

6、使学生了解生物化学在实验教学中的重要性。培养学生严谨的科学态度和良好的习惯。培养学生团结互助的团队精神，建立良好的友谊。

三、教学重点及难点

1、重点：实验中的基本原理、基本操作、实际中简单及综合应用。

2、难点：某些较抽象的原理的理解及阐述。

四、与其它课程的关系

生物化学是生命科学的基础专业课之一，在大学二年级第一学期开始开设，目的是为以后开设与之密切相关的专业课如动植物生理学、遗传学、微生物学、细胞生物学、分子生物学等打下良好的基础。

五、学时、学分

学时：30

学分：3

六、实验内容

实验一氨基酸的分离鉴定----纸层析法

（一）目的

通过氨基酸的分离，学习层析法的基本原理及操作方法。

（二）主要教学内容

1、分配层析的原理。

2、基本操作。

（三）注意事项

1、点样点直径不要超过3毫米。

2、一定用铅笔做标记。

3、手不要摸滤纸

4、原点不能浸如展层剂

5、以组为单位作出层析图谱。

实验二蛋白质性质实验一

蛋白质及氨基酸的呈色反应

（一）目的

学习呈色反应原理，掌握鉴定蛋白定性鉴定的方法。

（二）主要内容

双缩脲反应、印三酮反应、黄色反应、考马司亮兰反应

实验三蛋白质性质实验二

蛋白质的等电点测定和沉淀反应

（一）目的

学习蛋白质的等电点测定，了解沉淀与变性关系。

（二）主要内容

1、蛋白质的等电点，蛋白质在等电点时的特性，测定原理

2、沉淀不一定变性，变性不一定沉淀。了解变性与降解关系。

实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳

（一）目的

学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一般原理。

（二）主要内容

1、电泳的一般原理

2、醋酸纤维薄膜电泳的操作

（三）注意事项

1、点样一定要细且均匀。

2、调整好电压和电流。

实验五、六总氮量的测定--微量凯氏定氮法

（一）目的

学习凯氏定氮法的原理和操作技术

（二）主要内容

1、原理：蛋白质系数。

2、操作：样品的处理及消化；蒸馏；滴定；数据处理

（三）注意事项

1、一定消化完全。

2、消除所有可能对实验结果造成的误差。

实验七动物组织中核酸的提取

（一）目的

了解核酸的组成，掌握鉴定核酸组成的方法

（二）主要内容

1、原理

2、操作匀浆的制备；抽提；沉淀；水解；鉴定

（三）注意事项

1、离心时一定要平衡。

2、研磨一定彻底，否则量少鉴定现象不明显。

实验八酶的特性

（一）目的

加深对酶的催化特性及专一性的认识

（二）主要内容

1、温度对酶活力的影响

2、pH对酶活力的影响

3、激活剂、抑制剂对酶活力的影响

4、酶的专一性

（三）注意事项

1、pH值配制一定准确。

2、酶量、底物的量一定合适。

实验九V C的定量测定

（一）目的

1、学习V C定量测定法的原理和方法

2、进一步掌握熟悉微量滴定法的操作技术

（二）主要内容

1、样品提取液的制备

2、标准VC的滴定

3、样品的滴定

4、数据的处理

（三）注意事项

滴定要迅速。

实验十谷丙转氨酶的活性鉴定

（一）目的

学习应用纸层析法鉴定移换反应

（二）主要内容

1、肌肉糜的制备

2、氨基移换反应

3、层析

4、数据处理

（三）注意事项

一定用铅笔，药品不要弄混，注意酶反应的合适pH值。

生物技术专业

生物化学实验技术教学大纲

一、课程说明：生物化学实验技术是生物技术专业重要专业课之一。重点要求学生掌握生化

技术的基本原理，训练学生基本生化技术操作能力、分析问题解决问题的能力。

二、教学目的及要求：

1、理论部分：熟悉现代生化技术的基本原理及应用。

2、实验部分：独立完成典型生化技术的基本操作，包括试剂配制、仪器使用、结果分

析。

三、重点及难点：

1、重点：生化技术的四大部分，包括：分光光度技术、色谱技术、离心技术、电泳技

术。

2、难点：色谱技术及电泳技术的原理及操作。

四、与其他课程的关系：与微生物学、遗传学、细胞生物学、分子生物学都有密切关系。

五、学时学分

1、学时：72

2、学分：4

实验部分

实验一、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量（Bradford法）

一、原理

考马斯亮蓝G-250染料在酸性溶液中与蛋白质结合，溶液的颜色由棕黑转为蓝色，595nm比色，做出标准曲线。在一定的蛋白浓度范围内，A595与蛋白浓度成正比。

二、试剂及仪器

试剂：考马斯亮蓝G-250，BSA，95%乙醇，85%磷酸，二蒸水。

仪器：容量瓶，722分光光度计，试管，混合器。

三、实验操作

1、配试剂：100mg考马斯亮蓝G-250 + 50mL95%乙醇+120 mL85%磷酸+水，共计1 L。

2、制备标准曲线：

方法一，配置母液，按照教材各取一定量母液得到一个浓度梯度进行检测。

方法二，配置母液，用系列稀释方法得到浓度梯度进行检测。

各取0.1 mL蛋白液加5 mL考马斯亮蓝G-250，2min-1hr 595nm比色，绘标准曲线。

以标准蛋白浓度为横坐标，用吸光度值A595为纵坐标，得一直线。

3、样品测定：鸡蛋清蛋白液。

4、结果及分析。写出实验报告。

实验二、凝胶层析法测定蛋白质的分子量

一、目的

学习凝胶层析的原理和操作，测定蛋白质的分子量。

二、原理