常见细胞系使用的培养基

mem培养基

mem培养基MEM培养基摘要：MEM（Minimal Essential Medium）是一种常用的细胞培养基，被广泛应用于生物医学研究领域。

本文将介绍MEM的组成成分、配制方法、应用领域以及常见的注意事项，以帮助读者更好地了解和使用MEM培养基。

1. 引言细胞培养是生物医学研究的重要手段之一。

为了保证细胞正常生长和增殖，在进行细胞培养时，需要提供适当的培养基。

MEM培养基作为一种全面适用的基础培养基，被广泛应用于各个领域的细胞培养工作中。

2. MEM培养基的组成成分MEM培养基由多种成分组成，包括无机盐、氨基酸、维生素、能源源和其他添加物。

其中无机盐的主要成分有钾、钙、镁、磷等。

氨基酸是细胞合成蛋白质的基本组成部分，维生素则是细胞正常代谢所需的营养物质。

能源源包括葡萄糖等糖类，提供细胞生长所需的能量。

除此之外，MEM培养基还添加了胎牛血清（FBS）等血清成分，来提供细胞所需的生长因子和其他重要成分。

3. MEM培养基的配制方法MEM培养基的配制可以通过两种方式进行：一种是购买现成的MEM培养基粉末，按照说明书配制；另一种是自行配制。

自行配制时，可以根据需要将相应的成分按照一定比例加入无菌蒸馏水中，然后通过无菌过滤器过滤，得到最终的MEM培养基。

4. MEM培养基的应用领域MEM培养基被广泛应用于细胞生物学的各个领域，包括细胞培养、细胞增殖、细胞扩增、病毒培养等。

它为细胞提供了适宜的环境，使得细胞能够在培养皿中正常生长和增殖，并可用来进行细胞系的维护和传代。

5. MEM培养基的注意事项在使用MEM培养基时，需要注意以下几点：- 必须保持培养基的无菌性，在制备和使用过程中严格遵循无菌操作规范；- 使用培养基前，应将其保存在4℃下，避免暴露于高温和阳光直射下；- 在配制培养基时，按照比例准确称量各个成分，并充分溶解均匀；- 培养基中的胎牛血清应选用优质的血清，并在使用前进行热灭菌处理。

另外，一些特殊细胞株（如原代细胞）也可以选择使用无血清培养基；- 培养基的pH值需要调整到适宜范围内（通常为7.2-7.4），可以使用缓冲液进行调节。

培养基分类

培养基分类
培养基是实验室常用的培养液，是细菌、哺乳动物、真菌等生物的根据活动和生长的特点，选择的一种提供适宜的、能够满足特定细菌或动物发展和生长的营养介质。

培养基是由多种有机物和无机物构成，如碳源、氮源、营养盐、维生素、催化剂等共同构成，主要用于微生物、动物细胞系和组织培养，也可以用于活体成分分离、细胞膜特质的研究，近年来已经成为细胞和分子生物学研究的重要培养基与载体。

培养基可以分为多种，常见的有细菌培养基、真菌培养基、动物细胞培养基等。

一、细菌培养基
细菌培养基是一种专门用于培养细菌的培养基，通常包含碳源、氮源和其他大量的微量元素以及一些必需的原料。

细菌通常是由碳水化合物和氨基酸等多种物质组成，因此，细菌培养基应能够提供充足的碳源和氮源，并且能够满足细菌繁殖所需要的物质和能量需求。

二、真菌培养基
真菌培养基是一种专门用于培养真菌的培养基，它的组成通常包括碳源、氮源、矿质营养盐、维生素等。

真菌可以从有机物和无机物中分解碳源和氮源，因此，真菌培养基应该能够提供包括碳源、氮源在内的多种营养物质，以支持真菌的增殖和发育。

三、动物细胞培养基
动物细胞培养基是一种专门用于培养动物细胞的培养基，一般由
碳源、氮源、营养盐、维生素等构成。

动物细胞能从培养基中摄取营养物质，因此，动物细胞培养基的组成必须能够满足细胞的能量需求和物质需求，此外还要考虑细胞所需要的pH值和微量元素的存在，以及附加物的使用，以提高细胞增殖和促进细胞发育。

总之，培养基是细菌、真菌、动物细胞研究中不可或缺的重要原料，选择合适的培养基对于研究起到至关重要的作用。

常见细胞系使用的培养基

常见细胞系使用的培养基细胞系培养基是在细胞体外培养时提供营养、调节生理功能和维持细胞生长所必需的基础培养液。

常见的细胞系培养基包括以下几种：1.基本培养基：(a) Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)：DMEM是最常用的细胞培养基之一，可以满足大多数哺乳动物细胞的生长需求。

它包含丰富的氨基酸、维生素和硒等营养物质，pH 为7.4，细胞因子和血清可以根据需要添加。

(b)RPMI1640：RPMI1640是一种适用于淋巴细胞等肿瘤和免疫细胞的培养基。

它还包含可溶性蛋白、胎牛血清、植物血清和病毒适配因子等。

(c) Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)：EMEM是一种全面的培养基，适用于广泛的细胞系，并可添加血清、血清替代物或血清补充物来满足特定细胞系的需求。

(d) Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)：IMDM是用于骨髓细胞和其他白细胞的培养基，也适用于一些其他特定的细胞系。

2.补充因子：(a)L-谷氨酸：可以通过促进蛋白质合成以及为细胞提供能量，促进细胞生长。

(b)胱氨酸：可以作为抗氧化剂，保护细胞免受氧化损伤。

3.血清和血清替代品：(a)胎牛血清(FBS)：FBS是最常用的培养基补充物之一，因为它含有多种生长因子、蛋白质和营养物质，可以促进细胞生长和增殖。

(b)马血清：适合一些特定的细胞系，可以替代FBS。

(c)血清替代品：血清替代品通常是人类血浆衍生物，不含动物血清，可以减少细胞系受到的外源性感染风险。

4.碳源和氮源：(a)葡萄糖：葡萄糖是最常用的碳源，可以提供细胞的能量需求。

(b)氨基酸：提供细胞各种生物合成的原料。

(c)谷氨酸/谷氨酰胺：作为氨基酸的前体，是合成蛋白质和核酸的重要物质。

5.生长因子和维生素：(a)血液集落刺激因子(CSFs)：CSFs可以促进造血系统细胞系的增殖和分化。

细胞培养基种类及用途

基础细胞培养基通常指基础合成培养基，主要成分为氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质（核酸降解物、氧化还原剂等）。

据不同细胞和研究目的，选用合适培养基,•还可补加新成分。

•如杂交瘤中常用DMEM加丙酮酸钠、2-巯基乙醇（相当于胎牛血清可透析组分的作用）。

合成培养基使用时加5-30%血清。

1． 199细胞培养基及其改良品种1950年Morgan等设计，除BSS外，含有53种成分，为全面培养基，广用于各类细胞培养，广泛用于病毒学、疫苗生产。

2． BME细胞培养基基础Eagle培养基（Basal Medium Eagle），1955年Eagle设计，BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素。

简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMEM等。

3． MEM细胞培养基低限量Eagle培养基（Minimal Essential Medium），1959年修改，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。

4． DMEM细胞培养基及其改良品种DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基，各成份量加倍，分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)。

生长快，附着稍差肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。

例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。

5． IMEM细胞培养基IMEM由Iscove's改良的Eagle培养基，增加了几种氨基酸和胱氨酸量。

6． RPMI-1640细胞培养基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等，广泛适于许多种正常细胞和肿瘤细胞，也用做悬浮细胞培养7．Fischer’s细胞培养基用于白血病微粒细胞培养。

细胞培养各种培养基简介

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。

一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。

最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。

而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。

MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。

Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。

选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。

例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。

F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。

在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。

对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。

MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。

这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。

原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。

实际操作中并非如此简单。

显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。

细胞培养基

细胞培养基1.概述培养基是培养环境中最重要的成分，可提供细胞生长所必需的营养素、生长因子和激素，并能调节培养体系的pH 值和渗透压。

2.种类（1）基础培养基大多数细胞系均可在基础培养基中生长良好，基础培养基中含有氨基酸、维生素、无机盐和碳源(如葡萄糖),但是这种基础培养基配方中必须添加血清。

（2）减血清培养基减少血清对细胞培养实验不良效应的另一种策略是使用减血清培养基。

减血清培养基是一种补充了营养素和动物来源因子从而降低了血清需要量的基础培养基配方。

（3）无血清培养基无血清培养基 (SFM) 通过用适当的营养和激素成分代替血清，避免了使用动物血清带来的问题。

无血清培养基配方可用于多种原代细胞和细胞系，包括：用于重组蛋白生产的中国仓鼠卵巢(CHO) 细胞、各种杂交瘤细胞系、Sf9和Sf21 昆虫(草地贪夜蛾)细胞系以及用于病毒生产宿主细胞系(例如：293、VERO、MDCK、MDBK)等。

使用无血清培养基的一大优势是可通过适当的生长因子组合使培养基对特定细胞种类具有选择性。

3.常用细胞系培养基许多哺乳动物连续细胞系均可采用相对简单的培养基(例如添加了血清的 MEM 培养基)进行培养，而采用MEM培养基培养的细胞同样也可采用DMEM或199培养基进行培养。

但是，如果细胞表达某种特殊功能，则可能需要使用较为复杂的培养基。

有关为某种细胞选择合适培养基的信息通常可通过发表的文献以及提供细胞的机构或者细胞库获得。

如果无法找到细胞该选择何种培养基的信息，您可根据经验选择生长培养基和血清，或者测试几种不同的培养基，以获得最佳结果。

一般而言，贴壁细胞可首先考虑MEM培养基，而悬浮细胞可首先考虑RPMI-1640 培养基。

实验室常用培养基配方及制备方法

实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种，不同的培养基适用于不同类型的微生物，如细菌、真菌或细胞系等。

下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。

1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。

其配方如下：- Tryptone：10g/L- Yeast extract：5g/L-NaCl：10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0。

用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。

其配方如下：- Peptone：10g/L- Dextrose：40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）DMEM培养基常用于细胞系的培养。

其配方如下：-DMEM粉：每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中，并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。

调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基，适用于检验细菌的营养需求。

其配方如下：-Na2HPO4：6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

细胞培养各种培养基简介

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基如MEM和添加剂如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子组成,培养基的配方一直在改进,其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等;一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液BSS基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质;最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素;而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂例如核苷酸;MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基;Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍;选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足;例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时;F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应;在所有这些培养基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源;对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸若培养基中这两种物质缺乏时;MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM 含更高浓度的NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用;这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果;原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制;实际操作中并非如此简单;显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的;Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长,该培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生;这一培养基的优点是明显的,特别是在保持较高CO2有困难时,例如在长时间的显微操作及生理学研究中;L15培养基已用来成功的培养了外周神经元,但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过;二、血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活,在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态;基础培养基常常要添加血清,血清终浓度多为5~20%;特殊用途的血清来源须用经验确定,广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清;胎牛血清中富含有丝分裂因子,常选其作增殖细胞用的血清,也用于细胞系和原代培养;而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养;然而,很多人也将胎牛血清用于神经型血清；人类的胎盘血清,亦曾用于神经组织的器官类型的培养,也用在一些特殊培养种类中;血清的不同批号含有不同的成分,所以许多人发现,应该在使用前对血清进行测试;大多数试剂商提供样品,所满意的批号即可选用,这样可以一次得到足够一年用量的血清,血清在使用前通常在56℃加热30分钟,这一过程称为灭活;三、无血清培养基1979年神经细胞培养出现了一个重要进展,用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长而不需要在培养基中添加血清;其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合置换培养基中的成分,最后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方,该配方称为N2,专门用于神经细胞培养,最早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养;它的基础培养基是1：1的DMEM与H12的混合液,添加了胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和硒;胰岛素和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用,硒是谷胱甘肽产生的合作因子,可能有助于过氧化物和超氧化物的水解,有报道说还能防止细胞的光照损伤;随后的其他配方如N1N3则含有较低浓度的转铁蛋白;未料到的是上述配方构成的培养基可以支持神经母细胞瘤细胞系快速增殖,随后又发展了能支持原代培养的各种神经元生长的培养基,这种培养基在许多实验室里已取代了有血清培养;在某些培养方案中,细胞直接进入无血清培养,这样的培养基可以消除来自血清的不均一性;更为重要的是,它们可用来检测生长因子以及其他促进神经元存活或生长的因子,或者用来检测那些可保护神经元免遭环境毒物损伤的制剂;专用于神经元的培养基在某些培养环境中还可以减低非神经元细胞的增殖,故可使神经元纯化;血清中含有的组分,例如血清蛋白,可作为代谢毒物清除剂使用并能聚集于培养基中;当缺乏这些成分时,如神经元在无血清培养基中生长时,特别容易为过氧化物及自由基伤害,这已被许多研究者注意到了;过氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培养基中过氧化物和超氧化物的累积,有报道讲可以促进低密度培养细胞的存活;有学者发现细胞存活可为氧分压的下降而促进;因而,无血清培养基的配方常含有抗氧化剂的试剂;例如,维生素E和丙酮酸,可作为过氧化物清除剂使用;上述这些影响在高密度培养时变小,特别是神经元与胶质共培养时,它们可以吸收和代谢神经元毒性物质如谷氨酸;应该注意,尽管无血清培养基是有化学限定性的,但在培养过程中它仍有变动,培养起始时可能有些物质缺乏,而后细胞的产物可能积累,从而使培养基的成分改变;这其实是有另一方面的好处,即条件培养基已培养过细胞的培养基的形成,条件培养基常常用来增加神经元和胶质细胞的发育;生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡;解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在培养基中加入纯的生长因子;如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时;若某种生长因子积累,而最后促使所需要的细胞类型能够生长;但是,这种对营养生长因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制;另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养;因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效;不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基经过了高密度培养进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持;满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子;通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF;不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长;许多PNS类型的神经元在离体状态时表现出简单的营养需求,只需提供单一的营养因子就足以使其在低密度时增殖;例如,大鼠交感神经元仅需NGF即能存活,在其生存期间,这些神经元可在严格局限条件下生长好几个月即在无血清培养基中、或缺乏胶质细胞、或在化学限定基质上;有证据表明NGF是活体中交感神经元存活的生理调节因子;然而,交感神经元也对来自胶质细胞的神经营养因子GDNF有反应,还有NT3、LIF与CNTF也对其有作用;在不产生GDNF 或NT3的动物中,交感神经元会有损伤;在离体与活体营养需求之间的差别或许可以用在不同环境中NGF含量和分布的不同来解释,培养中的NGF弥散在整个环境中,而在活体内,大部分区域的含量是有限的;因此,NGF的重要性在于其合适的浓度;尽管在大多数实验中已经习惯了营养因子的最大效应使用量,其他营养因子的协同效应在亚优剂量下更容易观察到;此外,高浓度的营养因子可使细胞更能抵抗毒剂以及其他压力;相应的,低浓度的营养因子可能用来检查表现型,例如对自由基或氨基酸的毒性刺激剂量的反应;有许多其他的PNS培养系统只需单一营养因子就可使有实用价值的细胞保持在一定比例,广为人知的有雏鸡睫状自主神经节神经元和大鼠背根神经节感觉神经元;不过,这些模型也有局限性;例如,培养中的睫状神经节的神经元加入CNTF时,超过90%的神经元能存活一个很长时期,但并未有迹象表明它属于内源的靶细胞来源的营养因子,而是有争论的相关分子,GPA,扮演了这一角色;大鼠背根神经节含有好几种细胞群体,其中小细胞群、包括nocioceptive cell,对NGF有反应,但其他神经元,例如大细胞群中的proprioception 却对不同的神经营养因子有反应;因此,在大多条件下培养物的生长并不能忠实反映亲代群体的所有特性,这一问题在CNS的细胞培养中特别突出,因为已有的经验表明,没有一种培养基能适合于所有类型及亚类的神经细胞的生长;现有的证据已表明,CNS神经元的营养需求比PNS的更复杂;对脊髓运动神经元与视网膜节细胞神经元的研究表明,这些神经元与外周神经元相比能对更为广泛的营养因子起反应;例如,至少发现了15种不同的分子可在离体条件下增加神经元的存活;而且,已观察到运动神经元与视网膜对任何单独的营养因子的存活反应,与PNS中所观察到的典型反应相比,都要小得多;因此,大多数影响运动神经元及视网膜节细胞的营养因子仅仅只能支持神经元的亚群,而神经元的最佳存活要求诸多因子的结合;在视网膜节细胞的培养中,因子的最佳组合如BDNF、CNTF、IGF、bFGF包括了来自不同生长因子家族的代表;这一结果的普遍性尚待进一步的证实,但敲除单一的营养因子基因之后,没有表现出对CNS大多类群的神经元的存活产生太大影响,这一观察与上述的事实是一致的;现已知少突胶质细胞的长期存活也需要众多营养因子的相互作用;四、抗生素在细胞培养中最常用的抗生素是青霉素常用浓度是25~100ui/ml与链霉素25~100μg/ml;这两种抗生素常混合使用;在一些实验室里,它们常规加入所有的培养基中;庆大霉素10~100μg/ml通常有广谱抗菌效应,并具有溶液稳定性,故也被一些实验室使用,特别是当有低水平的污染存在时更是这样;以上这些试剂对霉菌与酵母菌的污染均无效;尽管很多实验室在细胞系的培养基中常规加入抗生素作继代培养,但仍建议不要在原代培养中加入抗生素,其理由之一是获得的细胞是无菌的,原代培养时的细菌污染很少发生;其次,尽管认为抗生素对细胞代谢的影响可忽略,但最好避免使用它们,以免细胞生长环境的不稳定;最重要的是要意识到培养中主要污染物的类型,它们通常暗示了问题的来源;五、抗有丝分裂剂某些DNA合成抑制剂对分裂细胞有毒,但对没有DNA合成的细胞仅有轻微影响;由于神经元通常缺乏DNA合成能力,因此对抗有丝分裂剂没有多大反应;这样的试剂常常用于神经元的培养,以消除或减少非神经元群体;若要杀死所有的非神经元细胞,可以先加入血清或生长因子来保证有高比例的非神经元细胞进行DNA合成,此时再加入抗有丝分裂剂;但是,某些细胞在它的细胞周期的某些时相时对抗有丝分裂剂是不敏感的;不过,可以重复的将抗有丝分裂剂使用于增殖的细胞群体;在CNS神经元的培养中抗有丝分裂剂常常在星形细胞形成单层后加入,此时,星形细胞由于接触抑制而终止了DNA的合成即细胞停止增殖,它们不会因抗有丝分裂剂的加入而死亡;原代培养中用这种方法阻止成纤维细胞的过度增殖是十分必要的;有两种抗有丝分裂剂常用于神经元的培养：Fluorodexyuridine,是胸苷合成酶抑制剂,一般使用浓度为～10μM;尿苷10μM也常使用,可阻止不分裂细胞的RNA合成;另外,阿糖胞苷也常被使用,其使用浓度为5～50μM;使用任何一种抗有丝分裂剂,都必须考虑它的神经原毒性,应该确定最低效应的使用浓度;阿糖胞苷在很低的浓度下,也会对某些种类的神经元有毒性,可以造成特定神经原的死亡;其他的抗有丝分裂剂尚未表现出这种毒性;六、培养的保持培养物是应该保持在孵箱中的;孵箱可以自动将O2与CO2混合很快达到培养基的设计要求,空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多;对于某些细胞的生长,包括神经原,应使氧含量处在一个较低的水平;可以用孵箱达到这个标准,但这样的孵箱并未广泛使用;高湿度可避免培养皿中培养基的蒸发,保持孵箱中的湿度通常是在箱底部放上一大盆水,这水应该经常换,乘水容器应经常消毒以防霉菌生长;若孵箱曾被霉菌孢子严重污染过,那么要想完全去除污染则会非常困难;当培养物必须要长期保持在孵箱中时,应采用较少培养基的瓶、皿,且将盖子盖紧以避免蒸发,或采用相应的按比例供空气的孵箱;温度的精确调节应定期检查,孵箱温度常设置为37℃或较低温度;细胞在低温时可有较长时间的忍耐限度,但当温度升至39℃时,几小时内即死亡;维持培养物的最佳方案常常改变;例如培养胶质细胞时,要经常换液以使其增殖达到最大;而在培养某些神经原时,则要求尽可能少的换液,神经原在两次换液之间的条件下长的最好;大脑皮质的培养要求在不换液的情形下维持一个月以上;另一方面,象海马神经原那样的细胞,倚赖于条件培养基,若换液太频繁细胞就会衰退,此时,可采用1/3或1/2换液的方式;。

常用培养基及基本特性

常用培养基及基本特性1、RPMI-1640MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。

主要用于悬浮细胞培养。

其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。

成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。

MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。

3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。

适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。

低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。

F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM 以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。

该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。

为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。

16、McCoy’s5A9McCoy’s5A Medium主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。

RPMI 1640培养基的配方与应用

RPMI 1640培养基的配方与应用RPMI 1640培养基是一种常见的细胞培养基，广泛应用于生物学研究、医学诊断和药物筛选等领域。

该培养基在维持细胞生长和增殖方面具有很强的稳定性和普适性，使其成为细胞培养中不可或缺的一部分。

1. RPMI 1640培养基的配方RPMI 1640培养基的主要成分包括以下几个方面：碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等。

其中碳源通常采用葡萄糖，作为细胞能量代谢和营养物质来源。

氮源则包括多种氨基酸和蛋白质物质，为细胞提供合成DNA和蛋白质所需的原料。

无机盐包括钾、钠、钙、镁、铁等元素，维持细胞的体内环境平衡。

维生素和生长因子则为细胞提供必要的营养物质，促进细胞增殖和生长。

RPMI 1640培养基的具体配方如下：- 碳源：6100mg/L 葡萄糖；- 氮源：2000mg/L L-谷氨酰胺、1500mg/L 显微酰胺；- 无机盐：350mg/L NaHCO3、290mg/L CaCl2、400mg/L KCl、125mg/L MgSO4、80mg/L Na2HPO4、10mg/L KH2PO4、25mg/L NaCl、1mg/L FeSO4；- 维生素：1mg/L 维生素B12、1mg/L 叶酸、5mg/L 泛酸、5mg/L 烟酸、1mg/L 氯化胆碱、1mg/L 氯化钴、1mg/L 氯化铜、1mg/L 氯化锰、1mg/L 氯化锌；- 生长因子：1mg/L 胰岛素、1mg/L 转铁蛋白、10mg/L 氨基酸、10mg/L 谷氨酸、0.25mg/L 胆汁酸。

2. RPMI 1640培养基的应用RPMI 1640培养基在生物医学领域中被广泛应用，具有以下几个方面的应用：2.1 细胞培养RPMI 1640培养基是一种常用的细胞培养基，许多细胞系如淋巴细胞、人类淋巴瘤细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞等都可以在该培养基中得到良好的生长和增殖。

因为RPMI 1640培养基的成份比较全面，适合大多数细胞生长，所以被广泛地用于细胞培养中。

细胞培养基大全

细胞培养基⼤全⼀、细胞培养基的概念和原理细胞培养基是⼈⼯模拟细胞在体内⽣长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞⽣长增殖的物质基础。

培养液或培养基的含义⼏乎相同，英⽂都是medium。

当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，⽽将粉剂配成液体后，多称为培养液。

培养液中常常补加⾎清、抗⽣素等成分。

培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和⽆⾎清细胞培养基等。

天然细胞培养基是⼈们早期采⽤的细胞培养基，直接取⾃于动物组织提取液或体液，如⾎浆凝块、⾎清、淋巴液、胚胎浸出液等。

营养价值⾼，但成分复杂，差异⼤、不稳定，来源也受到限制。

⽔解乳蛋⽩和胶原是两种较好的天然培养基，富含氨基酸。

⾎清是天然培养基中最有效和最常⽤的培养基，但其组成成分复杂，其中⼀些成分与功能不明确。

⾎清的来源有胎⽜⾎清、⼩⽜或成⽜⾎清、马⾎清、鸡⾎清、⽺⾎清及⼈⾎清，最⼴泛应⽤的为胎⽜⾎清和⼩⽜⾎清。

合成细胞培养基是⽤化学成分明确的试剂配制的培养基，组分稳定，主要包括糖类、必需氨基酸、维⽣素、⽆机盐类等。

⾃1950 年199 细胞培养基问世以来，合成细胞培养基发展⾄今已有⼏⼗种，除了沿⽤半个世纪的基础合成细胞培养基之外，近年来还出现了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基。

由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常⽤基础细胞培养基有6～7 种，如BME、MEM、DMEM、HAM F12、PRMI1640、199 等。

由于天然培养基的⼀些营养成分不能被合成细胞培养基完全代替，因此⼀般需在合成细胞培养基中添加5％～10％的⼩⽜⾎清。

⼩⽜⾎清的加⼊对细胞培养⾮常有效，但⼩⽜⾎清的成分复杂，这对培养产物的分离纯化和检测会带来⼀定的不便，为减少⼩⽜⾎清的影响，开发了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基，可以将⼩⽜⾎清的使⽤量降低到1～3％。

⽆⾎清细胞培养基（serum free medium， SFM）是指在使⽤中⽆需添加⾎清的细胞培养基，且其组成成分不含有任何动物组分。

常用细胞培养基配方及缓冲液

常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。

细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。

同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。

下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。

3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。

4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。

6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。

17细胞系培养方法

17细胞系培养方法
1.细胞系的选择：在进行细胞系培养前，需要选择合适的细胞系。

常见的细胞系包括HeLa细胞、HEK293细胞、CHO细胞等。

2. 培养基的选择：根据不同的细胞系，选择合适的培养基。

常用的培养基包括DMEM、RPMI 1640、MEM等。

3. 细胞种植密度的确定：不同的细胞系对种植密度有不同的要求。

一般来说，种植密度过高会导致细胞过度生长，种植密度过低则会导致细胞生长缓慢。

4. 细胞的传代：当细胞种植密度达到一定程度时，需要将细胞分为若干等份进行传代。

传代的目的是保持细胞的生长状态和避免细胞突变。

5. 细胞培养条件的控制：细胞培养需要在一定的环境条件下进行。

这包括温度、湿度、CO2浓度等的控制。

6. 细胞的冻存和解冻：当需要长期保存细胞时，可以将细胞冻存。

在需要使用时，可以将细胞解冻后进行培养。

7. 细胞的检测：在进行细胞培养的过程中，需要对细胞进行定期的检测，以确保细胞的纯度和健康状态。

8. 细胞的应用：不同的细胞系可以用于不同的实验和应用中，包括细胞毒性测试、药物筛选、疫苗研制等。

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常见的植物组织培养基各类及其特点

常见的植物组织培养基各类及其特点
植物组织培养
教材研究：教材中的植物组织培养的培养基提到的只有MS培养基，其实，植物组织培养基还有其它种类，它们各⾃有不同的作⽤。

1．MS培养基
为Murashige和Skoog缩写，⼆⼈于1962年为培养烟草细胞⽽设计的。

特点：是⽆机盐离⼦浓度较⾼，硝酸盐较⾼，为较稳定的平衡溶液。

适⽤：⼴泛地⽤于植物的器官、花药、细胞和原⽣质体培养，效果良好。

2．B5培养基
是1968年由GamBorg等为培养⼤⾖根细胞⽽设计的。

特点：含有较低的铵，这可能对不少培养物的⽣长有抑制作⽤。

适⽤：如双⼦叶植物特别是其中的⽊本植物。

3．White培养基
是1943年由Ｗhite为培养番茄根尖⽽设计的。

1963年⼜作了改良，称作White改良培养基，提⾼了MgSO4 的浓度和增加了硼素。

特点：⽆机盐数量较低，KNO3，MgSO4·7H2O，CuSO4·5H2O，　MnSO4 ·H2O，KI，烟酸（Vpp），盐酸吡哆醇（VB6），盐酸硫胺素（VB1）。

适⽤：⽣根培养。

4．N6培养基
是1974年朱⾄清等为⽔稻等⽲⾕类作物花药培养⽽设计的。

特点：成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量⾼。

适⽤：⼴泛应⽤于⼩麦、⽔稻及其它植物的花药培养等。

5．KM－8P培养基
它是1974年为原⽣质体培养⽽设计的。

特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维⽣素。

适⽤：原⽣质融合的培养。

细胞培养相关知识点

细胞培养相关知识点
细胞培养是指将细胞从体内或体外来源中采集到培养基中，通过提供合适的营养物质和环境条件使其在体外无限制地生长和繁殖的一种生物学实验技术。

常见的细胞培养技术包括原代细胞培养和细胞系培养。

1. 培养基：细胞培养中使用的培养基是包含多种营养物质的液体或固体培养基。

常见的培养基种类包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，并根据细胞的类型和特殊需要进行相应的改制。

2. 细胞分离：通过一系列的操作将组织中的细胞分离出来，常用的方法有机械剪切、酶消化和离心等。

3. 细胞传代：细胞的传代是指将细胞从旧的培养皿中转移到新的培养皿中，以保持细胞的生长状态和增殖能力。

细胞传代的方法有裂解法、胶原酶法和选择性黏附法等。

4. 培养条件：细胞的生长需要适宜的温度、湿度、pH值和气体环境。

常见的培养条件为37℃、5% CO2和95%湿度。

5. 防止细胞污染：细胞培养中常见的污染源有细菌、真菌和支原体等。

常用的防止污染的方法包括消毒培养器具和介质、使用无菌操作等。

6. 细胞检测：常用的检测方法包括细胞形态观察、细胞数量计
数、细胞活力测定、染色体核型分析和细胞分化等。

7. 细胞培养的应用：细胞培养技术在生物医学研究中有广泛的应用，如药物筛选、疾病模型建立、组织工程和基因工程等。

注：以上所列举的知识点为细胞培养的基本内容，具体的细胞培养操作方法和技巧可根据具体实验需求和细胞类型进行进一步学习。

细胞培养中常用到哪些培养基

细胞培养中常用到哪些培养基1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特别造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培育，是目前应用非常广泛的培育基。

主要用于悬浮细胞培育。

其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。

2、Minimum Essential Medium（MEM）也称低必需培育基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。

成分简洁，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培育。

MEM-Alpha一般用于培育一些难培育细胞类型，而其它没有特别之处的细胞株则几乎均可采纳MEM来培育。

3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用非常广泛的培育基，可用于很多哺乳动物细胞培育,更适合高密度悬浮细胞培育。

适用于附着性较差，但又不盼望它脱离原来生长点的克隆培育，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培育。

4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用非常广泛的培育基，可用于很多哺乳动物细胞培育。

低糖适于依靠性贴壁细胞培育，特殊适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培育。

5、DMEM/F12DMEM/F12培育基适于克隆密度的培育。

F12培育基成分简单，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培育基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的养分成分为优点。

该培育基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培育。

为了增加该培育基的缓冲力量，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。

6、McCoy’sMcCoy’s Medium 主要为肉瘤细胞的培育所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培育外，主要用于作组织活检培育、一些淋巴细胞培育以及一些难培育细胞的生长支持。

raw细胞培养方法

raw细胞培养方法细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，它允许研究人员在控制条件下观察和研究细胞的生长、增殖、分化以及与环境之间的相互作用。

在细胞培养中，raw细胞是常用的细胞系之一。

本文将介绍raw细胞培养的方法，包括准备培养基和培养器具、细胞的分离和传代，以及培养条件的控制等。

一、准备培养基和培养器具1.1 选择适合raw细胞培养的细胞培养基。

在raw细胞培养中，常用的培养基包括DMEM（Dulbecco最小培养基）、RPMI 1640（Roswell Park细胞文化基）、FBS（胎牛血清）等。

根据实验需求，可以添加适量的抗生素如青霉素和链霉素等来防止细菌污染。

1.2 准备培养器具。

培养器具包括培养皿、培养瓶、离心管、培养箱等。

这些器具必须经过高温高压灭菌处理，以确保无菌状态。

二、细胞的分离和传代2.1 准备细胞原料。

选择合适的动物（如小鼠）进行实验，将其牺牲并收集组织样本（如脾脏、肾脏等）。

将组织样本放入含有消化酶（如胰蛋白酶）和酶解缓冲液（如PBS）的离心管中，进行组织分离。

2.2 细胞的分离。

将组织分离液通过过滤网筛除多余的细胞块和组织残渣。

再利用无菌注射器将细胞分离液吸入离心管中，在低速离心下将细胞沉淀。

2.3 细胞的传代。

通过显微镜观察细胞密度和活力，根据需求调整培养基中细胞的密度。

将细胞悬液分装到新的培养器具中，添加新鲜的培养基，进而使细胞继续增殖生长。

三、培养条件的控制3.1 培养温度和湿度的控制。

对于raw细胞的培养，通常在37摄氏度和5%二氧化碳气氛下进行。

可以通过培养箱、CO2孵化器等仪器设备来控制培养温度和湿度。

3.2 培养基的更换和补充。

细胞在培养基中不断耗用营养物质，同时释放代谢产物。

为了保证细胞的生长和增殖，必须定期更换培养基，并添加适量的胎牛血清、细胞因子等营养物质。

3.3 细胞的监测和形态观察。

在培养过程中，需要对细胞的形态和状态进行监测。

利用显微镜观察细胞的形状、大小、颜色等变化，及时评估细胞的健康状况。

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识

尽管很多实验室在细胞系的培养基中常规加入抗生素作继代培养，但仍建议不要在原代培养中加入抗生素，其理由之一是获得的细胞是无菌的，原代培养时的细菌污染很少发生。其次，尽管认为抗生素对细胞代谢的影响可忽略，但最好避免使用它们，以免细胞生长环境的不稳定。最重要的是要意识到培养中主要污染物的类型，它们通常暗示了问题的来源。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
四、抗生素
在细胞培养中最常用的抗生素是青霉素（常用浓度是25~100ui/ml）与链霉素（25~100μg/ml）。这两种抗生素常混合使用。在一些实验室里，它们常规加入所有的培养基中。庆大霉素（10~100μg/ml）通常有广谱抗菌效应，并具有溶液稳定性，故也被一些实验室使用，特别是当有低水平的污染存在时更是这样。以上这些试剂对霉菌与酵母菌的污染均无效。
五、抗有丝分裂剂
某些DNA合成抑制剂对分裂细胞有毒，但对没有DNA合成的细胞仅有轻微影响。由于神经元通常缺乏DNA合成能力，因此对抗有丝分裂剂没有多大反应。这样的试剂常常用于神经元的培养，以消除或减少非神经元群体。若要杀死所有的非神经元细胞，可以先加入血清或生长因子来保证有高比例的非神经元细胞进行DNA合成，此时再加入抗有丝分裂剂。但是，某些细胞在它的细胞周期的某些时相时对抗有丝分裂剂是不敏感的。不过，可以重复的将抗有丝分裂剂使用于增殖的细胞群体。在CNS神经元的培养中抗有丝分裂剂常常在星形细胞形成单层后加入，此时，星形细胞由于接触抑制而终止了DNA的合成（即细胞停止增殖），它们不会因抗有丝分裂剂的加入而死亡。原代培养中用这种方法阻止成纤维细胞的过度增殖是十分必要的。有两种抗有丝分裂剂常用于神经元的培养：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑制剂，一般使用浓度为～10μM。尿苷（10μM）也常使用，可阻止不分裂细胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用浓度为5～50μM。使用任何一种抗有丝分裂剂，都必须考虑它的神经原毒性，应该确定最低效应的使用浓度。阿糖胞苷在很低的浓度下，也会对某些种类的神经元有毒性，可以造成特定神经原的死亡。其他的抗有丝分裂剂尚未表现出这种毒性。

构建细胞系的原理

构建细胞系的原理
细胞系是指从原始细胞中一次性分离出来的、具有相同遗传特征的细胞群体。

构建细胞系是细胞生物学和生物医学领域中非常重要的一项技术，其原理主要包括以下几点：
1. 细胞培养基的配制：构建细胞系的第一步是选择合适的细胞培养基，并按照一定比例配制好培养基。

常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640等，这些培养基中含有细胞所需的营养物质、生长因子和激素等。

2. 细胞分离和传代：将原始细胞分离出来并传代，是构建细胞系的核心步骤。

分离细胞的方法有机械分离、胰蛋白酶消化、胶原酶消化等。

传代的过程是通过将细胞从原来的培养瓶中剥离，并重新放入新的培养瓶中，使其继续生长分裂，达到扩增细胞数量的目的。

3. 细胞的鉴定和纯化：在构建细胞系的过程中，需要对细胞进行鉴定和纯化，以确保细胞具有相同的遗传特征和生物学性质。

鉴定细胞的方法包括细胞形态学观察、酶标记和流式细胞术等。

4. 冻存和复苏：为了保证构建的细胞系能够长期保存和使用，需要将其冻存并进行复苏。

冻存细胞的方法包括DMSO冻存液法、甘露醇冻存液法等，复苏的方法则是将冻存细胞加入到新的培养瓶中，并添加适当的培养基，使其重新生长。

总之，构建细胞系是一项复杂的过程，需要仔细把握各个步骤，并在每个环节中严格控制操作条件，才能构建出稳定、可靠的细胞系。

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