生物化学实验的基本操作
生物化学的基本操作与血清尿素测定实验报告
生物化学的基本操作与血清尿素测定实验报告
一、实验原理：
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的二甲基氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。
因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰与强酸作用产生二乙酰。
二、实验试剂：
1、酸性试剂：在三角烧瓶中加去离子水约100ml，然后加入浓硫酸
44ml、85%磷酸66ml。
冷至室温，加入氨基硫脲50mg及硫酸镉2g，溶解后用去离子水稀释至IL。
置棕色瓶中，4℃可保存半年。
三、基本操作及注意事项：
1、试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，（每小时小于5%）。
煮沸显色经冷却后，应及时比色。
2、尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。
四、评价：
1、本法试剂单一，方法简便，但试剂毒性和腐蚀性。
在标本数量多时加热开始难以达到100℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。
生物化学实验原理和步骤
⑴1％盐酸溶液 ⑵30％硫酸锌溶液。 ⑶15％亚铁氰化钾溶液。
四、实验步骤
1.样品的处理 在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入
50ml 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热 15min→先加1ml 30% ZnSO4混匀→再加1ml 15%亚铁氰 化钾混匀→移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去 最初15ml收集其余滤液。 2.旋光度测定
五、结果计算
β-淀粉酶活力＝（α＋β）淀粉酶总活力－α-淀 粉酶活力
六、附 注
❖ 1．样品提取液的定容体积和酶液稀释倍数可根据不同材 料酶活性的大小而定。
❖ 2．为了确保酶促反应时间的准确性，在进行保温这一步 骤时，可以将各试管每隔一定时间依次放入恒温水浴，准 确记录时间，到达5min时取出试管，立即加入3,5-二硝基 水杨酸以终止酶反应，以便尽量减小因各试管保温时间不 同而引起的误差。同时恒温水浴温度变化应不超过 ±0.5℃。
❖ 3．如果条件允许，各实验小组可采用不同材料，例如萌 发1d、2d、3d、4d的小麦种子，比较测定结果，以了解 萌发过程中这两种淀粉酶活性的变化。
七、思考题
❖ 1．为什么要将试管中的淀粉酶原液置70℃水浴中 保温15min？
❖ 2．为什么要将各试管中的淀粉酶原液和1%淀粉 溶液分别置于40℃水浴中保温？
实验四 淀粉酶活力测定
一、实验目的
学习和掌握测定淀粉酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）活力 的原理和方法。
二、实验原理
淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可机 作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽 三糖、糊精等还原糖 ， β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进 行水解， 生 成 麦芽糖。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使 3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸 。
生物化学实验基本操作
生物化学实验基本操作在生物化学研究中，实验操作是非常关键和基础的环节。
正确的实验操作能够确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍生物化学实验的基本操作步骤，以及注意事项和常见错误，旨在帮助读者进行高质量的实验。
1. 实验室准备实验前需要充分准备实验室和实验设备。
确保实验室环境整洁，无杂物和污染物。
检查实验设备的完整性和正常运行状态，如酶标仪、离心机、超低温冰箱等。
检查试剂的标签和耐期，确保试剂无污染、完整密封。
准备所需的试剂和溶液，按照实验要求正确称量和稀释。
2. 安全措施生物化学实验涉及到一些有害物质和有毒试剂，因此必须采取相应的安全措施。
佩戴实验手套、眼镜和口罩，避免直接接触化学物质。
对于具有刺激性和致敏性的试剂，应采取适当的通风和排放措施。
在实验操作过程中，注意实验室的安全出口和紧急出口，以应对突发情况。
3. 实验记录实验过程中的记录是非常重要的部分，确保实验结果的可靠性和重复性。
在实验前，准备好实验记录表格，包括实验步骤、试剂使用量、反应时间和实验结果等。
实验过程中，实验人员应及时、准确地记录各项数据和观察结果，不漏一步、一项。
同时，注意记录实验中的异常情况和发现的问题。
4. 实验步骤生物化学实验的步骤根据具体实验目的和方法而定，但一般包括样品处理、试剂制备、反应或分离、结果检测等。
在进行每一步操作之前，确保实验器材和试剂已经准备好，操作空间整洁无杂质。
按照实验步骤的要求依次进行操作，注意操作的顺序和时间控制。
严格按照实验方法和条件要求操作，避免人为因素对实验结果的影响。
5. 清洁和废弃物处理实验完成后，要及时清洁实验器材和实验台面，避免试剂残留和交叉污染。
使用正规的清洗剂和方法进行清洗，定期对实验室进行无菌处理和消毒。
对于废液和废弃物的处理，要按照实验室的规定和环保要求进行集中收集、处理和处置。
总之，生物化学实验的基本操作包括实验室准备、安全措施、实验记录、实验步骤和清洁处理等环节。
生物化学实验基本操作-实验报告
生物化学实验基本操作一、实验目的1、熟悉化学类实验室的基本常识、规则、安全及防护知识。
2、掌握基本实验操作及常用仪器的使用方法。
3、通过实际操作，进一步掌握理论知识，能独立完成真个实验的设计、操作及计算。
二、实验仪器与试剂1、实验器材仪器名称型号厂家PH计Sartorius PB-10干燥箱101EXB-3型电热鼓风干燥箱上海树立仪器仪表有限公司酶标仪DNM-9602酶标分析仪北京普朗新技术有限公司2、实验试剂试剂名称生产厂家生产批号质量（g）Na2HPO4北京化工厂201007017.16NaH2PO4北京益利精细化学品有限公司20110313 3.12NaCl天津市塘沽化学试剂厂850328 0.9BCA蛋白定量试剂盒北京普利莱基因技术有限公001107三、实验内容（一）蛋白质的定量测定1、实验原理Bicinchoninic acid (BCA)法是近来广为应用的蛋白质测定方法。
即在碱性环境下，蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值，并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
2、实验方法（1）、工作溶液（Working Reagent,WR）的配制：将50体积BCA Reagent 与1体积Cu Reagent 混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色。
（2）、标准蛋白溶液配制：用双蒸水与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释：40μl 4000μg/ml BSA+60μl 稀释溶液（H2O）=100μl（BSA=1600μg/ml）,从中取出50μl连续倍比稀释，得到BSA标准溶液1600、800、400、200、100、50、25μg/ml,各50μl。
（3）、蛋白测定蛋白质浓度线性检测范围为10-2000μg/ml。
微板测定用96孔板，反应终体积225μl，用酶标仪测定。
a.微板测定：用加样器将25μl标准品与200μl WR工作液混合于微板孔中。
生物化学实验指导1
生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。
留长发的同学应挽短、戴帽。
2. 整洁。
实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。
实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。
3. 安静。
实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。
4. 废物及废液处理。
实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。
但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。
少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。
火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。
5. 试剂与标准溶液。
取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。
取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。
取样时，应注意用多少取多少。
如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。
7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。
调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。
8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。
如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。
9. 防火。
勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。
若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。
10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。
实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。
生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。
实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。
例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。
一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。
因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。
如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
动物生物化学实验教程正式
动物生物化学实验教程正式实验一血清蛋白质含量测定牛血清蛋白：BSA。
血浆：指血液的液体成分，淡黄色（因含胆红素）。
含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。
血液经抗凝处理、离心沉淀后，获得的液体部分。
血清：血液凝固后，释出的液体。
不含纤维蛋白原及游离钙离子。
蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。
蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一，其种类繁多、结构多样、功能各异，而且分子量相差很大，所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。
目前测定蛋白质含量的方法很多，常用的测定方法有Folin—酚法（Lowry法）、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等，每种方法在实践中都有其优点和局限性。
本实验采用考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）。
(灵敏度最高)一、实验目的1．掌握分光光度法测定的原理，分光光度计的结构和基本操作要点（光源-单色器-样品室-检测器-显示器）2．掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法3．掌握微量移液器的使用方法4．了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法二、实验原理染料考马斯亮蓝G-250（R250，结合后可以解离）在游离状态下呈红色，最大吸收峰为465nm。
它能与蛋白质的疏水微区结合，形成蓝色复合物，该复合物的最大吸收峰为595nm，在一定浓度范围内（为什么在一定范围内），其吸光度值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量的测定。
三、实验操作步骤表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量试管号稀释的血清样品（mL）0.9%NaCl溶液（mL）考马斯亮蓝G-250溶液（mL）空白管-0.15样品管0.1-5室温静置5min，于波长595nm处，以空白管调“0”，测定样品管的吸光度值，查标准曲线，吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量，然后乘以血清的稀释倍数（10倍），可得血清中蛋白质的含量。
四、实验试剂1．考马斯亮蓝G-250溶液（0.01%）：称取考马斯亮蓝G-250100mg，溶于50mL95%乙醇中，再加入100mL85%(W/V)浓磷酸，然后用蒸馏水定容至1000mL，置棕色瓶过夜（如有不容物，可用二层滤纸过滤）。
生化实验的基本操作
生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。
配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。
2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。
3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。
不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。
4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。
5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。
倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。
6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。
7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。
手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。
还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。
8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。
9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。
一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。
10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。
（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。
2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。
而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。
滤纸越致密，过滤就越慢。
3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。
沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。
最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。
4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。
折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。
放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。
撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。
生物化学实验的基本操作
一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。
最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。
2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。
若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。
在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。
因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。
生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。
其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。
重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。
因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。
由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。
洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。
（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。
（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。
（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。
（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。
玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。
生化实验基本操作要求
实验数据的记录：准确、完整、清晰、及时
数据处理结果：确保数据的准确性和可靠性
数据处理报告：撰写数据处理报告包括数据处理方法、结果、结论等
数据处理：使用专业软件进行数据处理和分析
实验结果分析和报告撰写
PRT FIVE
实验结果的分析方法
结果比较：将实验结果与预期结果进行比较分析差异原因
审阅结果：通过、修改后通过、不通过等
评价标准：科学性、准确性、完整性、创新性等
实验质量的保证和提高
PRT SIX
实验误差的分析和控制
实验误差的来源：仪比实验等方式进行评估
实验误差的控制：选择高精度仪器、规范操作流程、控制实验环境等
实验误差的修正：通过统计方法进行修正如线性回归、最小二乘法等
实验器材的准备和使用
实验器材的种类：包括试管、烧杯、滴定管、离心管等
实验器材的规格：根据实验需求选择合适的规格
实验器材的清洁：使用前应进行清洁和消毒
实验器材的使用：按照操作规程正确使用实验器材避免损坏和污染
试剂的配制和储存
试剂配制：按照实验要求准确称量、溶解、混合等步骤
试剂储存：根据试剂性质选择合适的储存条件如温度、湿度、避光等
结论总结：根据实验结果和比较分析得出结论并撰写报告
观察实验现象：记录实验过程中的现象和变化
数据处理：对实验数据进行整理、分析和解释
实验报告的撰写规范和要求
实验目的：明确实验的目的和意义
格式要求：按照规定的格式要求撰写实验报告包括字体、字号、页边距等
参考文献：列出参考的文献和资料包括书籍、期刊、网络资源等
实验环境控制：保持实验室清洁避免污染确保实验设备正常运行
实验操作步骤和要点
临床生物化学检验实验指导(医学检验技术专业48学时)
《临床生物化学和生物化学检验》实验指导前言实验教学作为基础医学教学中的一项重要内容，在培养学生分析问题、解决问题及动手能力等方面发挥着十分重要的作用。
临床生物化学检验实验教学是临床生物化学检验课程的重要组成部分，本教研室根据中医本科专业的特点，并依据《临床生物化学检验》实验大纲要求，结合多年的教学实践，组织编写了《临床生物化学和生物化学检验》实验指导。
本实验指导内容共12项实验。
每项实验包括实验目的、实验原理、实验内容（材料、方法、结果分析及注意事项）等项目，同时后附思考题，以供学生独立思考、加深理解。
实验学时：48学时实验一基本操作（综合性实验，4学时）【实验目的】1.掌握移液管、微量加样器正确使用方法。
2.掌握721分光光度计的正确使用方法及简单维护3.熟悉试验结束后试管、移液管的清洗方式【实验仪器、器材与试剂】1.实验仪器和器材：721分光光度计、玻璃试管、微量加样器、移液管、试管架、洗耳球、记号笔等。
2.实验试剂：蒸馏水、生理盐水等。
【实验项目、方法与步骤】1、微量移液器使用（1）根据取用溶液体积选用适当量程的微量移液器a)P20 2 ~ 20b)P200 21 ~ 200c)P1000 201 ~ 1,000（2）容量设定从大值调整到小值时，刚好即可。
从小值调整到大值时，需要调超过三分之一圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。
不要将按钮旋出量程，这将导致移液器损坏。
（3）吸液头安装正确的安装方法是：把白套筒顶端插入吸液头，在轻轻用力下压的同时，把移液器按逆时针方向旋转180度。
切记用力不能过猛，更不能采取剁吸液头的方法来进行安装，那样做会对移液器造成不必要的损伤。
（4）预洗吸液头安装了新的吸液头或增大了容量值以后，应把需要转移的液体吸取、排放两到三次。
这样做是为了让吸液头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使移液过程具有重现性。
（5）吸液先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸液头垂直浸入液面。
生物化学实验-实验的基本操作及要求
实验器材的干燥
实验前确保所有实验器材都已彻底干 燥，以防止实验过程中出现意外。
实验试剂的准备
01
02
03
试剂的储存
根据试剂的特性选择合适 的储存方式，确保试剂稳 定且有效。
试剂的配制
按照实验要求准确配制试 剂，并记录详细的配制过 程和结果。
试剂的纯度与质量
确保所使用的试剂纯度高、 质量好，以获得准确的实 验结果。
实验环境的准备
实验室安全
确保实验室具备必要的安全设施，如灭火器、急救箱等。
实验室清洁
保持实验室整洁，定期清理和消毒实验台面和地面。
实验室温度和湿度的调节
根据实验需求，调节实验室温度和湿度，以确实验条件的一致性。
02
实验操作
实验操作流程
实验前准备
明确实验目的、原理和步 骤，准备好所需的仪器、 试剂和材料。
实验结果交流与讨论
小组讨论
在实验结束后，组织小 组讨论，分享实验结果 和心得体会，促进相互 学习。
学术交流会议
参加学术交流会议，向 同行展示自己的实验结 果，听取他人的意见和 建议。
论文发表
将实验结果整理成学术 论文，发表在学术期刊 上，供同行参考和评价。
实验结果的应用与推广
实际应用
将具有实际应用价值的实验结果应用于生产 实践或解决实际问题。
03
实验要求
实验结果的要求
准确性
实验结果应准确反映实验过程和 现象，数据应真实可靠，误差在
可接受范围内。
重复性
实验结果应可重复，即相同条件 下，其他人或团队应能得出相同
的结果。
可比性
不同实验之间的结果应具有可比 性，以便进行比较和分析。
实验报告的要求
基础生物化学实验报告
一、实验目的1. 掌握基础生物化学实验的基本操作技能。
2. 了解生物大分子的性质和结构。
3. 培养严谨的科学态度和实验习惯。
二、实验原理生物大分子是生物体内重要的组成部分，主要包括蛋白质、核酸、多糖等。
本实验通过观察和比较不同生物大分子的性质和结构，加深对生物大分子的认识。
三、实验器材与试剂1. 器材：显微镜、离心机、电泳仪、紫外可见分光光度计、紫外灯、移液器、吸管、烧杯、试管等。
2. 试剂：蛋白质、核酸、多糖样品，生理盐水，染色剂，缓冲液等。
四、实验步骤1. 蛋白质鉴定实验（1）观察蛋白质样品的外观，记录颜色、形态等特征。
（2）用生理盐水制备蛋白质溶液，记录浓度。
（3）观察蛋白质溶液的透明度，记录是否出现浑浊现象。
（4）将蛋白质溶液滴加到试管中，加入染色剂，观察颜色变化。
2. 核酸鉴定实验（1）观察核酸样品的外观，记录颜色、形态等特征。
（2）用生理盐水制备核酸溶液，记录浓度。
（3）观察核酸溶液的透明度，记录是否出现浑浊现象。
（4）将核酸溶液滴加到试管中，加入染色剂，观察颜色变化。
3. 多糖鉴定实验（1）观察多糖样品的外观，记录颜色、形态等特征。
（2）用生理盐水制备多糖溶液，记录浓度。
（3）观察多糖溶液的透明度，记录是否出现浑浊现象。
（4）将多糖溶液滴加到试管中，加入染色剂，观察颜色变化。
4. 蛋白质、核酸、多糖分离实验（1）将蛋白质、核酸、多糖样品分别加入离心管中，加入适量缓冲液。
（2）用离心机进行离心，观察沉淀和上清液的颜色变化。
（3）用紫外可见分光光度计测定沉淀和上清液的吸光度，计算浓度。
五、实验结果与分析1. 蛋白质鉴定实验结果蛋白质样品呈现白色固体，加入染色剂后变为红色，说明蛋白质具有染色特性。
2. 核酸鉴定实验结果核酸样品呈现白色固体，加入染色剂后变为蓝色，说明核酸具有染色特性。
3. 多糖鉴定实验结果多糖样品呈现白色固体，加入染色剂后变为红色，说明多糖具有染色特性。
4. 蛋白质、核酸、多糖分离实验结果蛋白质、核酸、多糖在离心过程中分别沉淀和溶解，说明它们在溶液中的溶解度不同。
生物化学实验操作手册(生物科学专为业)
总论21世纪是生命科学的世纪,生物化学与分子生物学是当代生命科学领域中一门重要的基础学科,它涵盖的基础理论,基本知识,基本技术与医学研究各学科领域密切相关,其理论与技术的发展,推动了生命科学的发展,对人类的科技进步与文明产生巨大影响。
生物化学实验是医学院校学生必修的一门独立的基础实验技术课程，其研究技术的发展与应用是依据物理学、化学及生物学的基本理论和实验方法而建立起来的。
20世纪20年代微量分析的发展，30年代电子显微镜的出现，40年代层析技术和电泳技术的兴起，以及同位素示踪技术、各种光谱技术、核磁共振技术的应用，激光、超导等新技术的出现，电子计算机技术的突飞猛进，使生物化学实验手段提高到一个崭新的水平，掌握生物化学实验方法和研究技术，对医学院校学生来说是十分重要的。
本门课程主要侧重于给学生以基本的实验方法和技能的训练，让学生了解并掌握生物化学的四大基本实验方法，即：分光光度法、离心法、层析法和电泳法。
同时也注意引进一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究技术，作为学生学习其他专业课程和进入科学研究领域的准备。
一、实验要求1．实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果，操作关键步骤及注意事项。
2．实验时要严肃认真专心进行操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果，结果不良时，必须重做。
3．实验中，应及时将实验结果如实记录下来，并请老师当场审核。
根据实验结果进行科学分析，按时将实验报告交教师评阅。
二、实验时注意事项1．进实验室要穿好实验服，以免酸碱腐蚀衣服。
2．进实验室前准备好实验指导、课本、笔记、实验记录本、报告本、文具等。
3．要保持实验台整洁，试剂、仪器应整齐,按次序放置。
实验完毕要按各类仪器的清洗方法和要求将仪器清洗干净。
4．实验室是培养学生独立思考、独立工作能力及良好科学作风的重要场所，操作务必认真不得敷衍，室内应保持肃静，不得吸烟、玩闹，不得随地吐痰，乱丢纸屑。
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一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。
最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。
2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。
若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。
在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。
因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。
生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。
其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。
重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。
因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。
由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。
洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。
（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。
（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。
（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。
（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。
玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。
一般地说洗净后的玻璃仪器，如不急用应倒放在晾架上令其自然干燥。
若有急用可放在烘烤箱中烤干，但容量玻璃仪器，如容量瓶、吸量管、滴定管以及烧结、结构复杂的玻璃仪器等，严禁烘烤。
此类仪器，如急用可采用水泵抽气法干燥。
（二）常用玻璃仪器的使用1、吸量管：吸量管是用来测量一定容积的液体，并把它从一个器皿转移至另一个器皿中的量器。
常用的吸量管有以下几种：（1）刻度吸量管：刻度吸量管是多刻度吸量管，有0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0毫升等规格。
吸量管刻度所标的数字有自上而下和自下而上两种，使用之前应仔细分辨。
实验室所用之刻度吸管多属于刻度到尖端的吸管，所以要吹出尖端留存的液体。
（2）奥氏吸管：在量取粘度较大的液体如血液、血清等时，应当使用奥氏吸管。
这种吸管也是单标的，并且在其下端有一个膨大部分。
所以液体与吸管表面接触面积较小，当量取血液时，较他种吸管准确。
奥氏吸管的容量包括遗留在尖端的液体，故在缓缓使液体流出后，再停留数秒钟，吹出最后一滴。
在学生实验中常用的有1、2、5毫升等规格。
吸量管使用法：使用吸量管时，用拇指和中指靠近顶端部分。
将管的下端插入液体里，用吸球吸入液体至需要刻度的标线上1~2厘米处（插入液面下的部分不可太深，以免管的外壁沾附的溶液太多；也不可太浅，防止空气突然进入管内，将溶液吸入吸球内），将已充满液体的吸量管提出液面，用小片滤纸揩去管外沾附的溶液，把吸管提到与眼睛在同一水平线上。
然后小心松开上口，按所需要液体容积缓缓自由流出。
最后再根据规定吹出或者不吹出尖端的一滴。
（3）微量加样器2、容量瓶及量筒：容量瓶是一个细长颈梨形的平底瓶，具有磨口塞，颈上有标线，表示在所示温度下（一般为20℃）当液体充满到标线时，液体体积恰好与瓶下所注明的体积相等。
容量瓶有10、25、50、100、200、250、500、1000、2000毫升等规格。
容量瓶是装量型的定量容器，多用作稀释溶液或配制精确试剂。
当将液体加至刻度后须用瓶塞塞好，颠倒混匀数次方可使用。
容量瓶是较精确的定量容器，不得直接加热或烘烤，也不应将盛有溶液的容量瓶放入冰箱内。
当配制溶液需要加热促其溶解时，必须在烧杯中加热溶解，并待溶液达到室温后，再定量地转入容量瓶内，然后稀释到刻度，并要注意摇匀。
当所量取的液体量要求不十分准确时，可使用量筒，因其较使用吸管或量瓶更为简便，量筒之底座及筒身是焊接一起的，因而不能量取过热液体，更不能直接加热，以防炸裂。
3、滴定管：滴定管是供容量分析滴定之用，有带玻塞及橡皮管的两种类型。
前者用以量酸，后者用以量碱。
滴定管有刻度较精细的微量滴定管，有1.0、2.0、5.0、10毫升等规格。
还有25、50、100毫升等规格的常量滴定管。
使用滴定管应该注意以下事项：（1）检查是否清洁干燥，是否漏水，玻塞是否滑润，如有漏水或转动不灵，应拆下活塞重新涂抹凡士林。
涂抹前要将玻塞擦干，用手指沾少量凡士林在活塞两头各擦一薄层，将活塞插入槽内，然后向同一方向转动活塞，直到从外面看时，全部透明为止。
油涂好后，在活塞的小头的槽上套一橡皮圈，以防活塞滑脱。
（2）使用前必须认出每一格表示多少毫升。
先用少量滴定液清洗滴定管2~3次，然后方可装液。
装液体后，管内如有气泡必须排出。
（3）滴定前先应读取起始点。
滴定时，左手控制玻塞，右手持瓶，边滴边摇，密切注意被滴定溶液的颜色变化。
（4）装置滴定管时，管身必须与地面垂直。
读数时眼睛与溶液月形面下缘在同一水平线上，不要仰头或低头读数。
（5）如用酸式滴定管装碱性溶液，滴定后应立即洗净，以免活塞粘连。
二、一般操作技术1、混匀法：欲使一化学反应充分进行，必须使反应体系内各种物质迅速地相互接触，因此除特别规定外，一般都需要将反应物彻底混匀。
混匀方式大致有以下几种，可随使用的器皿的液体容量而选用。
（1）旋转混匀法：手持容器作离心旋转，适用以未盛满液体的试管或小口器皿，如三角瓶等。
（2）弹指混匀法：左手持试管使直立，以右手食指轻击试管下部，使管内溶液作旋转流动。
（3）倒转混匀法：适用于有玻璃塞的瓶子，如容量瓶等。
（4）弹动混匀法：以右手大拇指、食指、中指握住试管上部，将试管放平，于左手掌中弹动。
（5）吸管混匀法：用吸管将溶液反复吸放数次，适用于量少而无沉淀的液体。
（6）搅拌混匀法：适应烧杯等大口容器所盛之溶液的混匀，一般在配制混合试剂时，用玻棒搅拌以助溶，或混匀大量的溶液。
2、保温与加热：为使某一化学反应在一定的温度下进行，常需要保温；为促进或停止化学反应，有时需要加热。
（1）保温：常用恒温箱或恒温水浴进行，后者的温度较前者稳定。
（2）加热：加热常用两种方法，一是直接把试管、烧杯等器皿在酒精灯、电炉或煤气火焰上加热；二是在水浴中加热或煮沸，应根据实验的目的而定。
3、过滤：过滤的目的是将沉淀与液体分开，可用滤纸、棉花、纱布等。
生化实验中所进行的过滤，为了不改变溶液的浓度，一般不要用水湿润滤纸。
过滤所用的滤纸常摺成多摺状，以增大过滤面积。
当过滤难滤之物或为了加快速度，可采用减压抽滤法。
实验室中有时用离心法代替过滤。
三、实验样品的制备在生物化学实验中，无论是分析组织中各种物质的含量，还是研究组织中物质代谢的过程，皆需利用特定的生物样品。
为了达到一定的实验目的，往往需要将获得的样品预先做适当的处理。
掌握实验样品的正确处理方法乃是做好生物化学实验的先决条件。
基础生物化学实验中，最常用的动物或人体样品是全血、血清、血浆及无蛋白血滤液。
组织样品则常用肝、肾、胰、胃粘膜或肌肉等，实验时可制成组织匀浆、组织糜、组织切片或组织浸出液等形式。
有关这些组织样品的制备方法，扼要介绍如下：（一）血液样品全血：无论是收集动物还是人的血液，均应注意仪器的清洁与干燥，同时也要及时加入适当的抗凝剂以防止血液的凝固。
一般在血液取出后，迅速盛于含有抗凝剂的器皿中，同时轻轻摇动，使血液与抗凝剂充分混合，以免形成小凝块。
取得全血如不立即进行实验，应储存于冰箱内。
常用的抗凝剂有草酸盐、柠檬酸盐、氟化钠及肝素等，可视实验要求而选用。
一般实验用草酸盐即可，但它不适用于血钙测定。
氟化钠因兼有抗凝及抑制糖酵解之作用，故可用于血糖测定。
但因其也能抑制脲酶，故用脲酶测定尿素时，则不能应用。
肝素虽好，但价格较贵。
抗凝剂的用量不应过多，否则影响实验结果。
通常每毫升血液加1~2mg草酸盐或5mg柠檬酸钠或5~10mg氟化钠，肝素仅需要0.01~0.2mg，最好抗凝剂制成适当浓度的水溶液，然后取0.5ml置于准备盛血的器皿内，再横放蒸干（肝素不宜超过30℃），则抗凝剂在器皿壁上形成一层薄膜，使用时较为方便，效果较满意。
血浆：上述抗凝的全血在离心机中离心，所得的上清液即为血浆。
如需用血浆进行分析时，必须严格防止溶血，故采血时一切用具（注射器、针头、试管等）皆需清洁干燥，取出的血液也不能剧烈振摇。
血清：收集的血液不加抗凝剂，在室温下放5~20分钟即自行凝固。
通常经3小时，血块收缩，析出清亮的血清。
为了节省时间，必要时可离心分离血清。
制备血清同样须防止溶血。
无蛋白血滤液：分析血液中许多成分时，也常除去蛋白质，制成无蛋白血滤液。
如血液中的非蛋白氮、尿酸、肌酸等测定皆需先把血液制成无蛋白血滤液后，再进行分析测定。
蛋白质沉淀剂如钨酸、三氯醋酸或氢氧化锌皆可用于制备无蛋白血滤液，可根据不同的需要而加以选择。
（二）尿液样品一般定性实验只需将尿收集一次即可，但一天之中各次排出尿液的成分随食物、饮水及一昼夜的内生理变化等的影响而有很大的差异，因此定量测定尿液中各种成分皆应收集24小时尿混合后取样。
通常在早晨一定时间排出残余尿而弃去，以后每次尿皆收集于清洁大玻瓶中，到第二天早晨同一时间收集最后一次尿即可，随即混合并用量筒量准其体积。
收集的尿液如不能立即进行实验，则应置于冷处保存。
必要时可在收集尿时即于收集的玻瓶中加入防腐剂如甲苯、盐酸等，通常每升尿中约加入5ml甲苯或5ml盐酸即可。
如须收集动物尿液，可将动物置于代谢笼中，其排出之尿液经笼下漏斗流入瓶中而收集之。
（三）组织样品离体不久的组织，在适宜的温度及ｐH等条件下，可以进行一定程度的物质代谢。
因此，在生物化学实验中，常利用离体组织，研究各种物质代谢的途径与酶系的作用，也可以从组织中提取各种代谢物质或酶进行研究。
但是各种组织离体过久后，都要发生变化。
例如，组织中的某些酶在久置后发生变性而失活。
有些组织成分如糖原、ATP等，甚至在动物死亡数分钟至十几分钟内，其含量即有明显的降低，因此，利用离体组织作代谢研究或作为提取材料时，都必须迅速将它取出，并尽快地进行提取或测定。
一般采用断头法处死动物，放出血液，立即取出实验所需之脏器或组织，去除外层的脂肪及结缔组织后，用冰冷之生理盐水洗去血液，必要时也可用冰冷之生理盐水灌注脏器以洗去血液，再用滤纸吸干，即可作实验之用。