显微镜的种类及其使用方法

显微镜的种类及其使用方法

一、光学显微镜

光学显微镜是一种精密的光学仪器。当前使用的显微镜由一套透镜配合，因而可选择不同的放大倍数对物体的细微结构进行放大观察。普通光学显微镜通常能将物体放大1500～2000倍(最大的分辨力为0.2μm)。（一）光学显微镜的基本结构（附图-1）

1．光学部分包括目镜、物镜、聚光器和光源等。

（1）目镜：通常由两组透镜组成，上端的一组又称为“接目镜”，

下端的则称为“场镜”。两者之间或在场镜的下方装有视场光

阑（金属环状装置），经物镜放大后的中间像就落在视场光

阑平面上，所以其上可加置目镜测微尺。在目镜上方刻有放

大倍数，如10×、20×等。按照视场的大小，目镜可分为普

通目镜和广角目镜。有些显微镜的目镜上还附有视度调节机

构，操作者可以对左右眼分别进行视度调整。另有照相目镜

(NFK)可用于拍摄。

（2）物镜：由数组透镜组成，安装于转换器上，又称接物镜。通

常每台显微镜配备一套不同倍数的物镜，包括：①低倍物镜：

指1×～6×；②中倍物镜：指6×～25×；③高倍物镜：指25×～

63×；④油浸物镜：指90×～100×。其中油浸物镜使用时需

在物镜的下表面和盖玻片的上表面之间填充折射率为1.5左

右的液体（如香柏油等），它能显著地提高显微观察的分辨

率。其他物镜则直接使用。观察过程中物镜的选择一般遵循

由低到高的顺序，因为低倍镜的视野大，便于查找待检的具

体部位。

显微镜的放大倍数，可粗略视为目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。

（3）聚光器：由聚光透镜和虹彩光圈组成，位于在载物台下方。聚光透镜的功能是将光线聚焦于视场范围内；透镜组下方的虹彩光圈可开大缩小，以控制聚光器的通光范围，调节光的强度，影响成像的分辨力和反差。使用时应根据观察目的，配合光源强度加以调节，得到最佳成像效果。

（4）光源：较早的普通光学显微镜借助镜座上的反光镜，将自然光或灯光反射到聚光器透镜的中央作为镜检光源。反光镜是由一平面和另一凹面的镜子组成。不用聚光器或光线较强时用凹面镜，凹面镜能起会聚光线的作用；用聚光器或光较弱时，一般都用平面镜。

新近出产的显微镜一般直接在镜座上安装光源，并有电流调节螺旋，用于调节光照强度。光源类型有卤素灯、钨丝灯、汞灯、荧光灯、金属卤化物灯等。

显微镜的光源照明方法分为两种：透射型与反射(落射)型。前者是指光源由下而上通过透明的镜检对象；反射型显微镜则是以物镜上方打光到(落射照明)不透明的物体上。

2. 机械部分包括镜座、镜柱、镜壁、镜筒、物镜转换器、载物台和准焦螺旋等。

（1）镜座：基座部分，用于支持整台显微镜的平稳。

（2）镜柱：镜座与镜臂之间的直立短柱，起连接和支持的作用。

（3）镜臂：显微镜后方的弓形部分，是移动显微镜时握持的部位。有的显微镜在镜臂与镜柱之间有一活动的倾斜关节，可调节镜筒向后倾斜的角度，便于观察。

（4）镜筒：安装在镜臂先端的圆筒状结构，上连目镜，下连接物镜转换器。显微镜的国际标准筒长为160 mm，此数字标在物镜的外壳上。

（5）物镜转换器：镜筒下端的可自由旋转的圆盘，用于安装物镜。观察时通过转动转换器来调换不同倍数的物镜。

（6）载物台：镜筒下方的平台，中央有一圆形的通光孔。用于放置载玻片。载物台上装有固定标本的弹

簧夹，一侧有推进器，可移动标本的位置。有些推动器上还附有刻度，可直接计算标本移动的距离以及确定标本的位置。

（7）准焦螺旋：装在镜臂或镜柱上的大小两种螺旋，转动时可使镜筒或载物台上下移动，从而调节成像系统的焦距。大的称为粗准焦螺旋，每转动一圈，镜筒升降10mm；小的为细准焦螺旋，转动一圈可使镜筒仅升降0.1mm。一般在低倍镜下观察物体时，以粗准焦螺旋迅速调节物像，使之位于视野中。在此基础上，或在使用高倍镜时，用细准焦螺旋微调。必须注意，一般显微镜装有左右两套准焦螺旋，作用相同，但切勿两手同时转动两侧的螺旋，防止因双手力量不均产生扭力，导致螺旋滑丝。

（二）普通光学显微镜的基本成像原理

光线→（反光镜）→遮光器→通光孔→镜检样品（透明）→物镜的透镜（第一次放大成倒立实像）→镜筒→目镜（再次放大成虚像）→眼。

（三）普通光学显微镜的使用过程

1．镜检前的准备

室内应清洁而干燥，实验台台面水平，稳固无震动，显微镜附近不应放置腐蚀性的试剂。

从显微镜柜或镜箱内取出显微镜时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地取出，放置在实验台桌面上，置于操作者左前方，距实验台边缘约10cm，镜臂朝自己，镜筒朝前。实验台右侧放绘图用具。2．调节光源

如需利用外置光源，宜采用散射的自然光或柔和的灯光。直射的太阳光会对观察者的眼睛造成伤害。

转动转换器，使低倍镜正对通光孔，将聚光器上的虹彩光圈开到最大，观察目镜中视野亮度，同时调节反光镜角度，使光照达到最明亮最均匀。

自带光源的显微镜，可通过调节电流旋钮来调节光照的强弱。

3．装置待检玻片

将待观察的样品制作成临时或永久装片，放在载物台上，用弹簧夹固定，有盖玻片的一面朝上。移动推进器，调节待检样品至通光孔的中心。

4．低倍镜观察

将低倍镜对准通光孔，缓缓转动粗准焦螺旋，将物镜与装片的距离调至最近。注意不要压碎盖玻片。通过目镜观察，同时用粗准焦螺旋缓慢调节，直至物像出现，再用细准焦螺旋微调，同时调节光源亮度与虹彩光圈的大小，使物像达到最清晰的程度。并利用推进器把需要进一步放大观察的部分移至视野中央。

如果使用双筒目镜，应在观察前先调整双筒距离，使两眼视场合并。

5．高倍镜观察

转动转换器，选择较高倍数的物镜，用细准焦螺旋调节焦距，到物像清晰为止。

6．油镜观察

油浸物镜的工作距离（指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离）很短，一般在0.2 mm以内，且一般光学显微镜的油浸物镜没有“弹簧装置”，因此使用油浸物镜时，调焦速度必须放慢，避免压碎玻片，并使物镜受损。

（1）在低倍镜下找到观察目标，中、高倍镜下逐步放大，将待观察部位置于视野中央，调节光源和虹彩光圈，使通过聚光器的光亮达到最大。

（2）转动粗准焦螺旋，将镜筒上旋（或将载物台下降）约2 cm，加一小滴香柏油于玻片的镜检部位上。（3）将粗准焦螺旋缓缓转回，同时注意从侧面观察，直至油镜浸入油滴，镜头几乎与标本接触。

（4）从目镜中观察，用细准焦螺旋微调，直至物象清晰。

（5）镜检结束后，将镜头旋离玻片，立即清洁镜头。一般先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油滴。再用擦镜纸蘸少许乙醚-酒精混合液（2：3），擦去残留油迹，最后再用干净的擦镜纸擦净（注意向一个方向擦拭）。

7．还原显微镜

关闭内置光源并拔下电源插头，或使反光镜与聚光器垂直。旋转物镜转换器，使物镜头呈八字形位置