消化性溃疡药效评价动物模型技术参数
浅谈四逆散抗胃溃疡的药效数据试验研究
浅谈四逆散抗胃溃疡的药效数据试验研究摘要：目的：按照动物实验进行药理数据分析，检测四逆散的抗胃溃疡的药效，以科学的药理数据分析四逆散的作用。
方法：采用幽门结扎和醋酸涂抹的方法，复制小鼠的消化溃疡模型，研究四逆散抗溃疡的有效作用。
结果：四逆散对于急、慢性胃溃疡症具有明显的预防和治疗效果。
可以有效的提高胃内组织氧化物歧化酶SOD的水平，逐步降低胃液的总体酸度，移植胃组织内丙二醛MDA的变化水平。
结论：四逆散可以通过增加防御因子和损伤抑制因子实现胃环境的有效保护作用。
关键词：四逆散；胃溃疡；药效引言胃溃疡是一种临床上较为常见的疾病，主要是因为消化系统病变产生的。
因溃疡所致的攻击因子在胃粘膜的保护因子作用下，失去了胃内部平衡，攻击因子的实力过强，而保护因子实力较弱而造成的胃部环境。
现代医学研究胃溃疡治愈的效果较高，因其慢性发病的特点，根治较为困难而且容易出现复发的现象，严重的患者甚至会出现消化道穿孔、出血、受阻的并发症问题，直接危害着人们的身体健康。
中药具有良好的全身稳定药性，可以通过稳定机体的病灶的同时，逐步改善胃部的内环境，与西药相比较具有一定的优越性作用。
本文将针对动物实验进行四逆散的防胃溃疡病变作用分析。
1 材料及方法选健康小鼠100只，雄雌各50只，体重在100g-30g之间，选用柴胡、白芍、炙甘草，枳实四种药材，将其细细研磨后，分别将其放入烤箱内进行80℃的温度烘干，通过目筛按四逆散1：1：1：1的称重量进行研钵，细研后均放入到配置好的相应浓度的混悬液中。
采用醋酸涂抹的方法，将小鼠禁食1d后，乙醚麻醉后进行剖腹，拉出全部胃底，用塑料管固定，向管内注射100%含量的冰醋酸0，1ml，经过60s后与腺胃部前臂桨膜接触，去除胃夹，采用生理盐水对局部进行清洗，然后牵引大网膜包腹的酸面，缝合腹壁。
幽门结扎型的溃疡模型是采用小鼠幽门结扎的方法。
在试验过程中，对小鼠进行乙醚麻醉作用，固定小鼠板面，沿腹中线下进行切开腹壁处理，切口控制在2cm-3cm之间，在左侧肋边缘部分，用手指轻轻的向上推，从而确保胃暴露于切口，在幽门下穿线完成幽门结扎处理。
第八章消化系统疾病动物模型
6. 用肉眼或放大镜观察胃粘膜面，记录每只动物 产生的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃 疡指数）及病变的情况。
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幽门结扎法胃溃疡模型
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幽门结扎法胃溃疡模型
结果
形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的 前胃部（瘤胃），多为圆形或椭圆形。但病变较 表浅，属于胃粘膜急性出血性糜烂，与人类胃溃 疡的典型病变差距较大。
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幽门结扎法胃溃疡模型
二、幽门结扎法胃溃疡模型
幽门结扎法胃溃疡模型
[造模机制]
通过手术结扎幽门，使胃内胃酸、胃蛋白 酶潴留，对胃粘膜造成侵蚀而形成溃疡。
[实验动物]
成年大鼠，雄雌均可。
幽门结扎法胃溃疡模型
[操作方法]
1. 给药3天。实验前大鼠禁食(24h)不禁水。 2. 自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约2-3cm。
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急性胃溃疡—乙醇法
模型评价及注意事项
乙醇性胃溃疡的程度与乙醇的浓度成正比，一 般乙醇浓度40％以上可引起胃黏膜明显损伤， 80％以上时出现明显破溃、坏死，因此制备胃 溃疡模型时多采用75％以上乙醇或无水乙醇。
也可用盐酸-乙醇(50%乙醇-O.15mmol/L盐酸) 给大鼠灌胃(1ml/100mg)造成溃疡，称为酸乙醇 性溃疡。
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实验动物
成年小鼠，雄雌均可。
操作步骤
急性胃溃疡—利血平法
动物禁食不禁水24 h后，灌胃给予受试药后 1 h，腹腔注射利血平5 mg/kg体重，18 h后处死 动物，取胃按上述方法用10%甲醛Okabe法）
消化系统疾病动物模型
常用的方法
① 应激法 ② 幽门结扎法 ③ 药物法 ④ 醋酸法
乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松
……
阳性对照药：
H2受体拮抗药——西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等 加强胃黏膜防御功能——甘珀酸，果胶铋，硫糖铝
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王慷慨
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研究抗胃溃疡药物
胃黏膜形态观察 胃分泌试验 胃黏膜血流量测量 胃粘液测定 抗炎镇痛试验 抑制幽门螺杆菌试验等
muropeptide
MAP3KINASES
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INFLAMMATION
GASTRITIS
Naumann M, Trends in Microbiology, 2004, 12(1): 29–36
王慷慨
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酸制剂法
急性胃炎动物模型
实验动物
体重300g左右雄性Wistar大鼠。
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（6）15%的乙醇；
（2）-（6）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃；
急性胃炎动物模型
结果
4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性 弥漫性炎症改变。
病变
胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层 内见中性粒细胞浸润。
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？ 观察指标：
组织：HE，免疫荧光，干湿重比等 NOS， PGE2等
平法和乙醇法可任选其一。
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王慷慨
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急性胃溃疡动物模型
常用的方法
① 应激法 ② 幽门结扎法 ③ 药物法 ④ 醋酸法
乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松
消化系统疾病动物模型
消化系统疾病动物模型（一）胃肠疾病动物模型1、急性胃炎动物模型（1）酸制剂诱发急性胃炎模型：Wistar大鼠，雄性，300g，大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：①水杨酸制剂（如20mmol／L阿司匹林或水杨酸溶液）按100mg／kg体重灌胃；②2ml10mmol／L的醋酸或2ml不同浓度的盐酸（1、10、100mmol／L）；③2ml同种动物胆汁或2mmol／L的牛磺胆酸；④2ml15％的乙醇。
4h 后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变。
胃粘膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层内见中性粒细胞浸润。
（2）胆汁反流性胃炎模型：碱性肠液倒流入胃，刺激胃粘膜可引起炎症，即胆汁反流性胃炎。
常见于原发性或继发性幽门功能紊乱或胃切除手术后。
本法取上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大鼠胃内，使之对胃粘膜产生持续刺激，形成胃炎。
动物选取雄性Wistar大鼠，体重180～220g,制备上部小肠液，向胃内注入小肠液，2 ml/只（正常对照组注入2 ml生理盐水）。
缝合腹壁，腹腔注射阿托品5 mg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃粘膜损伤模型的形成。
处死大鼠，开腹，结扎贲门，取出胃，沿胃大弯剪开。
用滤纸吸干表面水分，立即称量胃重，以胃湿重/体重之比（胃系数）表示胃水肿程度。
肉眼观察并计数整个胃粘膜出血点数，作为损伤指数。
模型组动物胃系数和损伤指数明显增加，肉眼观察模型组胃粘膜充血、水肿，皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血点。
2、慢性胃炎动物模型（1）大鼠慢性萎缩性胃炎模型酗酒、用药不当、饮食习惯不良、幽门螺杆菌感染、自身免疫等是此病的主要病因。
组织病理学是评价造模成功的最主要指标，主要观察和测量胃粘膜厚度、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率等。
综合法一：胆汁（去氧胆酸钠）+热水+主动免疫综合法二：去氧胆酸钠+热糊+主动免疫综合法三：去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌3、动物胃粘膜肠上皮化生模型（1）X线胃局部照射诱发胃粘膜肠化生模型：选用5～8周龄的Wistar 或JCL/SD大鼠。
溃疡性结肠炎模型选择及评价指标
溃疡性结肠炎模型选择及评价指标溃疡性结肠炎模型选择及评价指标1，实验候选模型：葡聚糖硫酸钠（DSS）致动物溃疡性结肠炎模型。
DSS UC模型的特点: ①采用自由饮用或者定量灌胃DSS溶液的方法建立模型，实验条件和操作方法简单，损伤易复制，便于掌握和推广；②可通过改变DSS溶液的浓度和作用时间建立急性、慢性和急慢性交替性模型，模型持续时间长，体现了急性向慢性转化的动态过程，解决了UC的慢性化和维持问题，这是以前许多模型无法比拟的；③已证实DSS模型是由1型/2型辅助性T细胞( Th1/ Th2) 型细胞反应介导的，其发病与TNF-α、IFN-γ和IL-10等有关，这与人类UC 的免疫学反应很相似；④不同种系动物对DSS的敏感性不同，为揭示遗传因素与UC 的关系提供了新的依据；⑤DSS UC模型的组织学特点和临床表现与人类UC极为相似，如病变从肛门侧自下而上连续性发展，急性期可见黏膜充血水肿、散在溃疡和中性粒细胞浸润，慢性期可见腺体萎缩、结肠缩短和巨噬细胞浸润，临床表现主要为腹泻、体重减轻、血便等。
2，实验候选动物：C3H/HeJ Bir小鼠或者BALB/c小鼠动物种系: DSS UC模型适用于多种动物，包括各种大鼠、小鼠、仓鼠和豚鼠等，但各种系对DSS的易感性和病变部位存在差异，其中大鼠、小鼠的病变主要以直肠和左半结肠为主，而仓鼠、豚鼠则以盲肠和右半结肠较为明显。
Mahler 等将3.5% DSS(分子量为Mr 36000～46000) 溶于饮用水，予9只不同种系的小鼠饮用以诱导UC，结果临床和组织病理学表现各不相同，C3H/HeJ Bir小鼠对DSS 最敏感，病变主要位于远端结肠和回盲部；C57BL/6J小鼠的中段和远端结肠易发生炎症；大部分NON/LtJ小鼠对DSS不敏感；BALB/c小鼠对DSS 敏感，病变主要位于结肠远端。
溃疡性结肠炎是一种局限于结肠粘膜及粘膜下层的炎症过程。
病变多位于乙状结肠和直肠，C3H/HeJ Bir小鼠和BALB/c小鼠对DSS致溃疡性结肠炎敏感，且病灶部位与人类相似（乙状结肠和直肠），因此可作为实验研究理想动物。
胃溃疡模型
胃溃疡实验模型探索1 病因病机消化性溃疡是一种常见的消化系统慢性病。
中医学属“胃脘痛”范畴。
胃脘痛又称胃痛，临床表现以胃脘部经常疼痛为主症，痛时连及胁背，或兼见恶心、呕吐、吞酸、嘈杂，大便溏薄或秘结，甚至吐血、便血等症【1】。
胃、十二指肠溃疡的病因和发病机理较为复杂，迄今尚未完全阐明。
目前认为胃、十二指肠是一种多病因疾病，各种与发病有关的因素如胃酸、胃蛋白酶、感染、遗传、环境、饮食、生活习惯、神经精神因素等均可诱发溃疡产生。
而胃酸-胃蛋白酶的侵袭作用增强和胃粘膜防护机制的削弱是本病发生的基本原理，任何影响这两者平衡关系的因素，都可能是本病发病及复发的原因。
其次幽门螺杆菌的感染可引发胃内多种炎性介质的释放，这些炎性介质可致胃黏膜的损伤。
胃、十二指肠溃疡在中医学属于胃痛、胃脘痛、心痛等范畴。
中医认为该病的发生主要由于情志失调，伤肝犯胃；饮食不节或劳倦过度，脾胃虚寒；外感寒邪，内客于胃等导致胃失和降、气机不利、胃失濡养而发生胃脘痛。
胃脘痛的发生，其病变脏腑主要在胃，但与肝脾关系密切，胆肾也与之相关。
若久病人络，瘀血阻滞胃络，络脉损伤，则会出现吐血、便血等症。
２溃疡模型的种类与方法幽门结扎型溃疡、应激性溃疡（水浸法）、胃粘膜损伤性溃疡（醋酸法）、药物诱发型溃疡。
四种溃疡动物模型总的特点是：结扎法溃疡为圆形、椭圆形、线性，结扎后随时间延长，溃疡数目增加，溃疡恒定发生在前胃部，深达肌层。
应激法溃疡数量多，水温超过24℃溃疡出现少而轻，水浸8h以上开始出现溃疡，随时间延长溃疡数量增加，溃疡均发生在腺胃部，溃疡浅表，均不累及粘膜肌层。
醋酸法溃疡发生在注射部位，溃疡部位胃壁增厚，溃疡数与注射醋酸部位准确与否有关，病理组织学改变与人类慢性溃疡近似。
药物诱发性溃疡发生在腺胃部，溃疡数量少，体积小而浅表，仅累积粘膜上皮表层，部分深达粘膜腺体，但不超过粘膜肌层。
2.1 应激性溃疡模型2.1.1 应激性溃疡原理应激性溃疡发生机制有复杂的神经一体液因素参与，应激性胃溃疡是先使皮层中枢的兴奋和抑制过程失调，进而引起植物神经调节功能紊乱，导致迷走神经张力过高，致使胃肌强力收缩，压迫肌肉血管，引起继发性黏膜血管运动障碍，导致溃疡形成。
消化性溃疡药
(五)吲哚美辛溃疡模型
1．原理 美辛通过抑制胃黏膜前列腺素合成酶，使胃黏腆内前列腺素减 少，细胞保护作用减弱，以致胃黏膜防御因素减弱而形成溃疡。
2．方法 大鼠禁食24h，自由饮水，皮下注射吲哚美辛20mg／kg(体 重)(吲哚美辛粉溶于5％碳酸氢钠溶液中，成为10mg／ml，再用蒸馏水稀释 成处死，取胃用甲醛 溶液固定，沿胃大弯剖开胃腔，展开平铺，观察溃疡情况并汁算溃疡指数， 溃疡位腺胃部，表现为与轴平行的点状、线状瘀点。溃疡指数的评定及计 算与应激性溃疡模型相同。
三、消化性溃疡动物模型建立方法 (一)慢性乙酸溃疡模型 1．原理 在大鼠胃的浆膜下或浆膜面注射或浸润定量的乙酸，由于乙酸
的腐蚀致胃黏膜损伤而造成溃疡。
2．方法 大鼠禁食24h，自由饮水，乙醚麻醉，常规消毒开腹，轻轻将胃取 出，在腺胃部前壁窦体交界处注入30％乙酸0．03ml于浆膜下，缓慢出针，勿 使乙酸流出。用生理盐水冲洗胃创面，将胃送入腹中，缝合腹壁创口。术后常 规喂养，术后3～5日形成溃疡。溃疡—般呈圆形或卵圆形，但有不规则。一般 术后的次日可分组进行给药治疗。观察完毕后，杀死动物，剖腹，结扎幽门及 贲门，用甲醛溶液10ml注入胃内，将胃放人同一浓度甲醛溶液中l0min，使胃的 内外层固定以便测量。然后沿胃大弯将胃剪开，用自来水洗去胃内容物，将胃 铺于纸上观察，测量溃疡面积。通常以疗后溃疡面积(或体积)的大小评价药物 的作用。
2．方法 大鼠禁食36h，自由饮水。在轻度乙醚麻醉下，常规消毒开腹，在幽 门与十二指肠连接处用缝线结扎，术后禁食禁水，18h后处死，按需要不同时间 处死，取胃按前法用甲醛溶液固定，沿胃大弯剖开。观察前胃部溃疡发生情况， 并同时分析胃液分泌情况。无穿孔者以小溃疡数及溃疡面积计算溃疡指数。溃 疡的最大径大于1mm者计算面积。
大鼠实验性胃、十二指肠溃疡_百替生物
大鼠实验性胃、十二指肠溃疡[适用对象]中医学（骨伤方向）、中西医临床医学、保险学、中医学（医事法律方向）、音乐学、中医学、中医学（国际交流方向）、针灸推拿学、护理学专业[实验学时]4学时一、实验目的掌握复制大鼠胃、十二指肠溃疡模型的方法及其判断标准。
了解胃、十二指肠溃疡病的发病机制。
二、实验原理醋酸法：由醋酸直接损害胃粘膜造成溃疡，是一种化学性损伤。
此法可选择复制胃或十二指肠溃疡模型造模方法。
可经胃或十二指肠壁浆膜面注入醋酸，也可将醋酸作用于胃或十二指肠壁的浆膜面上，分别造成慢性胃或十二指肠溃疡。
三、仪器设备高压消毒灭菌器、显微镜、消毒小动物手术器械一套（包括手术刀，手术剪、镊子，缝针，线，洞巾，载玻片，0.25ml注射器及26号针头各2只），小圆玻璃管（内径5~6mm，长2mm，口钝），钟罩，滤纸，乙醚，冰醋酸，灭菌生理盐水，75%酒精，2.5%碘酒。
四、相关知识点消化性溃疡是一种慢性溃疡，是由胃粘膜糜烂和急性溃疡发展而来。
慢性溃疡的好发部位是胃窦和十二指肠球部，大多数病人仅发生一个溃疡。
胃粘膜糜烂、急性溃疡和慢性溃疡的病理变化存在差异。
根据溃疡病的病因及病理特点，可建立多种溃疡病的动物模型，以观察其发生发展过程，结合所学的中医药相关知识，可设计对慢性溃疡病的药效学研究。
五、实验步骤（一）醋酸注入法1、方法（1）取250～300g大鼠，置钟罩内用乙醚麻醉后，仰缚于鼠板上，剪去腹部被毛，用碘酒、酒精消毒皮肤。
自剑突下剖开腹壁，切口长约2～3cm，暴露胃，选择好所要诱发溃疡的部位，一般在胃体部和幽门窦交界处，诱发胃溃疡；在十二指肠球部前壁处诱发十二指肠溃疡。
（2）用26号针头及有0.01ml刻度的0.5ml注射器，抽取到10%～20%醋酸，经浆膜刺入，透过胃或十二指肠壁肌层向粘膜注入0.01～0.05ml。
缝合腹壁，常规饲养。
（3）注射3天后，将动物放血处死，按应激法取胃。
十二指肠溃疡则在十二指肠距幽门约1cm处结扎，其余方法均同。
浅析胃溃疡动物模型及机理
浅析胃溃疡动物模型及机理廖承谱【摘要】胃溃疡是一种慢性的胃部消化性疾病,最主要的临床症状是胃脘部的周期性的疼痛,恶心,呕吐,严重有胃出血表现,另外发病率高,病程长,且容易反复发作,为临床常见病症.据统计,人群中约有10%的人在一生中可能罹患此病,因此建立更加理想的胃溃疡模型,对于胃溃疡的深入研究具有一定的积极意义.根据近几年来国内外对胃溃疡的研究显示,对胃溃疡发病机理的研究已经成为热点话题,其中建立了许多胃溃疡模型,文章就近几年对胃溃疡模型的建立以及发病机理进行综述,为以后胃溃疡进一步研究提供参考依据.【期刊名称】《大众科技》【年(卷),期】2017(019)010【总页数】3页(P76-78)【关键词】胃溃疡;动物模型;发病机理【作者】廖承谱【作者单位】广西中医药大学,广西南宁 530001【正文语种】中文【中图分类】R573胃溃疡是由多种因素引起的慢性消化性疾病，发病率高，病程较长，是临床的常见病症，其发病机理比较复杂，侵袭因素（胃蛋白酶、盐酸、幽门螺杆菌等）与保护性因素（前列腺素、黏液-碳酸氢盐屏障、胃黏膜血流、细胞膜的完整性和细胞再生等）之间对抗失衡所致，任何一种可导致侵袭因素加强或保护性因素减弱的作用力都可导致胃溃疡，Synnerstad I等报道，当体内攻击因子与保护因子之间相互作用不平衡时将会导致胃溃疡的发生。
临床多以上腹部疼痛或不适、腹胀、反酸、恶心、呕吐等为特征。
据统计，胃溃疡的发病率高达10%左右，严重者可并发出血、胃穿孔等。
目前对胃溃疡的研究已经有了较深入的认识，不过在病因、病机、病理、防治等各方面都还有进一步探讨的空间。
通过建立胃溃疡动物模型实验是研究和寻找治疗该疾病药物的重要渠道，因此，建立理想的胃溃疡动物模型，对探索该病的病因、病机、病变发展规律及明确治疗方法及研发新药有积极意义。
在中医实验胃溃疡模型中，有多种模拟胃溃疡的动物模型，主要有药物诱发胃溃疡模型、乙醇引起胃溃疡动物模型、水浸应激性动物模型、幽门结扎型、乙酸法等。
溃疡性结肠炎模型选择及评价指标
溃疡性结肠炎模型采用及评介指标之阳早格格创做1，真验候选模型：葡散糖硫酸钠（DSS）致动物溃疡性结肠炎模型.DSS UC模型的特性: ①采与自由饮用大概者定量灌胃DSS溶液的要领修坐模型，真验条件战收配要领简朴，益伤易复制，便于掌握战推广；②可通过改变DSS溶液的浓度战效率时间修坐慢性、缓性战慢缓性接替性模型，模型持绝时间少，体现了慢性背缓性转移的动背历程，办理了UC的缓性化战保护问题，那是往日许多模型无法比较的；③已证据DSS模型是由1型/2型辅帮性T细胞( Th1/ Th2) 型细胞反应介导的，其收病与TNF-α、IFN-γ战IL-10等有闭，那与人类UC 的免疫教反应很相似；④分歧种系动物对于DSS 的敏感性分歧，为掀穿遗传果素与UC的闭系提供了新的依据；⑤DSS UC模型的构制教特性战临床表示与人类UC极为相似，如病变从肛门侧自下而上连绝性死少，慢性期可睹黏膜充血火肿、集正在溃疡战中性粒细胞浸润，缓性期可睹腺体萎缩、结肠收缩战巨噬细胞浸润，临床表示主要为背泻、体沉减少、血便等.2，真验候选动物：C3H/HeJ Bir小鼠大概者BALB/c小鼠动物种系: DSS UC模型适用于多种动物，包罗百般大鼠、小鼠、仓鼠战豚鼠等，但是百般系对于DSS的易感性战病变部位存留好别，其中大鼠、小鼠的病变主要以曲肠战左半结肠为主，而仓鼠、豚鼠则以盲肠战左半结肠较为明隐.Mahler等将3.5% DSS(分子量为Mr 36000～46000) 溶于饮用火，予9只分歧种系的小鼠饮用以诱导UC，截止临床战构制病理教表示各没有相共，C3H/HeJ Bir小鼠对于DSS最敏感，病变主要位于近端结肠战回盲部； C57BL/6J小鼠的中段战近端结肠易爆收炎症；大部分NON/LtJ小鼠对于DSS 没有敏感；BALB/c小鼠对于DSS 敏感，病变主要位于结肠近端.溃疡性结肠炎是一种限制于结肠粘膜及粘膜下层的炎症历程.病变多位于乙状结肠战曲肠，C3H/HeJ Bir小鼠战BALB/c小鼠对于DSS致溃疡性结肠炎敏感，且病灶部位与人类相似（乙状结肠战曲肠），果此可动做真验钻研理念动物.3，D SS分子量及浓度：Mr=40000，浓度=3%-5% 1%～10%DSS浓度可用于UC 模型.DSS诱导肠黏膜慢性益伤的程度呈浓度依好性，已正在BALB/c小鼠中得到了证据.Granger等钻研了DSS摄与量的估计公式，DSS用量(mg/g) =总饮火量(ml)×[DSS (mg)/100 ml]/小鼠初初体沉( g)，指出诱导稳当战沉复性佳的UC模型[以构制髓过氧化物酶(MPO) 的活性战构制病理变更为尺度)，DSS总摄与量的最矮阈值为30mg/g体沉，只消DSS的背荷量达到30mg/g那一闭键剂量，其总摄进量的好别没有会效率炎症反应的宽沉程度.DSS 浓度是制摸乐成的最闭键果素，可效率制模时间战临床表示.据报导，小鼠饮用含1% DSS溶液90天后，仅出现大便隐血考查阳性.Egger等应用分歧浓度的DSS( 0%、2.5%、5%、7.5%) 溶液喂养BALB/c小鼠7天，截止创制结肠腺体益伤评分随DSS浓度的普及呈线形减少，但是与DSS 总摄与量无相闭性，由此估计DSS诱导黏膜益伤的程度依好于DSS 浓度，而非总摄与量.但是DSS浓度过下，动物牺牲率也会降下.予无胸腺小鼠饮用含5% DSS溶液，与饮用1.5%、2.5% DSS 溶液( 各浓度的分子量相共)组比较，其致死率明隐降下.暂时，真验中中最常采与3%大概5%的DSS溶液举止制模.4．评介指标4.1 徐病活动度用大便情况动做徐病活动度（DAI）评介，评介细则如下睹表-1.表-1 DAI评分细则评分大便性状隐血大概血便0平常阳性1硬便阳性2硬便隐血阳性3背泻隐血阳性4背泻血便4.2 结肠病灶病理构制隐微镜查看并评分（CMDI），评分尺度如下：溃疡：分三级，0—无，1—小溃疡（小于3mm），2—大溃疡（大于3mm）炎症：0—无，1—沉度，2—沉度肉芽构制：0—无，1—有病变深度：0—无，1—粘膜下层，2—肌层，3—浆膜层纤维化：0—无，1—沉度，2—沉度4.3 对于免疫器官的效率：1）免疫器官净器系数①脾净，②胸腺；2）4.4 免疫指标 1）抗人中性粒细胞胞量抗体（P-ANCA）：蛋黑火解酶（PR3）、构制蛋黑酶G（CG）.2）抗结肠抗体（ACA），3）免疫球蛋黑IgA战IgG，局部免疫反应已证据结肠粘膜爆收洪量IgA战IgG，焦君良等以人体结肠粘膜为抗本，用之攻打大鼠后，大鼠结肠粘膜出现典型溃疡，病变部位洪量淋巴、单核战嗜中性细胞浸润，局部制型动物血浑抗大肠抗体阳性，免疫球蛋黑IgA 战IgG明隐删下，淋巴细胞转移率隐著落矮.以上截止均收援溃疡性结肠炎的自己免疫收病教道. 4）细胞免疫指标：CD4、CD8、T淋巴细胞战可溶性黑细胞介素2受体（SIL-2R）动做细胞免疫的主要指标被认为与溃疡性结肠炎的宽沉程度有闭5）炎症细胞果子：TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-4、IL-104.5 其余死化指标：MPO，SOD，MDA。
消化系统疾病动物模型2016知识分享
2020/10/3
王慷慨
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模型评价与注意事项
幽门结扎法胃溃疡模型
4.术中要求。
5.观察药物对溃疡的影响时，动物应预先给 药或同时给药，若粗制剂可采用灌胃给药，应确 认胃内已排空后方能结扎幽门。粗制剂可在幽门 结扎的同时采用十二指肠内注入给药较好。
6.阳性对照药:灌胃给予
西咪替丁（甲氰咪胍）1.0g/kg体重 雷尼替丁0.135g/kg体重
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王慷慨
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大鼠胃的解剖及幽门结扎法所致胃溃疡图
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王慷慨
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王慷慨
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大鼠慢性胃溃疡模型
第三节 急性和慢性肝损伤动物模型
2020/10/3
王慷慨
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常用的肝损伤物质
四氯化碳 D-半乳糖胺 硫代乙酰胺 刀豆蛋白A
2020/10/3
王慷慨
PCR：特定基因或炎症因子 Western：特定激酶或信号分子，特定基因等 ……
2020/10/3
王慷慨
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第二节 急性胃溃疡动物模型
2020/10/3
王慷慨
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溃疡病的病因
致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药 不合理应用、幽门螺杆菌感染等。
防御因素：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、 粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因 子和内生性前列腺素等。
动物
(CCl4)剂量 (ml/kg体重)
用法
形成肝损伤 所需时间
0.5% 10 颈背部皮下注射1次 约24h
小鼠
0.1% 10 腹腔注射1次
约24h
0.2% 10
12~24h
大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价
大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价建立胃溃疡动物模型是研究胃溃疡发生机制和评价抗溃疡药物的有效方法之一。
大鼠形体适中，繁殖快，成本较低，可用于大样本实验，因此常选用大鼠（Wistar或SD建立胃溃疡模型。
其造模方式较多，主要有水浸应激性大鼠胃溃疡模型[1] 、幽门结扎型大鼠胃溃疡模型[2] 、乙醇致大鼠胃溃疡模型[3] 、非甾体抗炎药所致胃溃疡模型[4-6] 、乙酸致慢性胃溃疡模型[7] 。
其中乙酸致慢性胃溃疡模型的建立简单，模型成功率较高，不易恢复等特点。
目前大鼠胃溃疡模型中以冰乙酸性模型在实验研究中应用较广[8] ，研究表明此模型方法可靠，重复性好，溃疡深而大，与人类的慢性胃溃疡极为相似，其自然愈合需要60d 左右[9] 。
建立慢性胃溃疡动物模型有以下3种：乙酸注射法、乙酸滤纸贴敷法、乙酸直接灼烧法[10] 。
其中因乙酸注射法造模型的操作部位比较麻烦，不易造模型；乙酸滤纸贴敷法造模要精准直径的大小和滤纸贴敷的时间的长短不同而模型的程度不同；乙酸直接灼烧法造模时乙酸的量越多，造成的损伤最越重，有的引起肌层及浆膜层的损伤，甚至有坏死组织等。
以上3 种模型都有各自的不足点。
应此目前还是没有建立乙酸型动物模型的标准和评价指标。
本试验将建立3种乙酸型大鼠胃溃疡模型并进行评价。
1 仪器与材料11实验动物清洁级Wistar大鼠，体重（200土2）g，雄性，购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物许可证号GB14922-2001。
12 仪器紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；酶标仪（帝肯上海贸易XX公司）；TG16-WS高速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器XX公司）；HH-W6 0（数显三用恒温水箱（江苏省金坛市荣华仪器制造XX公司）。
13材料冰乙酸（天津市天力化学试剂XX公司）；甲醛（天津市天力化学试剂XX公司）；水合氯醛（批号20150330,天津市东丽区新中村科技园区）；[JP+2]MDA （批号：20160114）、SOD（批号：20160112）、NO （批号：20160115）和EGF（批号：20160231）试剂盒，南京建成生物工程研究所。
消化性溃疡病证动物模型研究概要
消化性溃疡病证动物模型研究概要摘要】近年来，有关消化性溃疡病证结合动物模型研讨已成为相关实验研究中的热点问题。
在整理文献资料的基础上，将相关的实验研究概况进行了阐述，并提出研制与中医证型相近的病症结合动物模型是深入探讨中医药治疗本病的疗效及其机制的关键所在。
【关键词】消化性溃疡病证结合动物模型综述消化性溃疡（peptic ulcer，PU）是我国常见的慢性病之一。
目前中医应用辨证论治方法治疗PU取得了甚佳的疗效。
但在动物实验研究方面，未考虑中医“证”的因素的西医溃疡动物模型将在某种程度上影响中医药治疗消化性溃疡的疗效和机制的深入研究。
因此，本文对消化性溃疡病证结合动物模型的研究作一深入探讨。
1 消化性溃疡证型的选择中医将消化性溃疡归属于“胃脘痛”范畴，常因外邪犯胃、饮食伤胃、情志不畅及素体脾虚等引发。
而对于中医证型、分型标准以及治法方药，目前临床上尚未统一。
通过对3413例病例的统计分析认为临床最常见的中医证型分别是：脾胃虚寒证、肝胃气滞证、瘀阻胃络证、胃阴亏虚证、胃热炽盛证[1]。
2 消化性溃疡动物模型的选择消化性溃疡是一种超过粘膜肌层的局限性粘膜缺损，故制造出的消化科溃疡模型多以胃粘膜损伤为主。
在实验方面，尽管当前对胃溃疡的病因、发病机理、病生及治疗等方面的研究均已取得了卓有成效的进展，然而建立稳定性好、可控性强的胃溃疡动物模型具有必要性。
原因在于在现代医药学研究中实验研究具有举足轻重的作用，而开展实验研究首先进行的就是建立出符合疾病特点、可复制性高的适用动物模型。
目前，西医学建立消化性溃疡动物模型的方法已日渐成熟，主要有冰乙酸法、幽门螺杆菌感染法、吲哚美辛法、无水乙醇法、胃损伤缺血再灌注法等引起胃损伤等[2、3]。
由于消化性溃疡是一种常见的慢性病，故非甾体类药物（NSAIDs）引起胃损伤模型、乙酸型慢性溃疡模型、幽门螺杆菌感染胃损伤模型这三种模型在复制最为频繁。
2.1 NSAIDs引起胃损伤此类药物可以通过抑制胃粘膜环氧化酶（COX）而使前列腺素合成减少，从而减弱胃粘膜的防御修复屏障的功能以诱发溃疡。
消化系统疾病动物模型2016
6. 用肉眼或放大镜观察胃黏膜面，记录每只动物产生 的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃疡指数）及 病变的情况。
2019/11/1
王慷慨
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幽门结扎法胃溃疡模型
病变程度的评价1—溃疡面积
通过溃疡中心量取的最大纵径和横径 S=π（d1/2）（d2/2）
三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性， 使Ca2+内流增加，从而引起细胞中毒死亡；
三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键，损害线粒体使 NADH及ATP在肝内生成减少，脂肪酸氧化受抑制，影响肝 脏能量生成障碍，并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积。
CCl4急性肝损伤模型
常用实验动物CC l4致急性肝损伤所需剂量和用法
平法和乙醇法可任选其一。
2019/11/1
王慷慨
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常用的方法
① 应激法 ② 幽门结扎法 ③ 药物法 ④ 醋酸法
急性胃溃疡动物模型
乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松
……
治疗性给药——醋酸法复制的模型 预防性给药——其他模型
2019/11/1
王慷慨
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急性胃溃疡动物模型
Microaerophilic, i.e. it requires oxygen but at lower levels than those contained in the atmosphere (5-8%)
With its flagella and its spiral shape, the bacterium drills into the mucus layer of the stomach, and can either be found suspended20in19th诺e贝ga尔st医ric学m奖u，coWsaarorrenat和taMchaersdhtaollepithelial cells
胃溃疡实验模型及探究胃痛宁合剂对实验性大鼠胃溃疡的【精品课件】
四组:正常组,灌服蒸馏水组,小剂量灌服胃痛 宁合剂组,大剂量灌服胃痛宁合剂组。每组5只。
7.正常组常规饲养,余三组分别灌服蒸馏水,小
剂量胃痛宁合剂,大剂量胃痛宁合剂,每日一次, 共7 天。
8.于给药第6 天严格禁食24 小时,可自由饮水,
活动不受限制,实验前1 小时禁水。正常对照 组,禁食24小时后断头取血,开腹取胃。其余3 组大白鼠在末次给药30 分钟后,用乙醚麻醉后 固定在应激板上。
9.打开腹腔,结扎贲门,取出全胃,沿胃大
弯切开胃壁,洗净内容物,将胃壁展开,用 大头针将其固定在木板上,肉眼观察。
10.算出每组产生溃疡的鼠数、溃疡程度、
溃疡面积(溃疡指数)。
溃疡指数:测量每个溃疡面积,将每只鼠溃疡面 积的总和分为5个等级,作为溃疡指数。
溃疡指数：
1
2
溃疡面积
（mm2）：
1-12
等氧自由基,抑制组织发生脂质过氧化,具有抗氧化作 用;由以上组方的胃痛宁合剂可减轻实验性胃溃疡大鼠 的胃粘膜损伤,从而起到了对胃粘膜损伤明显的保护作 用,可有效地防治溃疡发生。
实验对象:
大白鼠30只
实验器材和药品:
大白鼠灌胃管二个 手术器械二套 大 烧杯一个 玻璃棒一根 小动物手术台 手术器械 微量注射器 0．4%的中性福 尔马林若干 阿司匹林若干克 不同剂 量的胃痛宁合剂
胃溃疡实验模型及探究胃痛
宁合剂对实验性大鼠胃溃疡 的作用效果
2.胃痛宁是以“化浊降逆法”组方,治疗胃溃疡的代表
方剂,临床应用疗效显著。方中砂仁、紫蔻、枳实、白 术、紫苏、陈皮为行气止呕、理气合胃降逆之要药。 元胡、五灵脂、白芷、蒲公英可活血化瘀,行气止痛。 荷叶具有清宣透毒,生清降浊之功效。同时现代药理学 研究发现藿香具有解痉、止痛作用;五灵脂可减少胃液 量,降低胃酸,减轻粘膜的充血程度,改善局部微循环, 使溃疡面积减少;蒲公英、白芨借其高度粘性在胃内形 成一定厚度的胶状膜溃疡保护层],此外三七一方面活 血化淤,改善血液循环,消除溃疡及其周围组织的炎症, 另一方面还可促进胃粘膜再生,加快修复,促进溃疡将 10只大白鼠平分为2组,禁食